脂质过氧化损伤诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达细胞间粘附分子1
姜黄素的药理作用研究进展
亚硝酸盐含量．结果显示，姜黄素抑制巨噬细胞释放一氧化氨 Ｉｃｓｏ为６ ｍｍｏｌ／１．，一氧化氮合成酶ｍＲＮＡ和蛋白质含量降 低。提示姜黄素能抑制诱导型一氧化氮的产生，具有清除过氧 亚硝基阴离子的作用。Ｊｏｅ等”１发现，用台姜黄索的培养液培养 大鼠腹腔巨噬细胞，１０ ｍｍｏｌ／Ｌ就能完全抑制巨噬细胞产生超 氧阴离子、过氧化氢和亚硝酸｝饲料中添加姜黄索喂养８周，继 续ｉｇ ２周后取腹腔巨臌细胞体外培养并测定超氧腭离子，过氧 化氢和亚硝酸含量，结果显示，与对照组比较．给药组腹腔巨噬 细胞释放ＲＯＳ减少。 １．３对氧化损伤ＤＮＡ的保护作用：Ｓｈａｌｉｎｉ等研究证实姜 黄素水提液１００ ｐｇ，Ｌ具有保护ＤＮＡ免受过氧化损伤的作 用．抑制率达到８０％。Ｓｈｉｎ等“。。研究发现ＮＩＨ３Ｔ３细胞用乙 酸肉豆蔻沸波醇处理３０ ｒａｉｎ后黄嗓呤氧化酶活性升高１．８ 倍ｆ黄嘌呤氧化酶催化反应生成ＲＯＳ，进而氧化脂质和核苷 酸，使脱氧鸟苷酸转变为８一羟基脱氧鸟苷酸ｔ引起基因突变 产生致癌作用；与单独给予诱变剂组比较ｔ同时给予２ ｍｍｏｌ／Ｌ姜黄素和诱变荆的黄嘌呤氧化酶活性降低２２．７“。 另报道．诱变剂乙酸肉豆蔻沸波醇体外处理鼠成纤维细胞 后，能使鼠成纤维细胞ＤＮＡ中８一羟基脱氧鸟苷酸含量升 高．而姜黄素能抑制此过程，说明姜黄素具有抗氧化和抗诱 变的作用。Ｒａｊａｋｕｍａｒ等报道，７５ ｍｍｏｌ／Ｌ姜黄索能抑制黄 嘌呤氧化酶系统产生的超氧阴离子。 １．４抗自由基作用：姜黄素及其结构类似物通过抗过氧化 脂质达到保护生物膜的作用，而其抗过氧化脂质的主要机制 是清除自由基。有研究报道，酚羟基有很强的去除自由基的 能力，这种能力在甲氧基的存在下显得越发明显，而姜黄索 的分子结构正好符合这种特性，因此具有较强的清除自由基 的能力。Ｂｏｎｔｅ等［２”通过氧嘌岭／黄嘌呤氧化酶（ＨＸ／Ｘｏ）和 硝基四唑蓝（ＮＢＴ）还原局部产生超氧化物引起人角质化细 胞发生应激反应研究姜黄素对角质化细胞的保护作用． ＭＴＴ实验观察到ＨＸ／ＸＯ引起人角质化细胞严重损伤， ４９％的细胞死亡，给予姜黄素０．３２５、１．２５、５＃ｇ／ｍｌ，可使细 胞的存活率分别增加１３％、１ ８％、２２％，且无细胞毒作用｝还 发现姜黄紊类化合物可抑制ＮＢＴ的还原，１．２５、５ ｐｇ／ｍＬ下 抑制率高达８７％，０．３２５ ｇｇ／ｍＬ抑制率为７５％。提示姜黄紊 类化合物通过抑制ＮＢＴ的还原，减少超氧化物的形成，降低 过氧化氢浓度而对人角化细胞起到保护作用。Ｍａｎｉｋａｎｄａｎ 等ｏ”研究报道姜黄索对异丙肾上腺素引起的大鼠心肌缺血 的保护作用，造成心肌缺血前或后３０
高浓度葡萄糖对培养血管内皮细胞活力和黏附分子表达的影响
临床研究 高浓度葡萄糖对培养血管内皮细胞活力和黏附分子表达的影响穆 王君 史 斌(首都医科大学附属复兴医院内科)摘要:目的 探讨高浓度葡萄糖作用于脐静脉内皮细胞后,对脐静脉血管内皮细胞系的活力和白细胞黏附分子 血管细胞黏附分子-1(VCA M-1)、细胞间黏附分子-1(I CAM-1) 表达的影响,为阐明高血糖在糖尿病血管病变的早期发病中作用与机制提供依据。
方法 采用胎盘蓝染色法及流式细胞仪检测细胞活力和黏附分子表达。
结果 高浓度葡萄糖可使内皮细胞的死亡率增加,ICAM-1表达显著上调,但V CAM-1表达无明显变化。
结论 减少高糖诱导的ICAM-1、VCA M-1表达增加,对减少糖尿病患者慢性并发症的发生概率是一条有益的途径。
关键词:血管内皮细胞;葡萄糖浓度;黏附分子中图分类号:R322.1+2Effects of High Glucose C oncentration on Adhesion Molecules Expression and Survival in Cultured Human Umbilical Vein Endothelial CellsM u Jun,Shi Bin(Dep ar tment of I nter nal M edicine,Fux ing H osp ital,Cap ital University of M edical Sciences)ABSTRAC T:Objective T o investigate whether or not survival was decreased after incubation w ith high glucose concentrations in culture media,and to examine t he effects o f g lucose on the ex pression of intercellular adhesion molecule-1(I CAM-1)、vascular cell adhesion molecule(V CAM-1)in cultured human umbilical vein endothelial cells.Methods Human umbilical v ein endot helial cells (ECV304)were incubated in a culture medium with11.2mmol/L,16.8mmol/L and33.6mmol/L glucoseco ncentrations for24 h,48h,72h respectively.T he trypan-blue exclusion test w as used to study the influence of D-glucose on cell sur vial.T he ex pression of intercellular adhesion molecule-1(I CAM-1),vascular cell adhesion molecule-1(VCA M-1)w er e measured by flow收稿日期:2004-03-254 参考文献[1] KaneW B,Wolf P A,Benjamin E J,et al.Prevalence,incidence,prognosis,and predisposing conditions foratrial fibrillation:populatio n-based estimates.Am JCardiol,1998,82(Suppl):2N~9N[2]Psaty B M,M anolio T A,Kuller L H,et al.I ncidenceof and risk factors for atr ial fibrillation in older adults.Circulation,1997,96:2455~2461[3]Beldner S,Gerstenfeld E P,L in D,et al.Ablation ofatr ial fibrillation:localizing tr iggers,mapping systemsand ablation techniques.M inerva Cardioang iol,2004,52:95~109[4] Ig larz M,Schiffrin E L.Role of endothelin-1inhypertension.Curr Hypertens Rep,2003,5:144~148 [5]Amar J,Chamontin B,Ferr ier es J,et al.Hyper tensioncontrol at hospital dischar ge after acute coronar y event:influence on cardiov ascular prog nosi s-the PREVENI Rstudy.Heart,2002,88:555~558[6]Gosselink A T M,Smit h A J,Crijns G J,et al.Alteration of peripheral v aso dilatory reser vecapacityafter cardioversion of ar trial fibr illation.Eur Heart J,1996,17:926~934[7]Rakhit R D,M arber M S.Nitr icox ide:an emergingrole in cardiopro tection?Heart,2001,86:368~372 [8]T opper J N,Cai J,F alb D,et al.Identification ofvascular endot helial genes differenttially responsiv e tofluid mechanical stimuli:cycloox ygenase-2,manganesesupero xide dismutase,and endothelial cell metric ox idesynthase are selectiv ely up-regulated by steady laminarshear stress.Proc N atl A cad Sci U SA,1996,93:10417~10422[9]M arin F,Roldan V,Climent V,et al.Isthrombog enesis in atrial fibr illation related to matrix metallopro teinase-1and its inhibitor T IM P-1?Stroke,2003,34:1181~11862005年 6月第26卷 第3期首都医科大学学报Journal of Capital University of Medical SciencesJun.2005Vol.26 No.3cytometry.Results When D-g lucose concentrations rose tr ypan-blue excluded cells were decreased.HU VEC exposed to a hig h g lucose concentration(33.6mmol/L)show ed a1.22-fold increase and a1.27-fold increase in cell surface ex pression o f ICA M-1 after48h and72h exposure compared w ith those cultured in medium with a low glucose concentration(5.6mmol/L).C onclusion Hig h concentration of g lucose can arrest t he proliferative response and show that even a short-term ex posure o f endothelial cells (ECs)to high glucose concentration leads to their activ atio n associated w ith increased ex pression of adhesio n molecules such as ICA M-1and that this effect may appears more sig nificantly along wit h time of ex posuring high concentration of glucose.Key words:endothelial cell;glucose concentr atio ns;adhesion molecules糖尿病因伴有严重的大血管和微血管并发症而造成患者死亡率增加,其中内皮细胞(EC)功能损害是血管病变起始的关键因素之一。
氟伐他汀对内脏脂肪素诱导的内皮细胞间黏附因子-1表达的影响
54主国塞旦医王!』!Q!Q生!旦筮≥!鲞筮!!麴Q些塑!』螋型堕型趔幽塑垃：垫!Q：!丛：≥2。
№：!!对鲍曼不动杆菌敏感率呈下降趋势。
如亚胺培南／西司他丁对鲍曼不动杆菌敏感率已经自93．O％(2004年)下降到78．3％(2008年)，该趋势也与文献报道一致，但敏感率低于文献报道卜1。
而在本地区使用较少或不使用的哌啦西彬他唑巴坦、阿米卡星、头孢吡肟等仍维持较高的敏感率。
笔者根据此临床分析结合相关文献认为，近年来哌啦西林／他唑巴坦，头孢哌酮／舒巴坦等以其较高的敏感率在临床使用中有逐步取代敏感率低的三代头孢菌素(如头孢曲松、头孢噻肟等)之势。
阿米卡星对鲍曼不动杆菌耐药率低，但单独应用效果较差，一般为辅助用药。
氟喹诺酮对鲍曼不动杆菌敏感率有下降，但其有良好的亲肺性及高于血药浓度的肺组织浓度，其对鲍曼不动杆菌肺部感染的抗感染作用并未丧失，一般主张B一内酰胺类与氨基糖甙或氟喹诺酮类联用以获得较强的抗鲍曼不动杆菌活性”。
而对碳青霉烯类耐药的菌株，则不得不使用毒性大的多粘菌素B或多粘菌素Ei61。
参考文献[1]沈宁，姚婉珍，周庆涛，等．呼吸科和呼吸监护病房非发酵菌耐药性分析[J]．中国感染与化疗杂志，2007，7(3)：203-205，[2]Si m or A E，L ee M，V ear ncom be M，et a1．A n ou t br e ak due t o m u hi r es i s-r an t a ei net ob a c te r baum a nni i i n a bu m un i t：ri sk fa ct or s fo r aeq ui si．t i o n and m anagem ent[J]．I nf ect Co nt rol H os p Epi d em i ol，2002，23(5)：261-267．[3]杜小幸，张幸国，周萍，等．亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌同源性及碳青酶烯酶研究[J]．中国感染与化疗杂志，2006，6(4)：234-235．[4]陶传敏，陈慧莉，刘义剐，等．1998—2005年我院临床分离非发酵革兰氏阴性杆菌耐药性分析[J]．中国感染与化疗杂志，2006，6(12)：399-401．[5]侯天文，陈晶，李玮。
体外诱导内质网应激的常用方法和机制探讨
体外诱导内质网应激的常用方法和机制探讨敖娜【摘要】Endoplasine retirulum stress( ERs )is the basis of the pathophysiology of many diseases. In the cardiovascular, endocrine and metabolic*, neurological and other systems development and progression of the diseases, it has played an important role. In this context, in vitro induction of ERs is the key for further research. In recent years, lots of ERs indurers have been applied to the researchs, but their mechanisms are different. Understanding and mastering the mechanism and application of some common indurers can help to the studies of diseases which is associated with ERs.%内质网应激(ERs)是多种疾病的病理生理基础,在心血管、内分泌及代谢、神经等多种系统疾病的发生、发展过程中都扮演着重要角色,在此背景下,体外诱导ERs成为进一步研究的关键.近年来各项相关研究应用到的ERs诱导剂很多,其作用机制各不相同.了解及掌握一些常用ERs诱导剂的作用机制及适用范围,对与ERs相关疾病的体外研究有重要意义.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2012(018)022【总页数】4页(P3727-3730)【关键词】细胞;内质网应激;衣霉素;毒胡萝卜素;蛋白酶体抑制剂;非酯化脂肪酸【作者】敖娜【作者单位】中国医科大学附属第一医院内分泌科,沈阳,110001【正文语种】中文【中图分类】R34内质网应激(endoplasmic reticulum stress，ERs)是细胞内一种适应性机制，持续或过强的ERs则诱导细胞凋亡，造成组织损伤。
【国家自然科学基金】_细胞间黏附因子-1(icam-1)_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140803
科研热词 细胞间黏附分子-1 肿瘤坏死因子-α 慢性阻塞性肺疾病 急性加重期 动脉粥样硬化 内皮细胞 降钙素基因相关肽 葡萄糖 细胞因子 糖尿病肾病 痰热证 炎症因子 内皮素-1 人脐静脉内皮细胞 abca1 鼻黏膜 黏附分子 黏附 黄芩苷 高级糖化终产物 间充质干细胞 趋化因子ccl2 衔接蛋白类,信号转导 血管平滑肌细胞 血瘀证 脓毒症 胞问黏附分子1 肺疾病,阻塞性,慢性 肺损伤 肺 肝细胞生长因子 肌细胞 细胞黏附分子 细胞间黏附分子1 细胞间粘附分子-1 糖尿病 糖原合成酶激酶-3β 硫化氢 白细胞介素类 白细胞介素-8 白介素-8 痰热壅肺证 痰湿证 病证结合 炎症反应 炎症 炎性因子 流体切应力 活性氧 氧化低密度脂蛋白 核转录因子(nf)-κ b 当归补血汤
1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90
2009年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50
科研热词 脑微血管内皮细胞 细胞间黏附分子1 细胞间黏附分子-1 肿瘤坏死因子-α 缺血再灌注损伤 灯盏细辛注射液 一氧化氮 黄芪 高血压性脑出血 高血压 阿托伐他汀 阻塞型睡眠呼吸暂停低通气综合征 酸味中药复方 透明质酸受体 软坚散结 转录因子-κ b 趋化因子受体5 视网膜 血管细胞黏附因子1 血管细胞黏附分子1 血管内皮生长因子 蛋白激酶c 脑缺血 脑水肿 脂多糖 肺损伤 肝移植 细胞间黏附因子1 细胞间黏附因子-1 糖尿病大鼠 糖尿病 灯盏细辛 核转录因子κ b 核因子子-κ b 总咖啡酸酯 心肌缺血 心肌保护 子宫内膜异位症 大鼠 冠状动脉粥样硬化性心脏病 再灌注损伤 内皮素-1 内毒素 人脐静脉内皮细胞 二氧化硫 toll样受体4 pparγ icam-1 e选择素8 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75
脂多糖对人脐静脉血管内皮细胞的直接损伤作用
脂多糖对人脐静脉血管内皮细胞的直接损伤作用
姚磊;孙宇;张征
【期刊名称】《基础医学与临床》
【年(卷),期】2001(021)005
【摘要】@@ 血管内皮细胞(endothelial cells,EC)炎症反应是感染性休克向不良方向演变的重要原因,有关激活剂(LPS、IL-1)导致EC活化的研究是败血症病理反应的中心课题.内毒素引起微循环EC损伤是内毒素性组织损伤的重要环节之一.本实验探讨了LPS对体外培养脐静脉EC的直接损伤作用.
【总页数】1页(P479-479)
【作者】姚磊;孙宇;张征
【作者单位】第三军医大学新桥医院检验科;第三军医大学新桥医院检验科;第三军医大学新桥医院检验科
【正文语种】中文
【中图分类】Q538
【相关文献】
1.脂多糖对人脐静脉血管内皮细胞的直接损伤作用 [J], 姚磊;孙宇;任成山;张征
2.黄连素对脂多糖诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用研究 [J], 王丽君; 包贝贝; 郭君平; 华燕吟
3.丹参酮ⅡA通过NF-κB通路抑制脂多糖诱导人脐静脉血管内皮细胞炎性反应的作用机制 [J], 何德全;陈友权;王世祥
4.miR-30a对脂多糖诱导人脐静脉血管内皮细胞自噬的影响 [J], 王丽君;赵瑜;胡
烨;郭君平;张炜
5.脂多糖直接损伤血管内皮细胞后内皮细胞膜脂的修饰 [J], 王翔;蔡绍皙;罗向东;王裴;罗勤;梁光萍;杨宗城
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纤维蛋白(原)及其降解产物对共培养人脐静脉内皮细胞的细胞间黏附分子-1表达的影响
纤维蛋白(原)及其降解产物对共培养人脐静脉内皮细胞的细胞间黏附分子-1表达的影响刘慧慧;吴延华;周晓梅;张艳林;曹勇军;刘春风【摘要】Objective To investigate the effect of fibrinogen( Fg) and its degradation products( FDPs) on the expression of in tercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1 ) in cocullure system of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) and rabbit smooth muscle cells (SMCs). Methods The coculture system of HUVECs in primary culture and rabbit SMCs was established. According to thedifferent interventions and concentrations, they were divided into Fg, Fb and FDPs groups and corresponding 0 mg/ml, 0. 5 mg/ml, 3, 0 mg/ml , 6. 0 mg mg/ml subgroups. The each 3. 0 mg/ml and 6. 0 mg mg/ml subgroups Were intervented by antagonist of inhibitory of nuclear factor B (1-B) BAY 11-7082 and antagonist of protein kinase C(PKC) Staurosporine. The level of ICAM-1 mRNA in HUVF.Cs was detected by reverse transcriptase (RT)-PCR. ICAM-1 protein content from culture supernatant was detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results The levels of ICAM-1 mRNA and protein in Fg 3.0 mg/ml and 6.0 mg/ml subgroups were significantly higher than those in 0 mg/ml subgroup and corresponding concentrations Fg + BAY 11-7082 subgroup (all P<0. 05) ; and the levels of ICAM-1 mRNA and protein in Fg 3. 0 mg/ml subgroup were significantly higher than those in 3. 0 mg/ml + Staurosporine subgroup (all P < 0. 05 ). The levels of ICAM-1 mRNA in Fb 6. 0 mg/ml subgroup was significantlyhigher than lliose in 0 mg/ml subgroup, 6. 0 mg/ml + BAY11 -7082 and 6.0 mg/ml + Staurosporine subgroups (all P < 0. 05). The content of ICAM-1 protein in Fb 6. 0 mg/ml subgroup was significantly higher than that in 0 mg/ml subgroup (P < 0. 05). The levels of ICAM-1 mRNA and proteinin FDPs 6. 0 mg/ml subgroup were significantly higher than those in 0 mg/ml subgroup, corresponding concentrations FDPs + BAY 11-7082 subgroup and Staurosporine subgroup (all P< 0.05). Conclusion The medium, high concentrations of Fg, Fb and FDPs can up-regulate the expression ofICAM-1 in vascular endothelial cell.%目的探讨纤维蛋白原(Fg)、纤维蛋白(Fb)及其降解产物(FDPs)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)/兔平滑肌细胞(SMCs)共培养模型中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响.方法建立原代HUVECS与兔SMC 共培养体系,根据干预物及其浓度的不同分为Fg、Fb、FDPs组及相应的0mg/ml、0.5 mg/ml、3.0 mg/ml和6.0 mg/ml亚组.应用核因子B抑制蛋白(I-B)拮抗剂BAY 11-7082、蛋白激酶C(PKC)拮抗剂Staurosporine分别对0.5 mg/ml、3.0 mg/ml和6.0 mg/ml亚组进行干预.采用反转录(RT)-PCR法检测HUVECS内ICAM-1 mRNA水平；酶联免疫吸附法(EK=LISA)检测培养上清液的ICAM-1蛋白含量.结果 Fg3.0mg/ml和6.0 mg/ml亚组ICAM-1 mRNA水平和蛋白含量显著高于0 mg/ml亚组及相应浓度Fg+BAY 11-7082亚组(均P ＜0.05)；Fg3.0 mg/ml亚组ICAM-1 mRNA水平和蛋白含量显著高于3.0 mg/ml+ Staurosporine亚组(均P＜0.05).Fb 6.0 mg/ml亚组ICAM-1 mRNA水平显著高于0 mg/ml、6.0 mg/ml+ BAY11-7082和6.0 mg/ml+ Staurosporine亚组(均P＜0.05),但Fb 6.0 mg/ml亚组ICAM-1蛋白含量显著高于0 mg/ml亚组(P＜0.05).FDPs 6.0 mg/ml亚组ICAM-1 mRNA水平和蛋白含量显著高于0 mg/ml、相应浓度BAY11-7082和Staurosporine亚组(均P＜0.05).结论中、高浓度Fg、Fb、FDPs能上调血管内皮细胞ICAM-1的表达.【期刊名称】《临床神经病学杂志》【年(卷),期】2012(025)004【总页数】4页(P271-274)【关键词】纤维蛋白原;纤维蛋白;纤维蛋白降解产物;人脐静脉内皮细胞;细胞间黏附分子-1【作者】刘慧慧;吴延华;周晓梅;张艳林;曹勇军;刘春风【作者单位】215004 苏州大学附属第二医院神经内科;215004 苏州大学附属第二医院神经内科;215004 苏州大学附属第二医院神经内科;215004 苏州大学附属第二医院神经内科;215004 苏州大学附属第二医院神经内科;215004 苏州大学附属第二医院神经内科【正文语种】中文【中图分类】R392.11纤维蛋白原(Fg)是动脉粥样硬化的独立危险因素［1，2］，Fg、纤维蛋白(Fb)及其降解产物(FDPs)参与了血栓形成和动脉粥样硬化的发展过程;Fg与细胞间黏附分子-1(ICAM-1)作为炎症因子在诱导炎性细胞内膜下浸润起了识别和桥接作用。
细胞衰老检测指标及衰老模型研究进展
细胞衰老(cellular senescence,CS)是细胞增殖、分化能力和生理功能逐渐发生衰退的变化过程[1~2]。
细胞衰老研究是衰老机制、抗衰老、抗癌[3]研究的重要内容之一,而构建细胞的衰老模型是研究细胞衰老必不可少的步骤。
根据诱发因素的不同,细胞衰老可以划分成应激诱导早衰(stress-inducedpremature senescence,SIPS)、复制性衰老(replicative senescence,RS)[4~5]、癌基因诱导衰老(oncogene-in-duced senescence,OIS)。
衰老指标对于验证所制备模型成功与否十分重要,指标的选择也同样重要。
目前,不同文献中使用的衰老细胞模型和检测指标都不尽相同。
不同情况下如何选用合适的模型和检测指标尚无统一标准。
本文讨论和分析了现有的一些细胞衰老模型的建立方法,列举了常用的细胞衰老检测指标并总结了其选择方法,以便为相关的研究提供参考。
1检测指标细胞衰老的特征包括细胞形态变化、细胞周期阻滞、氧化应激水平和染色质的改变。
由于没有单一的性状可以独自定义细胞衰老,所以体外衰老表型的确定往往需要多个特征同时验证,有文献建议至少验证3个不同的特征[6]。
具体的检测指标有基于这些特征的通用指标,如:衰老相关的β-半乳糖苷酶(senescence-associated beta-galac-tosidase,SA-β-Gal)活性升高、细胞形态改变、衰老相关蛋白质累积、细胞周期分布改变、DNA 损伤灶产生[7]、衰老相关的分泌表型(senescence-as-sociated secretory phenotype,SASP)[1,8]等;也有基于DOI:10.16605/ki.1007-7847.2021.03.0138细胞衰老检测指标及衰老模型研究进展张凌云,刘缨*(北京中医药大学生命科学学院,中国北京102488)摘要:细胞衰老被认为是一种细胞生长周期停滞状态,它不可逆转。
过氧化氢诱导HUVECs氧化应激模型的构建
过氧化氢诱导HUVECs 氧化应激模型的构建戴青里１），孙贵虎２），闫斌３），郭涛２），戴青原２）（1）大理白族自治州人民医院超声科，云南大理671000；2）昆明医科大学第一附属医院心内科；3）门诊部，云南昆明650032）［摘要］目的利用过氧化氢（H 2O 2）诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells ，HUVECs ）构建体外氧化应激细胞模型．方法H 2O 2分6个浓度梯度处理HUVECs 不同时间，倒置显微镜观察细胞形态变化，CCK-8法检测细胞存活率，流式细胞术检测细胞凋亡率，DCFH-DA 荧光探针和流式细胞仪检测细胞内活性氧水平，筛选H 2O 2的最佳作用浓度和时间．结果不同浓度H 2O 2处理细胞不同时间，对HUVECs 均有损伤作用；400、600、800μmol/L H 2O 2处理HUVECs 24h ，细胞存活率显著降低（＜0.05），800μmol/L H 2O 2作用HUVECs 不同时间，细胞存活率随处理时间延长逐渐降低（＜0.01）；各组H 2O 2处理HUVECs 24h ，细胞凋亡率显著增加（1000μmol/L 除外，＜0.05），坏死率亦显著增加（100μmol/L 除外，＜0.05）；800μmol/L H 2O 2处理HUVECs 不同时间，细胞凋亡率随处理时间延长逐渐增加，24h 时达到最高（＜0.05），细胞坏死率亦逐渐增加，48h 时达到最高（＜0.05）；各组H 2O 2作用HUVECs 24h ，浓度400μmol/L 时，细胞内ROS 水平达到最高（＜0.01），800μmol/L H 2O 2处理HUVECs ，胞内ROS 水平随处理时间延长而递增（＜0.01）．结论800μmol/L H 2O 2与HUVECs 作用24h 可构建体外细胞氧化应激模型．［关键词］人脐静脉内皮细胞；过氧化氢；氧化应激；细胞模型［中图分类号］Q505［文献标志码］A ［文章编号］2095－610X （2018）4－0034－06Establishment of Oxidative Stress Model by Inducing HumanUmbilical Vein Endothelial Cells Using Hydrogen PeroxideDAI Qing-li １），SUN Gui-hu ２），YAN Bin ３），GUO Tao ２），DAI Qing-yuan ２）（1）Dept.of Ultrasound ，Dali Bai Autonomous Prefecture People's Hospital ，Dali 671000；２）Dept.of Cardiology ；３）Out 原patient Deartment ，The First Affiliated Hospital of Kunming Medical University ，Kunming 650032，China ）［Abstract ］Objective To establish an oxidative stress cell model by inducing human umbilical vein endothe-lial cells （HUVECs ）using hydrogen peroxide （H 2O 2）.Methods Six gradient concentrations of H2O2wereco-cultured with HUVECs for 6h ，12h ，24h and 48h.Inverted microscope was used to observe the change of cell morphologies.The optimal working concentration and effect time of H 2O 2on HUVECs were screened by CCK-8method for cell viability ，flowcymetry for apoptosis rate ，and CDFU-DA fluorescent probing and flowcymetry for ROS levels.Results Any concentration of H 2O 2could do harm to HUVECs co-culturing with cells.Cell viabilitiesdecreased statistically when treating cells with 400，600or 800μmol/L H 2O 2for different times （＜0.05）.Cell viabilities also decreased gradually as time prolonged when treating cells with 800μmol/L H 2O 2（＜0.001）.When treating cells with different concentration of H2O2for 24h ，cell apoptosis rates increased dramatically （1000μmol/L as an exception ，＜0.05），so did cell necrosis rates （100μmol/L as an exception ，＜0.05）；When treating cells with 800μmol/L H 2O 2，cell apoptosis rates increased dramatically as time prolonged ，reaching the peak at 24h （＜0.05），so did necrosis rates ，reaching the peak at 48h （＜0.05）.ROS level reached theJournal of Kunming Medical UniversityCN 53-1221R昆明医科大学学报2018，39（4）：34耀39［基金项目］云南省教育厅科学研究基金资助项目（2015Y153）［作者简介］戴青里（1975～），女，云南大理市人，医学学士，副主任医师，主要从事妇产科B 超工作．［通信作者］戴青原．E-mail:dqy0823@peak while treating cells with400μmol/L H2O2（＜0.001）;ROS levels increased gradully as time prolonged when treating cells with800μmol/L H2O2（＜0.001）.Conclusions The oxidative stress model in HUVECs was es-tablished by coculturing cells with culture medium containing800μmol/L hydrogen peroxide for24h.［Key words］Human umbilical vein endothelial cells；Hydrogen peroxide；Oxidative stress；Cell model冠心病在全世界范围内具有高发病率和高死亡率，发生的首要原因是动脉粥样硬化，内皮细胞损伤是动脉粥样硬化的始发事件，常与内皮功能紊乱相关，而氧化应激是动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）发展的重要原因[1]．氧化应激是指机体在遭受各种刺激时，促氧化剂和抗氧化剂间的平衡被打破，活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）过度表达诱导凋亡，导致内皮细胞受损[2]．过氧化氢（H2O2）极易透过细胞膜，与细胞内铁离子形成高活性的自由基，是引起血管损伤的主要成分，H2O2易于获得，性质稳定，是研究氧化损伤的重要工具[3]．既往有研究利用H2O2成功构建心肌细胞、肝细胞等氧化应激模型，但作用浓度均较低、作用时间均较短[4-5]，本研究应用不同浓度过氧化氢作用不同时间，诱导HUVECs构建体外氧化应激细胞模型，筛选出理想H2O2浓度和时间，为相关研究提供可靠的细胞模型．1材料与方法1.1主要试剂和仪器30%过氧化氢（分析纯，广东西陇化工公司）、Tunel试剂盒（Roche公司，美国）、CCK-8检测试剂盒（南京凯基公司）、ROS检测试剂盒（北京普利莱公司）、EA-hy926细胞株（中国科学院上海细胞库）、流式细胞仪（Beckman Coulter公司，美国）、酶标仪（Thermo Scientific公司，美国）．1.2细胞株复苏常温复苏EA-hy926脐静脉内皮细胞株，含FBS20%、1%青/链霉素、1%谷氨酰胺的DMEM 完全培养基、37℃、5%CO2培养箱培养，每2～3 d换液，对数生长期细胞用于实验．1.3模型构建-细胞分组及干预实验细胞随机分为对照组和实验组.1.3.1剂量效应干预实验组分为6个浓度梯度：100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L、600μmol/L、800μmol/L、1000μmol/L，对照组不加任何药物．1.3.2时间效应干预通过剂量效应筛选出H2O2最佳作用浓度，与HUVECs共同培养6h、12h、24h、48h，筛选最佳作用时间.1.4倒置相差显微镜下观察各组H2O2处理后的细胞形态1.4.1CCK-8法检测细胞的存活率细胞接种于96孔板（1×102/孔），每孔100μL，共设6组，每组3个重复孔，常规培养，80%融合时加不同浓度H2O2分别处理；吸去上清液，加入10μL CCK-8试剂，继续孵育2h，酶标仪于450nm波长处测定各孔吸光度，用该值代表细胞活性.1.4.2流式细胞仪TUNEL法检测细胞凋亡细胞（1×106/mL）500r/min室温离心2min，加入200μL4%PFA，4℃放置30min，700r/min室温离心3min，加入70%酒精200μL，-20℃放置30min，700r/min室温离心3min，同一样品分为2管，分别加入TDT反应液及阴性对照液各30μL，37℃孵育1h，含0.2%BSA的PBS洗涤，700r/min室温离心3min，加入10mg/mL RANse20μL、0.1%Triton 200μL，37℃孵育15min，加入100μg/mL PI染液1m L，避光15～30min，24h内上机检测．1.4.3细胞内ROS检测2×104细胞接种于6孔培养板中，加H2O2分组处理后，弃原培养基，原位装载探针37℃、5%CO2培养箱内孵育60min；阳性对照组加入试剂盒阳性对照试剂37℃孵育60 min；PBS洗涤2次，胰酶消化，1000r/min离心3 min，加入3mL PBS重悬细胞，流式细胞仪检测．1.5统计学处理使用SPSS软件进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，各组差异比较采用One-Way ANOVA方差分析，有统计学意义时，进一步用LSD法做两两比较．＜0.05为差异有统计学意义. 2结果2.1H2O2对HUVECs形态的影响正常HUVECs呈单层鹅卵石镶嵌状紧密排列，边界清楚，胞核位于细胞中央，核仁1~2个（见图1A）；实验组细胞缩小、胞膜皱缩、间隙增大、胞核增大，大多数胞浆有暗色颗粒，部分细胞上浮，典型排列受到不同程度的破坏，球形或椭圆35第4期戴青里，等．过氧化氢诱导HUVECs氧化应激模型的构建形细胞数量随H2O2作用时间和浓度增加而增多，表明H2O2对HUVECs具有损伤作用（图1B、图1C、图1D）．ABC D图1H2O2对HUVECs形态的影响（40×）Fig.1The effect of H2O2on morphology of HUVECs（40×）A:正常对照组；B:H2O2400μmol/L处理24h；C:H2O2800μmol/L处理24h；D:H2O21000μmol/L处理24h.2.2不同浓度H2O2对HUVECs存活率的影响CCK-8实验分为2部分，剂量效应和时间效应。
姜黄素对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞炎症损伤的保护作用
姜黄素对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞炎症损伤的保护作用朱磊;谢春毅【摘要】目的:研究姜黄素是否可抑制血管内皮的损伤及炎症反应从而起到预防动脉粥样硬化(AS)的作用.方法:培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),加入外源性氧化型低密度脂蛋白(OX-LDL组)组构造与AS发病早期相似的体外模型,用姜黄素干预后(姜黄素组)观察HUVEC形态的改变及炎症因子[细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-8]表达的变化.结果:OX-LDL诱导的AS模型内皮细胞增殖减少,ICAM-1、IL-6、IL-8的表达增加,均高于阴性对照组(P<0.01);姜黄素组可减少细胞凋亡,降低ICAM-1、IL-6、IL-8的表达,与OX-LDL组差异均有统计学意义(P<0.01).结论:姜黄素能降低内皮细胞炎症损伤时相关炎症因子的表达,保护血管内皮细胞,预防AS.%Objective: To study whether curcumin has the protective effect on atherosclerosis via modulation inflammation and endothelial function. Methods: Human umbilical veins endodermis cells ( HUVEC ) were cultured in vitro. The effects of curcumin on the changes of vascular endothelial cell morphology and the expressions of inflammation factors including inter-cellular adhesion molecule-1 ( ICAM-1) ,interleukin-6 (IL-6)and interleukin-8 ( IL-8 ) were studied on the early phase model of atherosclerosis induced by oxidative low-density lipoprotein ( OX-LDL) . Results: Compared with control group, OX-LDL inhibited the proliferation of HUVEC and induced the expressions of ICAM-1 ,IL-6 and IL-8 in HUVEC,which were higher than in control group(P <0. 01 ). Compared with ox-LDL group, curcumin reduced the apoptosis of HUVEC, the expressionsof ICAM-1, IL-6 and IL-8 were decreased, which were statistical different( P < 0. 01) . Conclusions: Curcumin can improve atherosclerosis and protect vascular endothelial cells by inhibition of the expressions of inflammatory factors.【期刊名称】《蚌埠医学院学报》【年(卷),期】2012(037)010【总页数】5页(P1151-1154,1158)【关键词】动脉粥样硬化;姜黄素;人脐静脉内皮细胞;氧化型低密度脂蛋白【作者】朱磊;谢春毅【作者单位】上海市杨浦区平凉社区卫生服务中心,200082;上海市中西医结合医院,心内科,200082【正文语种】中文【中图分类】R541.4动脉粥样硬化性心脑血管疾病是以血管平滑肌细胞增生和脂质在粥样硬化斑块沉积为特征的危害人类健康最严重的疾病之一。
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[文章编号] 100723949(2002)1020220109203・实验研究・脂质过氧化损伤诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达细胞间粘附分子1邹飞雁,邓仲端,瞿智玲,倪娟(华中科技大学同济医学院病理学教研室,湖北省武汉市430030)[主题词] 脂质过氧化; 内皮,血管; 细胞间粘附分子1; 联胺[摘 要] 为探讨脂质过氧化损伤能否诱导血管内皮细胞表达细胞间粘附分子1,用胰酶消化法分离人脐静脉内皮细胞进行原代培养,内皮细胞用不同浓度联胺作用相同时间或同一浓度联胺作用不同时间,使之发生脂质过氧化损伤,逆转录聚合酶链反应检测内皮细胞细胞间粘附分子1mRNA 表达,细胞酶链免疫吸附实验测定内皮细胞细胞间粘附分子1蛋白表达。
逆转录聚合酶链反应结果发现,不同浓度联胺(1μm ol ΠL 、5μm ol ΠL 和10μm ol ΠL )作用8h ,内皮细胞细胞间粘附分子1对β2actin 吸光度比值依次为0.535、0.908和1.186,分别是对照组(0.185)的2.89倍、4.91倍和6.41倍;而同一浓度联胺(5μm ol ΠL )作用4h 和24h ,吸光度比值依次为0.598和1.292,分别是对照组(0.185)的3.23倍和6.98倍。
细胞酶链免疫吸附实验结果发现,经1μm ol ΠL 、5μm ol ΠL 和10μm ol ΠL 联胺作用4h 后,内皮细胞细胞间粘附分子1蛋白表达的吸光度值依次为0.1387、0.1775和0.2326,分别是对照组(0.1035)的1.34倍、1.71倍和2.25倍(P <0.01)。
结果表明,联胺诱导的内皮细胞细胞间粘附分子1的表达在一定作用时间和浓度范围内呈时间和剂量依赖性。
提示联胺诱导的脂质过氧化损伤可能上调细胞间粘附分子1mRNA 和蛋白的表达,这可能在单核细胞聚积于内皮下间隙起重要作用。
[中图分类号] R392.11[文献标识码] ALipid Peroxidation I njury I nduces Expression of I ntercellular Adhesion Molecule 21in Cul 2tured H uman Umbilial V ein E ndothelial CellsZ OU Fei 2Y an ,DNEG Zhong 2Duan ,QU Zhi 2Ling ,amd NI Juan(Department o f Pathology ,Huazhong University o f Science and Technology ,Tongji Medical College ,Wuhan 430030,China )[MeSH ] Lipid Peroxidation ; Endothelium ,Vascular ; Intercellular Adhesion M olecule 21; Diamide [ABSTRACT ] Aim T o observe whether lipid peroxidation injury to endothelial cells (EC )induces intercellular adhesion m olecule 21(IC AM 21)expression. Methods The lipid peroxidation injury to cultured human umbilical vein endothelial cells (hUVEC )was induced by exposure of the cells to diamide either at a same concentration for different incubation time or at different concentrations ,but for a same incubation times. The IC AM 21mRNA expression in hUVEC was determined by reverse tran 2scriptase 2polymerase chain reaction (RT 2PCR ),and was normalized with β2actin mRNA. The IC AM 21protein expression in hU 2VEC was determined by cell enzyme 2linked immunos orbent essy (E LIS A ). R esults RT 2PCR showed that the ratios of the abs orbance (A )values of IC AM 21mRNA to that of the β2actin mRNA expressed in hUVEC exposed to diamide at different con 2centrations (1μm ol ΠL ,5μm ol ΠL and 10μm ol ΠL )for 8h was 0.535,0.908and 1.186,respectively. Whereas the ratio of the A values of IC AM 21mRNA to that of the β2actin mRNA expressed in hUVEC exposed to diamide at a concentration of 5μm ol ΠL for 0,4h and 24h was 0.185,0.598and 1.292,respectively. Cell E LIS A showed that the A values of IC AM 21protein expressed in hUVEC exposed to diamide at different concentrations (1μm ol ΠL ,5μm ol ΠL and 10μm ol ΠL )for 4h were 0.1387,0.1775and 0.2326,which were 1.342fold ,1.712fold and 2.252fold as much as that of the control group (0.1035),respectively. There was a significant statistical difference between groups (F =38.89,P <0.01). T aken together ,these results suggest that IC AM 21expression in hUVEC induced by diamide was in a dose 2and time 2dependent manner. Conclusions Lipid peroxida 2tion injury to EC induced by diamide may up 2regulate IC AM 21mRNA and protein expression ,which play an im portant role in the recruitment of m onocytes into subendothelial space in atherogenesis.[收稿日期] 2001209214 [修回日期] 2002202220[基金项目] 国家自然科学基金(39730220)资助。
[作者简介] 邹飞雁,女,1963年出生,湖南省衡阳县人,博士研究生。
邓仲端,男,1927年出生,病理学教授,博士研究生导师,长期从事动脉粥样硬化发病机制的研究。
血管内皮细胞(endothelial cell ,EC )在一些有害因子如脂质过氧化、氧化型脂蛋白及内毒素等作用下,可发生功能失调,诱导产生某些粘附分子[1,2],导致血中白细胞粘附于内皮[3],并迁入内皮下间隙,形成泡沫细胞[4],促进动脉粥样硬化(atherosclerosis ,As )的发生发展。
本研究从mRNA 水平和蛋白表达方面探讨联胺诱导培养的人EC 脂质过氧化后对细胞间粘附分子1(intercellular adhesion m olecule 21,901C N 4321262/R 中国动脉硬化杂志2002年第10卷第2期IC AM21)表达的影响,为阐明EC的脂质过氧化损伤在As发生发展中的作用提供实验依据。
1 材料和方法1.1 人脐静脉内皮细胞的培养参照文献[5],用胰酶消化法获取人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,hUVEC),培养于含5%新生牛血清、10%胎牛血清、5%人血清和0.03%谷氨酰胺的M199培养基(G ibco公司),每2～3天更换培养液,待细胞达到亚汇合时,用0. 25%胰蛋白酶消化传代。
第2至3代细胞用于实验,显微镜下H UVEC呈铺路石样排列,鼠抗人第Ⅷ因子抗体阳性。
1.2 实验分组实验分六组:①对照组:不加联胺;②1μm olΠL 组:加1μm olΠL联胺温育8h;③5μm olΠL组:加5μm olΠL联胺温育8h;④10μm olΠL组:加10μm olΠL 联胺温育8h;⑤4h组:加5μm olΠL联胺温育4h;⑥24h组:加5μm olΠL联胺温育24h。
1.3 逆转录聚合酶链反应收集各组细胞,按TRI zol(G ibco公司)试剂说明书提取细胞总RNA。
取各组细胞总RNA3μg逆转录合成cDNA,再取逆转录产物1μL进行PCR循环。
94℃变性1min,61℃退火45s,72℃延伸1.5min,共34个循环,末次延伸72℃10min,-20℃储存。
PCR 反应体系总体积为50μL,包括1×PCR bu ffer、MgCl2 1.5mm olΠL、dNTPs0.2mm olΠL、引物各20pm olΠL、T aq 酶1u。
IC AM21引物(上海博亚公司)序列为:正链5’2C AC AAG CC A CG C CTC CCT G AA CCT A23’,负链5’2TG T GGG CCT TTG TG T TTT G AT G CT A23’, PCR扩增产物长度为458bp。
内参β2actin引物序列:正链5’2CCT AG C ACC ATG AAG AC A A23’,负链5’2AG C C AT G CC AAA TG T CTC A23’,扩增产物长度为253bp。