小鼠睾丸不同的生精阶段

合集下载

神经生长因子在不同周龄小鼠睾丸组织中的表达

化，外吸收法测定ＲＡ浓度及纯度，脂糖凝胶紫Ｎ琼
电泳检测其完整性。１４２引物的设计：．．参照Ｇｎａｋ中所登录的小鼠ｅｂｎ
（Ｎ０３０）、大鼠（Ｘ００７３）人Ｍ１６９Ｍ０１５１０、
进行了分析，以探讨ＮＦ与睾丸组织发育和精子发Ｇ
大利ＢｏＲｄ司；ＭＬ２型显微镜：国Ｌｉ。ｉ－ａ公ＤＢ德ｅｃａ
１４方法．
１４１总ＲＡ的提取及检测：用Ｔｉｌ剂盒．．Ｎ利ｒｏ试ｚ
提取各周小鼠睾丸组织中的总ＲＡ，规方法纯Ｎ常
生的关系。
（Ｍ０２０）牛（Ｍ５００）ＮＦ基因序列，Ｎ０５６、Ｘ８９７的Ｇ在
ＮＢ上进行同源性比较，用Ｐｉｅ．ＣＩ利ｒｒ０软件在小ｍ５
１材料与方法
１１实验动物．实验动物为山西医科大学实验动物中心提供的成年昆明种小鼠（动字第０００医７１２号）共３，２只（雌雄比例３：１。笼养一周后，照雌３只／１）按雄
Ｋｔ５ｐＤＡｍｒｅｉ０ｂＮａｋｒ由大连宝生物公司提供；、
ＲｂｉａｔＮＦ即用型ＳＢａｂｔｎｉＧ、．ＡＣ试剂盒、ＡＤＢ显色试
剂盒（Ｒ０２由武汉博士德生物工程有限公司提Ａ１２）

性成熟前小鼠生精细胞的发育过程

第20卷第3期中国兽医学报V o l.20,N o.3 2000年5月Ch inese　Jou rnal　of　V eterinary　Science M ay2000性成熟前小鼠生精细胞的发育过程张学明,文兴豪,赖良学,李德雪3,李子义,杨盛华,杜惜明,曾发贵　　(解放军军需大学动物科技系,吉林长春130062)摘要:用光镜、电镜观察了生后1～18d昆明白小鼠的生精上皮。

结果显示,生后1～3d,曲细精管内只有生殖母细胞和支持细胞2类形态结构截然不同的细胞,前者位于管中部;生后4～5d,少数生殖母细胞已附着在基膜上;生后6～7d,原始A型精原细胞大量出现并附着在基膜上;生后8d,A型精原干细胞大量出现,B型精原细胞开始出现;生后10d,B型精原细胞大量出现;生后12～13d,前初级精母细胞出现,少数曲细精管的管腔开始出现;生后14～15d,多数曲细精管管腔基本形成,前初级精母细胞大量出现。

本试验的结果表明,7～8d小鼠的睾丸最适于分离精原干细胞。

关键词:精原干细胞;形态结构;小鼠中图分类号:S852116 文献标识码:A 文章编号:100524545(2000)0320293205 精原干细胞的异体及异种移植是当前干细胞领域的一个新的研究热点。

但目前用于移植的细胞都是混合细胞,效率很低[1]。

若能将精原干细胞分离纯化,即可克服上述不足。

分离纯化精原干细胞必须选取合适日龄的睾丸,才能获取较多的细胞。

目前有关性成熟前小鼠生精上皮细胞生长发育所经历的形态结构的变化,尚缺乏系统的研究报道。

本试验系统观察了小鼠性成熟前各级生精细胞发育分化进程,以为选择合适日龄的小鼠睾丸分离纯化小鼠精原干细胞提供依据。

1　材料与方法111　动物的选择及饲养　昆明白小鼠,由本校实验动物中心提供,按常规方法饲养管理。

选择自然发情母鼠与公鼠合笼,次日8:00检查阴道栓,见栓日中午记为交配后(PC)0.5d,PC19d后确切记录幼鼠出生时间。

不同时期小鼠睾丸睾酮合成能力差异机制的研究

农业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology2007,15(2):207~211*基金项目：国家自然科学基金项目(No.30270955)；西农博士启动基金(2004博01)资助。

**通讯作者。

Author for correspondence.教授，主要从事生殖生理和生殖内分泌研究。

Email： <j.zhang@>.收稿日期： 20060724接受时期： 20060831·研究论文·不同时期小鼠睾丸合成睾酮能力的差异 *王鲜忠，孙燕，吴建云，罗英，贾孙涨，胡淮杰，张家骅 **（西南大学动物科技学院，重庆市牧草与草食家畜重点实验室，重庆 400716）摘要：不同发育阶段，睾丸合成睾酮的能力差异很大。

为了阐明引起睾酮合成差异的分子机制，实验以不同年龄的 SPF昆白小鼠 ,采用 RTPCR与Western blot分析了不同年龄阶段类固醇合成酶的变化。

结果显示：（1）在不同年龄阶段，（胆固醇支链裂解酶） mRNA、（3β 羟胆固醇脱氢酶） mRNA、（类固醇合成快速调节蛋白） mRNA和蛋白的水平无明显变化；（2）（C 1720裂解酶） mRNA的表达水平在 30、 60和 120d均处于较高的水平，但是在 270d则处于较低的水平；（3） 30~270d，细胞外信号调节激酶(ERK)活性无明显变化。

表明， mRNA表达差异可能导致不同时期睾酮合成能力差异的重要原因，但ERK活性可能与衰老引起睾酮合成能力下降无直接关系。

关键词：睾丸；类固醇合成;小鼠；年龄中图分类号： S188 文献标识码： A 文章编号： 10061304(2007)02020705Changes of the Ability of Testosterone Synthesis in Mouse Testis of Different PeriodsWANG Xianzhong,SUN Yan,WU Jianyun,LUO Ying,JIA Sunzhang,HU Huaijie,ZHANGJiahua**To study the mechanism of changes of the ability of testosterone synthesis in different periods,Kunbai mouse in different periods were used as experimental animals.The ability of testosterone synthesis was analyzed by RTPCR and Western blot.The results were as followed:(1)In all periods,the expression of cholesterol side chain decomposition enzyme( ),3betahydroxysteroid de hydrogenase( )， steroidogenic acute regulatory protein(StAR)mRNA and protein had no significant change.(2)The levels of cy tochrome P45017alphahydroxylase( )mRNA were high in10,60and120d.However,that of mRNA decreased sig nificantly in270d.(3)From30d to270d,the activity of extracellular signal regulated kinases(ERK)had no significant change.These re sults inferred that the difference of the level of mRNA was an important factor of the difference of the level of testosterone,butthe activity of ERK had no direct relation with the decrease of mRNA and the level of testosteronetestis;steroidogenesis;mice;age睾酮具有维持生精作用、刺激生殖器官发育、维持正常性欲和促进蛋白质合成的生理作用（王启荣和杨则宜， 2004）。

小鼠睾丸生精小管内残余体颗粒形成及转归的观察

粒。这些颗粒早可见于生精周期 Ⅳ ～Ｖ期，在精子细胞朝向管腔一侧的胞质之内出现细粒状的细小蓝色颗粒。伴随
着生精时相的向后推移，精子细胞的胞质逐渐减少，颗粒逐渐变大，颗粒数量相应减少，至精子排放时，即生精周期的
ＸｉａｏＣｈａｎｇｙｉ，ＷａｎｇＹａｑｉｎｇ，ＬｉＪｉａｈｕａｅｔａｌＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｉｓｔｏｌｏｇｙ＆Ｅｍｂｒｙｏｌｏｇｙ，ＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＣｈｉｎａＴｈｒｅｅＧｏｒｇｅｓＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙｉｃｈａｎｇ４４３００２，Ｃｈｉｎａ
小鼠睾丸生精小管内残余体颗粒形成及转归的观察
肖长义，王雅琴，黎家华，汤桂成，魏霞
三峡大学医学院组织胚胎学教研室，宜昌４４３００２
摘要：目的
的。方法
通过对小鼠睾丸生精小管内残余体物质的形成与转归的观察，了解机体器官是如何处置结构废弃物
ＦｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄＯｕｔｃｏｍｅｏｆＲｅｓｉｄｕａｌＢｏｄｉｅｓｉｎＳｅｍｉｎｉｆｅｒｏｕｓＴｕｂｕｌｅｓｏｆｔｈｅＭｏｕｓｅＴｅｓｔｉｓ

小鼠受孕知识

小鼠受孕知识.小鼠性成熟早，35 日龄雄性附睾精液中有运动的精子，雌鼠在35 日龄即可发情排卵、受孕．雌鼠在正常情况下，每隔4～5 d为一个性周期，发情后2～3 h即可排卵．雌鼠产后还可出现一次动情期，即分娩后24 h内排卵，此时交配可受孕，俗称“血配”，出现边哺育边妊娠的现象．2.实验动物的选择选用性成熟未交配过的健康小鼠进行．实验发现，体形和体重较大动物交配比较容易受孕．3.掌握小鼠性周期时间镜检阴道涂片，低倍镜下观察细胞的类型，然后换上高倍镜，细胞可能是有核上皮细胞、角化(老的、无核的)上皮细胞．观察阴道涂片的组织细胞学变化，可确定动情期的不同阶段．4.把握交配季节小鼠生殖有关的实验，一般应在春秋季进行，因小鼠怕热畏寒，这二季节温度比较适宜，动物的受孕率较高．若在夏冬季实验，动物房室温应控制在22±2~C，空气湿度为50％左右.5.动物交配，妊娠识别选择适龄雌雄小鼠，鉴定动情期，是确保小鼠受孕的关键．交配前查看雌鼠外阴和阴道口，外阴充血肿胀，阴道口张开且呈干燥状态，确认为动情期雌鼠.小鼠阴栓一般在交配后12～24 h自动脱落．由于小鼠交配后能产生阴栓，所以常把阴栓的有无作为判断是否交配的重要标志．6.受孕辅助方法及其影响为提高受孕率，可对动物进行动情周期诱导和同步化．常用两种方法：一种是物理方法，即“预接触”，经“预接触”处理后的雌鼠，60％～70％可查见阴栓．另一种是化学方法，即对小鼠进行“超数排卵”(supemvu lation)，腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)，48 h后结合HCG腹腔注射处理的雌鼠，当晚与雄鼠1：1合笼，一般均可受孕，80％可见阴栓．自然同步发情的生殖是理想的，副作用少，效果好，而超排卵质量较差，胚胎生活力较差，体外培养增殖缓慢．7.合理管理，精心饲养动物饲养应在开放系统动物房进行．由于光照能刺激小鼠性激素的分泌，对雌鼠性周期有一定的影响，因而采用12 h：12 h明暗光照，温度18～25℃，空气相对湿度40％～60％，噪音≤60分贝．8.昆明小鼠系远交系，l945年由印度Haffikine研究所引入云南昆明。

小鼠的生殖生理学特点

小鼠的生殖生理学特点(一)性成熟和体成熟动物生长发育到一定程度，即达到性成熟期。

性成熟的表现是生殖器官发育完全，出现第二性征。

这时雄性动物有产生精子、雌性动物有产生卵子的能力，并出现性的要求。

小鼠性成熟时期的标志是：雌性小鼠阴道口张开，出现求偶周期，有交配的欲望，愿意接近公鼠；公鼠睾丸下降，精子生成。

雌鼠一般在20日龄以前阴道口由皮肤闭合，之后阴道口皮肤逐渐变薄，阴道开口，其开口与卵巢机能活动相一致，所以阴道开口是雌鼠性成熟的主要标志。

雄鼠在25日龄左右，睾丸自腹腔落入阴囊，35日龄后睾丸形成精子，40日龄后的精子可受精，同时体重增加较快。

小鼠性成熟日龄因品系及饲养管理条件的不同而有所差异，一般雌性小鼠为35～50日龄，雄性小鼠为45～60日龄。

小鼠的体成熟一般在60～90日龄，此时小鼠体重增长较缓慢，是小鼠的适宜配种年龄。

(二)性周期小鼠为多周期发情动物。

雌性小鼠除妊娠期，通常进行周期性排卵。

性周期为4～5天，一般在发情后2～3小时即可排卵，其性活动一般可分为发情前期、发情期、发情后期和休情期。

产后12～14小时内有一次产后性周期。

自此以后，由于给仔鼠哺乳，性周期暂时停止。

离公鼠独居生产的母鼠，在仔鼠断乳2～6天后可出现下一个性周期。

(三)排卵和交配雌性小鼠排卵期为3～4天，但在排卵期仅有数小时允许公鼠交配。

小鼠属于自发排卵的动物，排卵一般发生在发情期末的半夜至凌晨4:30左右，交配一般发生在排卵前的22:00至次日凌晨1:00，即交配早于排卵2小时左右。

交配后精子到达输卵管受精部位的时间为20～60分钟，等待新鲜的卵子。

小鼠的排卵数因品系、个体及饲养管理等环境因素的不同而有所差异，我们在实验中常选用的昆白系小鼠排卵较多，但个体差异较大。

小鼠自然繁殖交配或超排发情交配后，如要知道是否已经交配以及体内的卵母细胞是否受精，一般是在交配的次日晨8:00时以前检查雌鼠的阴门，如见有阴门栓(小块稠桨糊样物质)，则认为已经交配，并表明卵母细胞可能受精。

小鼠生后不同发育阶段附睾组织中Crb3的表达

ｔｃｎｌ２１，ｔｌＩ６２７９ｐｇｓｄｉ１．１５２１／ｅｈｏ，０１ＡｒｉｅＤ８８１，ａｅ，ｏ：０１６／０１ｃ
８２１．６８７
［０ＲｏＨ，ＦｎＳ，ＬｉＪ，ｔａ．Ｔｈｕｓ一ｌ１ｏ — １３ｈＭａｕＣｅ１ｅＣｒｍｂ３Ｐａｓｃｒｎ
一
用＿ ” 。在对斑马鱼Ｏｌ及相关Ｃｂ基因和ＭＤ】］ｉｅＴｒ —
Ｃ细胞培养Ｌ。Ｋｌ研究下发现敲除Ｃｂｒ３将导致多核表型、纺锤体、纤毛及中心体异常，明Ｃｂ说ｒ３对细
胞游离面的纤毛形成也起着重要作用。目前，关哺乳动物附睾的形态学研究已有资有
种Ｃｂ基因，在人和小鼠中已确定存在Ｃｂ、ｒ而ｒｌ
Ｃｂｒ２和Ｃｂｒ３３个基因Ｌ。Ｃｂ７］ｒｌ主要在人和小鼠的视网膜及大脑的部分区域表达；ｒ２在肾和视网膜Ｃｂ
分别选取４周龄、８周龄、２周龄、６周龄小鼠用于试１１验。每周龄４只，３周至５周小鼠的体重在１～５ｇ２，周至１周小鼠体重在２～３。０ｇ８６５ｇ５ｇ
（北农林科技大学动物医学院，西杨凌７２０）西陕１１０
摘要：用ＨＥ染色法和免疫荧光组织化学技术分别对小鼠生后不同发育阶段附睾组织结构及Ｃｂ应ｒ３

雄性小鼠生殖相关解剖图谱

雄鼠的生殖器官包括睾丸、附睾、输精管、储精囊、凝固腺、前列腺、尿道球腺、包皮腺及阴茎。

睾丸：睾丸又称精巢，是产生精子的地方。

睾丸共有两个，幼年时睾丸藏存腹腔内，性成熟以后则下降到阴囊内，其表面为纤维性结缔组织，内部有无数的曲细精管，雄性间质组织产生精子，存在与睾丸的曲细精管内。

附睾：附睾又称精巢上体，由许多弯曲旋廻的细管组成，是接受并暂时贮存精子的地方。

附睾分头、体、尾三部分。

附睾头部与睾丸上部的精细管连接，体部在睾丸的一侧下行，尾部与输精管相连。

精子在通过附睾期间成熟。

成熟的有受精能力的精子通过与附睾相接的输精管，交配时射入雌鼠阴道。

输精管：输精管是精子通过的管道，它是由附睾尾部引出的毛细管在储精囊下面、膀胱的背侧汇合进入尿道。

成年小鼠的输精管存在无数的有受精能力的精子。

储精囊(精液腺)：储精囊呈半月状，形成多数锯齿分叶，内部储存营养精子的白色浓稠分泌物。

凝固腺：为精液腺内侧附着的半月弧形的半透明的器官，起着凝固精液腺所分泌的分泌液的作用，交配后，形成阴栓。

前列腺：前列腺分背叶和腹叶，背叶位于尿道的背侧，腹叶位于膀胱基部附近处尿道腹侧，它与尿道球腺及精液腺等分泌的液体稀释精液，而使精子更为活跃。

尿道球腺：为球状分泌腺，位于骨盆腔内尿道球的背上方。

包皮腺：小鼠的包皮腺较大，是存于阴茎近腹壁上皮间的瓜籽形的脂质分泌腺，开口于包皮内侧。

阴茎：公鼠交配器官，由阴茎体、龟头组成，不交配时保持于包皮内Hypothalamus 下丘脑 Optic chiasma 视交叉 pituitary stalk 垂体Optic chiasm 视神经交叉Adenohypophysis 腺（性）垂体（前叶） intermediate lobe （脑下）垂体中叶 neurohypophysis 垂体神经部。

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

PAS和Hematoxylin染色显示小鼠睾丸不同的生精阶段
第一期：圆形精子出现原初染色呈现红色顶体泡；SSCs和少量的pachytene,圆形精子和小的长形精子细胞（小的精子头）。

第二期：圆形精子出现2-3个染色呈现红色的顶体泡；pachytene与SSCs距离较近。

第三期：圆形精子膜上红色顶体泡合并，仍然在精子膜上，不与核膜相连；中期的pachytene 核，带有sex body;SSCs核呈现异染色质状。

第四期：红色顶体接触核膜，呈现线条状或扁平；SSCs处于有丝分裂状态，小型的B型SSCs 出现。

第五期：红色的顶体沿着圆形精子膜呈现月牙状或括弧状；B型SSCs核呈现异染色质状态。

第六期：顶体呈现帽状，覆盖圆形精子的三分之一的表面，成熟的精子几近管腔；成熟的精子靠近管腔。

第七期：顶体继续扩散，顶体并不全部朝向基膜（红色顶体不全部向基膜分布），成熟精子完全到达管腔边缘。

第八期：圆形精子顶体大多朝向基膜，管腔内无精子，新一轮精子形成开始。

第九期：spermatids精子核开始延长；圆形精子细胞，Leptotene, pachytene, round spermatocytes。

第十期：精子扁平，并继续延伸，大部分精子头染色较浅；无圆形精子细胞，Leptotene, Zygotene, pachytene。

第十一期：精子头变薄，精子头Hematoxylin深染色。

第十二期：减数分裂明显，出现中期分裂象的次级精母细胞, Diplotene spermatocytes（显示细胞核呈现长条状，分裂相）。