血清抗体制备及评价
兔子血清抗体实验报告

一、实验目的1. 探究兔子血清中抗体的产生及其特异性。
2. 分析兔子血清抗体与其他动物血清抗体的交叉反应性。
二、实验原理1. 兔子血清抗体实验基于抗原-抗体特异性结合原理。
将抗原物质注入兔子体内,兔子体内产生针对该抗原的特异性抗体。
2. 将兔子血清抗体与不同动物的血清进行混合,观察沉淀反应,分析抗体特异性及交叉反应性。
三、实验材料1. 实验动物:兔子(体重约2.5kg)2. 实验试剂:抗原(如卵蛋白)、兔抗人血清抗体、人血清、黑猩猩血清、狒狒血清、蜘蛛猴血清、猪血清、羊血清3. 实验器材:注射器、离心机、移液器、培养皿、显微镜等四、实验方法1. 兔子血清抗体制备(1)将抗原(如卵蛋白)注入兔子体内,免疫兔子。
(2)免疫后一周,采集兔子血液,分离血清。
(3)用ELISA法检测兔子血清抗体滴度,确定抗体产生。
2. 抗体特异性及交叉反应性分析(1)将兔子血清抗体与不同动物的血清进行混合,如人血清、黑猩猩血清、狒狒血清、蜘蛛猴血清、猪血清、羊血清。
(2)观察混合液是否产生沉淀反应,分析抗体特异性及交叉反应性。
五、实验结果1. 兔子血清抗体制备(1)免疫后一周,采集兔子血液,分离血清。
(2)ELISA法检测兔子血清抗体滴度,抗体滴度为1:32000。
2. 抗体特异性及交叉反应性分析(1)将兔子血清抗体与人血清混合,产生沉淀反应。
(2)将兔子血清抗体与黑猩猩血清混合,产生轻微沉淀反应。
(3)将兔子血清抗体与狒狒血清、蜘蛛猴血清、猪血清、羊血清混合,未产生沉淀反应。
六、实验讨论1. 兔子血清抗体实验成功制备了针对抗原的特异性抗体,表明兔子体内能够产生针对特定抗原的免疫反应。
2. 兔子血清抗体与人血清产生沉淀反应,表明兔子血清抗体具有特异性,可以识别并结合人血清中的抗原。
3. 兔子血清抗体与黑猩猩血清产生轻微沉淀反应,表明兔子血清抗体具有一定的交叉反应性,但与狒狒血清、蜘蛛猴血清、猪血清、羊血清无交叉反应,说明抗体特异性较高。
抗血清制备及抗体效价检测

短期免疫抗血清制备及抗体效价检测黄健,应技1201,2012304200315摘要通过一定程序注射颗粒性抗原或可溶性抗原免疫小鼠和家兔,是实验室制备多克隆抗血清的常用方法。
虽然依据常规免疫方案可以制备出效价高、亲和力强的抗血清,但整个常规方案耗时近1个多月,也容易受到免疫动物健康状况的影响和饲养成本的限制。
本试验以牛血清白蛋白为抗原缩短免疫注射周期,对小鼠和家兔进行短程快速免疫。
并进行效价检测,以探讨短程快速免疫方案的实效性。
关键词免疫,抗血清,抗原,ELISA主线实验分为三个小实验分别为:实验一:免疫小鼠(每组一只),家兔(每班一只)。
实验二:对免疫后的小鼠和家兔进行抽血、放血,其中老鼠采用断尾取血家兔采用颈动脉放血,分离抗血清。
实验三:ELISA测定抗体效价。
另有一个穿插实验:血型鉴定。
1 实验一:免疫用具有抗原性的物质注入到健康动物的机体后,将引起免疫应答,并会形成浆细胞,分泌抗体。
抗体主要存在于血清中,经多次免疫,使血清中的抗体量达到要求浓度,然后采集动物血液,再从血液中分离析出血清,从而获得抗血清。
为了制备高效价的抗血清,我们需要考虑下列五个因素。
实验动物的免疫反应性,抗原的免疫原性,抗原的剂量,免疫途径,免疫时间间隔。
1.1实验动物的选择常用的免疫动物有家兔、羊、马、大鼠、小鼠、豚鼠等。
免疫用动物应选适龄、健壮,最好为雄性。
家兔一般选择选择年龄在6个月以上当年繁殖的♂性,体重2~3公斤,健康家兔三只,免疫前用金属编号牌固定兔耳,或用染料涂沫在动物的背部,作出明确的标记。
同时应考虑抗原与动物的种属关系、抗原性质与动物种类、免疫血清的需要量、免疫血清的要求以及动物个体等因素。
我们此次选用小白鼠(每组一只),家兔(每班一只)。
1.2实验步骤1).编号标记3%~5%苦味酸溶液或80%~90%苦味酸酒精饱和液分别标记左前腿上部为1,左腰部为2,左后腿为3,头部为4,背部为5,尾基部为6,右侧从前至后依次为7、8、9。
血清抗体效价的测定

实验报告
10.选择波长630nm,将酶标板置于载板台上,开始扫描,测定OD值。
结果如下所示:
思考题:
1.查阅资料,了解共有哪些类型的ELISA实验,以及本实验中所用ELISA属于哪一类?答:本实验中所用ELISA属于间接法ELISA。
①直接ELISA
原理:将抗原与固相载体连接,洗涤除去未结合的抗原及杂质。
加酶标抗体进行孵育。
固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。
彻底洗涤未结合的酶标抗体。
此时固相上带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
加底物反应。
直接法主要用于测定抗原。
②间接法ELISA
原理:将抗原与固相载体相连结,形成固相抗原。
洗涤除去未结合的抗原及杂质。
加入特异性一抗与固相抗原相结合,形成固相抗原抗体复合物。
经洗涤后,加酶标二抗。
固相免疫复合物中的抗体与酶标二抗结合,从而间接地标记上酶。
洗涤后,加底物显色。
③双抗夹心法ELISA
原理:双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子,但不适用于小分子抗原。
将特异。
1实验一 免疫血清的制备及应用(1)

实验一免疫血清的制备及应用(1)免疫血清(溶血素)的制备【实验原理】用绵羊红细胞(SRBC)免疫家兔,可获得抗绵羊红细胞抗体(抗SRBC抗体)。
SRBC与抗SRBC抗体结合,在补体参与下,可出现红细胞溶解,因此抗SRBC抗体也称为溶血素。
【主要试剂与器材】1.健康雄性家兔、绵羊。
2.2%碘酒、75%酒精、无菌生理盐水。
3.0.10g/L硫酸镁生理盐水溶液。
4.无菌三角瓶(内装玻璃珠)、离心管、吸管、注射器。
5.离心机。
【操作方法】1.抗原制备(1)用碘酒、75%酒精消毒绵羊颈静脉处皮肤,抽血,缓慢注入含有玻璃珠的无菌三角瓶内,轻轻摇动三角瓶,脱纤维抗凝。
抗凝绵羊血用Alsever液可保存2周。
(2)无菌取抗凝绵羊血于离心管中,加适量生理盐水,2000r/min离心5min,吸去上清液和白细胞层,再用较多的无菌盐水与红细胞混匀,离心再弃上清,重复3次,最后一次离心10min。
(3)根据红细胞压积,用0.10g/L硫酸镁生理盐水溶液配成20%SRBC悬液。
2.免疫动物(1)取健康雄性家兔,通过耳静脉免疫,免疫程序见表1-2。
表1-2 溶血素制备免疫方案【结果判断】收获的抗血清应是无菌、无溶血的。
【注意事项】注意无菌操作,并尽可能多的采集血清。
【方法评价】溶血素方法简便易行,但是动物个体间产生溶血素质量差异较大。
【临床应用】溶血素可直接用于补体参与的溶血反应,如总补体溶血活性和单个补体成分溶血活性测定。
用溶血素和SRBC做指示系统,可进行补体结合试验。
【思考题】在制备绵羊红细胞过程中为什么要洗涤并吸去红细胞表面的白细胞层?。
生化免疫技术----免疫血清的制备及效价测定

免疫血清的制备及效价测定制备免疫血清的传统方法是将抗原注入动物体内,由动物体内 B 细胞增殖分化成浆细胞产生抗体。
由于抗原分子(完全抗原)具有多种抗原决定簇,每一种抗原决定簇可以激活具有相应抗原受体的 B 细胞系产生该决定簇的抗体,因此用抗原免疫机体获得的免疫血清一般均为多克隆抗体。
制备的免疫血清的质量(特异性、亲和力及效价高低)受多种因素的影响,主要包括抗原的性质、免疫动物的种类及状态、免疫剂量、免疫途径及免疫方案(加强免疫次数,间隔时间,佐剂的使用等)等。
因此要获得高质量的免疫血清需先通过预实验摸索确定最佳免疫方法。
测定免疫血清中抗体效价的方法很多,如凝集实验,沉淀实验、溶血实验, ELISA 等均可用于对抗体效价的测定。
第一部分、免疫血清的制备我们要制备的是多克隆抗体----抗IgG抗体的制备。
Ig是免疫球蛋白,对异种动物而言,是良好的抗原物质。
可以刺激异种动物产生抗Ig血清,经适当提取后,产生抗Ig抗体,又叫第二抗体或抗抗体。
在多数的间接标记反应中,均需制备抗Ig抗体。
【实验材料】1.动物IgG(兔源的,购买)2.弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂3.青霉素和链霉素4.实验动物: BALB/c小鼠5.无菌 1ml 注射器6. 生理盐水,酒精棉等【实验步骤】1. 免疫程序:40 ug+弗氏佐剂+青霉素1 000U/ml、链霉素1 000μg/ml+生理盐水混悬液背部皮下多点注射,隔10天加强免疫2次,腹腔注射20ug+不完全弗氏佐剂,一周后收血清。
一般在末次免疫结束后的第7 天,自鼠尾取少量血,分离血清,采用间接法ELISA 分析血清中抗体的效价,达到效价即可收取。
2. 获得免疫血清:小鼠摘眼球取血,收入小试管中,3000转/分离心5分钟,上清即为免疫血清。
第二部分、免疫血清质量评价一、 效价测定抗体效价测定方法很多,本实验采用琼脂扩散法,ELISA法—)、琼脂扩散法1.操作步骤(具体见附注)⑴ 做琼脂板,打梅花孔。
抗血清 的制备

抗血清的制备抗血清制备是一种常见的免疫学实验技术,用于检测特定物质的存在和数量。
下面将对抗血清制备的原理、步骤及注意事项进行详细介绍。
一、原理抗血清是由动物免疫某种抗原制备得到的一种免疫血清,其中包含了特异性抗体。
抗血清制备的原理是通过注射一定量的特异性抗原到动物体内,使其产生特异性抗体,然后收集抗血清。
二、材料和试剂1.抗原:需要制备抗血清的特定抗原。
2.兔、小鼠等动物。
3.盐酸:用于调整兔抗血清的pH值。
4.取血器:用于采集动物血液。
5.离心管、离心机:用于收集血清。
6.不含菌的容器:用于保存抗血清。
三、步骤根据实验要求,制备特定抗原,可以是蛋白质、细胞、病毒、细菌等。
2.制作与抗原相应的抗体兔/小鼠选择适宜种类的动物,注射免疫原,隔一段时间后,在动物体内试验特异性抗体的出现,出现后即可采血制血清。
一般来讲,兔子被认为是制备抗血清的最佳动物,而小鼠常常会出现交叉反应。
3.采集兔血液注射完最后一次免疫原后一周左右,在一个清洁的容器上臂处用取血器采血2-3ml。
离心采集到的兔血液,定量将其分离出血清,再加入盐酸,调节pH值,即可得到兔抗血清。
5.评价抗血清的质量评价抗血清的质量,主要是通过测定抗体滴度来判断抗血清的特异性和强度。
四、注意事项1.严格控制免疫原和免疫过程,确保抗原和抗体的特异性和纯度。
2.合理选择免疫动物种类,不同种类免疫动物会对抗原产生不同反应。
3.采血时要注意安全和卫生,防止感染病毒和细菌。
4.在制备抗血清的过程中需要注意保护动物的健康和福利,并严格按照实验室安全规范操作。
抗血清制备
抗血清制备抗血清是一种广泛应用于医学、生物学、农业等领域的重要抗体。
它可以通过对动物实验的刺激来制备,具有较高的特异性和灵敏性。
本文将介绍抗血清的制备过程和应用领域。
一、抗血清的制备抗血清的制备需要对动物实验进行免疫刺激,让其产生免疫反应,生成相应的抗体。
制备抗体的方法有多种,包括:1. 多次免疫法:将抗原与适当的佐剂混合后注射给动物,每次注射间隔时间大于1个星期。
免疫周期主要根据抗原型以及免疫状态来确定。
一般情况下,需要多次免疫才能达到所需的浓度。
2. 单次免疫法:在抗原一侧布局NMDA表达杂交的细胞,给兔子单偏免疫或初免疫后再进行免疫,以提高抗体效价。
3. 聚集物制备法:将抗原加入雄鹰蛋白中,然后注射到家兔或小猪体内,以选育出抗体。
以上三种方法都有它们的优缺点,适用于不同的条件下。
二、抗血清的应用抗体在医学、生物学、农业等领域都有广泛的应用。
以下是一些常见的应用领域:1. 诊断:通过抗血清与疾病相关物质的特异性结合可以进行诊断,如HIV、狂犬病、乙肝等病毒感染的检测。
2. 治疗:抗体被广泛应用于治疗各种疾病,如肿瘤、自身免疫性疾病、传染病等。
3. 细胞学:抗体可用于细胞学实验,用于检测细胞内、细胞表面或细胞核内的成分,如检测肿瘤细胞、细胞分离、特定蛋白识别等。
4. 农业:抗血清可用于畜牧业和农业生产,如检测动物或植物病毒感染、食品中添加的污染物等。
三、注意事项在制备抗血清时,需要注意以下几点:1. 选择优质的抗原,并进行适当的保护、存储。
2. 用药量应适当,尽量不要过多。
3. 对免疫动物的饲养和体温要求高。
4. 在注射时要注意卫生和安全问题,防止交叉感染。
5. 制备后需要进行充分的检测和鉴定,以确定抗体的特异性和效价。
抗血清的制备是一项重要的实验技术,应用领域广泛,但同时也需要谨慎和责任心。
只有严格遵守操作规定和注意事项,才能制备出优质的抗血清,促进科学的发展。
抗体制备及鉴定实训报告
一、实训目的1. 掌握抗体制备的基本原理和方法。
2. 学会使用ELISA、Western blot等实验技术对制备的抗体进行鉴定。
3. 培养实验操作技能和严谨的科学态度。
二、实训原理抗体是机体免疫系统在抗原刺激下产生的具有特异性结合能力的蛋白质。
抗体制备通常采用免疫动物的方法,通过免疫动物产生特异性抗体,再通过细胞融合等技术制备单克隆抗体。
三、实训材料1. 实验动物:Balb/c小鼠。
2. 抗原:人血清白蛋白(HSA)。
3. 细胞:杂交瘤细胞。
4. 试剂:免疫球蛋白、细胞培养试剂、ELISA试剂盒、Western blot试剂等。
5. 仪器:酶标仪、离心机、电泳仪、凝胶成像系统等。
四、实训步骤1. 免疫动物- 将HSA与载体蛋白(如BSA)偶联,制备免疫原。
- 将免疫原免疫Balb/c小鼠,定期采集血清,检测抗体效价。
2. 细胞融合- 将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,筛选出能分泌抗体的杂交瘤细胞。
- 将杂交瘤细胞进行克隆化培养,得到纯化的杂交瘤细胞。
3. 抗体制备- 将纯化的杂交瘤细胞进行培养,收集细胞培养上清或腹水,提取抗体。
4. 抗体鉴定- ELISA鉴定- 将HSA包被在微孔板上,加入抗体样品,检测抗体与HSA的结合情况。
- Western blot鉴定- 将HSA进行SDS-PAGE电泳,转膜,加入抗体,检测抗体与HSA的结合情况。
五、实训结果1. 免疫动物- 成功免疫Balb/c小鼠,采集到抗体效价较高的血清。
2. 细胞融合- 成功筛选出能分泌抗体的杂交瘤细胞,并进行克隆化培养。
3. 抗体制备- 成功制备抗体,并进行纯化。
4. 抗体鉴定- ELISA鉴定:抗体与HSA结合良好,表明抗体具有特异性。
- Western blot鉴定:抗体与HSA结合良好,表明抗体具有特异性。
六、实训讨论1. 抗体制备过程中,免疫动物的选择、免疫原的制备、细胞融合条件等因素都会影响抗体的制备效果。
2. 抗体鉴定方法包括ELISA、Western blot、ELISPOT等,可根据实验需求选择合适的鉴定方法。
免疫学实验论文——抗血清的制备及效价测定
免疫学实验抗血清的制备及其效价测定班级:生物技术1401小组:11姓名:2016年11月抗血清的制备及免疫小鼠效价检测摘要:本试验以牛血清白蛋白为抗原,对小鼠和家兔进行免疫,以制备高效价抗血清。
采用多次中程免疫使产生免疫应答小鼠的血清中抗体达到实验所需的要求,然后采集小鼠血液,从中分离出血清,从而获得抗血清。
利用间接ELISA 方法测得抗血清效价。
关键词:抗血清;间接法ELISA ;抗体效价前言:用具有抗原性的物质(牛血清白蛋白BSA )注入到健康小鼠的机体后,将引起免疫应答,并会形成浆细胞,分泌抗体。
抗体主要存在于血清中,经三次免疫,使血清中的抗体量达到要求浓度,然后采集小鼠血液,再从血液中分离析出血清,从而获得抗血清。
酶联免疫吸附实验(ELISA )是一种新型的免疫测定技术,利用间接ELISA 法,将抗原BSA 包被在酶标板上,加入待测的抗体,再加相应的二抗,生成复合物后再加入底物显色,借助仪器测得的光吸收值计算抗体效价。
材料与方法:实验主线:实验材料:包被缓冲液(0.05M pH 9.6碳酸盐缓冲液)、10ug/ml 抗原(牛血清白蛋白)、0.01M PBS 溶液、5%(w/v )脱脂奶粉、PBST 洗涤液(含0.05%Tween 20的0.01M 的PBS )、2M H2SO4、待测抗体、HRP 标记的羊抗小鼠IgG (二抗)、底物溶液TMB 、健康小鼠酶标板、酶标仪、保鲜膜、排枪、离心管、玻璃棒、烧杯、离心机、恒温箱动物免疫抗血清的采集与分离中程免疫3次间隔一周间接法ELISA 测定抗血清的效多克隆抗体实验内容与方法:一.动物的免疫:1.1实验动物的选择选择实验动物应考虑抗原与动物的种属关系、抗原性质与动物种类、免疫血清的需要量、免疫血清的要求以及动物个体等因素。
选择与抗原亲缘关系远的动物,尤其在制备抗免疫球蛋白(Ig)抗体时;根据抗体的需要量选择动物,制备一抗常用动物为小鼠和家兔,制备二抗常用动物为羊和马;常用青壮年期的雄性动物。
艾滋病病毒抗体室内质控血清制备及应用评价
>3n / l残废 率和死亡及植 物生存率 相对 增高 , 0 gm , 而且 N E S 增高越显著 , 其预后越 差 , 充分表 达 了脑损 伤患者 的预后 与 N E浓度 间的密切关 系, S 与文献 的观点相 同。然 而我们在
[ ] r s , n e u A d ea , t 1 l a a — dcdr u 2 Go U gt m U, n r v e a u m t i u e f x sJ h e N .G t e n e l
分 别 为 9 . %、 5 9 、 8 8 , 废 率 分 别 为 2 6 、 7 4 7 . % 1. % 残 .%
N E含量也有异常 的表达 , 至在一些正 常人 中也 可出现一 S 甚 定 比例的假 阳性反 应 。因此 它并非 是脑损 伤完全 特异 的标
志物 , 在实 际应 用时应注意鉴别 。
是 国际公认 的衡量 脑外伤 后 昏迷程 度的统 一指标 。在脑外
定值 时 , 对特定疾 病 的预示值 , 明某一个 结果 判断某 种 指
疾病 的可靠程度 , 有鉴别 诊断 的功能 , 具 因此 判断 限值较 正 常参考值对 临床提供的信息更 多、 更富有临床应用价值 。 综 上所 述 , 急性创伤性脑损伤患者血清 N E定量反映脑 S 细胞损伤 的程度 , 伤后进行血清 N E测定不仅对脑损伤的诊 S 断及伤情评估具 有重 要的临床价值 , 而且可望成 为预后早期 判断 的重要手段 。当然也有其不足之处 , 如敏感 性和特异性 仍不能令人满意 , 在一些 良恶性疾病 中( 神经母 细胞瘤 、 小细
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•
实验方法 伤寒杆菌H抗原的制备 1. 取有鞭毛的伤寒杆菌密集划线接种于普通琼脂平板上, 37℃培养24~48小时; 2. 取出培养板,用含有5%石炭酸(苯酚)的生理盐水洗下 琼脂平板上的菌苔,移入无菌三角烧瓶中,置37℃水浴 24h(或4℃3~5天固定杀菌); 3. 做无菌试验,用生理盐水稀释成10*9个/ml,即为细菌H 抗原。
• 实验方法 抗血清的鉴定 效价的测定 效价的测定可根据抗体的不同性质,分别采用环状沉淀试 验、琼脂双向扩散、单项免疫扩散、溶血试验、凝集反应、 酶免疫测定及放射免疫分析等方法进行测定。本实验以凝 集反应为例。 特异性测定 抗体的特异性通常以交叉反应率表示。交叉反应率可以用 竞争抑制试验测定。 亲和力测定 亲和力测定主要有平衡透析法、酶联免疫法和放射分析法。 亲和力的高低是由抗原分子的大小、抗体分子的结合位点 与抗原决定簇之间立体构型的合适度决定的。
• 实验方法 抗体的保存 抗体的保存浓度为20~30mg/ml为宜,加入1/10000的硫 柳汞或1/1000的叠氮钠防腐,并加入等体积的中性甘油, 分装小瓶,置-20℃以下低温保存。
思考与讨论 • 动物的选择 • 免疫方案的确定
• 实验方法 免疫方案
免疫日期(天) 1 免疫途径 多点皮内 静脉 静脉 静脉 静脉 抗原 伤寒杆菌O或H抗原 伤寒杆菌O或H抗原 伤寒杆菌O或H抗原 伤寒杆菌O或H抗原 伤寒杆菌O或H抗原 免疫剂量(ml) 1.0
6 11 16 19
0.5 0.5 1.0 2.0
•
实验方法 抗血清获取 1. 试血:末次免疫7d后试血,试血一般耳静脉或心脏采血, 分离血清与伤寒沙门菌O或H抗原做试验管凝集试验,凝 集效价(滴度)在1:1600~3200之间时即可以放血, 若效价较低,可继续加强免疫; 2. 放血:采用心脏采血以获得最大血量,置37℃促进血块 收缩,并用吸管吸取血清,3000r/min离心10min去除残 余的红细胞。
• 试剂与器材 抗原与免疫对象 细菌菌种(伤寒沙门菌 O901)、健康家兔。 试剂 生理盐水、麦氏比浊管、石炭酸、防 腐剂(0.02%叠氮钠或0.01%硫柳汞)等 设备与器材 剪刀、镊子、注射器、试管等 器材和冰箱、离心机等设备
•
实验方法 伤寒杆菌O抗原的制备 1. 取经革兰染色做细菌纯度鉴定的伤寒沙门菌,密集划线 接种于普通琼脂平板,37℃培养24~48小时; 2. 用生理盐水将细菌菌苔洗于清洁、无菌的三角烧瓶中, 置60℃水浴或隔水煮沸1小时使细菌的菌毛破坏(破坏H 抗原); 3. 将菌液移入离心管4000r/min离心10min,弃去上清,并 用无菌生理盐水洗涤2次; 4. 取少量处理过的菌液再次接种于琼脂平板上进行无菌实 验(37℃,24h),确定无活菌后用生理盐水调整菌液浓 度至10*9个/ml,加石炭酸至终浓度为0.5%,即为细菌O 抗原。
新乡医学院医学检验系 石 瑛
shiying@
• 实验原理 在抗原刺激下可以使机体产生相应的抗体, 由于抗体通常存在于血清中,因此也将机体受 到抗原刺激后的血清称为免疫血清,免疫血清 中含有对应于该抗原的多个决定簇的多种抗 体—即多克隆抗体。
•
实验原理 抗血清的制备分为三个步骤: 抗原的制备与纯化 动ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ的免疫(注射途径、注射次数、间隔 时间等) 血清分离纯化与效价鉴定