人肺炎支原体IgGMPIgG试剂盒使用方法
支原体试检测剂盒使用说明书(中文版)
支原体检测试剂盒使用说明书1.试剂：支原体检测试剂盒由武汉源深生物科技有限公司提供。
2.实验方法:巢式PCR的方法检测支原体污染：A.待检细胞汇合率在90％以上时取100 µL细胞上清液到离心管内B.95o C孵育5分钟C.短暂高速离心15秒钟左右D.试剂盒里的组份：引物混合物(Primer Mix) 20 µL阳性对照DNA (Positive Control DNA) 15 µL阴性对照(Internal Control DNA) 20 µL巢式PCR一共需要做2轮PCR，本检测方法不受其他来源（如所培养细胞）DNA的影响，不但提高了检测的灵敏度，同时也提高了特异性。
(1)第一轮PCR:PCR 混合物：向0.2 mL PCR薄壁管中依次加入以下组分，盖紧管盖，轻弹管壁混匀，稍加离心。
E.热循环程序：将准备好的PCR管放入PCR仪，运行如下程序。
PCR 混合物：向0.2 mL PCR薄壁管中依次加入以下组分，盖紧管盖，轻弹管壁混匀，稍加离心。
F. 热循环程序：将准备好的PCR 管放入PCR 仪，运行如下程序。
试验结果：2％ 琼脂糖凝胶电泳，TBE 缓冲液，PCR 产物及Marker 均点样10µL ，于50V 下电泳1hr ，EB 染色15min ，紫外灯下观察。
电泳结果见下图：图中泳道M 为DNA Marker ，1和2为待检测细胞系的第一轮PCR 产物 (1st )，3和4为待检测细胞系的第二轮PCR 产物 (2nd ), 其中1、3为阳性对照管PCR 产物，2、4为阴性对照PCR 产物。
阳性对照管在200bp 左右，和300-400 bp 处各有一条带，证明本次实验准确可靠 (不同的支原体Mycoplasma, such as M. fermentans, M. hyorhinis, M. arginini, M. orale, M. hominis, M. arthritidis, M. hyopneumoniae and Acholeplasma laidlawii 的保守区的片段长度不一，大概在200-400 bp 之间)。
肺炎支原体测试试剂盒使用
肺炎支原体测试试剂盒使用肺炎支原体是一种引起肺炎的病原体，可以导致呼吸道感染和肺部疾病。
肺炎支原体测试试剂盒是一种用于检测肺炎支原体感染的工具，它通过检测病原体的核酸来确认感染。
本文将介绍肺炎支原体测试试剂盒的使用方法和注意事项。
使用方法1.准备工作：将试剂盒从冰箱中取出后，将其适应室温放置30分钟，确保试剂盒内的试剂恢复到室温。
2.样本采集：使用专业的采样套装，采集患者的呼吸道样本。
一般可以选择咽拭子或者痰液样本作为采集物。
注意采集样本时要注意卫生，避免污染。
3.样本处理：将采集到的样本转移到试剂盒提供的管子中。
根据使用说明书的要求，将样本与提供的稀释液混合，充分混匀。
4.核酸提取：根据试剂盒提供的方法，进行核酸提取。
将样本与试剂混合，经过一系列处理步骤，将病原体的核酸提取出来。
5.PCR扩增：将提取的核酸加入PCR反应管中，根据试剂盒提供的PCR扩增方案进行扩增。
PCR扩增是将少量的核酸扩增成大量可检测的数量，以便进行后续的分析。
6.结果分析：将PCR扩增产物放入试剂盒提供的分析设备中，根据设备的提示进行操作。
设备会根据PCR扩增的结果判断样本中是否存在肺炎支原体，通常会给出阳性或阴性结论。
注意事项1.操作规范：使用试剂盒前，务必阅读说明书并按照要求操作。
严格遵循操作规范，确保结果的准确性。
2.样本采集：采集样本时，注意避免污染和交叉感染。
使用采样套装中的工具，并按照说明进行操作。
3.试剂保存：试剂盒中的试剂应妥善保存，避免暴露于阳光直射或高温环境。
注意试剂的保质期，过期的试剂可能会影响测试结果。
4.设备操作：在使用设备进行分析时，注意正确操作，遵循设备操作说明。
保持设备的清洁和维护，以确保结果的准确性。
5.结果解读：根据设备给出的结果，判断样本是否携带肺炎支原体。
阳性结果表示样本中存在肺炎支原体感染，阴性结果表示未检测到感染。
结论肺炎支原体测试试剂盒是一种有效的工具，用于检测肺炎支原体感染。
肺炎衣原体MOMP抗体IgG检测试剂盒胶体金法作业指导书
肺炎衣原体MOMP抗体IgG检测试剂盒胶体金法作业指导书1 目的建立肺炎衣原体MOMP抗体IgG检测试剂盒（胶体金法）作业指导书，确保生产过程处于受控状态。
2 范围适用于肺炎衣原体MOMP抗体IgG检测试剂盒（胶体金法）相关工序的操作者。
3 职责3.1 操作人员应严格执行本作业指导书。
3.2 生产主管负责监督检查。
3.3 质检部质检员负责抽查执行情况。
4 工作内容4.1 生产工艺流程图※★注：※ 关键过程 ★ 特殊过程4.2 作业内容4.2.1 胶体金制备（柠檬酸三钠还原法）氯金酸（HAuCl4）水溶液放入三角瓶内加热至沸腾→加热柠檬酸三钠溶液→混匀，搅拌煮沸10至15分钟→待胶体金溶液颜色由蓝→紫→红，冷却即可。
4.2.2 金标抗体（反应膜）制备以0.1M碳酸钾溶液调胶体金溶液pH8.0-9.0→加入抗人IgG单抗，15分钟后加入聚乙二醇→离心，调532nm测OD值5～10，方阵滴定法选定标记工作浓度→用无纺布浸湿胶体金溶液，干燥、平整，检测。
4.2.3 金标抗体反应膜质检将制备好的金标抗体反应膜按5‰比例抽检，与标准反应膜匹配组装成品，同时与标准成品作如下对照检测：a) 符合率：样品稀释液、阴性质控血清无假阳性，阳性质控血清均呈阳性；b) 反应强度：+/+++（阳性反应线/阴性反应线）；c) 反应时间：30s～5min。
确认合格后才能转入下一工序。
4.2.4 NC反应膜制备亲和性高分子硝酸纤维素膜→活化处理12小时→用水洗5次，每次20分钟→室温干燥后→取纯化Cpn重组MOPP抗原和兔鼠IgG抗体溶于10%CS中，浓度均为2mg/ml，用Cpn重组MOPP抗原在NC膜上包被肺炎衣原体抗体阳性检测线→用兔抗鼠IgG抗体在NC膜上包被对照线→干燥后，用BS液封闭，H2O 清洗后，室温干燥，备用。
4.2.5 NC反应膜质检4.2.5.1 常规图形模式检测：将制备好的反应膜按5‰比例抽检，与标准金标抗体反映膜匹配组装成品，同时与标准成品对照检测；观察阳性、阴性包被线及本底，要求图形规则程度均匀，无遗漏或重复包被。
肺炎支原体抗体
简易卡一.【肺炎支原体抗体（IgG）检验方法】1.将待测血清样本和试剂盒，恢复至室温（20～37℃）.2.取出反应板，于反应板孔中滴入血清二滴，静置，待血清完全吸入.3.在20分钟内观察反应板孔中现象.三.【单纯疱疹检验方法】1.用一次性真空采血针与抗凝采血管抽取静脉血2-5 ml，轻轻颠倒混匀8-10次，3000r/min 离心10-15分钟，分离血浆.2.取出反应板，用吸管吸取样本垂直加入，2-3滴.3.15分钟内观察反应板孔中现象.七.【革兰氏染色的检验方法】目的：1.涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，用移液器吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央，用移液器分别吸取10ul金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌位于待检品的两侧（中间要有足够的空间），分别作为阴阳性对照。
用无菌接种环将液滴涂布成均匀的薄层，涂布面不宜过大。
2.干燥：将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯火焰高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。
3.固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次，共约2-3秒种，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉得烫为宜（不超过60℃），放置待冷后，进行染色。
4.初染：在涂片薄膜上滴加革兰氏结晶紫试剂1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。
5.水洗：斜置载玻片，用洗瓶小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。
6.媒染：取1-2滴革兰氏碘液滴在涂片薄膜上，使染色液覆盖涂片，染色约1min。
7.水洗：斜置载玻片，用洗瓶小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。
8.脱色：斜置载玻片，滴加革兰氏脱色剂脱色，至流出的脱色剂不现紫色为止，大约需时20-30S，随即水洗。
9.复染：在涂片薄膜上滴加革兰氏番红精复染剂1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。
10.水洗：斜置载玻片，用洗瓶小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。
11.干燥：用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下观察。
肺炎支原体IgM说明书
肺炎支原体抗体（ IgM ）检测试剂盒（胶体金法）说明书【产品名称】肺炎支原体抗体（IgM ）检测试剂盒（胶体金法）【包装规格】40 人份 /盒或 20 人份 / 盒（详细规格见试剂盒包装标签）【预期用途】定性检测人血清中的肺炎支原体IgM 抗体，可用于支原体肺炎的协助诊疗。
【查验原理】本品应用间接法的胶体金标志免疫斑点渗滤原理，质控线采纳双抗夹心的胶体金标志免疫斑点渗滤原理。
该试剂盒里的斑点反响板上的微孔滤膜固相有肺炎支原体P1 蛋白抗原斑点，当待检测的血清中含有肺炎支原体IgM 抗体时，与微孔滤膜上的肺炎支原体P1 蛋白抗原抗原形成复合物，胶体金标志的羊抗人IgM 抗体与上述抗原抗体复合物联合，形成肉眼可见的红色斑点，即为阳性结果，不然为阴性结果。
微孔滤膜上的质控线含有羊抗人IgM 抗体，当待测血清加入后，人血清中的IgM 抗体与质控线上羊抗人IgM 抗体形成复合物，胶体金标志的羊抗人IgM 抗体再与上述复合物联合，形成肉眼可见的红色质控线。
【主要构成成份】1.斑点反响板： 40 块（或 20 块），每块斑点反响板主要由含固相肺炎支原体P1 蛋白抗原斑点的硝酸纤维膜和吸水纸构成。
2.试剂 A： 1 瓶，约 10ml （或 5 ml），无色澄清溶液，主要成份为PH7.4PBS 缓冲液、吐温－20、硫柳汞（ 0.1%）。
3.试剂 B： 1 瓶，约 8ml（或 4ml），深红色澄清溶液，主要成份为胶体金标志的羊抗人IgM 抗体、牛血清白蛋白、硫柳汞（0.1%）。
【储藏条件及有效期】试剂盒一般采纳冷链运输，并采纳最迅速的运输方式，缩短运输时间；冬季运输应注意防备制品冻结。
试剂盒储藏条件为2℃～８℃，有效期为8 个月。
【样本要求】1.本试剂盒产品仅合用于对血清样本的检测，其余样本（如，胸腹水、脑脊液、尿液等）未经过产品预期用途的有关研究，不合用于本产品的检测。
2. 样本收集：采纳静脉血于干净离心管中，不加任何抗凝剂、保护剂，置于37℃水浴 20～ 30 分钟（或置室温 1 小时以上），待纤维蛋白原充足凝结后离心（4000 转/ 分， 5～ 10 分钟）分别血清。
人肺炎支原体抗体（MP-Ab）酶联免疫分析试剂盒 说明书
人肺炎支原体抗体（MP-Ab）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人MP-Ab，且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人组织匀浆、血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中MP-Ab含量。
说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗MP-Ab抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗MP-Ab抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的MP-Ab呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板（Assay plate）：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3.样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）8.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
肺炎支原体免疫球蛋白(Ig)M检验在呼吸道感染患儿中的应用价值林茂坡
肺炎支原体免疫球蛋白(Ig)M检验在呼吸道感染患儿中的应用价值林茂坡发布时间：2023-07-10T08:36:09.674Z 来源：《药物与人》2023年7期作者：林茂坡[导读] 探讨在呼吸道感染患儿的诊断中进行肺炎支原体免疫球蛋白常熟市梅李人民医院 215500摘要：目的：探讨在呼吸道感染患儿的诊断中进行肺炎支原体免疫球蛋白（Ig）M检验的应用效果。
方法：选取2021年12月到2022年12月我院收治的1078例呼吸道感染患儿，将其按性别、年龄以及发病季节进行分组，所有患儿均进行IgM抗体检验，分析检验结果。
结果：男童阳性检出率低于女童，P＜0.05；0-1岁组患儿阳性率最低，11-14岁组患儿阳性率最高，P＜0.05；冬季组阳性检出率较低，秋季组阳性率较高，P＜0.05。
结论：在儿童呼吸道感染的检验中通过肺炎支原体IgM具有较高的检验价值，可结合患儿性别、年龄以及发病季节给予针对性的治疗，建议推广并应用。
关键词：儿童；呼吸道感染；肺炎支原体IgM；检验价值呼吸道感染是儿科临床发病率较高的疾病，小儿正处于发育阶段，肺部发育不完善，局部的黏膜免疫功能较低，呼吸道比较狭窄与短效，抵抗外来病毒与细菌侵袭的能力较弱，极容易发生呼吸道感染[1]。
临床研究发现小儿呼吸道感染的主要因素是肺炎支原体感染，具有较强的传染性，多见于儿童群体，秋冬季是呼吸道感染的高发季，患儿出现呼吸道感染会表现是无力、咳嗽、发热、肺炎等，若未早期干预，病情进一步发展可引发中枢神经感染，严重影响患儿的健康生长发育，因此，采取有效手段早期诊断并给予针对性治疗对改善患儿预后有重要的意义[2]。
随着临床检验技术的不断完善，在小儿呼吸道感染诊断中采用血清学抗体检验取得较高的成效，肺炎支原体IgM是重要的指标之一，本次研究着重分析在呼吸道感染患儿的诊断中进行肺炎支原体IgM检验的应用效果，汇报如下。
1 资料与方法1.1一般资料选取2021年12月到2022年12月我院收治的1078例呼吸道感染患儿，将其按性别分成男童组（n=575）、女童组（n=503）；按年龄分成0-1岁组（n=33）、2-4岁组（n=432）、5-7岁组（n=409）、8-10岁组（n=158）、11-14岁组（n=46）；按发病季节分成春季组（n=99）、夏季组（n=137）、秋季组（n=402）、冬季组（n=440）。
MP核酸检测试剂盒说明书
肺炎支原体（MP）核酸检测试剂盒（PCR荧光法）说明书【产品名称】通用名称：肺炎支原体（MP）核酸检测试剂盒（PCR荧光法）英文名称：PCR-Fluorescence Detection Kit for Mycoplasma Pneumonia【包装规格】32人份/盒【预期用途】本产品用于定性检测痰液或咽拭子中的肺炎支原体核酸。
肺炎支原体（）是人类支原体肺炎的病原体，主要经飞沫传染，潜伏期2～3周，支原体肺炎的临床表现和胸部X线检查并不具特征性，单凭临床表现和胸部X线检查无法做出诊断。
若要明确诊断，需要进行病原体的检测。
而病原体核酸检测是目前最为直接的检测手段。
适应症：由肺炎支原体感染引起的肺炎等疾病。
【检验原理】本试剂盒选用肺炎支原体（MP）保守基因片段设计特异引物及特异Taqman 探针，该探针能与引物扩增区域中间的一段DNA模板发生特异性结合，在PCR延伸反应过程中，Taq酶的外切酶活性将5’端荧光基团从探针上切割下来，使之游离于反应体系中，从而脱离了3’端荧光淬灭基团的屏蔽，即能接受光刺激而发出可供仪器检测的荧光，从而实现在全封闭反应体系中对肺炎支原体核酸的自动化检测。
注: 不同批号试剂盒中各组份不可以互换。
【储存条件及有效期】试剂-20℃可保存12个月。
【适用仪器】ABI7300、ABI7500荧光PCR扩增仪。
【样本要求】1. 标本：痰液及咽拭子。
2. 采集器：应当选用国家批准生产的一次性使用的咽拭子，拭子应当包括洁净海绵头、PP杆、PP杆与海绵头应连接牢固，经无尘清洗包装。
3. 采集：样本采集具体方法请参考《微生物标本采集手册》一书。
a. 自然咳痰法以晨痰为佳，用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入痰盒中，标本量应大于等于1ml。
b. 咽拭子取痰法用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，转动拭子取出粘液。
4.存放：2-8℃保存，不超过24小时；-20℃下保存，不超过3个月；-70℃下长期保存，但应避免反复冻融。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
人肺炎支原体IgG（MP-IgG）试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T
2.0 ng/L -48 ng/L
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中肺炎支原体IgG（MP-IgG）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人肺炎支原体IgG（MP-IgG）水平。
用纯化的
抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入肺炎支原体IgG（MP-IgG），再与HRP 标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标-抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的肺炎支原体IgG（MP-IgG）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人肺炎支原体IgG（MP-IgG）浓度。
试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（96 ng/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
48 ng/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
24 ng/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
12 ng/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
6.0 ng/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
3.0 ng/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。
测定应在加终止液后15 分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计
算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月__。