实验三 茎段培养与茎尖剥离
植物的茎尖培养脱毒技术
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（3）茎尖剥离 在双筒解剖镜下。切除叶片使芽体暴露，用解剖针剥掉 幼叶，直到只剩下2个最幼小的叶原基。
（4）茎尖培养 用小刀片切下茎尖放入培养基。培养条件为25℃，光照 16小时，光照强度为2000lx，平均两周进行一次转接，5～7周可获得单 个小植株。
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8Hale Waihona Puke 植物的茎尖培养脱毒技术优缺点：
• 茎尖生长点的培养成了去除植物病毒，使植物复 壮的重要方法。茎尖培养还可以去除其他病原体， 如细菌、真菌等。
• 茎尖越小，去病毒机会越大，脱毒效果就越好， 但同时因为其含营养及水量太低，故培养时对培 养基的要求就越高，对剥离技术要求也越高。
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植物的茎尖培养脱毒技术应用
• 茎尖脱毒培养对植物病毒的脱除效果好，后代遗 传性稳定，是目前生产上最常用的脱毒措施，已 在马铃薯、花卉、水果、蔬菜等作物脱毒快繁上 得到了广泛应用。
• （2）切取茎尖的大小虽然切取茎尖越小，带有病毒的可能性就越小， 但组织培养中，切取的茎尖太小，则不易成活。不同种类的植物和 不同病毒，切取的最适茎尖大小也不同。
• （3）组织培养常用基本培养基是MS培养基，它有较高浓度的无机 盐，对促进组织分化和愈伤组织生长有利；植物生长调节的种类和 配比依培养种类和生长时期来调整。
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4
酒精擦拭手
外植体消毒
浸泡5-7min
器械消毒 精选PPT课件
酒精灯灼烧
酒精擦拭培养皿 5
酒精擦拭
旋转灼烧
显微镜下 获取茎尖
接种
盖好瓶塞
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几种方法的配合使用是提高植物脱毒效果：
• (1) 高温热处理与微茎尖脱毒培养技术 • (2) 高温热处理与微（体）茎尖嫁接培养技术 • (3) 化学处理与茎尖脱毒培养技术
植物的茎尖培养
植物的茎尖培养姓名: 李希东专业: 植物学学号: 200808201 日期: 2009.4.25 成绩:一、实验目的：1. 掌握茎尖培养的原理和方法；2. 练习使用实体显微镜剥离茎尖；二、实验原理：植物细胞具有全能性，即每个植物细胞含能产生完整植株的全部遗传基因。
理论上讲，只要条件合适，含全部遗传基因的细胞都能分裂分化，产生完整植株。
在茎尖和根尖的分生组织中一般是无毒或仅含极低浓度的病毒粒子，而较老的组织中，病毒含量随离茎尖距离的增加而提高。
据此原理采用茎尖组织培养可获得无毒植株。
三、实验材料、器皿：实验材料：冬青顶芽实验器皿：高压蒸汽灭菌锅、电子天平、微波炉、三角瓶、培养皿、超净工作台、实体显微镜、酒精灯、烧杯、量筒、移液器、pH试纸、橡皮筋、解剖针、滤纸、剪刀、容量瓶、长柄镊子、酒精四、实验步骤：1.培养基配制配制母液：（按照培养基配方，配置不同扩大倍数的培养基母液）大量元素：母液扩大20倍；微量元素：母液扩大1000倍；CaCl2·2H2O：母液扩大100倍；铁盐：母液扩大200倍。
培养基配制方案：1. MS2. MS+BA 0.5 mg/L3. MS+BA 0.5 mg/L+IAA 0.1 mg/L4. MS+BA 1.5 mg/L+IAA 0.1 mg/L5. MS+BA 0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L6. MS+BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L按方案依次加入大量元素、微量元素、铁盐和有机物质，加入蔗糖30g/L，琼脂6.0g/L，肌醇50mg/L，水解乳清蛋白300 mg/L，和不同浓度的激素，定容到400ml，混合后微波炉加热溶解，再按配方加入各种激素，调节pH值为5.8-6.0，分装到锥形瓶中，每瓶20-25ml，用锡箔纸封口。
本实验选取1，4，6号培养基。
2. 灭菌：高压锅灭菌，121℃，保温20min，冷却，凝固，用于实验。
3. 接种（实体显微镜剥离茎尖－接种）（1）材料表面消毒：植物茎尖（顶芽或侧芽）用自来水水冲净，70％的酒精漂洗材料半分钟，然后放入0.1％的升汞中进行表面消毒8-10min，用无菌水冲洗材料3-5次。
茎尖培养脱毒技术
植物脱毒技术
一、茎尖培养脱毒 3．剥取茎尖与接种 在超净工作台上，将已消毒的芽放在垫有无菌滤纸的培养 皿中（已灭菌）。在双筒解剖镜下，用解剖针或镊子将材料固 定于视野中，用解剖刀尖仔细剥去幼叶，至出现裸露的生长点。 用刀尖切下带1～2个叶原基的生长点（约0.3～0.5mm)。用解剖 针或解剖刀尖将切下的茎尖转至培养基上（顶部向上)，每管接 1～2个茎尖。 为防止茎尖失水，可用无菌水润湿滤纸。操作中注意随时 更换滤纸和接种工具，剥取茎尖时切勿损伤生长点。
植物脱毒技术
一、茎尖培养脱毒 5．生根诱导 一些植物茎尖培养形成绿芽后，基部很快发生不定根。而 另一些植物不产生不定根，必须将无根绿苗再诱导才能生根成 为完整植株。诱导生根的方法是将2～3cm高的无根苗转入生根 培养基，继续培养1～2个月即可形成根。一些植物茎尖离体培 养极难生根，即使转入生根培养基诱导也难奏效（如桃、苹 果），这类植物的无病毒绿芽可通过微体嫁接法获得完整植株。 如果取茎尖脱毒试管苗的茎尖（可大于第一次切取的茎尖）， 再培养，即二次茎尖培养脱毒率可达 100％。
植物脱毒技术
一、茎尖培养脱毒
植物脱毒技术
一、茎尖培养脱毒 2．茎尖大小与脱毒效果
用于脱毒的茎尖外植体可以是顶端分生组织即生长点，最 大 直 径 0.lmm ； 通 常 是 带 1 ～ 3 个 叶 原 基 的 茎 尖 （ 约 0.3 ～ 0.5mm）。 茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。但不带叶原基的过 小，外植体离体培养存活困难，生长缓慢，操作难度大。茎尖 分生组织不能合成自身需要的生长素，而分生组织以下的1～3 个幼叶原基可合成并供给分生组织生长素、细胞分裂素。因而 带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。但茎尖外植体过大，脱毒 效果差。
植物脱毒技术
营养器官培养
番茄、胡萝卜、蝴蝶兰离体根的培养。
第二节 茎的培养
一、茎培养的意义：
1、用于无性系快速繁殖：变异率低，增殖快。 2、用于脱除植物病毒：提高植物产量和品质 3、用于育种：茎尖遗传性稳定，可快速繁殖新品
种，加速优良品种推广
①传统的无性繁殖：繁殖系数一般为1:10，推广慢； ②离体繁殖：不受季节限制，繁殖系数为几十至几百倍，
3 、促进试管苗生根的措施？
养发育最终形成幼苗。 （2）茎尖培养再生植株：外植体消毒 茎尖剥离
2、用于脱除植物病毒：提高植物产量和品质
茎尖培养
2、用于脱除植物病毒：提高植物产量和品质
③添加吸附剂，加入适量活性炭有利于生根；
2、用于脱除植物病毒：提高植物产量和品质
2、离体根培养的试验系统：需特殊装置
①传统的无性繁殖：繁殖系数一般为1:10，推广慢；
液体培养，25℃黑暗条件
研究根系生理和代谢、器官分化与形态建成。
7-10d继代一次，取主根增殖
4、用于形态建成研究：取材便利，培养条件可严格控制，且可排除其它部位的影响，实验重复性强。
指利用植物的根、茎、叶等器官的 2、茎尖的发育方向及其调节：
（2）茎尖培养再生植株：外植体消毒 茎尖剥离 茎尖培养 ①降低基本培养基无机盐的浓度，一般采用1/2MS培养基或改良White基本培养基；
营养器官培养
第六章 营养器官培养
教学目的：
掌握植物根、茎、叶培养的一般方法和技术，尤 其是茎段培养的方法及其特点，熟悉植物营养器 官培养的应用技术。
教学重点：
1、根的培养； 2、茎的培养； 3、叶的培养。
教学难点：
植物营养器官培养的应用。
②茎尖剥离：一般在解剖镜下剥离带两个叶原基的茎尖
百合茎尖脱毒培养流程
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准备无菌培养器具，如培养皿、镊子、剪刀等。
实验10 茎尖培养
三.试材
梨当年生枝条
四.培养方法
1．准备工作： 2．取材与消毒：用70%乙醇浸1分钟， 0.1%升汞溶液中浸15分钟，然后用无菌水 冲洗3～5遍即可。
3．接种：
在超净工作台上用镊子剥去鳞片与幼叶，用解剖针剥 去大的叶原基，暴露出圆滑的生长点部分，用解剖刀 切取0.5mm左右，带有1～2个叶原基的生长点，迅速 接种到事先准备好的培养基中，切面贴在培养基表面， 每瓶接种4～6个生长点。盖好瓶口并在瓶口包纸上注 明种类名称、接种日期和接种人姓名。注意接种过程 中镊子、解剖针等用具经常在酒精灯上烧燎消毒，在 接触茎尖前要稍凉一下，以免烫伤生长点，影响培养 效果。
六、实验要求
1．接种前要将手洗刷干净。 2．接种时动作要快、要轻，减少培养基和外 植体暴露在外的时间。 3．操作时不要讲话，手不要接触不洁之物， 以免交叉感染。
七、作业 观察记载茎尖分生组织的分化过程，每人交一份 简述。 。
实验10 茎尖培养小 植株。 二、仪器、用具与药品 超净工作台、镊子、钳子、解剖刀、解剖剪、培 养皿、酒精灯、火柴、培养基（1/2 MS + BA0.25-1.5mg· L-1 + IAA0.1-0.5 mg· L-1）、无 菌水、70%乙醇、脱脂棉、0.1%升汞溶液、 漂白粉、0.1%新洁而灭溶液。
茎段培养实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握茎段培养的方法和技术，理解茎段培养形成幼苗的基本原理。
2. 学习并操作茎尖剥离的技巧，认识茎尖生长点的形态特征。
3. 了解不同植物激素对茎段生长的影响。
二、实验材料与仪器1. 材料：某植物幼嫩茎段、茎尖、愈伤组织诱导培养基、再生培养基、植物激素（生长素、赤霉素等）。
2. 仪器：无菌操作台、剪刀、镊子、解剖针、显微镜、培养箱、天平、酒精灯、高压灭菌锅等。
三、实验方法1. 茎段培养（1）选取健康的某植物幼嫩茎段，剪成约1-2cm长的切段。
（2）将切段放入75%酒精中消毒30秒，再用无菌水冲洗3次。
（3）将切段接种到愈伤组织诱导培养基中，置于培养箱中培养。
（4）观察并记录愈伤组织的形成和生长情况。
2. 茎尖剥离（1）选取健康的某植物茎尖，用解剖针剥离出茎尖生长点。
（2）将茎尖生长点放入75%酒精中消毒30秒，再用无菌水冲洗3次。
（3）将茎尖生长点接种到再生培养基中，置于培养箱中培养。
（4）观察并记录茎尖生长点的生长情况。
3. 植物激素对茎段生长的影响（1）将茎段接种到含有不同浓度生长素和赤霉素的培养基中。
（2）置于培养箱中培养，观察并记录茎段生长情况。
四、实验结果与分析1. 茎段培养结果经过一段时间的培养，愈伤组织诱导培养基中的切段逐渐形成愈伤组织，并逐渐生长。
2. 茎尖剥离结果经过一段时间的培养，再生培养基中的茎尖生长点逐渐生长，形成新的植株。
3. 植物激素对茎段生长的影响（1）生长素对茎段生长的影响：低浓度生长素能促进茎段生长，高浓度生长素则抑制茎段生长。
（2）赤霉素对茎段生长的影响：赤霉素能促进茎段生长，其促进作用随浓度增加而增强。
五、实验结论1. 通过茎段培养实验，掌握了茎段培养的方法和技术，理解了茎段培养形成幼苗的基本原理。
2. 通过茎尖剥离实验，学习了茎尖剥离的技巧，认识了茎尖生长点的形态特征。
3. 通过植物激素对茎段生长的影响实验，了解了生长素和赤霉素对茎段生长的促进作用及其浓度依赖性。
003实验三 植物茎的培养
三、实验用品
1、 MS+0.5mg/L NAA(萘乙酸);也再可加入BA 16mg/L来合用. 2．材料：植物的茎（如10-15cm高芦荟幼苗） 3．消毒药品：用70%乙醇；10%次氯酸钠 4. 接种工具的准备：镊子（长）、剪刀、酒精灯。 手术刀片 5. 培养容器的准备：三角瓶、试管、培养 6、组培室配套设备等
实验四 植物茎的培养
一、实验目的:
掌握植物茎尖培养的方法 掌握无菌操作技术
二、实验原理：
茎是植物的营养器官。 常用植物的茎尖进行组织培养。茎尖培养是切取 茎的尖端部分或茎尖分生组织部分，进行无菌培 养。 茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为微茎尖 培养和普通茎尖培养。 1 微茎尖指带有1-2个叶原基的生长锥，其长度不超 过0.5mm。 2 普通茎尖指较大的茎尖(如几mm到几十mm)、芽 尖及侧芽。这种培养技术简单，操作方便，茎尖察 10-14 天后继代一次
五 思考讨论
1 离体茎培养的注意事项 2 那些植物最适合做离体茎培养
四 芦荟茎的组织培养
1 将准备好的芦荟幼苗在无菌水中冲洗数次 2、取茎尖部分，再冲洗1-2次，淋干，紫外灭菌30 分钟 3、在超净台上，用75%的乙醇将茎尖浸泡30-60s 4、在次氯酸钠中浸8-l0min，最后用无菌水冲洗数 次。无菌纱布吸干水份 5、用解剖刀取出茎尖生长点的组织切块，接种到愈 伤组织诱导培养基上MS+0.5mg/L NAA。 6、培养条件：光照 10-16h，光照度为 1500一 2500Lx，温度(25士)2℃。
实验三 茎
一、实验目的
1、认识茎的基本特征，茎尖结构 2、掌握草本双子叶植物茎和禾本科植物茎的初生结构 3、掌握双子叶植物茎次生结构 4、掌握裸子植物茎的结构,识别具缘纹孔 5、通过简易方法探究植物体内水分的运输的速率及途经 6、了解根茎转换部位及过程 7、识别组织：输导组织、机械组织、 次生保护组织，侧生分生组织
四、实验内容与方法：
（一）、茎的基本形态：毛白杨枝条观察 （二）、茎尖结构：黑藻（或洋紫苏、草石蚕）茎尖纵切制 片观察 （三）、双子叶植物茎的初生结构： 1.向日葵幼茎横切制片观察 2.选作蓖麻、大豆及向日葵茎横切徒手切片 （四）、双子叶植物茎的次生结构：椴树茎横切制片观察 （五）、禾本科茎结构：小麦、玉米、水稻茎横切制片观察
五、作业 拍摄所观察的典型结构图像（不同放大倍数），制作 ＰＰＴ，注明每个图像的详细结构。
顶芽 侧芽 叶迹 叶痕 节 节间 皮孔
叶芽 花芽
毛白杨枝条
芽鳞痕
黑藻茎尖纵切
双子叶植物茎的初生结构
表皮(epidermis) 皮层(cortex)
维 管 柱( vascul a der) r cylin
（六）、裸子植物茎的结构及茎的三切面：松树茎三切面制片观察 （七）、茎的运输速度及途径（结构判断）： 在红墨水中插入旱伞草、蓖麻，约1小时后作茎杆横切徒手切片，观察旱 伞草及蓖麻茎的结构及红墨水的运输途径。 （八）、根茎转换整体观察：取大豆芽从根端向茎端做横切面观察 （九）、组织观察：结合以上内容观察输导组织、机械组织、 次生保护组织、次生分生组织等 A. 输导组织：1.南瓜茎横、纵切制片观察 横切制片中观察双韧维管束（外韧皮部、束中形成 层、木质部、 内韧皮部）,导管分子，筛管分子及伴胞。 纵切制片中观察导管分子中的五种类型；筛管分子的筛板，筛孔 及筛域等结构。 2.杨树茎木材离析、松树茎木材离析观察 3.大豆芽胚轴横、纵切徒手切片观察 B.次生保护组织：观察椴树茎的周皮结构（木栓层、木栓形成层和栓内层） 和皮孔等结构。 C.侧生分生组织：各种茎横纵切面中观察维管形成层、木栓形成层特点
【精品】：马铃薯组织培养技术
马铃薯茎尖组织脱毒培养及植物激素在培养中的作用摘要：马铃薯茎尖组织脱毒培养,愈伤组织解除分化形成新个体时,体细胞有丝分裂的异染色质延迟复制行为较正常活体植株更严重,后代变异较自然群体变异高出500倍,若在培养过程添加辐射和化学诱变试剂变异率会更高。
因此,组织培养环境不只是现代生物技术辅助育种的一个重要条件,更是诱变育种的一个有效途径,对于以营养体繁殖的马铃薯作物效果更好。
本文介绍了马铃薯茎尖培养的意义和方法，综述了植物激素在马铃薯生长中的作用。
关键词：茎尖体细胞组织培养变异植物激素Abstract: Potato virus-free cultivation of the tip meristem, callus formation of new individual remove differentiation, somatic cell mitosis heterochromatin delay of normal living plant copy behavior more serious than natural group, variation and variation of 500 times higher in the training process, if add radiation and chemical mutagenesis reagent mutation rate is higher. Therefore, tissue culture of modern biological technology environment is not only an important supplementary conditions, is an efficient way of mutation breeding for excessive n-redistribution breeding, potato crop effect is better. The paper introduces the significance of potato meristem-tip culture were reviewed, and the method of plant hormone role in growth of potatoes.Key words: Stem cells; Tissue culture; variation; Plant hormones1马铃薯生态习性和种类对土壤的适应性很强，但对气候要求凉、冷、燥，在湿热地区虽然也能生长，不过一代以后品种就会演化，需要经常从寒冷地区引进新的种。
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B
A
三、实验操作
解剖针 体式显微镜
生根培养基
三、实验操作
(一)茎段培养(每组前5位同学先做)
1.实验材料：甜叶菊 2.茎段培养基配方： MS+6-BA 2 mg/L+琼脂粉 5.5 mg/L+糖 30 mg/L pH 6.0 1L
3.操作步骤 3.1 铺开无菌纸，用剪刀将培养瓶中的甜叶菊单株 从基部分离，置于无菌纸上。 3.2用剪刀将滁菊单株剪成2-3个茎段。 3.3接种至茎段培养的培养基上。 3.(一)下次试验培养基由第四组配制。 (二)第三组打扫卫生。 (三)按照要求写实验报告。
实验三 茎段培养与茎尖剥离
一、实验目的
1.掌握茎段培养的方法和技术，理解茎段培 养形成幼苗的基本原理。 2.掌握茎尖剥离的技巧，认识茎尖生长点的 形态特征。
茎尖结构
二、实验原理
1.茎段培养：当植物的顶端优势被解除后， 被抑制的侧芽(腋芽)得以萌发，并形成试管 苗。 2.茎尖剥离：植物茎尖。
问题？？
(二)茎尖剥离 1.实验材料：大叶黄杨 2.操作步骤 2.1 将黄杨叶片去掉。 3.2茎段置于解剖镜下，用解剖针将生长点周围的 叶片层层剥去，剥去时要注意从基部环剥。 3.3剥至露出生长点和最里面的叶原基为止。 3.4由教师检查、确定实验结果，在教学日志上签 字。
四、实验记录
(一)茎段培养
侧芽萌发率(%)=有新芽的外植体数/接种外植体数 侧芽萌发数=萌发的侧芽数/接种外植体数 (二)画出生长点的图片。