细菌药敏试验及耐药机制研究进展.pptx
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抗菌药物敏感试验与细菌耐药性检课件
相加作用：它们联用时的效果等于单用两种抗 生素效果之和； 60％～70％
无关作用：两种抗生素联用的效果，仅相当于 其中一种具有较强作用的抗生素的效果；
拮抗作用：两种抗生素联用时的效果反而小于 它们分别使用时的效果之和。 10％～15％
32
抗菌药物协同作用发生原理
两种抗菌药物作用部位不同： β－内酰胺类抗生素（抑制细菌细胞壁合成）与氨
因此细菌培养及药敏试验报告只能作为临床用 药的参考，应根据患者用药后的治疗反应和临 床病情及时调整用药。
医学检验的灵魂是与临床沟通。
46
新的药敏试验方法探索
流式细胞术检测抗生素最低抑菌浓度 分枝杆菌药物最低抑菌浓度的快速测定
方法研究
47
细菌耐药性的发生过程：
细菌获得与耐药相关的基因 基因：537 编码与耐药有关的蛋白 表型：书533页
心距离应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。
20
7.经过35℃16～24h孵育。 8.取抑菌环直径， 根据CLSI标准，报告细菌对 该抗生素敏感、耐药、中介。
21
纸片扩散法质量控制
抑菌圈直径？
培养基：M-H平板厚度，4 mm
↗↘
细菌悬液：0.5麦氏标准的细菌浓度 ↗ ↘
药敏纸片的质量
治疗浓度
治疗浓度的下限 即表中的 S
耐药
中介耐药 敏感
MIC
6
第一节、抗菌药物敏感性试验方法
需氧和兼性厌氧菌
7
需氧和兼性厌氧菌药敏试验的方法
稀释法 • 肉汤稀释法（试管稀释法） • 琼脂稀释法（平板稀释法） 纸片扩散法（纸片法） E-试验 联合药物敏感试验
8
稀释法的特点
定量的药敏试验，测定MIC、MBC。 方法比较繁琐，手工操作一般不作为常规试验，
无关作用：两种抗生素联用的效果，仅相当于 其中一种具有较强作用的抗生素的效果；
拮抗作用：两种抗生素联用时的效果反而小于 它们分别使用时的效果之和。 10％～15％
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抗菌药物协同作用发生原理
两种抗菌药物作用部位不同： β－内酰胺类抗生素（抑制细菌细胞壁合成）与氨
因此细菌培养及药敏试验报告只能作为临床用 药的参考，应根据患者用药后的治疗反应和临 床病情及时调整用药。
医学检验的灵魂是与临床沟通。
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新的药敏试验方法探索
流式细胞术检测抗生素最低抑菌浓度 分枝杆菌药物最低抑菌浓度的快速测定
方法研究
47
细菌耐药性的发生过程：
细菌获得与耐药相关的基因 基因：537 编码与耐药有关的蛋白 表型：书533页
心距离应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。
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7.经过35℃16～24h孵育。 8.取抑菌环直径， 根据CLSI标准，报告细菌对 该抗生素敏感、耐药、中介。
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纸片扩散法质量控制
抑菌圈直径？
培养基：M-H平板厚度，4 mm
↗↘
细菌悬液：0.5麦氏标准的细菌浓度 ↗ ↘
药敏纸片的质量
治疗浓度
治疗浓度的下限 即表中的 S
耐药
中介耐药 敏感
MIC
6
第一节、抗菌药物敏感性试验方法
需氧和兼性厌氧菌
7
需氧和兼性厌氧菌药敏试验的方法
稀释法 • 肉汤稀释法（试管稀释法） • 琼脂稀释法（平板稀释法） 纸片扩散法（纸片法） E-试验 联合药物敏感试验
8
稀释法的特点
定量的药敏试验，测定MIC、MBC。 方法比较繁琐，手工操作一般不作为常规试验，
抗菌药物敏感性试验与耐药检测ppt生物技术实验教学中心课件
8.联合药物敏感试验
1）方法很多，其中纸片法最为常用。先将试验菌均 匀涂布于培养基表面，盖好平皿，放置5分钟，待 平板表面水分吸收后，将两种含药纸片贴于平板 上，两纸片中心距离2--4mm左右。然后35℃ 孵育 过夜，取出观察结果。
2）结果判断 联合药物敏感试验可出现四种结果： A.无关作用： 甲+乙=甲单或乙单 B.拮抗作用： 甲+乙＜甲单或乙单 C.相加作用： 甲+乙=甲单+乙单 D.协同作用： 甲+乙＞甲单+乙单
三、实验操作步骤
（一）纸片扩散法：
1. M-H平板：直径为90mm，厚度 4mm。 2. 菌悬液制备：无菌挑取菌落于无菌生理盐水中，校
正浊度至0.5 麦氏。 3. 用无菌棉签浸入细菌悬液中，将棉签在试管壁上轻
轻挤压以挤去过多的菌液，用棉签以连续划线的方 式均匀涂抹琼脂平板表面三次（每次转60℃）使 菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。盖上 平板的盖子，放置3~10min。
一、实验目的：
1. 掌握纸片扩散法（K-B法）的原理、操作方法、结 果的判读及临床意义。
2. 了解各种稀释法抗生素敏感性试验的原理、操作 方法、结果判读和临床意义。
3. 掌握纸片扩散法的质量控制，了解稀释法的质量 控制。
二、实验原理
1. 抗菌药物敏感性试验是测定抗生素或其他抗 微生物制剂在体外抑制细菌生长的能力。这 种能力可以通过稀释或扩散方法来测定。
六、影响因素：
1. 培养基：厚度，PH，离子浓度，成份，添加剂； 2. 抗菌药物的配制方法，纸片的含量，大小，
渗透性，保存方式等； 3. 细菌的接种量； 4. 培养的环境，温度与时间； 5. 结果的判断及解释标准等。
4.每个孔加入100ul浓度为105菌悬液（大肠或金 葡），混匀，胶布封口，37°C培养。
细菌药敏试验及耐药机制研究进展
赏M嚙就试絵及耐嚙机制姿徼省佃書耐希此枚屮皿姿徵德科女曇础床松险徐折曇教可寒妥徽底科丈曇第一附属医浣检脸科給无宏一.嚙敏试验种类1、歡片扩徽该次稀轉法稀轉法包括宏董肉汤稀眷眩（%衣观奴必如攸刃、徽量肉汤稀尊该（滋滋滋滋如te^t）＞琼脂稀轉法（旳如cldatuM. te^t） o5\三・做雀细菌药敏试验■宏量稀释法•Minimal inhibitory concentration (MIC)•Reference method. Add standard inoculum to dilutions of antibiotic. Incubate overnight. MIC is lowest concentration that inhibits growth (can also be performed by agar dilution). Interpretation (S or R) is based on achievable drug levels徽量液俸稀轉法细圉药敏试验・E・test法•E-test•Strips containing a gradient of antibiotic are placed on lawn of bacteria and incubated over night. MIC is determined at point where zone of inhibition intersects scale on strip・•Combines ease of KB with an MIC method・ Particularly useful for S. pneumoniae.二、謠敬试验基凉条件试验条件培养基Mueller-Hinton 琼脂、CAMHB > Mueller-Hinton 琼脂接种物生长法或直接菌落悬液法，相当于0.5麦氏标准。
孵育35°C±2°C；空气；16・18小时推荐的质控菌株大肠埃希菌ATCC 25922；大肠埃希菌ATCC 35218 （为监控B ■内酰胺酶/B・内酰胺抑制剂纸片用）杆菌科一纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法（1）对于从粪便中分离的沙门菌和志贺菌属，常规仅测试和抿告氨茱西林，一种卩奎酮类药和甲氧节噪/磺胺甲噁哇。
细菌药敏试验 ppt课件
8
4
2
重要误差
12
258
1
1
12
小误差
敏感 5
1 0.5
1
25
9
0.25 6
8 10 12 细1菌4药敏1试8 验2p0pt课件22 24 26 28 30 32 349
不同国家的判定折点 －可能不同
原因：
用药剂量不同，服药的间隔不同 评价敏感时较保守 更强调检测出耐药株（即特定的耐药群） 技术因素：接种、培养基
* M100 每年更新一次
**M2, M7 每三年更细新菌一药敏次试验 ppt课件
123
药物分组
判断折点
标准菌株质控范围
特殊的耐药监测
细菌药敏试验 ppt课件
13
细菌药敏试验 ppt课件
14
敏感性分类(CLSI的定义)
敏感（Susceptible）
用常规用量治疗有效 常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌的
缓冲区：防止操作的系统误差造成重 大结果的判定错误
细菌药敏试验 ppt课件
16
药敏试验的方法学
半定量…纸片扩散法 (抑菌圈直径) MIC法：
稀释法(肉汤、琼脂) 自动化仪法 抗生素连续梯度法 (Etest ) 流式细胞仪
细菌药敏试验 ppt课件
17
纸片扩散法（Kirby-Bauer法）
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼 脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后 不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周 围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无 菌生长的透明圈即为抑菌圈。
细菌药敏试验 ppt课件
7
MIC与抑菌圈直径的线性关系
Log2. MIC R I
抗菌药物敏感试验细菌耐药性检测ppt课件
256 128
8
判读抑菌浓度
（MIC ug/ml)
016
完整最新版课件
28
E test 法特点
优点
连续浓度梯度，与琼脂稀释法相关性好 （相关系数为0.9）.可测MIC。
操作简单，影响因素少，稳定性高。
缺点：E试条较昂贵; 不适用于生长缓慢的苛养菌。
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31
四、联合药物敏感试验
联合药物意义
盖有15--20个对倍稀释浓度的宽度范围。
016
将E试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育，围
绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交
点的刻度浓度即为抗菌药物抑制细菌的MIC。
依照CLSI标准判断其敏感、耐药、中介。
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26
有菌生长区 无菌生长区
完整最新版课件
27
椭圆形细菌 生长抑制区
完整最新版课件
40
四种方法
比例法 放射同位素法 绝对浓度法 耐药率法
•直接法：直接采用图片阳 性的体液标本。（须经充 分消化五杂菌）
•间接法：经分离纯培养后 的次代培养菌。
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41
间接比例法（WHO推荐）
Middlebrook7H10琼脂 培养3周
无药
药1
药2
药3
不含药的对照格菌落数应为50~150 敏感：含药格无结核杆菌生长，
抗菌药物与细菌 纸片含量 抑菌圈直径：mm 相应MIC μg/ml 耐药 中介度 敏感 耐药 敏感
丁胺卡那霉素 氨苄青霉素
测肠杆菌 测葡萄球菌 测嗜血杆菌 测肠球菌
30μg ≤14 15-16 ≥ 17 ≥32 ≤16
10μg 10μg 10μg 10μg
8
判读抑菌浓度
（MIC ug/ml)
016
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E test 法特点
优点
连续浓度梯度，与琼脂稀释法相关性好 （相关系数为0.9）.可测MIC。
操作简单，影响因素少，稳定性高。
缺点：E试条较昂贵; 不适用于生长缓慢的苛养菌。
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31
四、联合药物敏感试验
联合药物意义
盖有15--20个对倍稀释浓度的宽度范围。
016
将E试条放在细菌接种过的琼脂平板上，经孵育，围
绕试条明显可见椭圆形抑菌圈，圈的边缘与试条交
点的刻度浓度即为抗菌药物抑制细菌的MIC。
依照CLSI标准判断其敏感、耐药、中介。
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26
有菌生长区 无菌生长区
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27
椭圆形细菌 生长抑制区
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40
四种方法
比例法 放射同位素法 绝对浓度法 耐药率法
•直接法：直接采用图片阳 性的体液标本。（须经充 分消化五杂菌）
•间接法：经分离纯培养后 的次代培养菌。
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41
间接比例法（WHO推荐）
Middlebrook7H10琼脂 培养3周
无药
药1
药2
药3
不含药的对照格菌落数应为50~150 敏感：含药格无结核杆菌生长，
抗菌药物与细菌 纸片含量 抑菌圈直径：mm 相应MIC μg/ml 耐药 中介度 敏感 耐药 敏感
丁胺卡那霉素 氨苄青霉素
测肠杆菌 测葡萄球菌 测嗜血杆菌 测肠球菌
30μg ≤14 15-16 ≥ 17 ≥32 ≤16
10μg 10μg 10μg 10μg
细菌药敏试验及其耐药表型检测课件
药敏试验的分类
纸片扩散法
将抗菌药物纸片贴在接种了待测 菌的琼脂平板上，通过测量抑菌 圈大小来确定细菌对药物的敏感
程度。
稀释法
通过不同浓度的抗菌药物与细菌在 琼脂平板上接触，观察细菌生长情 况，以判断药物的抑菌浓度。
E-test法
将抗菌药物浓度梯度试纸贴在接种 了待测菌的琼脂平板上，根据抑菌 圈边缘与试纸条的交汇点读出最低 抑菌浓度值。
点，是临床常用的药敏试验方法之一。
04
药敏试验的结果解读
结果判读标准
敏感（Susceptible）
01
表示细菌对药物敏感，通常为≤2μg/ml或≤10μg/ml，具体标
准根据药物种类和实验方法而异。
中介（Intermediate）
02
表示细菌对药物中度敏感，通常为2μg/ml＜MIC＜10μg/ml或
某些细菌可以产生酶类，将药物分解 或灭活，从而降低或消除药物的抗菌 作用。
抗菌药物作用靶点的修饰
细菌通过增加或改变靶点蛋白的数量 或修饰状态，降低药物与靶点的结合 能力。
03
药敏试验的方法
纸片扩散法
总结词
一种常用的药敏试验方法
详细描述
纸片扩散法是一种简便、快捷的药敏试验方法，通过将含有一定浓度的抗菌药 物的纸片贴在接种了待测菌的琼脂平板上，观察细菌周围的抑菌圈大小，判断 细菌对药物的敏感程度。
细菌药敏试验及其耐药表型检测课 件
目录
• 细菌药敏试验概述 • 细菌耐药性及耐药表型 • 药敏试验的方法 • 药敏试验的结果解读 • 耐药表型检测的应用 • 展望与未来发展方向
01
细菌药敏试验概述
药敏试验的定义
• 药敏试验：指通过实验室方法检测细菌对抗生素等抗菌药物的敏感程度，为临床医生提供抗菌药物选择依据的过程。
细菌耐药机制研究新进展PPT课件
细菌耐药机制
抗菌药物钝化 酶
ABAB
PBP
IV主动外排
g
g
g
PBP
PBP
plasmid
III通透性降低
I 抗菌药物钝化 II 抗菌靶位变异
2019/12/30
9
细菌耐药的生化机制
一、灭活酶或钝化酶的产生 1.β-内酰胺酶 2.氯霉素乙酰基转移酶 3.红霉素酯化酶 4.氨基糖苷类钝化酶（乙酰转移酶：磷酸
转移酶：核苷转移酶）
-内酰胺酶：最主要的灭活酶
目前已发现750种以上 新的种类不断出现 对-内酰胺抗生素造成严重威胁
具体种类、氨基酸位点改变及等电点见: /Study
2019/12/30
11
β-内酰胺酶分类
BJM分类
1
2
2a
2b
2be
2br 2c 2d 2e 2f 3 4
分子 分类
C A A A
A A D A A B ND
水解底物
头孢菌素 青霉素 青霉素、窄谱头孢 青霉素、头孢菌素
抑制剂
CA EDTA
-
-
+-
+-
+-
青霉素
+/- -
青霉素，羧苄西林
+-
青霉素素，苯唑西林
+/- -
头孢菌素
+-
青霉素、头孢、碳青霉烯 + -
碳青霉烯类
-
+
青霉素
2019/12/30 -
-
5
获得性耐药产生类型： 1.染色体介导的耐药性
2.质粒介导的耐药性
染色体介导的耐药：
一般是由于遗传基因DNA自发变化的结果， 具有典型的种属特异性，能够代代相传。 细菌的这类耐药性，一般对一种或两种相 类似的药物耐药，且比较稳定，耐药性的 产生与消失与药物接触无关，在自然界中 这类耐药菌占次要地位。
抗菌药物敏感性试验和细菌耐药性检查课件
细菌的外膜上特殊的药物泵出系统 使菌 体内的药物浓度不足导致耐药 。铜绿假单胞菌外 膜上有一种蛋白OprK，泵出多种抗生素 ，是产生 耐药的重要机制 。
19
细菌耐药性的生物化学机制
. 药物作用靶位的改变 通过靶位的改变使抗 生素不易结合，是耐药发生的重要机制。
1.核糖体靶位酶亲和力的改变导致对四环素、红 霉素、喹诺酮、氨基糖苷类、甲氧嘧啶、磺胺 类抗生素耐药 。
2.核糖体位点的改变引起对大环内酯类和林可霉 素类抗生素耐药 。
3. DNA螺旋酶的改变是对喹喏酮类抗生素耐药 的重要机制 。
20
细菌耐药性的生物化学机制
. 药物作用靶位的改变 4.核酸合成途径中序列靶位酶的改变 对磺胺- 甲氧嘧啶
耐药，二氢叶酸还原酶改变致甲氧嘧啶耐药。 5. PBP发生改变 , β - 内酰胺类抗生素不能结合或亲和
. K-B法试验程序
挑取菌落 转种肉汤
比浊
涂布平板上 放置药敏纸片 量取抑菌圈大1小
2
1、常见菌 2、苛氧菌 3、厌氧菌 4、酵母菌 5、真菌
. E试验法
13
. 联合药物敏感试验意义 . 联合抑菌试验 . 最低杀菌浓度测定
14
15
常用敏感性试验的方法
• 监控治疗效果试验：
• 1、血清抗菌药物浓度测定(serum antimicrobial level)
27
四、铜绿假单胞菌
• 铜绿假单胞菌对多数抗生素不敏感，呈现明显的 固有耐药性。长期以来假单胞菌的固有耐药性认 为是由于该菌具有外膜的低通透性(主要是外膜
微孔蛋白突变，阻止抗生素由外膜进入胞质)， 最近的研究表明，假单胞菌耐药的产生机制与细 菌具有能量依赖性的主动外排系统有关，也可能 同时存在其他耐药机制。由于在长期抗生素治疗 过程中铜绿假单胞菌可能发生耐药，因此，初代 敏感的菌株在治疗3~4周后，测试重复分离株的抗 生素敏感性是必要的。目前，对假单胞菌感染多 采用联合治疗，如选用一种 β 内酰胺类抗生素与 一种氨基糖苷类或一种喹诺酮类抗菌药物联合。
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细菌耐药性的生物化学机制
. 药物作用靶位的改变 通过靶位的改变使抗 生素不易结合，是耐药发生的重要机制。
1.核糖体靶位酶亲和力的改变导致对四环素、红 霉素、喹诺酮、氨基糖苷类、甲氧嘧啶、磺胺 类抗生素耐药 。
2.核糖体位点的改变引起对大环内酯类和林可霉 素类抗生素耐药 。
3. DNA螺旋酶的改变是对喹喏酮类抗生素耐药 的重要机制 。
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细菌耐药性的生物化学机制
. 药物作用靶位的改变 4.核酸合成途径中序列靶位酶的改变 对磺胺- 甲氧嘧啶
耐药，二氢叶酸还原酶改变致甲氧嘧啶耐药。 5. PBP发生改变 , β - 内酰胺类抗生素不能结合或亲和
. K-B法试验程序
挑取菌落 转种肉汤
比浊
涂布平板上 放置药敏纸片 量取抑菌圈大1小
2
1、常见菌 2、苛氧菌 3、厌氧菌 4、酵母菌 5、真菌
. E试验法
13
. 联合药物敏感试验意义 . 联合抑菌试验 . 最低杀菌浓度测定
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常用敏感性试验的方法
• 监控治疗效果试验：
• 1、血清抗菌药物浓度测定(serum antimicrobial level)
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四、铜绿假单胞菌
• 铜绿假单胞菌对多数抗生素不敏感，呈现明显的 固有耐药性。长期以来假单胞菌的固有耐药性认 为是由于该菌具有外膜的低通透性(主要是外膜
微孔蛋白突变，阻止抗生素由外膜进入胞质)， 最近的研究表明，假单胞菌耐药的产生机制与细 菌具有能量依赖性的主动外排系统有关，也可能 同时存在其他耐药机制。由于在长期抗生素治疗 过程中铜绿假单胞菌可能发生耐药，因此，初代 敏感的菌株在治疗3~4周后，测试重复分离株的抗 生素敏感性是必要的。目前，对假单胞菌感染多 采用联合治疗，如选用一种 β 内酰胺类抗生素与 一种氨基糖苷类或一种喹诺酮类抗菌药物联合。
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useful for S. pneumoniae.
二、药敏试验基本条件
1.肠杆菌科－纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
培养基 接种物 孵育 推荐的质控菌 株
试验条件
Mueller-Hinton 琼脂、CAMHB、Mueller-Hinton 琼脂 生长法或直接菌落悬液法，相当于 0.5 麦氏标准。 35℃±2℃；空气；16-18 小时 大肠埃希菌 ATCC 25922； 大肠埃希菌 ATCC 35218（为监控β-内酰胺酶/β-内酰胺抑制剂纸片用）
4.洋葱伯克霍尔德菌纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
培养基 接种物 孵育 推荐的质控菌株
试验条件 Mueller-Hinton 琼脂、CAMHB、Mueller-Hinton 琼脂 生长法或直接菌落悬液法，相当于 0.5 麦氏标准。 35℃±2℃；空气；20-24 小时 大肠埃希菌 ATCC 25922；铜绿假单胞菌 ATCC27853； 大肠埃希菌 ATCC 35218（为监控β-内酰胺酶/β-内酰胺抑制剂纸片用）
I
R
B
替卡西林/克拉维酸
≤16/2 32/2-64/ ≥128/2
2
头孢类（注射药物）（包括头孢菌素Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ代）
B
头孢他啶
≤8
18
≥32
碳青霉烯类
Байду номын сангаас
B
美洛培南
≤4
8
≥16
四环素类
B
米诺环素
≤4
8
≥16
氟喹诺酮类
B
左氧沙星
≤2
4
≥8
phenicols
B
氯霉素
叶酸代谢途径抑制剂
A
甲氧苄啶/磺胺甲噁唑
用纸片扩散法能可靠地测定分离于囊性纤维化病人的铜 绿假单菌的敏感性，但在作为敏感结果报告前，应将孵育 时间延长至24小时。
3.不动杆菌属纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
培养基 接种物 孵育 推荐的质控菌株
试验条件 Mueller-Hinton 琼脂、CAMHB、Mueller-Hinton 琼脂 生长法或直接菌落悬液法，相当于 0.5 麦氏标准。 35℃±2℃；空气；20-24 小时 大肠埃希菌 ATCC 25922；铜绿假单胞菌 ATCC27853； 大肠埃希菌 ATCC 35218（为监控β-内酰胺酶/β-内酰胺抑制剂纸片用）
Mueller-Hinton 琼脂、CAMHB、Mueller-Hinton 琼脂 生长法或直接菌落悬液法，相当于 0.5 麦氏标准。 35℃±2℃；空气；16-18 小时 大肠埃希菌 ATCC 25922；铜绿假单胞菌 ATCC27853； 大肠埃希菌 ATCC 35218（为监控β-内酰胺酶/β-内酰胺抑制剂纸片用）
（4）仅当被认为与临床有关时（如菌血症）才进行奇异变 形杆菌ESBLs筛选试验
（5）肠杆菌属、枸橼酸杆菌属和沙雷菌属可发展为耐药。 最初分离的敏感菌株在开始治疗3~4天内可变为耐药，因此 对重复分离菌株应重新进行药敏试验。 。
2.铜绿假单胞菌纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
试验条件
培养基 接种物 孵育 推荐的质控菌株
104 cfu
mg/ml 4
2
1
0.5 0.25 0.12
0
微量液体稀释法
细菌药敏试验- E-test法
•E-test •Strips containing a gradient of antibiotic are placed on lawn of bacteria and incubated overnight. MIC is determined at point where zone of inhibition intersects scale on strip. •Combines ease of KB with an MIC method. Particularly
四环素类
B 米诺环素 30μg ≤14 15-18 ≥19 ≥16 ≤4
叶酸代谢途径抑制剂
A
甲氧苄啶 /磺胺甲
1.25/23.7 5μg
≤10
11-15
≥16
噁唑
≥ 8/152
≤ 2/38
（2）洋葱伯克霍尔德菌液体稀释法、琼脂稀释法解释标准
试验/
报告 抗微生物药
S
分组
β内酰胺类/β内酰胺类抑制剂
MIC 值（μg/ml）
（1）对于从粪便中分离的沙门菌和志贺菌属，常规仅测试 和报告氨苄西林，一种喹酮类药和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑。此 外对于胃肠外分离的沙门菌属还一定要测试并报告氯霉素及 其某一种Ⅲ代头孢菌素的结果。
（2）所有确认产ESBLs的菌株应当报告为耐所有青霉素类， 头孢菌素类和氨曲南。
（3）出于对流行性，治疗及感染控制方面的考虑，应该把 从尿中分离的所有菌株做ESBLs 筛选试验作为一个基本制度。
细菌药敏试验及耐药机制 研究进展
安徽省细菌耐药监控中心 安徽医科大学临床检验诊断学教研室
安徽医科大学第一附属医院检验科 徐元宏
一、药敏试验种类
1、 纸片扩散法 2、稀释法 稀释法包括宏量肉汤稀释法(macrodilution test)、微 量肉汤稀释法(microdilution test)、琼脂稀释法(agar dilution test)。 3、E-test法
（1）洋葱伯克霍尔德菌纸片扩散法解释标准
试验/ 报告
抗微生物药纸片含药量 抑菌环直径（mm）
相对应 MIC 值 （μg/ml）
注释
分组
RIS
R
S
头孢类（注射药物）（包括头孢菌素Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ代）
B 头孢他啶 30μg ≤17 18-20 ≥21 ≥32 ≤8
碳青霉烯类
B 美洛培南 10μg ≤15 16-19 ≥20 ≥16 ≤4
细菌药敏试验-宏量稀释法
•Minimal inhibitory concentration (MIC) •Reference method. Add standard inoculum to dilutions of antibiotic. Incubate overnight. MIC is lowest concentration that inhibits growth (can also be performed by agar dilution). Interpretation (S or R) is based on achievable drug levels
≤8
16
≤2/38 -
≥32 ≥4/76
注释
5.嗜麦芽窄食单胞菌纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
二、药敏试验基本条件
1.肠杆菌科－纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
培养基 接种物 孵育 推荐的质控菌 株
试验条件
Mueller-Hinton 琼脂、CAMHB、Mueller-Hinton 琼脂 生长法或直接菌落悬液法，相当于 0.5 麦氏标准。 35℃±2℃；空气；16-18 小时 大肠埃希菌 ATCC 25922； 大肠埃希菌 ATCC 35218（为监控β-内酰胺酶/β-内酰胺抑制剂纸片用）
4.洋葱伯克霍尔德菌纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
培养基 接种物 孵育 推荐的质控菌株
试验条件 Mueller-Hinton 琼脂、CAMHB、Mueller-Hinton 琼脂 生长法或直接菌落悬液法，相当于 0.5 麦氏标准。 35℃±2℃；空气；20-24 小时 大肠埃希菌 ATCC 25922；铜绿假单胞菌 ATCC27853； 大肠埃希菌 ATCC 35218（为监控β-内酰胺酶/β-内酰胺抑制剂纸片用）
I
R
B
替卡西林/克拉维酸
≤16/2 32/2-64/ ≥128/2
2
头孢类（注射药物）（包括头孢菌素Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ代）
B
头孢他啶
≤8
18
≥32
碳青霉烯类
Байду номын сангаас
B
美洛培南
≤4
8
≥16
四环素类
B
米诺环素
≤4
8
≥16
氟喹诺酮类
B
左氧沙星
≤2
4
≥8
phenicols
B
氯霉素
叶酸代谢途径抑制剂
A
甲氧苄啶/磺胺甲噁唑
用纸片扩散法能可靠地测定分离于囊性纤维化病人的铜 绿假单菌的敏感性，但在作为敏感结果报告前，应将孵育 时间延长至24小时。
3.不动杆菌属纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
培养基 接种物 孵育 推荐的质控菌株
试验条件 Mueller-Hinton 琼脂、CAMHB、Mueller-Hinton 琼脂 生长法或直接菌落悬液法，相当于 0.5 麦氏标准。 35℃±2℃；空气；20-24 小时 大肠埃希菌 ATCC 25922；铜绿假单胞菌 ATCC27853； 大肠埃希菌 ATCC 35218（为监控β-内酰胺酶/β-内酰胺抑制剂纸片用）
Mueller-Hinton 琼脂、CAMHB、Mueller-Hinton 琼脂 生长法或直接菌落悬液法，相当于 0.5 麦氏标准。 35℃±2℃；空气；16-18 小时 大肠埃希菌 ATCC 25922；铜绿假单胞菌 ATCC27853； 大肠埃希菌 ATCC 35218（为监控β-内酰胺酶/β-内酰胺抑制剂纸片用）
（4）仅当被认为与临床有关时（如菌血症）才进行奇异变 形杆菌ESBLs筛选试验
（5）肠杆菌属、枸橼酸杆菌属和沙雷菌属可发展为耐药。 最初分离的敏感菌株在开始治疗3~4天内可变为耐药，因此 对重复分离菌株应重新进行药敏试验。 。
2.铜绿假单胞菌纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法
试验条件
培养基 接种物 孵育 推荐的质控菌株
104 cfu
mg/ml 4
2
1
0.5 0.25 0.12
0
微量液体稀释法
细菌药敏试验- E-test法
•E-test •Strips containing a gradient of antibiotic are placed on lawn of bacteria and incubated overnight. MIC is determined at point where zone of inhibition intersects scale on strip. •Combines ease of KB with an MIC method. Particularly
四环素类
B 米诺环素 30μg ≤14 15-18 ≥19 ≥16 ≤4
叶酸代谢途径抑制剂
A
甲氧苄啶 /磺胺甲
1.25/23.7 5μg
≤10
11-15
≥16
噁唑
≥ 8/152
≤ 2/38
（2）洋葱伯克霍尔德菌液体稀释法、琼脂稀释法解释标准
试验/
报告 抗微生物药
S
分组
β内酰胺类/β内酰胺类抑制剂
MIC 值（μg/ml）
（1）对于从粪便中分离的沙门菌和志贺菌属，常规仅测试 和报告氨苄西林，一种喹酮类药和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑。此 外对于胃肠外分离的沙门菌属还一定要测试并报告氯霉素及 其某一种Ⅲ代头孢菌素的结果。
（2）所有确认产ESBLs的菌株应当报告为耐所有青霉素类， 头孢菌素类和氨曲南。
（3）出于对流行性，治疗及感染控制方面的考虑，应该把 从尿中分离的所有菌株做ESBLs 筛选试验作为一个基本制度。
细菌药敏试验及耐药机制 研究进展
安徽省细菌耐药监控中心 安徽医科大学临床检验诊断学教研室
安徽医科大学第一附属医院检验科 徐元宏
一、药敏试验种类
1、 纸片扩散法 2、稀释法 稀释法包括宏量肉汤稀释法(macrodilution test)、微 量肉汤稀释法(microdilution test)、琼脂稀释法(agar dilution test)。 3、E-test法
（1）洋葱伯克霍尔德菌纸片扩散法解释标准
试验/ 报告
抗微生物药纸片含药量 抑菌环直径（mm）
相对应 MIC 值 （μg/ml）
注释
分组
RIS
R
S
头孢类（注射药物）（包括头孢菌素Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ和Ⅳ代）
B 头孢他啶 30μg ≤17 18-20 ≥21 ≥32 ≤8
碳青霉烯类
B 美洛培南 10μg ≤15 16-19 ≥20 ≥16 ≤4
细菌药敏试验-宏量稀释法
•Minimal inhibitory concentration (MIC) •Reference method. Add standard inoculum to dilutions of antibiotic. Incubate overnight. MIC is lowest concentration that inhibits growth (can also be performed by agar dilution). Interpretation (S or R) is based on achievable drug levels
≤8
16
≤2/38 -
≥32 ≥4/76
注释
5.嗜麦芽窄食单胞菌纸片扩散法、液体稀释法、琼脂稀释法