药物分析实验：硫酸阿托品注射液的分析
药分实验（吉林大学）硫酸阿托品注射液的含量测定
硫酸阿托品注射液的含量测定一、实验目的1.掌握酸性染料比色法的基本原理和操作。
2.熟悉注射剂分析的基本操作技术。
3.掌握比色法的基本方法，要求和计算。
二、基本原理在适当pH (5.6)溶液中，有机碱（B）可以与氢离子结合生成阳离子（BH+），酸性染料（HIn）在此pH值下可解离成阴离子（In-），阴离子可与上述阳离子（BH+）定量地结合成有色离子对。
定量的用有机溶剂提取，在420 nm处测定该溶液中有色离子对的吸收度，并与对照品比较，即可计算出有机碱药物的含量。
实验内容1.对照品溶液的制备取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品对照品25 mg，精密称定，置25ml 容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取5 ml，置100 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得，作为对照品溶液。
每1 ml溶液中含无水硫酸阿托品50 μg。
2. 供试品溶液的制备精密量取硫酸阿托品适量（约相当于硫酸阿托品2.5 mg），至50 ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
3. 硫酸阿托品的含量测定精密量取对照品溶液与供试品溶液各2 ml，分别置预先精密加入氯仿10 ml的分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液2 ml，振摇提取2 min后，静置使分层，分取澄清的氯仿液（以水2 ml同法平行操作所得的氯仿液为空白）于420 nm的波长处分别测定吸收度，并将结果与1.027相乘，即得。
本品含硫酸阿托品应为标示量的90.0%~110.0%。
四、说明1. 溴甲酚绿溶液的制备：取溴甲酚绿50 mg与邻苯二甲酸氢钾1.021 g，加氢氧化钠液（0.2mol/L）5 ml使溶解，再加水稀释至100ml，摇匀，必要时滤过。
2.本实验采用酸性染料比色法测定硫酸阿托品含量，实验中应严格控制水相pH并保证离子对化合物能定量提取进入氯仿层。
3.振摇提取时既要能定量地将离子对化合物提入氯仿层，又要防止乳化和少量水份不混入氯仿层，因此，需小心充分振摇。
实验六硫酸阿托品注射液的鉴别与含量测定实验七阿司匹林片剂的鉴别和含量测定
2CH 2 SO4
(V0
V) ms
103
M阿
平均片重 标示量 100%
药典规定:标示量％应为95.0％~105.0％。
二、实验内容
（二）含量测定
2．方法：
2组共用
12片量
称取30片（规格25mg）乙酰水杨酸片→ 于研钵中研细
→ 称取适量（相当于乙酰水杨酸0.3g）
片粉
20mL 乙醇
振摇
3d 酚酞
用NaOH滴定至粉红色
化钾醇溶液和固体氢氧化钾作用→ 醌型产
物（深紫色）。
2、方法：
一支针剂5mg/mL
本品
（约相当于硫酸 阿托品5 mg)
水浴 蒸干
残渣
5d 发烟硝酸
水浴蒸干
黄色残渣
放冷
2~3d 乙醇
1小粒 固体KOH
观察颜色
深紫色
二、实验内容
（二）含量测定（酸性染料比色法 ）
利用碱性药物在一定pH下与某些酸性染料结合显 色，而进行分光光度法测定药物含量的方法。
＝
A
供
C对 稀释倍数 A对
1 标示量
1.027
100%
50µg/mL
本品为硫酸阿托品的灭菌水溶液，以含 （C17H23NO3）2H2SO4·H2O含量表示
药典规定:标示量％应为90.0％~110.0％。
实验七 阿司匹林片剂的鉴别 和含量测定
一、实验目的
掌握水杨酸类药物鉴别反应的实验原理。 掌握两步滴定法测定阿司匹林片剂的基本 原理。 了解制剂中辅料对测定的影响和排除方法。
二、实验内容
（一）鉴别 1．原理：
COOH
OCOCH3 + H2O
COOH OH + CH3COOH
硫酸阿托品有关物质液相方法研究
硫酸阿托品有关物质液相方法研究摘要：目的建立硫酸阿托品注射液有关物质方法方法采用高效液相色谱法，色谱柱为YMC-C18柱（4.6*10mm，3um），流动相A：水相（3.5g十二烷基硫酸钠+7g磷酸二氢钾溶于1800ml水中，用磷酸调节pH至3.3）-乙腈（180：96）；流动相B：乙腈。
检测波长210nm，流速1.0ml/min，柱温30℃。
结果各杂质峰与主峰能有效分离，杂质A与杂质C的线性较好（R?均为1），回收率分别为98.81%，97.72%。
结论建立的高效液相色谱法快速、准确、专属性强，可用于硫酸阿托品注射液有关物质检查。
关键词：硫酸阿托品；液相色谱；有关物质1.仪器与试剂1.1 仪器Agilent1260，PHS-3C精密PH计，METTLER TOLEDO XS105天平1.2 色谱柱根据EP标准中所定，本实验选用YMC C18（3μm，4.6×10mm）为试验用柱。
1.3 试剂乙腈（Merck色谱纯），磷酸二氢钾（西陇化工股份有限公司），十二烷基硫酸钠（AR，湖南尔康制药股份有限公司），磷酸（无锡市佳妮化工有限公司，批号20130701），水为纯化水经0.45um滤膜抽滤，盐酸（上海三鹰化学试剂有限公司），氢氧化钠（上海三鹰化学试剂有限公司）。
2.方法与结果2.1方法确定2.1.1色谱柱选择根据EP硫酸阿托品原料项下标准，以十八烷基硅烷键合硅胶（4.6mm）作为填充剂。
2.1.2流动相配制流动相A：水相（3.5g十二烷基硫酸钠+7g磷酸二氢钾溶于1800ml水中，用磷酸调节pH至3.3）-乙腈（180：96）；流动相B：乙腈时间流动相A 流动相B0-2 95 52-20 95→705→302.1.3波长以及进样量选择根据EP硫酸阿托品标准中方法，选用210nm作为检测波长，进样量为10ul。
2.1.4对照溶液（系统适用性）配制取本品适量，加流动相A溶解并稀释制成每1ml中约含硫酸阿托品0.24mg的溶液，作为供试品溶液；称取约2.5mg阿托品有关物质B对照品，置于10ml容量瓶中，用供试液溶解并稀释至刻度，移取5ml此溶液，置于25ml容量瓶中，用流动相A稀释至刻度，即得。
硫酸阿托品的分析
硫酸阿托品Liusuan Atuopin Atropine SulfateH O OH2H2SO4 H2O(C17H23NO3)2`H2SO4`H2O 694.84本品为（±）α-（羟甲基）苯乙酸8-甲基-8- 氮杂双环[3.2.1]-3-辛酯硫酸盐一水合物。
按干燥品计算，含(C17H23NO3)2·H2SO4不得少于98.5％。
【性状】本品为无色结晶或白色结晶性粉末；无臭。
本品在水中极易溶解，在乙醇中易溶。
熔点取本品，在120℃干燥3小时后，立即依法测定（附录ⅥC），熔点不得低于189℃，熔融时同时分解。
【鉴别】(1)本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集487图）一致。
原理：从红外吸收光谱中可以获得硫酸阿托品吸收光谱的形状，吸收峰波数的位置、吸收相对强度等信息，这些信息均可以用于鉴别。
若供试品德光谱图与对照光谱图一致，通常可判定两化合物为同一物质。
(2)本品显托烷生物碱类的鉴别反应（附录Ⅲ）。
原理：托烷类生物碱的酯键易水解生成莨菪酸。
莨菪酸与发烟硝酸共热得黄色的莨菪酸三硝基衍生物，冷后，加醇制氢氧化钾溶液或固体氢氧化钾作用转变成醌型产物，呈深紫色。
(3)本品的水溶液显硫酸盐的鉴别反应（附录Ⅲ）。
原理：①取供试品溶液，滴加氯化钡试液，即生成BaSO4的白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。
②取供试品溶液，滴加醋酸铅试液，即生成PbSO4的白色沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解。
③取供试品溶液，加盐酸，不生成白色沉淀（与硫代硫酸盐区别）。
【检查】酸度取本品0.5g，加水10ml溶解后，加甲基红指示液1 滴，如显红色，加氢氧化钠滴定液(0.02mol/L) 0.15ml ，应变为黄色。
原理：阿托品为弱碱性物质，与硫酸（强酸）成盐，即为强酸弱碱盐，故水溶液显酸性，所以加入甲基红后显红色；滴加氢氧化钠滴定液，中和掉了硫酸，使得阿托品游离出来，此时溶液显碱性，所以甲基红变为黄色。
硫酸阿托品实验报告数据
一、实验目的1. 了解硫酸阿托品的性质和用途；2. 掌握硫酸阿托品在实验中的用量和配制方法；3. 通过实验，验证硫酸阿托品在不同条件下的药效。
二、实验原理硫酸阿托品是一种抗胆碱药，主要作用是阻断乙酰胆碱受体，使副交感神经功能减弱，从而产生扩瞳、调节麻痹、抑制腺体分泌等作用。
本实验通过观察硫酸阿托品在不同条件下的药效，验证其药理作用。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：电子天平、移液管、滴定管、烧杯、试管、试管架、酒精灯、加热器、温度计等；2. 试剂：硫酸阿托品、氢氧化钠溶液、酚酞指示剂、蒸馏水等。
四、实验步骤1. 硫酸阿托品标准溶液的配制：a. 称取一定量的硫酸阿托品，准确至0.0001g；b. 将称取的硫酸阿托品溶解于少量蒸馏水中，转移至100ml容量瓶中；c. 用蒸馏水定容至刻度，摇匀；d. 配制浓度为1mg/ml的硫酸阿托品标准溶液。
2. 硫酸阿托品药效实验：a. 将实验分为三组，每组设置5个试管；b. 分别向三个试管中加入1ml的硫酸阿托品标准溶液，另两个试管作为对照组，加入1ml蒸馏水；c. 向每个试管中加入2ml的氢氧化钠溶液，观察并记录溶液颜色变化；d. 向每个试管中加入1滴酚酞指示剂，观察并记录溶液颜色变化；e. 分别对三个试管进行加热，观察并记录溶液颜色变化；f. 记录实验数据。
五、实验数据及结果1. 硫酸阿托品标准溶液的配制：1mg/ml；2. 硫酸阿托品药效实验数据：| 组别 | 加入硫酸阿托品 | 加入氢氧化钠溶液 | 加入酚酞指示剂 | 加热 || ---- | -------------- | ----------------- | ---------------- | ---- || 1 | + | + | + | + || 2 | + | + | + | + || 3 | + | + | + | + || 4 | - | + | + | + || 5 | - | + | + | + |结果：加入硫酸阿托品的三个试管溶液颜色变化明显，对照组溶液颜色变化不明显。
硫酸阿托品对家兔瞳孔、胃肠道、腺体、胆囊以及心脏的作用研究
科研计划书题目：硫酸阿托品对家兔瞳孔、胃肠道、腺体、胆囊以及心脏的作用研究一统计设计1.明确研究目的和研究假说目的：探究硫酸阿托品对胃肠道的影响，探讨硫酸阿托品对家兔瞳孔的扩散作用，探究硫酸阿托品解除迷走神经对心脏的抑制，探究硫酸阿托品是如何解除胃肠道痉挛的。
研究假说：硫酸阿托品是抗胆碱药物用于胃肠道、胆绞痛，散瞳检查验光，角膜炎，有机磷农药中毒等的治疗2.确定研究对象与观察数量、样本含量和抽样的办法研究对象：家兔样本含量：6只抽样办法：随机抽样3.观察指标体重，尿量，瞳孔的大小，饮食量，排便量以及家兔的状态（心率、活动能力、身体状态）4.需要收集哪些原始的资料，又采用什么办法所以的相关资料都需要收集并纪录下来，可以用过尺子测量称重心电图器肉眼观察以及精密仪器测量后得到。
5.如何对资料作进一步的整理和分析通过家兔的瞳孔大小尿量排便量体重心率等作出表格，以注射不同含量的阿托品为变量，再对体重相差不多的家兔状态以及上述情况进行分析整理，观察各组内各指标的情况计算并统计指标。
6.如何控制误差？研究员分成至少3组分别对18只家兔进行研究实验，参与实验的研究人员都经过统一的培训;各个指标在每个样本中进行重复测量3次;所有分组的药品要规格统一一致。
7.预期会得到什么结果：阿托品是一种抗胆碱药物是M受体阻断剂，它可与乙酰胆碱竞争副交感神经节后纤维突触后膜的乙酰胆碱M-受体，抑制了家兔腺体分泌：导致家兔瞳孔扩大、调节睫状肌痉挛、解除肠胃和支气管等平滑肌痉挛。
8.研究进度研究进度：2020.9 -2020-9 查阅文献资料、整理提出问题2020.9 -2020-9 开展实验2020.9 -2020-9 整理实验数据，开始论文写作2020.9 -2020-9 完成论文二、收集资料阿托品是经典的M胆碱受体阻断药，具有散瞳、解痉、抑制腺体分泌等作用，对心血管系统亦有一定影响。
在临床上，阿托品可于胆囊手术前给药以预防胆心反射，稳定心率及血压[1-2]。
硫酸阿托品注射液的含量测定
In BH BH In
四
操作步骤
水相中反应 有机溶剂提取
比色法测定
精密量取对照品溶液与供试品溶液 (标示量=0.5mg/ml)各２ml，分别置预先 精密加入氯仿１０ml的分液漏斗中，各 加溴甲酚绿溶液2ml，振摇提取２min后， 静置使分层，分取澄清的氯仿液（以水 ２ml同法平行操作所得的氯仿液为空白） 于４２０nm的波长处分别测定吸收度
－ －
BH+
－
OH
H+
H+ + In
★ pH（Leabharlann 性）BH+，In－ BH+In-，有机溶剂提取的是HIn ★ pH（碱性） In-，BH+ BH+In-，有机溶剂提取的是B
2. 有机溶剂的选择 3. 酸性染料的选择 4. 水分的影响 严防水分的混入
5. 有色杂质的排除
课后思考题
成都医学院药物分析教研室
实验四
硫酸阿托品注射液的含量测定
一
实验目的
• 1. 掌握酸性染料比色法的基本原理及操作
要点.
• 2.熟悉注射剂的分析方法．
• 3.正确使用UV-1102型分光光度计.
二
仪器和试剂
仪器： 分液漏斗、锥形瓶、移液管、
UV-1102型分光光度计 等
试剂： 硫酸阿托品对照品及供试品、 溴甲酚绿溶液pH 3.6~5.2（黄~蓝） 、 氯仿
五
注射液含量测定结果的 计算
c对 标示量 %
A供 A对
n 100 %
c标示
影响定量分析的因素 1. 水相的最适pH值 能使有机碱全部以盐的形式存在，酸
硫酸阿托品及其制剂的分析
ü 目的：消除溶剂或其他可能的 因素带来的误差
记录滴定液体积
高氯酸滴定液 (0.l mol/L) 滴定至溶液显 纯蓝色
空白试验
硫酸阿托品制剂
有多种剂型：片剂、注射液、眼用制剂（软膏，凝胶）
含量测定-硫酸阿托品片
ü 药理活性较强 ü 临床使用剂量较小
药L/O物/G/分O 析
硫酸阿托品及其制剂的分析
阿托品（Atropine）
• 亦称消旋莨菪碱 • 从莨菪、颠茄和曼陀罗等植物中提取 • 天然生物碱
天仙子
洋金花
阿托品（Atropine）
• 莨菪烷类药物典型代表
• 最常用的M胆碱受体阻断剂
• 临床用途广泛
缓解内脏绞痛，解除痉挛
硫酸阿托品注射液 （ChP2015）
Ø 酸性染料比色法 Ø 只在供试品溶液配制略有差异 Ø 直接稀释，方法简单
精密量取 约相当于2.5mg
50mL
供试品溶液
硫酸阿托品眼膏 （ChP2015）
—专属性强的HPLC
取本品适量 约相当于10mg
加水适量
精密称定
50mL
加水振摇 使溶解
50mL
对照品约25mg
精密称定
精密量取 5ml
25mL
100mL
对照品 溶液
供试品溶液
2ml
CHCl3
溴甲酚绿
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5
空白溶液和对照品溶液的制备
空白溶液：以水2ml按同法平行操作所得的氯 仿液为空白；
对照品溶液：以对照品溶液2ml按同法平行操 作所得的氯仿液为对照溶液；
6
样品测定
照分光光度法，于420nm的波长处分别测定 如下样品的吸光度
1、以空白溶液校正，消除系统误差干扰； 2、测定样品溶液的吸光度； 3、测定对照品溶液的吸光度。
7
结果计算
按下式求得样品占标示量的百分含量：
式中：Ax 为供试品溶液的吸光度；Ar为对照 品溶液的吸光度；Cr为对照品溶液的浓度 (mg/ml)；n为样品的稀释倍数；1.027为无水 硫酸阿托品与含1分子结晶水硫酸阿托品的分 子置换算因数
3
对照品溶液的制备
精密称取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品对 照品25mg，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释 至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶 中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
浓度=？（计算好）
4
供试品溶液的制备
精密量取本品适量(约相当于硫酸阿托品 2.5mg)，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度， 摇匀，即得。
10
注意事项（二）
4．所用比色杯应检查是否配对。比色杯装液 后严格要求内外清洁透明，若有气泡或颗粒应 重装。
5．接触过氯仿提取液的容器，使用完毕均应 先以醇荡洗，然后水洗，再以温热的清洁液处 理，洗净备用。
6、实验数据要保留第一手资料，切记不要随 处乱记。
11
8
结果判断
药典规定，本品含硫酸阿托品应为标示量的 90.0-110.0%.
9
注意事项
1．酸性染料比色法中所用的试液、指示液、 溶剂等均应用吸量管精密量取。
2．对照品与供试品应平行操作，包括振摇的 方法、次数、速度、力度以及放置的时间等均 应一致。
3．采用甘油—淀粉糊做润滑剂。分液漏斗必 须干燥无水。分取澄清的氯仿提取液时，应弃 去初流液。
硫酸阿托பைடு நூலகம்注射液的分析
目的和要求
1．掌握酸性染料比色法基本原理 及操作要点
2. 熟悉注射剂的分析方法 3. 正确使用紫外分光光度计
2
实验原理
在pH5.6的缓冲溶液中，阿托品(B)与氢离子（ H+)结合成盐(BH+)，酸性染料溴甲酚绿在此 pH下解离为阴离子(In-)，与上述阳离子定量( 过量）地结合成黄色配位化合物(BH+ In-)，并 被氯仿定量地提取，于λmax420nm处测定氯仿 提取液的吸光度，与对照品的结果比较，求得 硫酸阿托品的含量。