高效表达L-乳酸的酿酒酵母工程菌构建研究

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高考生物真题按知识点分类汇编92-生物技术与工程-基因工程的操作程序综合题(含解析)

五年2018-2022高考生物真题按知识点分类汇编92-生物技术与工程-基因工程的操作程序综合题（含解析）一、单选题1．（2020·浙江·高考真题）下列关于基因工程的叙述，正确的是（）A．若受体大肠杆菌含有构建重组质粒时用到的限制性核酸内切酶，则一定有利于该重组质粒进入受体并保持结构稳定B．抗除草剂基因转入某抗盐植物获得2个稳定遗传转基因品系，抗性鉴定为抗除草剂抗盐和抗除草剂不抗盐。

表明一定是抗盐性的改变与抗除草剂基因的转入无关C．抗除草剂基因转入某植物获得转基因植株，其DNA检测均含目的基因，抗性鉴定为抗除草剂和不抗除草剂。

表明一定是前者表达了抗性蛋白而后者只表达抗性基因RNAD．已知不同分子量DNA可分开成不同条带，相同分子量的为一条带。

用某种限制性核酸内切酶完全酶切环状质粒后，出现3条带。

表明该质粒上一定至少有3个被该酶切开的位置2．（2020·北京·统考高考真题）人体感染新冠病毒后，机体会产生多种特异性抗体。

我国科学家从康复者的浆细胞中克隆出针对病毒表面抗原的抗体基因相关序列，构建表达载体并在相应系统中表达，可制备出全人源单克隆抗体。

以下表述错误的是（）A．该单抗可直接用于新冠病毒的核酸检测B．在该单抗制备过程中利用了基因工程技术C．该单抗可与新冠病毒相应蛋白特异性结合D．可用抗原-抗体反应检测抗体基因表达产物二、综合题3．（2022·全国·统考高考真题）新冠疫情出现后，病毒核酸检测和疫苗接种在疫情防控中发挥了重要作用。

回答下列问题。

(1)新冠病毒是一种RNA病毒，检测新冠病毒RNA（核酸检测）可以采取RT-PCR法。

这种方法的基本原理是先以病毒RNA为模板合成cDNA，这一过程需要的酶是______，再通过PCR技术扩增相应的DNA片段。

根据检测结果判断被检测者是否感染新冠病毒。

(2)为了确保新冠病毒核酸检测的准确性，在设计PCR引物时必须依据新冠病毒RNA中的______来进行。

食品级乳酸菌基因表达系统的研究进展

基金项目：国家自然科学基金（０７０２３６０８）资助。
２食品级载体选择标记
传统的乳酸菌载体为保持一定的选择压力都带有一
作者简介：平（９５）唐１７～，男，江苏南京人，讲师，在读博士研究生，研究方向：基因表达与调控。通讯作者：郭锡杰
唐平等：食品级乳酸菌基因表达系统的研究进展
２９
个或多个编码特定抗生素（红霉素、氯霉素）抗性的基因，由于抗性因子具有可转移性，将其释放到环境或被
在Ｌ１ｃｉ功地表达了来源脯氨酸亚氨基肽酶的基因．ｔ成ａｓ
ｐｅ【。ｐｉ
人或动物摄人体内会带来严重的生物安全性后果，美国
片球菌、链球菌及双歧杆菌等。传统乳制品制作有着几千年的历史，其中的乳酸菌是重要的可利用生物资源，乳球菌和乳杆菌的许多种通常是被认为具有安全（ｅｅａｙｒｇｒｅ —ｓａｅＧｎｒｌ — ａｄｄａ— ｆ，ＧＲＳｌｅｓＡ）的特性，是一种食品级的微生物 … 。在过去的２年里，Ｌ０ＡＢ的特
用前景十分广阔。
包括内源性质粒的去除、电穿孔方法的建立等，已建
立了一系列具有不同用途的选择标记和突变系统等，以及ＬＢ的模式菌Ｌｃｏｏｃｓａｔ的基因组的测序完Ａａｔｃｃｕｃｓｌｉ成【，这些都为ＬＢ３］Ａ在食品、医药工程方面的应用提供了可能，而食品级的高效表达系统的构建和应用更是
１乳酸基因工程菌
乳酸菌是人和大多数动物肠道内的常见细菌，已证
明其在食品工业各个领域中的长期应用不具有致病性，

乳酸菌食品级基因表达系统_张振中

18卷4期2002年7月生　物　工　程　学　报Chinese J ou rnal o f BiotechnologyVol .18　No .4July 2002收稿日期:2001-10-18,修回日期:2002-04-08。

基金项目:中国科学院“九五”重大项目(No .KY95-J 1-331)和中国科学院创新项目资助。

＊通讯作者。

　Tel :86-10-62652851;Fax :86-10-62581447;E -mail :huanld @s un .i m .ac .cn乳酸菌食品级基因表达系统张振中1,2　陈秀珠1　贾士芳1　陈美玲1　还连栋1,2＊(中国科学院微生物研究所1分子微生物学研究中心和2微生物资源前期开发国家重点实验室,北京　100080)摘　要　乳酸菌是一类重要工业菌株。

最近,乳酸菌遗传学和分子生物学的研究取得长足进步,导致发展了乳酸菌食品级基因表达系统。

通过介绍乳酸菌食品级基因表达系统的基本要求、食品级选择性标记、食品级诱导物及该系统的研究进展,展示了乳酸菌食品级基因表达系统的建立对研究乳酸菌的基因表达调控和它的深层次的开发利用所具有的重要意义。

关键词　乳酸菌,食品级,基因表达中图分类号　Q93 文献标识码　C 文章编号1000-3061(2002)04-0516-05 乳酸菌(LAB )是一类在食品中应用最广泛的重要工业菌株,它包括乳酸球菌、乳酸杆菌、双歧杆菌等十几个属。

由于它早就被人类用于制作泡菜、酱油,生产奶酪和酸奶而家喻户晓,因而公认为是安全的(G R AS )食品级微生物。

与大肠杆菌、芽孢杆菌、酵母菌相比,乳酸菌分子遗传学的研究起步较晚,对其基因转录和翻译的调控及蛋白质分泌的机制还不甚了解。

最近十多年来,乳酸菌分子生物学研究取得长足进步。

随着乳酸菌各类表达调控元件的分离,相继发展了一批适用于乳酸菌的克隆载体、表达载体、整合载体[1],而乳酸菌食品级高效表达系统的构建及应用则是该领域研究的前沿和热点。

一株产核酸酿酒酵母工程菌及其构建方法与应用

一株产核酸酿酒酵母工程菌及其构建方法与应用
一株产核酸酿酒酵母工程菌是指经过基因工程技术改造的酿酒酵母菌株，具有高产核酸能力的微生物。

以下是一种构建该菌株的方法和应用：
构建方法：
1. 选择合适的酿酒酵母菌株作为基础菌株。

2. 通过PCR或其他基因克隆技术，获得目标基因（例如核酸
合成酶基因）的DNA序列。

3. 将目标基因与适当的表达载体连接。

4. 将表达载体转化到酿酒酵母菌细胞中。

5. 通过筛选、鉴定等方法，获得具有目标基因表达的酿酒酵母菌株。

应用：
1. 高产核酸酿酒酵母工程菌可用于生产核酸药物，如核酸疫苗、抗肿瘤药物等。

2. 该菌株还可用于生物反应器中进行大规模生产核酸。

3. 可通过进一步改造该菌株，使其具备其他有益特性，如耐高温、耐久性等，进一步拓展其应用领域。

4. 该菌株也可用于基础科学研究，探索核酸生物学、基因调控等领域。

产高纯度L-乳酸大肠杆菌基因工程菌的初步研究

Ｌ乳酸经过反应可聚合生成直链或环状聚乳酸，＿聚Ｌ乳酸是无毒的高分子化合物，具有生物相溶性．（ｉｏｐｔｉｔ）ｂｏｍａｂｌ，在人体内能被分解成Ｌ酸，被人ｃｉｉｙ哥Ｌ体代谢吸收，不引起变态反应。鉴于以上特性，聚Ｌ一乳酸可用作许多产品的原料，如缓释胶囊制剂、生物植片、外科手术用的缝合线。而且聚乳酸可被微生物完全降解为Ｃ２ＨＯ，因此可用于制造生物降解纤０和２
维、降解塑料，替代现在广泛使用的ＰＣＰ类塑料Ｖ、Ｐ
制品，减少不可再生资源石油的使用，减少清理垃圾
的成本。正由于聚乳酸可以在自然界分解，这不仅消除了“ 白色污染” 而且在自然界形成了一个良性循环，，
符合人们对绿色环保的倡导。现阶段，聚乳酸新的用
ＣｏｓｒｃｉｎｏｃｍｂｎｎｏｌＳｒｉｏｏｕｉｇＨｉｈｐｒｔｎｔｕｔｏｆＲｅｏｉａｔｃｉｔａｎｆｒＰｒｄｃｎｇ — ｕｉＥｙ
Ｌ．ｃａｅＬａｔｔ
ＹＡＮＧＤｅｇｆｎ，ＡＮＬｉｉ，ｎ－ｇＰｅ－ａＧＵＡＮＮｉＨＵＡｘ．ＮＧＲｉｏ－ｂ
摘要：本文以鼠李糖乳杆菌（ａｔｂｃｌａｏｕ）Ｌｃａｉｓｈｍｎｓｓ基因组为模板，ｏｌｒｕ扩增出Ｌ乳酸脱氢酶基因ｌ，一ｄ将其连接到表达载体ｐＥ８，ｈＳ３０
转化到Ｄ乳酸脱氢酶及丙酮酸甲酸裂解酶双缺失的大肠杆菌Ｆ４一ＭＪ４中，摇瓶发酵得到３Ｌ的高纯度为９％的Ｌ乳酸。１．ｇ５／９．关键词：Ｌ乳酸；鼠李糖乳杆菌；Ｌ乳酸脱氢酶基因一．文章篇号：７—０８２１）—２—２１３９７（００２１６１８６

乳酸杆菌表达系统的研究进展

乳酸杆菌表达系统的研究进展丁轲程安春(四川农业大学动物科技学院四川雅安625014)乳酸杆菌是一种常见的益生菌，它的应用已有几百年的历史，是一种公认的具有GRAS(Generally Regarded As Safe)有益微生物。

该菌广泛存在于人、动物和植物中，可以产生多种物质，如短链脂肪酸、过氧化氢、细菌素、蛋白质和各种酶类等。

尤其重要的是它是人和动物肠道中最重要的优势菌群之一，对于机体的代谢、免疫调节等方面起着极其重要的作用。

但随着基因工程技术的发展日趋完善，人们已不再满足于乳酸杆菌自身固有的功能，特别是当前由于疫苗免疫和菌(毒)株的残留毒力之间的矛盾，促使人们寻求能良好表达外源抗原且安全的疫苗载体候选菌株，乳酸杆菌便自然成为最佳选择菌株之一，因此近年来在疫苗载体的研究中日益受到重视，但其研究却远远落后于病原微生物。

现就这一方面作一综述。

1 乳酸杆菌表达载体的优点乳酸杆菌作为表达载体有许多独特的优势，这主要是因为乳酸杆菌是人和动物体内最优势的益生菌株之一，许多研究都表明它的有无和多寡都对机体有着至关重要的影响，以它为表达系统有其它菌株不可比拟的优点，主要表现在以下方面：①乳酸杆菌是至今发现的唯一没有致病性的一个种；②它在人和动物体内占绝对优势，以它为表达系统，较其它菌株更易达到较高的表达量；③若选择非抗性标记，则该表达系统中的菌体、选择性标记、诱导物均为食品级，为生产绿色安全的食品提供了可能；④乳酸杆菌菌体本身就对机体有益生作用，其分泌多种物质更是机体必不可少的，若再在其载体上克隆入外源基因，这样就可集菌体、自泌物质和外源蛋白于一体；⑤乳酸杆菌对机体粘膜有极强的粘附作用，因此构建的乳酸杆菌基因工程菌就可在粘膜处不断繁殖，持续向机体释放目的蛋白；⑥乳酸杆菌可直接口服，能够耐受胃液中的强酸和小肠上段的胆盐，这样就免去了目的蛋白的体外提纯等后加工。

2 乳酸杆菌质粒1976年Chassy[1]首先发现乳酸杆菌中存在质粒，质粒在不同的乳酸杆菌中分布不均，Vescovo等[2]对159株乳酸杆菌进行质粒抽提，发现L. reuteri、L. helveticus 和L. acidophilus 含质粒的比率较高，分别为63%、27%和20%，L. casei仅有4%的菌株含有质粒，L.plantarum、L. brevis 和L. coryniformis没有发现质粒。

大肠杆菌工程菌利用甘蔗糖蜜发酵产L-乳酸研究

大肠杆菌工程菌利用甘蔗糖蜜发酵产L-乳酸研究赵锦芳;薛葳蕤;张晓敏;王永泽;王金华【摘要】大肠杆菌HBUT-L来源于HBUT-D，因此具有快速利用蔗糖的特性。

对HBUT-L利用蔗糖及甘蔗糖蜜发酵产L-乳酸的特性进行了研究。

结果表明，该菌株在96 h的发酵过程中，可将100 g/L的蔗糖转化生成60.0 g/L乳酸，转化率达到74.0%，杂酸产量少，具有工业化开发潜力。

在玉米浆培养基中可以直接添加未经处理的甘蔗糖蜜，发酵周期持续224 h，发酵液所得乳酸产量为87.0 g/L，发酵液残糖为28.6 g/L，但乳酸产率极低，仅为0.389 g/（L•h)，后续将对甘蔗糖蜜预处理工艺进行研究，进一步提高乳酸发酵速度和产量。

%Escherichia coli HBUT-L comes from the strain HBUT-D, so it is characterized by the rapid uti1ization of sucrose. In the experiment, the characteristics of L-1actic acid fermentation from Escherichia coli HBUT-L by sugar and sugarcanemo1asses were studied. The resu1ts showed that in 96 h of fermentation process, HBUT-L cou1d convert 100 g/L of sucrose into 60.0 g/L of L(+)-1actic acid, the conversion ratio was 74%, with 1ess production of impurities and deve1opment potentia1 for industria1ization. Untreated sugarcane mo1asses cou1d be direct added into corn steep 1iquor medium, the fermentation 1ast-ed 224 h, and fermentation broth produced 87.0 g/L of L(+)-1actic acid and 28.6 g/L of residua1 sugar, however the yie1d of L-1actic acid was extreme1y 1ow and just 0.389 g/L. Subsequent1y, it needed to research the pretreatment techno1ogy of sugar mo1asses and further increase the speed and yie1d of L(+)-1actic acid fermentation.【期刊名称】《湖北农业科学》【年(卷),期】2016(055)024【总页数】5页(P6541-6544,6545)【关键词】大肠杆菌工程菌;甘蔗糖蜜;发酵;L-乳酸【作者】赵锦芳;薛葳蕤;张晓敏;王永泽;王金华【作者单位】湖北工业大学生物工程学院/发酵工程教育部重点实验室，武汉430068;湖北工业大学生物工程学院/发酵工程教育部重点实验室，武汉 430068;湖北工业大学生物工程学院/发酵工程教育部重点实验室，武汉 430068;湖北工业大学生物工程学院/发酵工程教育部重点实验室，武汉 430068;湖北工业大学生物工程学院/发酵工程教育部重点实验室，武汉 430068【正文语种】中文【中图分类】TQ92L-乳酸是一种重要的有机酸，广泛应用于食品、医药和化工领域，L-乳酸最具前景的应用在于聚乳酸（PLA），PLA是一种可降解的、具有良好使用性能的生物相容性高分子材料，用于制造可生物降解塑料，近些年一直成为关注和研究的热点［1］。

(完整版)生物技术制药习题答案(夏焕章版)

第一章绪论填空题1. 生物技术制药的特征高技术、高投入、高风险、高收益、长周期。

2. 生物药物广泛应用于医学各领域，按功能用途可分为三类，分别是治疗药物、预防药物、诊断药物。

3.现代生物药物已形成四大类型：一是应用DNA重组技术制造的基因重组多肽、蛋白质类治疗剂；二是基因药物；三是来自动物植物和微生物的天然生物药物；四是合成与部分合成的生物药物；4.生物技术的发展按其技术特征来看，可分为三个不同的发展阶段，传统生物技术阶段；近代生物技术阶段；现代生物技术阶段。

5.生物技术所含的主要技术范畴有基因工程；细胞工程；酶工程；发酵工程；蛋白质核酸工程和生化工程；选择题1.生物技术的核心和关键是（A ）A 细胞工程B 蛋白质工程C 酶工程D 基因工程2. 第三代生物技术（ A ）的出现，大大扩大了现在生物技术的研究范围A 基因工程技术B 蛋白质工程技术C 海洋生物技术D细胞工程技术3.下列哪个产品不是用生物技术生产的（D ）A 青霉素B 淀粉酶C 乙醇D 氯化钠4. 下列哪组描述（A ）符合是生物技术制药的特征A高技术、高投入、高风险、高收益、长周期B高技术、高投入、低风险、高收益、长周期C高技术、低投入、高风险、高收益、长周期D高技术、高投入、高风险、低收益、短周期5. 我国科学家承担了人类基因组计划（C ）的测序工作A10% B5% C 1% D 7%名词解释1.生物技术制药采用现代生物技术可以人为的创造一些条件，借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医学药品，称为生物技术制药。

2.生物技术药物一般说来，采用DNA重组技术或其它生物新技术研制的蛋白质或核酸来药物称为生物技术药物。

3.生物药物生物技术药物是重组产品概念在医药领域的扩大应用，并与天然药物、微生物药物、海洋药物和生物制品一起归类为生物生物药物。

简答题1.生物技术药物的特性是什么？生物技术药物的特征是：（1）分子结构复杂（2）具有种属差异特异性（3）治疗针对性强、疗效高（4）稳定性差（5）免疫原性（6）基因稳定性（7）体内半衰期短（8）受体效应（9）多效应和网络效应（10）检验特殊性2.简述生物技术发展的不同阶段的技术特征和代表产品？（1）传统生物技术的技术特征是酿造技术，所得产品的结构较为简单，属于微生物的初级代谢产物。

押广东卷第20题基因工程(原卷版)

押广东卷基因工程1、（2023广东高考）种子大小是作物重要的产量性状。

研究者对野生型拟南芥（2n=10）进行诱变筛选到一株种子增大的突变体。

通过遗传分析和测序，发现野生型DAI基因发生一个碱基G到A的替换，突变后的基因为隐性基因，据此推测突变体的表型与其有关，开展相关实验。

回答下列问题：（1）拟采用农杆菌转化法将野生型DAI基因转入突变体植株，若突变体表型确由该突变造成，则转基因植株的种子大小应与_________植株的种子大小相近。

（2）用PCR反应扩增DAI基因，用限制性核酸内切酶对PCR产物和_________进行切割，用DNA连接酶将两者连接。

为确保插入的DAI基因可以正常表达，其上下游序列需具备_________。

（3）转化后，T-DNA（其内部基因在减数分裂时不发生交换）可在基因组单一位点插入也可以同时插入多个位点。

在插入片段均遵循基因分离及自由组合定律的前提下，选出单一位点插入的植株，并进一步获得目的基因稳定遗传的植株（如图），用于后续验证突变基因与表型的关系。

①农杆菌转化T0代植株并自交，将T1代种子播种在选择培养基上，能够萌发并生长的阳性个体即表示其基因组中插入了_________。

②T1代阳性植株自交所得的T2代种子按单株收种并播种于选择培养基，选择阳性率约_________%的培养基中幼苗继续培养。

③将②中选出的T2代阳性植株_________（填“自交”、“与野生型杂交”或“与突变体杂交”）所得的T3代种子按单株收种并播种于选择培养基，阳性率达到_________%的培养基中的幼苗即为目标转基因植株。

为便于在后续研究中检测该突变，研究者利用PCR扩增野生型和突变型基因片段，再使用限制性核酸内切酶X切割产物，通过核酸电泳即可进行突变检测，相关信息见下，在电泳图中将酶切结果对应位置的条带涂黑_________。

2、（2022广东高考）“绿水逶迤去，青山相向开”大力发展低碳经济已成为全社会的共识。

2024北京高三二模生物汇编：遗传与进化(非选择题)

2024北京高三二模生物汇编遗传与进化（非选择题）一、非选择题1．（2024北京东城高三二模）铝毒害会限制植物生长，对农业和生态安全造成威胁。

对植物如何感知铝进而启动抗铝响应开展研究。

(1)无机盐在细胞中大多数以形式存在，对细胞和生物体的生命活动有重要作用。

有些无机盐对细胞有毒害，具有抗性的植物有更多的机会产生后代，经过长期的，后代抗性不断增强。

(2)为研究ALR1与植物抗铝性的关系，研究者利用拟南芥进行实验，测量根长并计算相对值，根长相对值=有金属离子处理的根长/无金属离子处理的根长×100%，结果如图1、图2。

综合图1、图2结果，推测。

(3)植物根分泌的有机酸阴离子能结合并限制铝离子进入根，这是植物抗铝性的核心作用。

ALMT1和MATE为有机酸盐外排转运蛋白，在条件下分别检测野生型、ALR1缺失突变体和ALR1过表达突变体植株根部细胞中相应基因的表达情况，结果表明这两种蛋白参与ALR1介导的抗铝性。

(4)ALMT1和MATE的表达由转录调控因子STOP1控制。

检测各组植株中STOP1的mRNA和蛋白含量，由此推测ALR1仅通过抑制STOP1蛋白水解调控植物的抗铝性。

请在图3中画出有铝条件下各组的实验结果。

(5)最终确定ALR1是铝离子受体。

除本题中提到的ALR1调控植物抗铝性的信号通路外，还需证明ALR1能，才能得出此结论。

2．（2024北京昌平高三二模）褐飞虱和白背飞虱是两种为害水稻的稻飞虱，研究者对二者的种间关系进行了一系列的研究。

(1)褐飞虱和白背飞虱都是通过吸食水稻汁液和在稻株上产卵等方式为害水稻，二者之间存在关系。

(2)水稻自身可释放挥发物，会影响褐飞虱和白背飞虱的行为。

研究者使用下图所示的“H”型嗅觉仪进行实验。

注：“H”型透明封闭装置中，A区放置稻飞虱，B和C区放置不同的水稻苗或土壤①实验中水稻挥发物作为物质发挥作用。

①在“H”型装置的B和C区放置不同的水稻苗或土壤，A区放置稻飞虱，一段时间后统计两侧的稻飞虱数量，为避免稻飞虱迁飞的影响，可通过法进行计数。

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关键词：一酸；应进化；传改造；副产品；境友好Ｌ乳适遗农环
ＣｏｔｕｃｉｎｏｍｍｅｃａａｃａｏｃｓｃｒｖｓａｔｌｃｉｃｄＥｆｃｅｏｕｃｉｎＡｂｌｙｎｓｒｔｏｆＣｏｒｉＩＳｃｈｒｍｙｅｅｅｉｉｅｗｉｈＬ— ａｔｃａｉｆｉｎｔＰｒｄｔｏｉｉｉｔＷＵａ－ａＺＨＡＮＧａｇｙ ’ Ｘｉｏｙｎ，Ｇｕｎ－ｉ
ｄｃｒｏｙａｅ１ｇｎｓｔｅｈｍｏｏｏｓｉｔｇａｉｅｓｔ，ｅｏｔａｓｏｍｈａｍｅｔｉｔｅＳｃｒｖｔｅａｂｘｌｓｅｅａｈｏｌｇｕｅｒｔｉｅｔｎｃ－ｒｎｆｒｔｅｆｇｎｎｏｔ．ｅｅ￣ｅｗｉｎｖｈｒｈｈｙａｔｅｉｏｌｐａｍｉＵＴ３２ａｄｓｌｃｈｒｎｆｒｎｓｗｉＤＨｃｉｉＦｒｈｒｓｒｅｓｃｒｉｄｏｔｅｓｐｓｍａｌｓｄｐ３ｎｅｅｔｔｅｔａｓｏｍａｔｔＬｈａｔｖｔｙ．ｕｔｅｃｅｎｗａａｒｅｕ
程菌。结果表明，工程茵的培养介质组成（，）ｇ．；酵条件为Ｌ２、０ＫＨＯ６起０Ｈ５０发
发酵时间４ｄ接种量ｌ，０％，搅拌速度６０／ｉ，气量１／ｉ，酵温度３５ｍｎ通ｒ．ｍｎ发５Ｌ０℃。
ｌ４６
２１０２年７月第３３卷第７期
ＦｏｅａｃｎｅｅｏｄＲｓｒＡｄＤｖｌｅｈｏ
食品研究与开敖
生物工程
高效表达Ｌ乳酸的酿酒酵母工程菌构建研究一
吴晓燕张光一，・
（．１河北省产品质量监督检验院，河北石家庄００５；．５０１２河北经贸大学生物科学与工程学院，河北石家庄
ｍｔｏ．ｉｔｃｎｔｃｔｅｉｅｒｔｈｒａｍｎｆａｔｅｙｒｅａｅ（Ｄ）ｓｇｙａｔｙｖｔｅｄＦｒ，ｏｓｔｈｔｇｅｃｉｉｆｇｅｔｃｃｄｈｄｏｎｓＬＨｕｉｅｓｐｒａｈｓｕｒｎａｄｍｅｃｒｏｌｉｇｎｕｅ
ｅｃｎｌＴｅｐｍｚｄｕｕｅｅｉｃｍｏｉｏ（Ｌｗｓｏａｓｓ２，ｏｓａｔｗｔ００ＫＨＯｆｉｔ．ｈｔｉｌｒｍｄｐｓｉｇ）ａｌｅ１０ｃｒｐｔｗｓａｒ０，２Ｐ４ｉｆｅｙｏｉｅｃｔａｏｔｎ／ｍｓｎａｅｅｅ１
Ａｂｔａｔｓｒｃ：ＡｎｅｇｎｅｅａｃａｏｃｓｃｒｖｓｔａｎｗａｏｓｒｃｅｙｇｎｔｎｉｅｒｎｎｖｌｔｏｎｉｅｒｄＳｃｈｒｍｙｅｅｅｉｅｓｒｉｓｃｎｔｕｔｄｂｅｅｉｅｇｎｅｇａｄｅｏｕｉｎｃｉ
６Ｈ．Ｔｅｏｔｍｉｅｅｍｅｔｔｏａａｔｒｒｓｆｌｏｆｒｅｔｔｎｔｍｅ４ｄ，ｎｃｌｔｇｒｔ０％，，ｐ５０．ｈｐｉｚｄｆｒｎａｉｎｐｒｍｅｅｓａｅａｏｌｗ，ｅｍｎａｉｉｉｏｕａｉａｅ１ｏｎｓｉｒｎａｅ６０ｒｍｉａｒｔｎｒｔ．／ｎ，ｅｍｅｔｔｎｔｍｐｒｔｒ０℃ 。ｔｉｇｒｔ５／ｎ，ｅａｉａｅ１５Ｌｍｉｆｒｎａｉｅｅａｕｅ３ｒｏｏＫｅｒｓ：Ｌ—ｌｃｉｃｄｄｐｉｅｅｏｕｉｎｅｅｉｄｆａｉｎｇｉｕｔｒｌｂ－ｒｄｔ；ｅｖｒｎｎ — ｙｗｏｄ — ｔｃａｉ；ａａｔｖｌｔ；ｇｎｔｃｍｏｉｃｔｏ；ａｒｃｌｕａｙ－ｏｕｃｓｎｉｏｍｅｔ— ａｖｏｉｐ
（．ｅｅＩｓｔｔｏＰｏｕｔｕｌｙｕｅｖｉｎｓｅｔｎＳｉａｈａｇ５０１ＨｂｉＣｉ；．ｉｃｅｃｄ１ｂｉｎｔｕｅｆｒｄｃＱａｔＳｐｒｉｏａｄＩｐｃｏ，ｈｉｕｎ０５，ｅｅｈａ２ＢｏｉｅｎＨｉｉｓｎｎｉｊｚ０，ｎｓｎａ
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００６）５０１
摘
要：采用基因工程方法和进化工程相结合的策略对酿酒酵母进行遗传改造，获得高效表达Ｌ乳酸的酿酒酵母适一
应工程菌。以酵母丙酮酸脱羧酶基因１为同源序列构建乳酸脱氢酶编码基因整合片段，并与酵母自主表达质粒ｐＴ３Ｕ３２共转化酿酒酵母茵，筛选具有乳酸脱氢酶活性的转化子。再通过进一步适应进化筛选高产乳酸的酿酒酵母工