实验9紫外线对微生物生长的影响及抗生素对微生物生长的最低抑制浓度的测定
微生物试验-细菌的人工培养及形态学检查
实验一 细菌的人工培养
一、细菌在自然界的分布
1.空气中细菌的检查：每班两个血平板，标记 方法：在室内选择一处放一个平皿，揭开皿盖，
暴露放置10min，即盖上皿盖，放入37℃温箱 培养24小时，观察结果。
2.人体表面细菌的检查---手 指（每组1个平皿）
方法：取一普通平皿培养 基，一部分标记“前”， 另一部分标记“后”，然 后将手指在标记“前”的 部分沾一下，洗手后在标 记“后”的部分沾一下。 放入37℃温箱培养24h后 观察细菌的生长情况。
呼吸道咽部常驻菌群种类较多，正常人咽部需氧菌 中，甲型链球菌检出率最高，其次是奈瑟球菌属和表 皮葡萄球菌。
二、 理化因素对细菌的影响
1.物理因素对细菌的影响---紫外线
原理：紫外线主要作用于 DNA，使一条DNA链上相邻 的两个胸腺嘧啶以共价键结合成二聚体，从而干扰 DNA 的复制与转录导致细菌变异或死亡。
3.人体内部细菌的检查--咽喉部
方法：用“咳碟法”进行检查，取一个血琼脂平 皿培养基，打开平皿盖，置于口腔前约 10cm， 对着平皿咳嗽几次，标记时间，姓名，然后放 入37℃温箱培养24h后观察菌落特征。
二、外界因素对细菌的影响：
1.物理因素对细菌的影响 ：
紫外线：全班两份普通平板：一组大肠杆菌， 一组葡萄球菌，比较紫外线对G+，G-的抑制作 用。
满足a充足的营无菌
（三）分类：1、按物理性状
分类：
+0.3~0.5%琼脂
+1.5~2.5%琼脂
半固体培养基 液体培养基
固体培养基
观察细菌动力 大量繁殖细菌 细菌的分离和纯化
短期保存菌种
固体平板培养基
液体培养基
固体斜面培养基 半固体培养基
微生物考试试题(附答案)
微生物考试试题(附答案)一．选择题（每个2分，共20分）1、组成病毒粒子衣壳的化学物质是（）A、糖类B、蛋白质C、核酸D、脂肪2、属于细菌细胞特殊结构的为（）A、荚膜B、细胞壁C、细胞膜D、核质体3、噬菌体属于病毒类别中的（）A、微生物病毒B、昆虫病毒C、植物病毒D、动物病毒4、半固体培养基中，琼脂使用浓度为（）。
A、0.B、0.3—0.5%。
C、1.5—2.0%。
D、5%6．下述那个时期细菌群体倍增时间最快()A稳定期B衰亡期C对数期D延滞期7.下面关于连续培养的说法中，叙述不正确的是（）A.恒化连续培养的控制对象是菌体密度B.恒浊连续培养中微生物菌体以最高生长速率生长C.恒化继续造就的产物是分歧生长速率的菌体D.XXX继续造就无生长限制因子8.以下叙述中精确的说法是（）A.产生抗逆性强的芽孢是产芽孢细菌在不良环境条件下的一种生殖方式。
B.厌氧的微生物需要较低的氧化复原电位。
C.一种细菌的学名是Staphylococcus aureus,其中aureus属名，Staphyloccus是种名D.类病毒是有侵染性的蛋白颗粒。
9.下述诱变剂中常引起移码突变的是：（）A亚硝酸B烷化剂C碱基类似物D丫啶类染料10.下述那个最可能产生一个重组细胞：（）AF+xF-BHfrxF+CHfrxF-DF+xF-二、写出下列名词解释的中文翻译及作出解释（每个2分，共12分）1.Gram positive bacteria2.parasporal crystal3.colony4.life cycle5,capsule6,endospore三、判断改错题（每个2分，共10分）1.大肠杆菌和枯草芽孢杆菌属于单细胞生物，唾液链球菌和金黄色葡萄球菌属于多细胞生物（）2.遗传型相同的个体在不同环境条件下会有不同的表现型。
（）3.低剂量照射紫外线，对微生物几乎没有影响，但以超过某一阈值剂量的紫外线照射，则会导致微生物的基因突变。
微生物学与免疫学习题8参考答案
微生物学与免疫学习题8参考答案一名词解释1．最小杀菌浓度：最小杀菌浓度（minimum bactericidal concentration，MBC）：杀死99.9%（降低3个数量级）的供试微生物所需的最低药物浓度。
有些药物的MBC与其MIC非常接近，如氨基糖苷类。
有些药物的MBC比MIC大，如β内酰胺类。
如果受试药物对供试微生物的MBC≧32倍的MIC，可判定该微生物对受试药物产生了耐药性。
2．最小抑菌浓度：最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）：在特定环境下孵育24小时，可抑制某种微生物出现明显增长的最低药物浓度即最小抑菌浓度，用于定量测定体外抗菌活性。
3．获得耐药性:对原来敏感的抗生素通过遗传性的改变而获得了抗药性4．多重耐药性：同时对两种以上作用机制不同的药物产生的抗药性5．交叉耐药性：对结构类似或作用机制类似的抗生素均有抗药性6．赖药性：不仅对该药物具有抗性，而且需要该药物作为特殊的营养因素7．耐受性：该菌在最低抑菌浓度时仍受到抑制，但最低杀菌浓度提高8．免疫(immunity)是指机体识别和排除抗原性异物，执行免疫防卫，维持自身生理平衡与稳定的功能。
9．免疫原性：刺激机体产生免疫应答，包括产生抗体或效应T淋巴细胞的性能。
10.免疫反应性：指与抗体或效应T细胞发生特异性结合的能力。
二．选择题1．IMVC试验最常用于鉴定下列何种细菌（B）A．化脓性球菌B．肠杆科细菌C．厌氧性细菌D．结核分枝杆菌E．霍乱弧菌2．与内毒素有关的细菌结构是AA．外膜B．核膜C．线粒体膜D．荚膜E．细胞膜3．内毒素的主要成分为EA．肽聚糖B．蛋白质C．鞭毛D．核酸E．脂多糖4．革兰阳性菌细胞壁与致病有关的化学组分是DA．N-乙酰胞壁酸B．磷壁酸C．壁磷壁酸D．膜磷壁酸E．脂肪酸5．青霉素的抗菌机理是EA．破坏肽聚糖的聚糖支架B．损害细胞膜C．干扰菌细胞的酶系统D．作用于核糖体抑制蛋白质合成E．抑制四肽侧链D-丙氨酸与甘氨酸交联桥的连结6．下列哪种细菌具有异染颗粒AA．白喉棒状杆菌B．百日咳鲍特菌C．流感嗜血杆菌D．伤寒沙门菌E．铜绿假单胞菌7．与细菌侵袭力有关的结构是BA．芽胞B．荚膜C．细胞壁D．中介体E．核糖体8．破坏热原质最有效的方法是EA．高压蒸气灭菌B．紫外线照射C．酒精D．煮沸E．高温干烤9．对人致病的细菌大多是DA．专性需氧菌B．专性厌氧菌C．微需氧菌D．兼性厌氧菌E．以上都对10．细菌代谢产物中与致病性无关的是EA．外毒素B．内毒素C．侵袭性酶D．热原质E．细菌素11.分离致病性肠杆菌科细菌最合适的培养基是CA.普通培养基B.血琼脂培养基C.选择培养基D.鉴别培养基E.厌氧培养基12．不能与红汞同时使用的化学消毒剂是DA．漂白粉B．乙醇C．新洁尔灭D．碘液E．洗必泰13．对血清培养基的灭菌，应选用CA．煮沸法B．巴氏消毒法C．间歇灭菌法D．流通蒸气灭菌法E．高压蒸气灭菌法14．常用的碘液浓度为CA．10g/L B．20g/L C．25g/L D．30g/L E．50gL15．乙醇消毒剂常用的浓度是CA．100％B．95％C．75％D．50％E．30％16．下列消毒灭菌法哪种是错误的AA．金属器械——漂白粉B．排泄物——漂白粉C．饮水——氯气D．含糖培养基——间歇灭菌法E．人或动物血清——滤过除菌17．新生儿预防淋病奈瑟菌所致的脓漏眼的消毒剂是AA．20~40g/L龙胆紫B．1g/L高锰酸钾C．20g/L红汞D．10g/L硝酸盐E．20g/L碘液18.在病原微生物的分类中，属于第一类的是DA.脊髓灰质炎病毒B. 天花病毒C.登革病毒D.新生隐球菌E.小鼠白血病病毒19. 在病原微生物的分类中，属于第二类的是BA.新疆出血热病毒B.汉坦病毒C.轮状病毒D.流感病毒E.破伤风梭菌20.属于高致病性病原微生物是AA.天花病毒B.登革病毒C.流感病毒D.志贺菌E.沙眼衣原体【参考答案】1．B 2．A3．E4．D 5．E 6．A7．B 8．E 9．D10．E 11.Ｃ12．D 13．C 14．C 15．C16．A 17．D18.B 19.B20.A三．填拱题1．口服给药制剂细菌总数≤1000个/g或≤100个/mL；霉菌和酵母总数≤100个/mL（或/g），不得检出大肠埃希菌.2．在控制菌（病原菌）的检查中口服药—不能检出沙门氏菌、大肠杆菌；外用药、眼科制剂—不能检出金葡菌、绿脓杆菌；深部用药不能检出破伤风梭菌。
微生物生长与控制习题及答案
第七章微生物的生长及其控制习题、名词解释1．微生物连续培养2．抗微生物剂3．抗生素4．抗代谢物5．微生物的抗药性6．灭菌7．消毒8．生长曲线9. 深层液体培养：、填空题1．一条典型的生长曲线至少可分为、、和4 个生长时期。
2．测定微生物的生长量常用的方法有、、和。
而测定微生物数量变化常用的方法有、、和；以生物量为指标来测定微生物生长的方法有、和。
3．获得细菌同步生长的方法主要有（1）和（2），其中（1）中常用的有4. 控制连续培养的方法有5 .影响微生物生长的主要因素有等。
6•对玻璃器皿、金属用具等物品可用进行灭菌；而对牛奶或其他液态食品一般米用灭菌, 其温度为,时间7 .通常，细菌最适pH的范围为，酵母菌的最适pH范围，霉菌的最适pH值范围是杀灭或抑制微生物的物理等。
9.抗生素的作用机制有10.抗代谢药物中的磺胺类是由于与相似，从而竞争性地与二氢叶酸合成酶结合，使其不能合成三、选择题1. 以下哪个特征表示二分裂？（）A、产生子细胞大小不规则 B 、隔膜形成后染后体才复制C、子细胞含有基本等量的细胞成分 D 、新细胞的细胞壁都是新合成的2. 代时为0.5h的细菌由103个增加到109个时需要多长时间？（）A、40h B 、20h C 、10h D 、3h3. 如果将处于对数期的细菌移至相同组分的新鲜培养基中，该批培养物将处于哪个生长期？（）A、死亡期B 、稳定期C、延迟期D、对数期4. 细菌细胞进入稳定期是由于：①细胞已为快速生长作好了准备；②代谢产生的毒性物质发生了积累；③能源已耗尽；④细胞已衰老且衰老细胞停止分裂；⑤在重新幵始生长前需要合成新的蛋白质（）。
A、1，4 B 、2，3 C 、2，4 D 、1，55. 对生活的微生物进行计数的最准确的方法是（）。
A、比浊法 B 、显微镜直接计数C、干细胞重量测定 D 、平板菌落记数6. 下列哪咱保存方法全降低食物的水活度？（）A、腌肉B、巴斯德消毒法C、冷藏D、酸泡菜7. 连续培养时培养物的生物量是由（）来决定的。
实验9紫外线对微生物生长的影响及抗生素对微生物生长的最低抑制浓度的测定
实验九紫外线对微生物生长的影响抗生素对微生物生长的最低抑制浓度的测定及硫化氢产生实验杨明轩生物111 28一、实验目的1、了解并掌握紫外线和抗生素杀灭微生物细胞的原理。
2、学习和掌握应用紫外线杀菌的实验操作步骤。
3、学习并掌握采用液体培养技术测定药剂对微生物的最低抑制浓度的方法。
4、通过了解不同细菌对含能产硫化氢半固体培养基的分解利用情况，结合实验八的结果，认识微生物代谢类型多样性。
二、实验原理紫外线是杀菌效率较强的物理因素。
其原理是，紫外线可以直接作用于细胞内的DNA 分子，使同一DNA 链上相邻的嘧啶形成胸腺嘧啶二聚体，因而导致双链DNA 结构发生变化，使DNA 的正常复制受到影响，最终导致细胞死亡。
紫外线的杀菌效果与照射剂量呈正相关，即紫外灯的功率、照射时间和照射物品距紫外灯的距离等因素都会影响杀菌效果。
虽然紫外线具有很好的杀菌效果，但其穿透能力不强，一层黑纸即可阻挡紫外线的通过，因此紫外线常用于室内空气灭菌或器皿的表面灭菌。
本实验采用平板法验证紫外线的杀菌作用和不同微生物对紫外线的耐受性。
很多化学药剂都能够抑制微生物的生长。
最低抑制浓度( MIC)是指药物抑制微生物生长的最低浓度，由于微生物对药物的耐受性不同，因此最低抑制浓度是有差异的。
可以通过液体稀释法来测定最低抑制浓度。
将一定培养液中加入不同浓度的药剂，配制成一定浓度梯度，再将制备好的菌悬液按一定体积接种，置一定温度培养后，可通过肉眼或分光光度计测定浊度，以不能生长菌株的试管内药剂的浓度为MIC。
三、实验材料1 菌种：大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis )、普通变形杆菌(Proteus vulgaris )、2、培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、LB 培养基、产硫化氢半固体穿刺培养基；3、试剂：无菌水、10血/ d链霉素；5、仪器：无菌培养皿、无菌试管、刮铲、灭菌黑纸、。
《微生物学》题库第七章微生物的生长及其控制
《微生物学》题库第七章微生物的生长及其控制第一部分微生物生长部分一、单项选择题1、菌株的定义应该是（）。
A.具有相似特性的细胞群体B.具有有限的地理分布的微生物群体C.从一单独的细胞衍生出来的细胞群体D.与种（species）一样定义2、微生物的干重一般为其湿重的（）。
A.5%～10%B.20%～25%C.25%以上D.10%～20%3、用于总活菌计数的方法是（）A.浊度计比浊法B.血球板计数法C.平板菌落计数法D.显微镜直接计数法4、下列不属于微生物直接计数法特点的是（）A.必须利用显微镜计数B.可以区分活菌与死菌C.不能区分活菌与死菌D.计数室都是400小格组成5、一个细菌每10分钟繁殖一代，经1小时将会有多少个细菌（）A.64B.32C.9D.16、代时是指（）。
A.从对数期结束到稳定期开始的间隔时间B.培养物从接种到开始生长所需要的时间C.培养物的生长时间D.细胞分裂繁殖一代所需要的时间7、微生物分批培养时，下列符合延迟期的特点是（）。
A.微生物的代谢机能非常不活跃B.菌体体积增大C.菌体体积不变D.菌体体积减小。
8、制备原生质体，选择适宜的菌龄期为（）A.迟缓期B.对数期C.稳定期D.死亡期。
9、下述那个时期细菌群体倍增时间最快（）A.稳定期B.衰亡期C.对数期D.延滞期10、细菌芽孢产生于（）A.对数生长期B.衰亡期C.稳定期前期D.稳定期后期正确答案：D11、处于（）的微生物，死亡数肯定大于新生数。
A.适应期B.对数期C.稳定期D.衰亡期12、指数期细菌的特点是（）A.细胞以指数速度死亡B.细胞准备开始分裂C.细胞以最快速度进行分裂D.细胞死亡数和分裂数相同13、细菌最适生长温度是（）℃A.35-40B.10-20C.20-30D.30-3514、真菌最适生长温度是（）℃A.35-40B.10-20C.20-30D.30-3515、微生物生长繁殖的最高温度是（）。
A.最高生长温度B.最适生长温度C.致死温度D.无法判断16、下面关于微生物最适生长温度判断，正确的是（）A.微生物群体生长繁殖速度最快的温度B.发酵的最适温度C.积累某一代谢产物的最适温度D.无法判断17、将土壤接种在含放射性碳的葡萄糖培养基中，5天后检查，下列那种情况证明土壤中有生命（）。
微生物抗菌素敏感试验
微生物抗菌素敏感试验----3d81e25e-715e-11ec-80b9-7cb59b590d7d抗菌素敏感试验1.掌握药敏试验（K-B纸片琼脂扩散法）的方法、原理和结果判断。
2.掌握抗酸染色方法及结果判断1、抗菌药物分类：（1）β-内酰胺类：青霉素类和头孢菌素类（硫酶、单酰基环β-内酰化酶抑制剂、甲氧基青霉素类）（2）氨基糖甙类：链霉素、庆大霉素、卡那霉素、妥布霉素、丁胺卡那霉素、新霉素、核糖霉素、小诺霉素、阿奇霉素（3）大环脂质：红霉素、白霉素、乙酰螺旋霉素、麦地那霉素、交沙霉素（4）四环素：四环素、土霉素、金霉素、强力霉素（5）氯霉素：氯霉素、甲砜霉素（6）作用于g+细菌的其它抗生素：林可霉素、氯林可霉素、万古霉素、杆菌肽（7）作用于g-菌的其它抗生素：多粘菌素、磷霉素、、环丝氨酸、利福平、抗真菌抗生素、灰黄霉素（8）抗肿瘤抗生素：丝裂霉素、放线菌素D、博莱霉素和阿霉素（9）具有免疫抑制作用的抗生素：环孢素2、抗菌药物敏感试验(antimicrobialsusceptibilitytestinginvitro)1）抑菌试验：体外测定抗菌药物抑制细菌生长能力的试验（1）纸片扩散法（discdiffusiontest）K-B纸片琼脂扩散法原理：将含有定量抗生素的纸片贴在接种试验菌的琼脂平板上。
纸张中的药物吸收琼脂中的水分并溶解，然后不断扩散到纸张周围区域，形成一个逐渐降低的梯度浓度。
在纸张周围的抑菌浓度范围内，被测细菌的生长受到抑制，从而形成一个透明的抑菌圈。
抑制区的大小反映了受试细菌对受试药物的敏感性，并与药物对受试细菌的最低抑制浓度（MIC）呈负相关。
（2）稀释试验a.将被检菌株接种于一组含有不同稀释度抗菌药物的培养基内b、在37℃下放置18-24小时后，抗菌药物可以用肉眼抑制受试细菌生长的最低浓度（MIC），即细菌对抗菌药物c.mic50mic90的敏感性d.根据mic和常用剂量时该药所能达到的血药浓度来划定细菌对各种药物的敏感度或耐药的界限（breakpoint,折点)（3） E试验（Etest）2）灭菌试验3）联合药敏试验4）检测细菌所产生的抗生素灭活酶试验3、药物敏感性分级1）敏感（s）这表明，在常规剂量的被测药物后，体内达到的血液药物浓度可以抑制或杀死被测细菌。
微生物的实验
微生物的实验实验一油镜的使用方法与革兰氏染色实验目的:掌握油镜的使用方法与革兰氏染色的方法实验原理: 革兰染色法⑴革兰阳性菌细胞壁结构较致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易透入；革兰阴性菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄，脂质含量多，乙醇易透入。
⑵革兰阳性菌等电点（pI 2~3）比革兰阴性菌（pI 4~5）低，在相同pH条件下，革兰阳性菌所带负电荷比革兰阴性菌多，故与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固，不易脱色。
⑶革兰阳性菌菌体含大量核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫牢固结合，使已着色的细菌不被乙醇脱色；革兰阴性菌含核糖核酸镁盐很少，故易被脱色。
实验步骤: 1.涂片取洁净载玻片1张，用接种环取1～2环生理盐水放于载玻片上，用灭菌的接种环在固体培养基上挑取少许细菌与盐水混合，涂布成直径１cm左右的菌膜（可视挑取菌落的多少涂片范围相应变化）。
若采用液体培养物，可直接取1～2环菌液涂布。
接种环须经火焰灭菌方可放回原处，以免造成污染。
2.干燥涂片最好在室温中自然干燥，或将标本接种面向上，置酒精灯火焰高处慢慢烘干，切勿在火焰上烤。
3.固定干燥后的标本面向上迅速通过火焰3次，这样既可杀菌，又能将细菌固定在玻片上，以免玻片上细菌在染色过程中被水冲洗掉。
2.染色(1)初染：滴加结晶紫染液2～3滴于涂布细菌处，覆盖菌膜，1min后以细水漫过轻洗，将积水甩干。
(2)媒染：滴加卢戈碘液同上，1min后水洗，并将标本片上的积水甩净。
(3)脱色：加95%乙醇数滴于标本片上，轻轻摇晃数秒，斜持玻片使乙醇流掉，再滴加乙醇直至无紫色脱下为止（约30s，灵活掌握时间），细水冲洗，甩干。
(4)复染：滴加石炭酸复红染液，30s～1min后水洗，用吸水纸吸去积水。
3. 镜检用油镜观察，并判断细菌的染色性。
记录实验结果。
4.实验后处理擦干油镜镜头，整理、清洁显微镜，把显微镜放回原处，把标本片放入消毒缸中。
注意事项: 1.标本片涂的太薄或太厚，菌体分散布不均匀，都可影响染色结果。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验9紫外线对微生物生长的影响及抗生素对微生物生长的最低抑制浓度的测定(总3页)
--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可--
--内页可以根据需求调整合适字体及大小--
实验九紫外线对微生物生长的影响
抗生素对微生物生长的最低抑制浓度的测定及硫化氢产生实验
杨明轩生物111 28
一、实验目的
1、了解并掌握紫外线和抗生素杀灭微生物细胞的原理。
2、学习和掌握应用紫外线杀菌的实验操作步骤。
3、学习并掌握采用液体培养技术测定药剂对微生物的最低抑制浓度的方法。
4、通过了解不同细菌对含能产硫化氢半固体培养基的分解利用情况，结合实验八的结果，认识微生物代谢类型多样性。
二、实验原理
紫外线是杀菌效率较强的物理因素。
其原理是，紫外线可以直接作用于细胞内的DNA分子，使同一DNA链上相邻的嘧啶形成胸腺嘧啶二聚体，因而导致双链DNA结构发生变化，使DNA的正常复制受到影响，最终导致细胞死亡。
紫外线的杀菌效果与照射剂量呈正相关，即紫外灯的功率、照射时间和照射物品距紫外灯的距离等因素都会影响杀菌效果。
虽然紫外线具有很好的杀菌效果，但其穿透能力不强，一层黑纸即可阻挡紫外线的通过，因此紫外线常用于室内空气灭菌或器皿的表面灭菌。
本实验采用平板法验证紫外线的杀菌作用和不同微生物对紫外线的耐受性。
很多化学药剂都能够抑制微生物的生长。
最低抑制浓度（MIC）是指药物抑制微生物生长的最低浓度，由于微生物对药物的耐受性不同，因此最低抑制浓度是有差异的。
可以通过液体稀释法来测定最低抑制浓度。
将一定培养液中加入不同浓度的药剂，配制成一定浓度梯度，再将制备好的菌悬液按一定体积接种，置一定温度培养后，可通过肉眼或分光光度计测定浊度，以不能生长菌株的试管内药剂的浓度为MIC。
三、实验材料
1、菌种：大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）、
2、培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、LB培养基、产硫化氢半固体穿刺培养基；
3、试剂：无菌水、10μg/μl链霉素；
5、仪器：无菌培养皿、无菌试管、刮铲、灭菌黑纸、。
四、实验方法
（1）紫外线对微生物生长的影响
1、将供试菌株接种于LB斜面，置37℃培养过夜。
2、将5ml无菌水分别注入菌种管内，混匀制成均匀的菌悬液，37℃振荡培养过夜。
3、取事先制备的LB平板3个，分别以菌悬液涂布一个平板，并做好标记。
4、取一灭菌的剪成五角星形状的黑纸放置在培养皿中央，将培养皿放于紫外灯箱内，打开皿盖，开紫外灯照射15min，盖好培养皿盖后将培养皿取出，注意将培养皿立即倒置于37℃温箱中培养过夜。
5、观察结果平纪录。
（2）抗生素对微生物生长的最低抑制浓度的测定
1、取活化好的菌种斜面，分别挑取一环接种于液体培养基中，在37℃下培养6~8h，作为测试液。
2、按下表配制不同链霉素浓度的培养基并按照顺序加样（每个试管3个重复），全班留一个只含培养基，不接菌也不用药的，做对照。
3、将试管置于37℃温箱培养12~24h，取出试管，充分震荡，用肉眼观察每个试管浊度，用“+”或“-”表示生长与否。
也可用分光光度计检测浊度。
表1 不同链霉素浓度的培养基的配制
（3）硫化氢产生实验
取硫化氢产生试管半固体柱状培养基，穿刺接种S. aureus、B. subtilis、P. vulgaris，28℃培养2天。
观察试管是否变黑（FeS沉淀）。
五、实验结果
（1）紫外线对微生物生长的影响
在黑纸覆盖的地方菌落生长良好。
而大肠杆菌的平板在黑纸覆盖区域的边缘位置长有少量菌落，其他没有覆盖的地方也零星的长有菌落；而金黄色葡萄球菌平板在没有黑纸覆盖的地方几乎没有菌落的生长。
（2）抗生素对微生物生长的最低抑制浓度的测定
表2 抗生素对微生物生长的最低抑制浓度的测定的结果
因为实验操作中，对于CK管（药物浓度为0）忘记了加入菌液，导致CK管也为“－”，通过比照同班其他组数据，可知CK管由上表可知E. coli、S. aureus均为“＋＋＋”，而链霉素对大肠杆菌的MIC为0μg/ml，链霉素对金黄色葡萄球菌的MIC为80μg/ml。
（3）微生物对含硫化氢培养基的水解（见实验八实验报告汇总）
六、思考题
1、分析结果，比较并观察菌株对紫外线的耐受能力。
答：由上面的结果可知，大肠杆菌平板在无覆盖的区域也长有少量菌落，而金黄色葡萄球菌无覆盖区域几乎没有菌落生长。
因此，大肠杆菌对紫外线的耐受能力比金黄色葡萄球菌更强。
2、为什么紫外线照射后应立即将培养皿放置于黑暗条件下培养？
答：紫外线可以直接作用于细胞内的DNA分子，使同一DNA链上相邻的嘧啶形成胸腺嘧啶二聚体，因而导致双链DNA结构发生变化。
但在可见光的作用下，嘧啶二聚体能够被光裂合酶直接切开，也能够被光解作用恢复为单体形式，即为DNA损伤的光修复。
直接黑暗培养能够避免光修复对实验结果造成影响。
3、分析操作因素会对结果有什么影响？
答：（1）涂菌时如果涂布器温度过高，则会造成菌体死亡，影响结果；
（2）如果黑纸盖得不严，留有缝隙，会造成纸下面的部分菌体死亡，得不到预期结果；
（3）紫外线照射时，紫外灯的功率、照射时间和照射物品距紫外灯的距离等因素都会影响结果；
（4）实验需要无菌操作，若引入杂菌，则会影响结果。
4、分析以上结果，判断两个测试菌株的抗药能力。
答：由上面的数据可知，链霉素对大肠杆菌的MIC为0μg/ml，对金黄色葡萄球菌的MIC 为80μg/ml。
因此，金黄色葡萄球菌对链霉素的抗药性远比大肠杆菌对链霉素的抗药性要强。
这也符合链霉素主要对革兰氏阴性菌起作用的药物特点。