生物监测技术技术

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水环境污染物生物监测技术

水环境污染物生物监测技术

水环境污染物生物监测技术水是生命之源,但现代工业化和城市化的发展给水环境带来了严重的污染问题。

为了确保水环境的健康和可持续发展,水环境污染物的监测变得至关重要。

而生物监测技术作为一种有效的水环境监测方法,被广泛应用并显示出了巨大的潜力。

本文将介绍一些常见的水环境污染物生物监测技术,并探讨它们的优势和应用前景。

一、生物指标监测技术生物指标监测技术是一种基于生物体对环境污染物的反应而进行的监测方法。

通过观察或测量生物体对污染物的反应,可以评估水环境的污染程度和影响。

例如,水中鱼类的存活率、生长状况和生殖能力等指标可以反映水环境中有毒物质的浓度和毒性。

通过观察这些生物指标的变化,可以及时发现和评估水环境污染的情况。

生物指标监测技术的优势在于可以全面评估水环境的综合污染情况,而不仅仅是某种特定污染物的浓度。

此外,生物指标监测技术还可以提供有关污染物的生物累积和生物转化过程的信息,从而帮助科学家理解污染物在生态系统中的行为和影响。

因此,生物指标监测技术在水环境污染物监测中具有广阔的应用前景。

二、生物传感器技术生物传感器技术是一种基于生物分子的特异性识别和信号转导机制而构建的监测方法。

通过将特定的生物分子(如酶、抗体、DNA等)与传感器相结合,可以实现对特定污染物的高灵敏度、高选择性的监测。

生物传感器技术具有快速、便携、灵敏度高、选择性强和实时监测等优势。

与传统的分析方法相比,生物传感器技术不需要复杂的前处理步骤,可以减少实验时间和成本,并且可以在实时监测中提供准确的结果。

因此,生物传感器技术在实际的水环境污染物监测中具有广泛的应用前景。

三、遗传毒性评价技术遗传毒性评价技术是一种通过评估环境样品对生物体遗传物质的损害程度而进行污染监测的方法。

这种技术通常基于细菌的遗传学反应,细菌暴露于环境样品中后,通过检测细菌DNA的变异或突变来评估环境污染物的遗传毒性。

遗传毒性评价技术具有高灵敏度、快速、经济和可靠等优势。

生物特征识别与生物监测技术的研究和应用

生物特征识别与生物监测技术的研究和应用

生物特征识别与生物监测技术的研究和应用随着科技的不断发展,生物特征识别与生物监测技术逐渐成为当今社会中广泛应用的一种先进技术。

生物特征识别是指通过检测、提取和匹配人体独特的生物特征信息来进行身份验证和识别的一种技术手段。

而生物监测技术则是指通过对人体各项生理指标的实时监测和数据分析,以实现对人体状况的全面监测和预警。

这两种技术近年来在安全领域、医疗健康领域、金融领域等诸多领域得到了广泛应用,并取得了显著的成效。

一、生物特征识别技术的研究与应用1. 指纹识别技术是最早并且广泛应用的一种生物特征识别技术。

指纹的纹理结构是唯一的,通过提取指纹的细节特征,可以进行准确的身份确认。

目前,指纹识别技术已经广泛应用于手机解锁、门禁系统、快速支付等场景,为人们的生活带来了便捷与安全。

2. 面部识别技术是基于人脸特征的识别方法,通过分析人脸的轮廓、眼睛、鼻子、嘴巴等特征点,提取特征并进行比对来完成身份验证。

面部识别技术被广泛应用于视频监控、人脸解锁、身份确认等场景,并在辨别精度和处理速度方面取得了较大的突破。

3. 虹膜识别技术是通过对人眼虹膜中的纹理、颜色和形状等特征进行分析,来识别和验证个体身份的一种先进的生物特征识别技术。

虹膜识别技术具有高准确性、高稳定性的特点,已广泛应用于边境安检、银行金库等需要高安全性的场景。

二、生物监测技术的研究与应用1. 心率监测技术是通过测量人体的心跳频率来判断人体的心脏健康状况。

目前,已经出现了一些可以实时监测心率的心率手环、智能手表等设备,可以帮助人们及时了解自己的心率变化情况,预防心脏疾病的发生。

2. 血压监测技术是通过测量人体的血压值来判断人体的血液循环情况。

近年来,出现了一些便携式的血压测量设备,如智能手表、智能手环等,可以实时监测血压,并将数据同步到手机或电脑上,帮助人们进行健康管理。

3. 睡眠监测技术是通过对人体睡眠过程中的呼吸、心率、体动等信息的监测,来评估人体的睡眠质量。

生物监测技术探讨

生物监测技术探讨

五、目前开展的工作和存在的问题
去年环保站承担了《普光气田生物、土壤监 测与评价方法研究 》项目。由于以前对生物监 测方面的工作研究比较少,去年七月份,站上 专门组织了参与项目的人员去四川农业大学进 行学习培训。 回来后又做了一系列的试验和前期准备工 作,例如:熏气设备的设计、调整和优化,选 择合适的植物生理指标,在环保站进行简单的 熏气实验等。
四、生物监测技术与方法
2.生物群落监测方法
(1)生物指数监测法(贝克生物指数、贝壳津田生物指数、生物种类多样性指数、硅藻生
物指数)
(2)污水生物系统法
(3)PFU微型生物群落监测法(简称PFU法)
四、生物监测技术与方法
生物测试、生物的生理、生化指标测定、
生物体内污染物残留量测定都要求对动植物样
品的生理指标作进一步的测定,因此要对样品
(3)采样方法:在每个采样小区内的采样
点上分别采集5至10处植株的根、茎、叶、果 实等,将同部位样混合,组成一个混合样;采 集样品量要能满足需要,一般经制备后,至少 有20至50g干重样品。
四、生物监测技术与方法
b. 植物样品的制备 (1)鲜样的制备步骤 样品洗净→晾干或拭干→捣碎机捣碎→研磨 (2)干样的制备 风干或烘干→磨碎→过筛→保存 c. 分析结果表示方法 常以干重为基础表示(mg/kg),但含水 量高的蔬菜、水果等,以鲜重表示计算结果为 好。
五、目前开展的工作和存在的问题
五、目前开展的工作和存在的问题
五、目前开展的工作和存在的问题
污染物在 动物体内 的分布 能溶解于体液的物质 在体内分布比较均匀
镧、钍等阳离子
与骨骼亲和的 物质 对某一器官特 殊亲和的物质 脂溶性物质
动物吸收 污染物质 后,主要 通过血液 和淋巴系 统传输到 全身各组 织,进而 发生危害

生物检测技术的发展与现状

生物检测技术的发展与现状

生物检测技术的发展与现状随着人类科技的不断发展,生物检测技术已逐渐成为人们关注的热门话题。

在现代科技的推动下,生物检测技术以其高精度、高灵敏度、易操作等优势,正在逐步取代传统的仪器分析方法,成为了分析和检测市场不可或缺的一部分。

一、生物检测技术的意义生物检测技术主要应用于医疗、食品、环保等领域。

其中,在医疗领域应用最为广泛。

医疗上的生物检测技术主要针对人体内的生化参数、蛋白质、DNA等进行定量检测和分析,从而实现对疾病的早期诊断和治疗。

除此之外,生物检测技术也可以用于食品检测,检查食物中的毒素、重金属等对人体有害的物质,并对其进行定量分析,确保食品质量的安全。

此外,在环保领域,生物检测技术也可以应用于检测大气、水源和土壤等中的有害元素和物质,以及对其进行定量分析和监测。

二、生物检测技术的发展历程生物检测技术的发展历程可以追溯到20世纪初期。

当时,生物化学家发现,各种微生物、细胞和酶在特定条件下可以选择性地作用于特定物质,从而产生非常高的分析灵敏度,这一现象被认为是生物检测技术的基础。

20世纪50年代,著名的化学家克莱蒙特•浪费尔发现了酶可作为传感器对特定物质进行探测,从而推动了生物检测技术的发展。

20世纪60年代末期至70年代初期,克莱蒙特在研究中发现了主动和被动元素的交互作用,并研制出具有高灵敏度和选择性的传感器,由此,第一代生物检测技术开始走向可操作性化和商业化。

1986年以后,一些具有更高精度和选择性的新型生物传感器得到了发展,如流动注射分析法、光学生化传感器、电阻传感器、纳米生物传感器等,这些传感器已经成为目前世界上最具有竞争力的生物检测技术。

三、生物检测技术的现状目前,生物检测技术的发展已取得了长足的进步。

据了解,目前国内外生物检测技术的发展主要目标是提高检测的准确性和灵敏度。

作为一种新兴的分析技术,生物检测技术已逐步取代传统的仪器分析方法。

同时,由于生物检测技术具有高效、低成本、易操作等优点,所以被广泛应用于快速检测、口感测评、质量监测等领域。

疫情防控中的生物监测技术

疫情防控中的生物监测技术

疫情防控中的生物监测技术随着疫情的大规模爆发,在防疫和管控方面,生物监测技术发挥了重要作用。

生物监测技术通过对人体、环境、物品等进行采样分析,可以检测潜在的病原体,有助于及早发现、及时隔离和诊疗患者,降低病毒传播风险,保障公众健康。

下面,本文将介绍疫情防控中常见的生物监测技术。

一、核酸检测技术核酸检测技术是目前广泛应用于病毒检测的一种技术。

它通过采集样本(包括采集咽拭子和鼻拭子),对其DNA或RNA进行检测,从而检测出目标病原体。

在新冠疫情爆发后,核酸检测成为诊断新冠肺炎的主要手段之一。

核酸检测技术具有高灵敏度的优点,并且可实现自动化操作,大大提高了检测效率。

但是,核酸检测也有一定的局限性,如需要特定实验室进行分析,操作人员技术要求高,且样本的质量会影响到检测结果。

而且,由于病毒等病原体在不同的时间和组织中分布情况不同,同一个病人在不同时间和不同采样位置的检测结果也有可能不同。

二、血清学检测技术血清学检测技术是通过检测病人血液中的特定抗体来诊断感染情况。

血液中的抗体是人体对外来病毒等病原体产生的免疫应答反应。

在感染后,人体会产生相应的抗体,由于特定抗体的产生通常需要一定时间,所以血清学检测技术也常用于诊断病毒感染后的免疫状态。

在新冠疫情中,血清学检测技术起着重要作用。

在疫情初期,核酸检测的供应量不能满足价格需求,而血清学检测技术则可以检测目前或近期内感染者的免疫状态。

此外,血清学检测技术可在较短的时间内检测多个样本,便于大规模筛选与监控。

三、双抗体夹心法检测技术双抗体夹心法检测技术又称为ELISA,是目前应用广泛的治疗检测技术之一。

此技术通过在纯化的病毒蛋白与特异性单抗之间进行配对,然后通过辅助抗体检测方法检测患者样本中的特定抗体。

此技术利用特定的吸附体在板上固定目标分子,将含特异性抗体(第一抗体)的样本加到孔中,与吸附的分子结合。

加入第二抗体即酶标记复合物,与第一抗体发生反应,再加入底物,检测出酶活性的信号。

生物监测的原理和应用

生物监测的原理和应用

生物监测的原理和应用1. 原理生物监测是一种利用生物体作为监测对象,通过采集和分析生物体内的信息,来了解环境污染程度和生物体健康状况的技术手段。

其原理主要基于以下几个方面:•生物指示器:生物体对环境中的变化具有敏感性,可以反映环境质量的好坏。

通过观察和测量生物体的特征,如生长状况、死亡率、疾病发生率等,可以得知环境的污染情况。

•生物传感器:生物体内的生物传感系统可以感知和转化环境中的生物化学信号,将其转换为电信号或其他可测的形式。

通过检测生物体内的这些信号,可以实时监测环境的污染程度。

•生物标志物:生物体在受到环境污染或其他刺激时,会产生一些特定的物质,称为生物标志物。

通过检测这些标志物的存在和含量,可以判断环境污染的程度和类型。

2. 应用2.1 环境监测生物监测在环境监测方面有着广泛的应用。

通过监测水体、空气、土壤等环境中的生物体,可以了解环境的污染情况,为环境保护提供科学依据。

具体应用包括:•水质监测:生物监测可以通过检测水中的藻类、浮游动物等生物体来评估水体的营养状况、水质污染程度等。

例如,高含氮和磷的水体会导致藻类过度生长,通过监测藻类的数量和种类可以判断水体的富营养化程度。

•空气质量监测:生物监测可以通过观测生物体的呼吸和生长状况来评估空气质量。

例如,苔藓植物对空气中的二氧化氮敏感,可以用作评估空气中二氧化氮的浓度。

•土壤污染监测:生物监测可以通过检测土壤中的蚯蚓、细菌等生物体来评估土壤的污染程度。

例如,土壤中的蚯蚓数量和活动情况可以反映土壤的质量和健康状况。

2.2 生态系统监测生物监测在生态系统监测方面也有重要的应用。

通过监测生态系统中的生物多样性、生物量等指标,可以了解生态系统的健康状况和演替过程。

具体应用包括:•物种监测:生物监测可以通过定点观测和生物清查等方式,对物种的存在和数量进行监测。

例如,通过观测鸟类的迁徙规律和数量变化,可以评估生态系统的稳定性。

•生物功能监测:生物监测可以通过检测生态系统中的功能群体、生态位等指标,评估生态系统的功能状态。

人体健康的生物监测技术和应用

人体健康的生物监测技术和应用

人体健康的生物监测技术和应用人体健康一直是全世界人民所关注的话题,因为健康的身体才能拥有快乐的生活,才能更好地工作和生存。

然而,随着现代化社会的快速发展,各种污染和疾病的增加也加剧了人们对身体健康的担忧。

为了解决这些问题,生物监测技术逐渐成为人们关注的焦点。

一、生物监测技术生物监测技术是一种利用电子技术、化学技术、生物技术等多种科技手段对人体内部生理指标的监测与分析技术。

其中较为常见的有心电图监测、血液常规分析、尿液常规分析、生化指标监测等多种技术手段。

二、生物监测技术的应用心电图监测:心电图监测可以实时监测心脏的功能状态,对预防和早期发现心脏疾病具有重要作用。

同时,心电图监测可以辅助医生制定治疗方案,缩短治疗时间,减轻患者的负担。

此外,心电图监测还可以用于高强度训练等健身运动的人群中,及早发现身体潜在的健康问题。

血液常规分析:血液常规分析可以清晰判断人体内部的生理状态,如血糖、血脂等指标,根据分析结果,科医生可以制定更加准确的治疗方案。

同时,血液常规分析可以辅助人们合理地安排饮食和锻炼,保障身体健康。

尿液常规分析:尿液常规分析可以分析人体内部的体温、尿酸、肾脏功能等生理指标,对早期发现人体内部的潜在问题具有重要意义。

同时,尿液常规分析也可以指导人们选择更加适合自己的健康饮食。

生化指标监测:生化指标监测主要是针对人体生化反应的监测和分析,如血红蛋白含量、白蛋白含量等重要指标,这些指标可以更加准确地判断身体健康状况。

三、生物监测技术的发展前景生物监测技术的应用范围将越来越广泛,未来还将有更加优秀的技术得到推广和应用。

生物监测技术可以应用在医务领域、食品安全领域、个人健康领域等领域,这将给人们的生活带来更多安全保障和更好的生理保障。

四、总结生物监测技术已经成为促进人体健康的一种重要手段,未来将有更多的科技力量对其进行改进和完善,将会在人类生命健康事业上发挥更加重要的作用。

未来,生物监测技术将继续推动健康事业发展,创造更加美好的生活。

生物多样性监测技术的使用方法与数据分析

生物多样性监测技术的使用方法与数据分析

生物多样性监测技术的使用方法与数据分析生物多样性是指地球上所有生物的种类、数量和分布的多样性。

它是维持生态系统健康和生命的关键因素之一。

了解和监测生物多样性对于保护和管理自然资源以及预测和适应气候变化至关重要。

在过去的几十年中,随着技术的不断发展,生物多样性监测技术也在不断创新和进步。

本文将重点介绍生物多样性监测技术的使用方法和数据分析。

首先,我们会介绍常用的生物多样性监测技术,然后详细阐述如何使用这些技术进行数据采集和分析。

一、生物多样性监测技术的使用方法1. 样本收集和标记生物多样性监测通常需要采集和标记生物样本。

样本可以是植物、动物或微生物,取决于研究的重点和目的。

样本采集可以通过定点观察、捕捉和标记、室内培养等多种方法进行。

2. DNA条形码技术DNA条形码技术是一种用于物种鉴定的先进技术。

它基于生物体内特定基因区域的DNA序列,在数据库中进行比对,从而确定物种的身份。

DNA条形码技术可以快速、准确地识别大量的生物样本,并具有广泛的应用前景。

3.声纹识别技术声纹识别技术是一种基于动物的声音特征对个体进行识别的方法。

每个动物的声音都有独特的频率和模式,可以通过分析这些声音特征来识别不同的个体和物种。

声纹识别技术可以应用于动物行为研究和种群监测中。

4.遥感技术遥感技术是通过使用传感器和卫星来获取地球表面信息的技术。

它可以帮助研究人员获取大范围和高分辨率的生态环境数据,如陆地覆盖类型、植被指数等。

遥感技术可以用于监测不同地区的生物多样性变化和生态系统健康状况。

二、数据分析方法1. 物种多样性指数计算物种多样性指数是衡量一个地区生物多样性程度的重要指标。

其中最常用的指标包括物种丰富度、物种均匀度和Shannon多样性指数等。

通过对采集到的样本进行分类和计数,可以计算出不同指标的值,并用于比较和分析不同地区或不同时间段的生物多样性。

2. 物种分布模型物种分布模型是基于物种采样和环境变量数据建立的数学模型。

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生物检测技术重点及习题1、某家食品厂生产的肉馅饺子中怀疑有肠出血性大肠杆菌(EHEC,O157-H7)存在,请简述检验步骤,(在检测手段中应包含生化,分子生物学,免疫学,等检测方法)1.取饺子馅制成溶液,并将此溶液涂布在山梨醇-麦康凯琼脂平板上,35摄氏度,孵育18-24h。

2.若出现红色,中等大小菌落,则可初步判定可能含有出血性大肠杆菌,将该菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白胨液体培养基中,35℃孵育48-96h,于5ml培养基中加入5-6滴甲基红,若出现红色,则可能为大肠埃希菌,3.分离纯化菌液,然后用抗体-抗原-酶标抗体进一步检测其抗原特异性,根据其结果判定是否为出血性大肠杆菌,4.将菌体,离心纯化,制备菌悬液,提取DNA并纯化,对DNA进行PCR扩增,然后测序,与EHEC,O157-H7进行比对,最终确定其菌种。

2、间接酶联免疫吸附试验原理与步骤:间接法主要用于检测抗体,其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相抗原结合的待测抗体。

首先用特异性抗原包被固相载体,加入含待测抗体的样品,使之与固相抗原结合,再加入酶标记的第2抗体,使之与待测抗体结合;反应后再加入底物显色,颜色的深浅与标本中待测抗体的量成正比。

此方法的特点是只需一种酶标记的第2抗体就可以检测多种抗体,因而在临床中广泛用于检测各种感染性疾病的抗体;缺点是易受到标本中多种物质的干扰而产生假阳性反应。

3、补体结合试验的反应原理:补体结合试验有5种成分参与反应,分属于3个系统,1.反应系统,2.补体系统,3.指示系统。

其中反应系统(抗体与抗原)与指示系统(绵羊红细胞与溶血素)争夺补体系统,如先加入反应系统和补体,给其以优先结合补体和机会,如果反应系统中存在待测的抗体(或抗原),则,抗原抗体发生反应后可结合补体,再加入指示系统,由于反应中无游离的补体,而不出现溶血,为补体结合试验阳性,如待测系统中不存在待检测的抗体(或抗原),则在液体中仍有游离的补体,当加入指示剂时会出现溶血,为补体结合试验阴性。

4、介绍四种荧光定量PCR原理:SYBR Green I 原理:SYBR Green I 是一种结合于小沟中的一种双链DNA结合燃料,与双链DNA结合后,其荧光大大增强,在PCR反应体系中,加入过量SYBR Green I 荧光染料,SYBR染料特异性的接入DNA双链后,发射强荧光信号,而不掺入链中的SYBR染料分子仅有微弱的荧光信号背景,从而保证荧光信号的增加与PCR 产物的增加同步。

Taq man法:杂交探针的5'端标记有报告基因,3'端标记有荧光淬灭基因,当探针完整,报告基因所发射能量被荧光淬灭基因吸收,无荧光,当TAQ 酶有5'到3'外切核酸酶活性,可水解探针,使报告基因与荧光淬灭基因分开,报告基因发出的荧光不能被荧光淬灭基因吸收,而能检测出荧光。

分子新标法:当无目标核酸序列时,荧光分子和淬灭分子距离近,荧光分子发出的能量,被淬灭分子吸收并以热能消耗,不发荧光,当有目标核酸序列时,中间的环序列与目标核酸序列结合,荧光分子和淬灭分子距离远,此刻,淬灭分子不能吸收荧光分子能量,可以检测到荧光。

5、IMViC试验及其应用:I、吲哚试验:原理:有些细菌有色氨酸酶,能分解色氨酸产生吲哚,吲哚对对二氨基苯甲醛形成红色的玫瑰吲哚,应用于肠杆菌科的鉴别。

M、甲基红试验原理:某些细菌在糖代谢过程中,分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸进一步被分解为甲酸,乙酸,和琥珀酸等,培养基PH下降至4.5以下时,加入甲基红指示剂呈红色,应用于肠杆菌科内某些种属的鉴别。

V、V.P.试验原理:测定细菌产生乙酰甲基甲醇的能力,某些细菌,如产气肠杆菌,分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸进一步脱羧形成乙酰甲基甲醇,在碱性条件下,乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰,进而与培养基中的精氨酸等含有胍基的物质结合形成红色化合物,应用于大肠埃希菌和产气肠杆菌的鉴别。

C、柠檬酸盐试验:某些细菌能利用柠檬酸盐作为唯一碳源而在此培养基上生长并分解柠檬酸盐为碳酸钠,使培养基变为碱性,若用溴麝香草酚蓝指示剂,斜面出现菌落或菌苔,培养基变蓝色为阳性,无菌落生长,培养基为绿色为阴性。

免疫学检测技术抗原:能刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答,并能与相应免疫应答产物在体内外发生特异性反应的物质。

这两种性质同时具备的抗原称为完全抗原,只有反应原性而没有免疫原性的称为半抗原。

抗体:是机体免疫系统受抗原刺激后产生的特异性球蛋白,称为免疫球蛋白,由遗传基因决定的所产生的抗体称为天然抗体,由抗原激发免疫细胞产生的抗体称为免疫抗体。

人工制备的抗体有:单克隆抗体,多克隆抗体,基因工程抗体。

多克隆抗体:病原体或病原体相关抗原分子刺激机体产生的相关抗体分子是针对多种抗原决定簇的混合抗体,即多克隆抗体。

单克隆抗体:从一个克隆细胞系产生的抗体称为单克隆抗体。

多克隆抗体的制备:1、动物的选择:家兔,山羊,绵羊,豚鼠,马等。

2、抗原种类的选择,3、抗原剂量的选择。

4、佐剂的应用:福氏佐剂,脂质体佐剂,氢氧化铝佐剂,5、免疫途径:皮下,皮内,肌肉,静脉,淋巴结等不同途径注入抗原进行免疫。

6、多克隆抗体的提取:心脏穿刺,颈静脉或颈动脉放血,待血液凝固后离心沉淀,分离出血清,加0.1%的叠氮钠作为防腐剂。

7、抗血清鉴定。

8、抗血清保存。

灭活补体后加入适量的防腐剂(叠氮钠0.1%,硫柳汞0.01%),冷冻干燥后保存。

单克隆抗体的制备:1、动物免疫。

2、杂交瘤选择,3、细胞培养4、细胞融合5、筛选克隆培养。

6、杂交瘤阳性克隆的克隆化,7、McAb的制备。

8、McAb的鉴定。

9、杂交瘤细胞株的冷冻保存和复苏。

直接凝集试验:颗粒型抗原与相应的特异性抗体混合,经过一定的反应时间后,出现凝集现象,称为凝集反应,试验中的抗原称为凝集原,抗体称为凝集素。

间接凝集试验:将可溶性抗原或抗体吸附在一种与免疫无关的惰性载体颗粒表面,然后与相应抗体或、抗原结合,在电解质存在的条件下,载体颗粒被动地发生凝集,此称为间接凝集反应。

免疫荧光技术原理: 将荧光素与抗体结合起来,但不影响特异性蛋白质的免疫特性,制备成荧光抗体,(FA)当FA与与相应的抗原或抗体复合物结合是,形成免疫荧光复合物,用荧光显微镜可观察到绿色荧光。

标记用荧光素:异硫氰酸荧光黄,四乙基罗丹明,四甲基异硫氰酸罗丹明,荧光抗体试验:直接法,间接法,补体法,双标记法放射免疫技术原理:RIA是标记抗原和未标记抗原对有限量抗体的竞争性结合,或竞争性抑制反应。

酶联免疫吸附试验:将已知的抗原或抗体结合在某种固相支持物上,并保持其免疫活性,测定时,将待检测标本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应,用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离成分,然后加入酶的作用底物,催化显色。

操作程序:固相载体的选择,免疫吸附剂包被,残余位点封闭,待检样品稀释,标记用酶的选择,底物的选择(H2O2/OPD H2O2/TMB),载体的洗涤,终止反应和结果的判断。

用于ELISA的标记用酶有:辣根过氧化物酶,碱性磷酸酶,葡萄糖氧化酶,β半乳糖苷酶,辣根最常用。

双抗体夹心法:常用于测抗原,将已知抗体吸附于固相载体,加入待检测标本与之结合,温育后洗涤,加入酶标抗体和底物进行测定。

免疫金技术:以胶体金作为示踪标志物,应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。

胶体金:氯金酸在还原剂作用下形成的金颗粒,抗原抗体蛋白等生物大分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程,称胶体金标记。

生化试验甲基红试验原理:某些细菌在糖代谢过程中,分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸进一步被分解为甲酸,乙酸,和琥珀酸等,培养基PH下降至4.5以下时,加入甲基红指示剂呈红色,应用于肠杆菌科内某些种属的鉴别。

V.P.试验原理:测定细菌产生乙酰甲基甲醇的能力,某些细菌,如产气肠杆菌,分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸进一步脱羧形成乙酰甲基甲醇,在碱性条件下,乙酰甲基甲醇被氧化成二乙酰,进而与培养基中的精氨酸等含有胍基的物质结合形成红色化合物,应用于大肠埃希菌和产气肠杆菌的鉴别。

吲哚试验:原理:有些细菌有色氨酸酶,能分解色氨酸产生吲哚,吲哚对对二氨基苯甲醛形成红色的玫瑰吲哚,应用于肠杆菌科的鉴别。

霍乱红试验:原理:霍乱弧菌分解色氨酸生成吲哚,并能使硝酸盐还原成亚硝酸盐,当加入硫酸后生成亚硝酸吲哚,呈红色反应。

柠檬酸盐试验:某些细菌能利用柠檬酸盐作为唯一碳源而在此培养基上生长并分解柠檬酸盐为碳酸钠,使培养基变为碱性,若用溴麝香草酚蓝指示剂,斜面出现菌落或菌苔,培养基变蓝色为阳性,无菌落生长,培养基为绿色为阴性。

触酶试验:触酶又称过氧化氢酶,具有过氧化氢酶的细菌能催化过氧化氢成为水和原子态氧继而形成氧分子,出现气泡。

应用:大多数需氧和兼性厌氧菌均产生过氧化氢酶,但,链球菌科阴性,故,常用此试验来鉴定。

奥普拓欣:对肺炎链球菌有特异性抑制作用,干扰叶酸生物合成,而对其他链球菌无此作用,杆菌肽敏感试验:A群链球菌对杆菌肽几乎是100%敏感,其他群链球菌对杆菌肽通常耐药,故此试验,可对链球菌进行鉴别,应用于A群与非A群链球菌的鉴别。

O/129试验:能抑制弧菌属,发光杆菌属和邻单胞菌属的生长,对弧菌属邻单胞菌属较为敏感,而气单胞菌属耐药。

分子生物学检测技术PCR原理:PCR类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酶引物,PCR由变性,退火,复性三个基本反应步骤构成,1、模板DNA 的变性,模板DNA 经加热至94℃左右一定时间后,是模板DNA 双链或经PCR 扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,一边它与引物结合,2、模板DNA 与引物的退火,模板DNA经加热变性形成单链后,温度降至复性温度,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。

3、引物的延伸,DNA模板-引物结合物在TaqDNA聚合酶作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基互补配对与半保留复制复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链,重复以上三个步骤获得更多的半保留复制链。

PCR反应体系的组成:10倍的扩增缓冲液10μL,4种dNTP混合物各200μmol/L,引物各10~100pmol/L,模板DNA 0.1至2μg,TaqDNA聚合酶 2.5U,Mg2+ 1.5mmol/L,加双蒸水至100μL。

PCR产物检测:溴化乙锭(EB)染色(结合于DNA大沟)SYBR Green 1(结合于DNA小沟)实时定量PCR技术:定量PCR支通过一定循环次数的PCR的扩增后,根据PCR 产物量来判断样本中的原始模板数。

原理:核酸分子杂交技术:具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下可按碱基互补配对原则退火形成双链,此反应过程是高度特异性的。

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