实验室DNA提取方法(盐酸胍最终版)
实验细菌基因组DNA的提取
原
因
1. 材料不新鲜或反复冻
融
2. 未很好克制内源核酸 酶旳活性
3. 提取过程操作过于剧
对 策
烈，DNA被机械打断
4. 外源核酸酶污染
5. 反复冻融
1. 尽量取新鲜材料，低温保存材料防 止反复冻融
2. 液氮研磨或匀浆组织后，应在解冻 前加入裂解缓冲液
3. 在提取内源核酸酶含量丰富旳材料 旳DNA时，可增长裂解液中螯合剂 旳含量
如：苯酚、氯仿、盐酸胍、DEPC
核酸制备中常用旳酶
DNase RNase 蛋白酶K 溶菌酶
核酸提取旳一般过程 1）破碎细胞（预防核酸酶旳作用）
微生物：溶菌酶、SDS裂解。 高等植物：捣碎器破碎、液氮研磨。
酶法：蛋白酶，如胰蛋白酶， 冰冻法：反复冻融或液氮冻后组织捣碎。 动物：液氮处理后用匀浆器破碎。 细胞器DNA：首先纯化细胞器。
一、试验原理
2、核酸制备旳一般原则
分离纯化核酸总旳原则： ①应确保核酸一级构造旳完整性； ②排除其他分子旳污染。
核酸纯化应到达旳要求： ①核酸样品中不应存在对酶有克制作用旳有机溶剂和过高 浓度旳金属离子； ②其他生物大分子旳污染应降低到最低程度； ③排除其他核酸分子旳污染。
一、试验原理
3、核酸制备旳一般原则
一、试验原理
4、核酸制备旳一般措施和原理
核酸酶旳克制和克制剂 降低温度，变化pH及盐旳浓度，都利于对核酸酶
活性旳克制，但均不如利用核酸酶克制剂更有利，当 然，几种条件并用更加好。
对于DNA，克制DNase活力很轻易，但预防机械 张力拉断则更主要。
对于RNA，因分子较小，不易被机械张力拉断， 但克制RNase活力较难，故在RNA提取中设法克制 RNase更主要。
2核酸操作技术-DNA提取
沉淀DNA、蛋白
上清RNA、多糖
等体积氯仿/异戊醇，震荡10min/离心 加2倍体积95％冷乙醇
加2倍体积95％冷乙醇 冰箱至出现白色沉淀 冰箱至出现白色沉淀 RNA 离心 离心 DNA
3、质粒DNA的分离、纯化及检测
Apa LI (178)
P(BLA)
Apa LI (2367)
溶解：用少量去离子水（约20毫升）溶解沉淀物，用以测定其含量。
工艺图
3g肝脏 + 20mL0.14mol/L 氯化钠
匀浆, 1min
离心 8000r/min, 7min
上清
沉淀
等体积80％苯酚 搅拌10-20min，冰箱静置30min
8000rn/min，7min
30ml生理盐水溶解 4ml 10％SDS，60℃，10min
准确复性，留在上清中。
–碱性下，变性蛋白是可溶的；酸性、中性下变性蛋白
不溶而沉淀。 –提取的质粒可有三种结构：线形、开环、闭环超螺旋。
• 质粒的特性：共价、闭合、环状的小分子 量DNA。 • 要去除的物质：
去除蛋白的常用方法
变性剂法：用SDS等去污剂使蛋白质变性，可以直接从
生物材料中提取DNA；
苯酚法：用含水的酚溶液沉淀蛋白质和DNA，分层、离
心。因蛋白变性，抑制了核酸酶活性，并且操作过程比较
缓和，可以得到较好的DNA制品；
氯仿法：用含辛醇或异戊醇的氯仿振荡核蛋白，使乳化，
离心除蛋白，DNA在上层水相，用乙醇沉淀上层，可将
方法：先用组织捣碎机将动物肝脏制成组织匀浆，再用
0.14mol/L 氯化钠溶液把细胞中的 RNP 提取出来，最后用酚
DNA提取方法
DNA提取方法一、移液器使用移液器（也称作“枪”）是所有分子实验操作不可或缺的工具，其正确使用是顺利开展各项实验的先决条件。
为保证实验结果的准确性和稳定性，同时延长移液器的使用寿命，请大家细心操作并遵守以下使用规则和注意事项：1.从未使用移液器或刚进入实验室的研究生，只有完全准确掌握移液器使用规则后方可独立使用移液器。
2.按需要选用合适量程的移液器，调整刻度时，注意看移液器刻度表，不要超过最大刻度。
3.装配吸头时，用力不要过猛，以免吸头难以脱卸，同时损坏移液器。
4.吸取液体时，注意要慢慢向上释放控制按钮以免吸入速度过快导致液体进入移液器内。
5.切忌平放带有残液的吸头的移液器，更不能倒放。
6.使用移液器清洗或溶解固体物质等需反复吸打时，请装配多个叠加的吸头，且调整刻度不超过移液器最大量程的一半。
7.移液器使用完毕，务必调到最大刻度，并稳妥地放回对应的移液器架上。
8.细心操作，如不小心使移液器表面沾到液体，请及时清洗干净；如不小心将液体吸入移液器内，应及时清洗。
9.严禁用沾有放射性或腐蚀性物质的手套触摸移液器表面；严禁不熟悉移液器构造者私自校对移液器刻度。
第一节叶片总DNA的提取一、取样须知1. 取样之前一般要先编号（牌子和离心管的编号）和挂牌，务必保证离心管中的叶片是来自于同一编号单株，编号切勿混淆；2. 为保证质量，所取样品尽量为幼嫩叶片组织，并尽量保证全程低温（使用冰袋或碎冰）；3. 取样时间最好在晴天或阴天上午叶面露水干后进行，尽量使样品不沾水及泥土。
4. 如使用塑料袋装样品，切记将袋内空气排尽，以免在–70℃保存时塑料袋破裂导致样品混合。
二、试剂的配制1. Tris-HCl ( 1.0 M/L, pH8.0 )121.16g Tris-HCl 和43ml HCl 加dd H2O 定容至1 L.2. EDTA ( 0.5M/L, pH8.0 )186g EDTA和25g NaOH加dd H2O 定容至1 L.3. 2％CTAB81.9g NaCl100ml 1.0 M/L Tris-HCl ( pH8.0 )40ml 0.5M/L EDTA ( pH8.0 )20g CTAB加dd H2O 定容至1 L, 灭菌后即可用于DNA的提取。
DNA提取步骤
第20章细胞基因分离鉴定和原位杂交第一节细胞DNA、RNA的分离鉴定技术一、培养细胞基因组DNA的提取及鉴定人和哺乳动物细胞基因组DNA的分离通常是在有EDTA、Sarkosye等一类去污剂存在下，用蛋白酶K消化细胞，随后用酚、氯仿抽提，经RNase处理和纯化来提取DNA，可用于细胞凋亡中对所引起DNA断裂、凝胶电泳呈现“梯形”条带的实验，在细胞凋亡章节中已介绍了有关DNA的提取和凝胶电泳鉴定，除此之外，提取纯化的DNA还可用于分析其结构，序列限制性内切酶片断长度多态性及其基因定位和克隆。
(一)DNA提取方法：(1)取单层细胞，经无钙、镁PBS洗一次，用0.25%胰蛋白酶消化，细胞悬液经PBS洗2次,弃上清，取细胞沉淀。
(2)加入2ml细胞裂解液(10mM Tris HCL，pH8.0，0.1mol/L EDTA，10mmol/L NaCL，1%SDS)充分混匀，加入蛋白酶K至终浓度为0.5～1g/L、Sarkosye终浓度为0.5%，混匀裂解蛋白呈糊状。
(3)50℃水浴2小时，转入37℃水浴过夜，次日加入等体积的饱和酚，轻轻颠倒混匀，以防止DNA断裂，约3分钟。
12000r/min离心15分钟（室温）(4)取水相，再加入等体积酚/氯仿(1:1),同样颠倒混匀，去除蛋白质12000 r/min离心15分钟（室温）(5)再重复步骤(4)，再用等体积酚/氯仿(1:1)抽提一次(6)取水相，再加入等体积氯仿，去除酚及蛋白质，颠倒混匀12000 r/min离心15分钟（室温）(7)取水相，加入2倍体积的预冷无水乙醇，沉淀DNA，混匀-20℃放置1小时12000 r/min离心15分钟（室温）(8)用70%乙醇洗涤一次，按上法离心将沉淀真空干燥10分钟。
(9)加入RNase A至终浓度100mg/L，37℃水浴消化1小时，消化污染的RNA。
(10)加入蛋白酶K至终浓度0.4g/L、Sarkosye至终浓度0.5%，混匀，50℃水浴2小时，加入Nace至终浓度10mmol/L。
DNA、RNA、蛋白质提取
1、菌体破碎液氮充分研磨，转入离心管中，加入1 ml Biozol 试剂，振荡混匀，室温孵育10 min( 如不立即提取，样品可在Biozol 试剂中4℃保存) 。
加入200 μl 氯仿，振荡混匀后在冰上孵育10 min，然后4 ℃、12 000 r /min 离心15 min。
离心后样品分为3 层，底层为蓝色有机相，上层为无色水相和中间层。
2、RNA 的提取。
将上层转移到1． 5 ml 离心管中，加入等体积异丙醇，颠倒混匀，将混合样品于-20 ℃孵育20min 以上，然后4 ℃、12 000 r /min 离心10 min。
RNA 沉淀通常形成片状沉淀附着于管壁和管底; 小心弃上清，用1 ml75%乙醇洗涤RNA 沉淀1 次，颠倒洗涤离心管管壁，尽可能让沉淀悬浮，然后4 ℃、12 000 r /min 离心5 min，再次去除上清; 适度干燥RNA 沉淀，用适量( 一般为20-50 μl) 无RNA酶水或TE 溶液来溶解RNA。
3、DNA 的提取。
DNA 的分离是CTAB 法的融合改进。
移去上层后，其余部分加入1.5 ml 无水乙醇，颠倒混匀后室温静置5 min，然后4 ℃、2000 r /min 离心5 min。
上清转移至新的1.5 ml 离心管中用于提取蛋白质，沉淀用于提取DNA。
沉淀加入700 μl 65 ℃预热的CTAB 抽提液［1.5% CTAB( W/V) ，0.1 mol /L Tris-HCl，20 mol /L EDTA，1.4 mol /L NaCl，pH 值8.0，用前加入β-巯基乙醇至终浓度为2%( V/V) ］，颠倒混匀，65 ℃水浴1 h 以上; 加入等体积的氯仿/异戊醇( 24:1，V/V) ，颠倒混匀，4 ℃、10000 r /min 离心10min; 取上清，加入等体积的异丙醇，-20℃放置30 min，4℃、12000 r /min离心15 min; 弃上清，用1 ml 75% 乙醇溶液洗涤沉淀，4℃、12 000 r /min 离心5 min，弃上清。
核酸_提取实验报告
一、实验目的1. 学习核酸提取的基本原理和操作方法；2. 掌握动物组织细胞中核酸的提取和鉴定方法；3. 熟悉实验操作技巧，提高实验操作能力。
二、实验原理核酸是一类生物大分子，包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），它们在生物体的遗传、代谢和调控等过程中发挥着重要作用。
本实验通过提取动物组织细胞中的核酸，对其进行鉴定，以了解核酸的基本性质和功能。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠；2. 实验试剂：盐酸胍、氯化钠、柠檬酸钠、乙醇、异丙醇、二苯胺、3，5-二羟甲苯等；3. 实验仪器：离心机、匀浆器、电炉、水浴锅、显微镜等。
四、实验步骤1. 实验动物处死，取肝组织；2. 将肝组织剪碎，加入适量匀浆液，用匀浆器进行匀浆；3. 将匀浆液加入盐酸胍，使pH值降至6.0；4. 加入适量的氯化钠和柠檬酸钠，使溶液的离子强度达到0.14mol/L；5. 将溶液转移至离心管中，在4℃、5000g条件下离心10分钟；6. 取上清液，加入等体积的异丙醇，混匀；7. 将混合液转移至另一离心管中，在4℃、10000g条件下离心10分钟；8. 弃上清液，用70%乙醇洗涤沉淀，在4℃、10000g条件下离心5分钟；9. 弃上清液，将沉淀干燥；10. 将干燥的沉淀溶解于适量的水中，加入二苯胺试剂，观察颜色变化；11. 加入3，5-二羟甲苯试剂，观察颜色变化；12. 根据颜色变化，判断核酸的类型。
五、实验结果1. 在二苯胺试剂的作用下，溶液呈蓝色，表明提取的核酸中含有DNA；2. 在3，5-二羟甲苯试剂的作用下，溶液呈绿色，表明提取的核酸中含有RNA。
六、实验分析1. 实验结果表明，通过本实验方法可以成功提取动物组织细胞中的核酸，并进行鉴定；2. 实验过程中，注意控制实验条件，如pH值、离子强度等，以保证核酸的提取效果；3. 实验结果与理论相符，验证了核酸提取方法的可行性。
七、实验总结1. 本实验成功提取了动物组织细胞中的核酸，并对其进行了鉴定；2. 通过实验，掌握了核酸提取的基本原理和操作方法，提高了实验操作能力；3. 本实验为后续研究核酸的功能和应用奠定了基础。
rna的提取与鉴定实验报告
rna的提取与鉴定实验报告一.原理本方法利用盐酸胍抑制RNA酶，匀浆裂解细胞，采用有机溶剂抽提去除蛋白质。
通过选择性沉淀RNA分子去除DNA。
二.方法1.样品处理⑴非政府样品处置：挑新鲜的非政府样品称量后，抠碎约1cm2的非政府块轻易重新加入坯浆液中展开RNA抽取，或液氮中速冻-70℃留存。
⑵贴壁培养细胞处理：用PBS洗细胞一次，吸干溶液后将培养板快速移至液氮中冷冻后转到-70℃保存；或加入1ml匀浆至培养板中直接裂解细胞，然后将粘稠的裂解液进一步匀浆。
⑶漂浮培育细胞处置：Vergt搜集细胞，用PHS漂浮冲洗再田心搜集，若不立即抽取RNA，则可以经液氮速冻后转往一70℃储藏水泵。
2.加l倍体积盐酸胍匀浆液[至准备好的样品细胞中，高速匀浆1min。
3.坯浆液g，室温Vergt10min。
4.将上清移至一个干净离心管中，加入0.1体积的3mol/L乙酸钠（PH5.2），混匀，再加5体积预冷的乙醇，立即充分混匀，-20℃放置至少2小时。
5.g 0℃Vergt10分钟结晶核酸，弃上清液，室温潮湿。
6，每个提取RNA的组织或细胞样品中，加入l0～15min盐酸胍匀浆液Ⅱ，搅拌溶解。
7.重新加入2.5体积预冷的乙醇，立即充份搅匀，-20℃至少置放2小时。
8.g 0℃离心10分钟沉淀核酸，去上清，室温挥发乙醇。
9.按每克组织细胞提5min的比例.分后两次重新加入0.02mol/L EDTA(pH8.0) 先加1/2体积EDTA震荡l～2分钟，gVergt2min.取出上清.再加另一个1/2体积的EDTA震荡l一2分钟.分拆两次核酸熔化液。
.10.用等体积氯仿―正丁醇(4：1)抽提核酸溶液，g室温离心l0min，g室温离心10min。
吸出上清至另一个干净离心管中。
11.提3倍体积lmol/L乙酸钠 (PH7.0) 搅匀，-20℃置放1h以上，此时RNA将选择地结晶，而DNA仍为熔化状况。
12.g，0℃离心20min，沉于管底的是RNA。
用盐酸胍裂解细胞
其大小范围从lkb至200kb以上不等。
这些质粒都是独立于细菌基因组DNA之外进行 复制和遗传的辅助性遗传单位。
质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或 表达的重要媒介物，这种基因运载工具 在基因工程中具有极广泛的应用价值， 而质粒的分离与提取则是最常用、最基 本的实验技术．
自溶： 细胞结构在本身所具有的各种水解酶作用下，发生溶 解。应用此法要特别小心，防止目的核酸被分解。
3、化学处理
用脂溶性的溶剂（如丙酮、氯仿、甲苯等）或表明活性剂（ SDS）处理细胞时，可使细胞壁和细胞膜的结构部分溶解，导 致细胞破碎。
4、生物酶降解
如溶菌酶等生物酶有降解细胞壁的功能。在用此法处理细菌细 胞时，先是细胞壁消融，然后是渗透压引起的细胞膜破裂，导 致细胞破碎。
2、酚抽提法:
酚作为蛋白变性剂，同时抑制了DNase的降解作用。现有许多派生的方 法。 （1）酚水法 一般向溶液中加入等体积用水或缓冲溶液饱和的重蒸酚（除 去氧化物醌），在室温下或低温下摇动混合。变性蛋白分子表面由于含有很 多极性基团与苯酚相似相溶，从而变性蛋白分子（以及细胞残渣）溶于酚相 ，而核酸和多糖溶于水相。其中间为不溶性变性蛋白质。离心分层后取出水 层，多次重复操作，直至中间层无明显变性蛋白为止。然后合并含DNA 的 水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀核酸 。此法的特点是使提取 的DNA保持天然状态 。
（3）原生质体分离法 此法首先将荧 光蛋白（GFP）转入受体细胞，用酶处 理破壁后，通过紫外照射使那些表达绿 色荧光蛋白的细胞产生荧光，再通过荧 光感受分离仪将其分离出来，进而制得 RNA。
（三） 核酸的浓缩和沉淀
DNA抽提的操作步骤
DNA抽提的操作步骤DNA抽提的操作步骤试剂准备：蛋白酶K、白细胞裂解液、苯酚、氯仿、无水乙醇、70%乙醇1.从冰箱取出冰冻的白细胞，将编号和姓名写在登记本上。
待白细胞融化后，向管内加入5ml白细胞裂解液和50ul蛋白酶K（20mg/ml）。
将管内液体摇匀，或者借助移液枪反复吹打混匀。
然后将管子放入60℃水浴锅内，过夜（可以根据孵育的时间长短适当调整温度）。
在水浴的过程中，每隔2-3小时将试管震荡摇匀一次。
2.把水浴锅内的试管取出，将其中的液体转移到15ml试管内（15ml的试管事先做好标记），并依次向试管内加入等体积（即5ml）的酚-氯仿，然后将盖子拧紧。
轻轻上下颠倒混匀（20次左右），然后离心3000rpm，15min。
离心时将离心机的温度调至室温，温度过低会导致有机溶剂凝固。
离心结束后，可以看到试管内的液体分为三层，上层为水相，中间为变性的蛋白质，下层为有机溶剂（酚氯仿）。
3.然后用钝口Tip吸出上层水相转移到干净的试管中（注意：将1ml的Tip尖端减去2-3mm即可得到钝口的Tip，在吸取上层水相的过程中要尽量避免混入蛋白相，动作要缓慢）多分几次转移），然后再加入等体积的酚氯仿，拧紧盖子，颠倒混匀，离心3000rpm，10min。
4.再次用钝口Tip把上层水相转移到干净的试管中，然后向试管内加入2倍体×2），拧紧盖子，缓慢颠倒，积的无水乙醇（无水乙醇的体积=V 所吸出的上清的体积即可看到絮状的DNA沉淀析出。
（如果抽提的数量较少，可以将管子放到Cold Room，等数量多了再一起进行下面的操作）5.用黄色Tip把白色絮状的DNA沉淀挑出来，放到70%乙醇（预先准备0.5ml的小管子，加入400ul70%的无水乙醇，洗涤用）中洗涤，重复两次。
6.最后用黄色Tip将DNA沉淀挑出，将DNA连同枪头一同打到1.5mlEP管中。
敞开盖子，室温放置直到乙醇完全挥发，向EP管内加入400ulTE，用Tip头反复吹打，使DNA完全溶于TE，得到DNA溶液。
提取dna的方法
提取dna的方法提取DNA的方法。
DNA提取是分子生物学和遗传学研究中的一项基础工作，它是分析DNA序列、进行PCR扩增、测序等实验的前提。
本文将介绍几种常用的DNA提取方法，希望能为科研工作者提供一些参考。
首先，我们来介绍化学法提取DNA的方法。
化学法是最常用的DNA提取方法之一，其原理是利用蛋白酶K和盐酸胍等试剂破坏细胞膜和蛋白质，使DNA从细胞中释放出来。
具体操作步骤为，首先，将待提取的细胞样品加入含有蛋白酶K 的溶液中，经过一定时间的消化后，再加入盐酸胍等试剂，使DNA沉淀出来。
最后，用乙醇洗涤和溶解，即可得到纯净的DNA。
其次，机械法也是一种常用的DNA提取方法。
机械法主要利用机械力破碎细胞壁，释放DNA。
常用的机械法包括玻璃珠研磨法和超声波破碎法。
玻璃珠研磨法是将样品和玻璃珠一起加入管中，通过高速震荡使细胞破碎，释放DNA。
超声波破碎法则是利用超声波的高能量震荡作用，破坏细胞壁，释放DNA。
这两种方法操作简单，适用于大批量的样品提取。
另外，磁珠法也是一种高效的DNA提取方法。
磁珠法利用表面修饰的磁珠与DNA的亲和性，通过磁力场控制DNA的分离和纯化。
操作步骤为，首先，将待提取的细胞样品与表面修饰的磁珠混合，使DNA与磁珠结合；然后，通过磁力场的作用，将磁珠与结合的DNA沉淀到管底；最后，去除上清液，用洗涤缓冲液洗涤，即可得到纯净的DNA。
最后，有机溶剂法也是一种常用的DNA提取方法。
有机溶剂法利用有机溶剂与DNA的亲和性，将DNA从细胞溶液中提取出来。
操作步骤为，首先，将待提取的细胞样品加入有机溶剂中，使DNA与有机相结合；然后，通过离心将DNA沉淀到管底；最后，去除上清液，用洗涤缓冲液洗涤，即可得到纯净的DNA。
综上所述，化学法、机械法、磁珠法和有机溶剂法是常用的DNA提取方法，每种方法都有其适用的场合和特点。
在实际操作中，可以根据实验需要和样品性质选择合适的提取方法。
希望本文对DNA提取方法有所帮助，谢谢阅读！。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验室DNA提取方法
试剂准备：
1.红细胞裂解液：
NH4CL 8.26g
Na2EDTA 37mg
KHCO3 1.00g
去离子水至1L
过0.22um滤膜
2.SDS 1X TE（PH 8.0）
SDS: 10g ①PH 8.0 10mM Tris-CL 1.211g/1L水去离子水：至100ml ②PH 8.0 1mM EDTA 0.5M EDTA
2ml（0.326g）
把②加到①即可
3.盐酸胍
盐酸胍72g
1M Tris-HCL 10ml（1.21g）
去离子水至100ml
PH 8.0
4.蛋白酶K（每瓶100mg）
每瓶加去离子水10ml，终浓度为10mg/ml
5.无水乙醇，70%乙醇
DNA提取Protocol：
1、准备工作：准备三个试管架，其中一个放血样，其余两个标记待用，打开水浴箱，70℃；
2、血样拿出来溶解；
3、记下血样的号码到册子上；
4、血样溶化后，将血样转移到10ml试管中；
5、加RBC裂解液（10ml试管）至管口，封口，弹开沉淀（振荡）；（通常加两倍血样体积的
裂解液）；
或者：
1. 1. 5ml血液（EDTA抗凝），离心2500rpm，10min；
2. 弃上清，加RBC裂解液（10ml试管）至管口，封口，弹开沉淀；
6、室温放置 10min后离心，3000rpm，10min （接着做第二份）
7、弃上清液，加RBC裂解液（10ml试管）至管口，封口，弹开沉淀（剧烈振荡）；
8、室温放置 10min后离心，3000rpm，10min（可以适时放置5-7分钟）
9、弃上清液，加双蒸水 800ul，弹开管底沉淀（涡旋进行）；
10、依次加：蛋白酶K 60ul；SDS 300 ul（涡旋下）；盐酸胍 300 ul；
11、放入70℃水浴中1小时，前15min要充分振荡三次（即每隔五分钟振荡一次，涡旋）；
12、水浴过程中准备两份的EP管并标号；
13、从水浴中拿出试管，冷却，离心3500rpm，3min；
14、将上清液移至 1.5ml离心管中，离心13000rpm，10min
15、取上清液放置于10ml试管中，加2.5倍预冷的（-20度）无水乙醇（约3ml），振荡，
可见 DNA沉淀；
16、用吸管吸出DNA沉淀放置于1.5ml离心管中；
17、加预冷的（-20度）70%乙醇1.6ml左右，洗两次（第一次加950 ul，第二次加650 ul），
离心13000rpm，30s；
18、室温下晾干；
19、晾干后用适量容积的TE溶解（约300ul）；。