HPLC色谱柱使用维护与保养规程
浅谈高效液相色谱仪的保养与维护
浅谈高效液相色谱仪的保养与维护高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种高效分离和分析样品成分的仪器，广泛应用于医药、化工、环境监测、食品等领域。
在使用HPLC 的过程中，保养和维护工作非常关键。
良好的保养和维护能够延长设备寿命，保证分析结果的准确性和可靠性。
本文将就HPLC的保养和维护进行较全面的探讨，以期为相关使用者提供帮助和指导。
一、日常保养1. 清洗：定期对HPLC进行清洗是保持设备正常工作的关键。
清洗前，首先应关闭色谱柱开关，拔掉电源，然后用无水乙醇清洗柱及管路，最后用纯水冲洗干净。
在一些需要不断更新样品溶剂的实验中，还需要对溶剂瓶、进样器等部件进行定期清洗。
2. 检查密封性：检查HPLC各接口的密封性，确保各部件之间无漏气、不漏液，避免因为漏气或漏液造成分析数据的误差。
3. 检查压力：在使用HPLC过程中，经常检查色谱柱前后的压力表读数，确保在正常范围内。
如果发现异常，应及时排查原因并进行处理。
4. 校准：定期对HPLC进行校准，保证设备和检测器的准确性。
可以借助标准物质进行定期的校准维护。
5. 检查溶剂余量：定期检查溶剂瓶的余量，确保实验过程中不会因为溶剂用尽而中断。
6. 检查灯管：若HPLC设备配备有紫外-可见检测器，需要定期检查和清洗灯管，以保证检测器的灵敏度和准确度。
二、周期性维护1. 良好的使用环境：保持HPLC设备使用环境的干净整洁，避免灰尘、化学气体等对设备造成影响。
需要注意设备周围的温度和湿度，避免影响设备的正常工作。
2. 正确存放标准溶液：在使用标准溶液时，要注意存放条件，避免因为存放不当导致标准溶液的失效。
3. 定期更换消耗品：HPLC设备的使用需要大量耗材，比如柱、进样器、检测器灯管等，这些耗材的使用寿命有限，需要定期更换，以保证设备的正常工作。
4. 记录维护情况：建立设备的维护记录，记录设备的使用情况、维护情况以及出现的问题及处理情况，为设备的维护提供参考。
HPLC液相色谱仪维护及保养
HPLC液相色谱仪维护及保养1．HPLC的日常操作条件：温度：10-40℃；相对湿度<80％；最好是恒温、恒湿，远离高电干扰、高振动设备。
2．泵的保养：1) 使用流动相尽量要清洁；2) 进液处的沙芯过滤头要经常清洗；3) 流动相交换时要防止结晶；4) 避免泵内堵塞或有气泡;3．进样器的保养：1) 每次分析结束后，要反复冲洗进样口，防止样品的交叉污染；2）平时应注意用二次蒸馏水和甲醇在装载状态及进样分析状态清洗；如出现漏液现象，原因极可能为转子密封垫磨损或污染，一般须申请维修或更换配件。
4．柱的保养：1) 柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动；2) 当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净；3) 要注意流动相的脱气、PH；4) 避免使用高粘度的溶剂作为流动相；5) 进样样品要提纯；6) 严格控制进样量；7) 每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品；8）每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱；9) 若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭；5．检测器(UV)的保养：1) 紫外灯的保养：在2小时以上不用是关闭，节省能量。
2) 样品池要冲洗、保养。
6、流动相的抽作要求：二次蒸馏水，缓冲盐一定要过滤；流动相脱气至关重要（可采用抽滤，超声波脱气等方法）。
缓冲盐的使用：流动相含有盐分时，做完实验后一定要进行流路冲洗；首先用水冲洗，打开排液阀用PURG 键转换出原有含盐的流动相，然后关闭排液阀打开泵冲洗全部流路45分钟以上，如此更换流动相为水和甲醇混合液冲洗全部流路30分钟（此步骤一般可省去，根据实验而论），最后更换纯甲醇冲洗全部流路45分钟以上。
7、吸滤头：特殊情况下可拆下滤头抽取以判断其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流动相通过吸滤头打出以判断其是否堵塞。
若有堵塞情况可用异丙醇超声波清洗；清洗不成功则需要换。
8、单向阀：如遇到泵压不稳或流动相不能抽取，则可能是单向阀出现问题，卸下用异丙醇超声波清洗，清洗时须按其安装的方向放置在小烧杯中，切记不可与安装方向倒置超洗！9、泵头：泵头漏液或出现其它故障一般要申请维修（如漏液，或更换柱塞杆及其密封垫等）10、过滤器：当色谱峰出现异常情况时，有可能是此部件被污染，拆下用异丙醇超洗或更换过滤垫片。
色谱柱的使用和维护
色谱柱的使用和维护色谱柱是一种用于分离混合物的重要工具，广泛应用于化学分析、环境检测、药物研发等领域。
为了保证色谱柱的正常使用和延长其寿命，以下将介绍色谱柱的使用和维护方法。
一、色谱柱的使用1.色谱柱的激活新购买的色谱柱通常需要进行激活处理，以去除柱内杂质和保证柱的稳定性。
常见的激活方法包括使用最终使用的溶剂/流动相进行洗脱或者使用强极性溶液进行反向激活。
激活后，需用洗脱溶剂或流动相进行平衡。
2.样品的前处理样品的前处理对色谱柱的使用和维护至关重要。
首先，要确保样品的纯度和浓度，以避免对色谱柱产生污染。
其次，对于有机溶剂溶解的样品，最好使用过滤器进行过滤，以防止固体颗粒和杂质进入色谱柱。
3.流动相的选择正确选择和配置流动相对于色谱柱的使用非常重要。
根据需要分离的组分特性，选择合适的流动相性质和组成，并根据需要进行酸碱调节、添加缓冲剂等。
此外，注意保持流动相的流速稳定，并定期更换或再生。
4.检测器的设置根据需要检测的组分，选择合适的检测器并进行适当的设置。
常见的检测器包括紫外-可见吸收光谱仪（UV-Vis）、荧光检测器、质谱仪等。
在使用检测器前，要确保其正常工作并进行校准。
5.流量控制使用色谱仪时，应保持流量的稳定性。
定期检查和校准流量控制器，并调整至适当的设置，以确保色谱柱正常运行。
6.色谱条件的优化根据分析需要，在保证分离效果的前提下，进行色谱条件的优化。
包括优化流速、温度、柱渗透性、梯度洗脱程序等，以提高分离效果和保护色谱柱。
二、色谱柱的维护1.洗脱和平衡每次使用完色谱柱后，应进行洗脱以去除残留的样品和杂质，并用适当的溶剂进行平衡。
洗脱和平衡步骤的操作要轻柔，避免使用高压流动相进行冲洗。
对于一些特殊样品，如蛋白质和多肽，可以使用具有较强亲和性的溶剂进行洗脱和平衡。
2.色谱柱的储存条件当色谱柱暂时不使用或需要长期储存时，应注意以下几点：首先，将色谱柱从设备上拆卸下来，用纯净溶剂充分洗脱并平衡，保证柱内干净；其次，封闭柱两端，避免进入灰尘和空气，可以使用柱塞或盖子进行封闭；最后，将柱放置在干燥、阴凉的地方存放，避免受到阳光直射和高温。
【色谱柱】色谱柱使用维护 色谱柱维护和修理保养
【色谱柱】色谱柱使用维护色谱柱维护和修理保养1、色谱柱的使用说明：（1）色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特别说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，确定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很简单析出，堵塞色谱柱。
（2）流动相：流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水可以是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
假如将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。
另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应当定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0—8.0，BDSC18适合于碱性化合物，PH值适用范围为 2.0—10.0、当必需要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立刻用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
（3）样品：样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。
在用正相色谱法分析样品时，全部的溶剂和样品应严格脱水。
2、色谱柱的保存：（1）反相色谱柱每天试验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，试验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。
注意：不能用纯水冲洗柱子，应当在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
（2）长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必需存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度可以是室温。
3、色谱柱的再生：由于色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的加添，会显现色谱峰高降低，峰宽加大或显现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。
HPLC色谱柱维护指南
HPLC色谱柱维护指南1.色谱柱的正确使用：-在使用前，检查色谱柱是否有损坏或污染。
如果有损坏，应立即更换。
如果有污染，可以尝试进行洗脱或使用其他清洁方法来恢复柱的性能。
-在使用前，根据分析样品的特性选择合适的色谱柱。
例如，对于高分子化合物的分析，应选择具有较大孔径的色谱柱。
-避免使用超过色谱柱推荐的最大流速和压力。
这样可以避免对色谱柱造成不必要的损害，并延长其使用寿命。
2.色谱柱的存储：-在使用前和使用后，应将色谱柱存储在干燥、清洁的环境中，避免受到湿气、灰尘和其他污染物的影响。
-色谱柱应垂直存放，避免受到外界压力和震动的影响。
-在存储过程中，可以使用柱保护器来保护色谱柱，延长其使用寿命。
3.色谱柱的洗脱：-每天使用前，应进行一次洗脱步骤，以去除可能残留在色谱柱中的污染物。
可以使用适当的洗脱溶剂，如乙腈、甲醇或水进行洗脱。
-洗脱过程中，应用适当的流速和压力，避免对色谱柱造成不必要的压力和损害。
-洗脱后，应进行适当的平衡步骤，以确保色谱柱的稳定性和准确性。
4.色谱柱的保养：-定期进行色谱柱的保养，以确保其良好的性能和稳定。
这包括清洗和再平衡的步骤。
-清洗过程中，可以使用适当的溶剂和清洗方法，如反向流洗、超声波清洗等，以去除色谱柱中的污染物和残留物。
-再平衡过程中，应使用适当的溶剂和流速，以恢复色谱柱的平衡状态。
5.色谱柱的更换：-根据色谱柱的使用寿命和性能变化情况，定期更换色谱柱。
一般来说，当分析结果出现明显的偏差或峰形变化时，应考虑更换色谱柱。
-在更换色谱柱时，应选择合适的替代柱，并根据其使用说明书进行正确的安装和调试。
总之，HPLC色谱柱的维护对于获得准确可靠的分析结果至关重要。
通过正确使用、存储、洗脱、保养和更换，可以延长色谱柱的使用寿命，并确保其良好的性能和稳定运行。
维护高效液相色谱柱的方法
维护高效液相色谱柱的方法如何维护高效液相色谱柱高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）柱是常用的分析仪器之一，通常用于生物、药物、环境等领域的化学分析。
为了保证HPLC柱的正常运行和保持其分离性能，有必要进行定期的维护和保养。
本文将介绍一系列维护HPLC柱的方法，帮助用户保持柱的高效性和延长其使用寿命。
一、准备工作在对HPLC柱进行维护之前，必须先准备工作。
首先，关闭HPLC 系统并关闭进样器。
然后，从色谱柱系统中拆下柱头，将柱塞或过滤垫插上柱头，以防止溶剂蒸发。
接下来，使用注射器将连接器处的溶剂完全抽入柱中，以避免残留溶剂的挥发造成柱内压力不均。
二、柱的清洗与保养1. 柱的清洗(1) 首次使用前的预处理柱在使用之前，首先需要进行预处理。
可将柱用纯溶剂（如醋酸乙酯/甲醇或乙酸乙酯/乙醇等）冲洗，以除去封装过程中可能残留的杂质和填充剂。
(2) 洗脱剂的选择柱的清洗需要使用合适的洗脱剂。
常见的清洗剂为纯溶剂、水、有机溶剂、酸碱溶液等。
根据柱的具体使用情况和分离物质的性质选择清洗剂。
(3) 清洗步骤清洗步骤可分为：预洗、主洗和后洗三步。
预洗：通常使用纯溶剂预洗，以移除柱表面的胶凝物和杂质。
可使用高压注射器将预洗溶剂不断注入柱内，或使用真空抽滤法注入预洗溶剂。
主洗：根据实际需要选择合适的清洗剂。
如果色谱柱上附着了水溶性的物质，可用水洗涤；如果有机溶剂沾附在柱上，可用纯有机溶剂洗涤。
清洗剂的流速可逐渐增加，以增强冲洗效果。
后洗：用纯溶剂进行后洗，以充分冲洗柱内的清洗剂残留物，恢复柱的初始性能。
2. 柱的保养(1) 使用前的条件调整在每次使用HPLC柱之前，需要根据实验需求调整一些条件。
比如，选择适当的温度、洗脱剂浓度、流速等，以提高分离效果和保护柱的寿命。
(2) 样品预处理样品的预处理也是保护柱的重要环节。
柱上堆积的杂质和沉积物会降低色谱分离效果，因此，要尽可能减少样品中的杂质。
液相色谱系列产品安全操作及保养规程
液相色谱系列产品安全操作及保养规程前言液相色谱技术在化学、生物、医药、环境等多个领域广泛应用。
为了确保液相色谱系列产品的正常使用和维护，保证用户的人身安全和实验室的设备安全，本文整理了针对液相色谱系列产品的安全操作和保养规程，希望可以为广大用户提供参考。
安全操作规程1. 实验前准备在进行实验前，应具备相应的理论和实验知识，并对所需仪器设备进行检查和准备。
在操作前，应先仔细阅读并熟悉仪器使用说明书和技术参数，按照操作步骤正确进行实验。
2. 液相色谱柱的使用与保养2.1 柱的安装在安装柱时，应先检查柱底接头是否清洁，并在所使用的连接器上加装垫圈，以防止泄漏。
连接器的紧固力应适当，不宜过度，以免损坏柱和连接器。
2.2 使用条件使用柱时，应确保流动相符合柱的使用要求，且使用寿命未过时方可使用。
当柱使用后，需要及时停止柱内的流动相，防止样品残留及堆积。
2.3 柱的保养使用完毕后，应及时清洗柱和连接器，并用纯净水和乙醇将柱内残留液体冲洗干净，以保证柱的使用寿命和准确性。
3. 液相色谱仪的使用与保养3.1 操作前准备使用液相色谱仪之前，应先检查仪器是否连接正确，并按照使用说明书进行操作。
在操作之前，应先开机预热，并进行系统检查，以保证仪器的正常工作。
3.2 制备液相色谱流动相溶液制备液相色谱流动相溶液时，需按照操作说明书进行溶液的配制。
切忌在操作过程中直接触碰有毒腐蚀性液体或固体，并戴上适当的防护用品。
3.3 液相色谱柱的更换液相色谱柱的更换需要在安全门关闭状态下进行。
当柱更换完成之后，需要清洗柱，以保证柱内液体的完全更换，防止混杂。
3.4 保养与维护在使用过程中，应及时对仪器进行保养与维护，例如及时更换气源过滤器，检查压力表和流量计的准确性等，以保证仪器的正常工作状态和寿命。
4. 样品制备与储存4.1 样品制备在制备样品时，应遵守实验室安全规定，戴上适当的防护用品。
切勿使用有毒、易燃、易爆等危险品进行制备，并按照操作说明书进行操作，避免产生有害气体和对人体造成伤害的高温等物质。
色谱柱的使用和维护方法及操作规程
色谱柱的使用和维护方法及操作规程色谱是一种分别分析手段，分别是核心，因此担负分别作用的色谱柱是色谱系统的心脏。
对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。
当然，色谱柱的正确使用和维护特别紧要，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。
在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。
1、避开压力和温度的急剧变化及任何机械震动。
温度的蓦地变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充情形；柱压的蓦地上升或降低也会冲动柱内填料，因此在调整流速时应当缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。
2、应渐渐更改溶剂的构成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂更改为全部是水，反之亦然，流动相使用前必需经脱气和过滤处理。
3、一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。
否则反冲会快速降低柱效。
4、选择使用适合的流动相（尤其是pH），以避开固定相被破坏。
有时可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避开分析柱中的硅胶基质被溶解，压力上升是需要更换预柱的信号。
5、避开将基质多而杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。
保护柱一般是填有相像固定相的短柱。
保护柱可以而且应当常常更换。
6、常常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。
在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂渐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50～75ml。
7、避开使用高粘度的溶剂作为流动相；假如使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在试验完毕柱子冲洗干净。
8、进样样品要提纯。
9、严格掌控进样量，不要超载。
10、每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱，好用洗脱本领强的洗脱液冲洗，例如ODS柱宜用甲醇冲洗至基线平衡。
当接受盐缓冲溶液作流动相时，使用完后应用无盐流动相冲洗。
实验室耗材色谱柱安全操作及保养规程
实验室耗材色谱柱安全操作及保养规程色谱柱是在色谱分离过程中必不可少的耗材之一。
它作为分离技术的核心，对色谱分离结果和分离效率起着至关重要的作用。
然而，由于色谱柱在实验室中的使用频率较高，其在使用过程中的安全问题与保养问题也日益凸显。
因此，本文将从色谱柱在实验室中的操作安全与保养规程两个方面进行详细阐述。
I. 色谱柱操作安全规程1.在操作前，必须先了解色谱柱的物理性质和化学性质，并根据实验需求选择合适的色谱柱和其它配套设备。
在选择色谱柱的过程中，应先了解柱子的尺寸、填充物和使用条件等基本信息。
2.操作前，插入色谱柱需要先检查柱子和连接器是否有裂缝或者破损。
若发现任何异常情况，应立即更换或者维修。
3.在装置分离柱时，应将色谱柱上下的滤膜按要求顺序排列，避免颠倒和错位导致气泡产生。
装置好色谱柱后，应检查连接管路的紧固性，确保无泄漏。
4.在色谱分离过程中，应设备操作者要经常检测色谱柱的操作参数，如流速、压力、温度等。
当发现异常情况时，应及时调节或者报告处理。
5.在拆除色谱柱时，要事先清空柱内流体并清洗各部位，同时使用合适的工具拆卸，以免对柱头和连接端口造成损伤。
6.色谱柱的替换和维修必须在使用前经过认真的教育和培训。
操作时，必须如实填写日志簿，记录日常维护和故障处理操作，以方便日后查证。
II. 色谱柱保养规程1.在使用过程中，要及时清除色谱柱表面污垢，避免因污染对分离结果产生负面的影响。
2.为避免使用过程中的反复载入产生堵塞，并实现最佳的分离效果，可在一定周期内对柱子进行反向冲洗。
反向冲洗的过程中，应注意避免使用耐酸性过差的反向冲洗液。
3.当未使用的色谱柱需要长期保存时，应在柱子上和下端口分别安装塑料盖。
4.减少样品残留的方法可以有多种。
例如，每次使用完柱子，应当掌握其排泄剂量，每次排泄时应当尽量将样品排尽，避免样品残留在柱内所造成的污染。
5.在清洗色谱柱时，如果使用的清洗液是酸性的，应及时进行中和处理。
色谱柱维护系统安全操作及保养规程
色谱柱维护系统安全操作及保养规程色谱柱是色谱分析的核心部件，对于任何一种色谱柱维护系统，都需要注意其安全操作和保养规程。
本文就通过对色谱柱维护系统的安全操作和保养规程进行概述，希望能够对相关从业人员有所帮助。
安全操作1. 使用前检查在使用色谱柱前，必须对其进行检查，确保没有受到损坏或者有其他异常情况。
具体需要注意的内容如下：•检查色谱柱的接口是否正确，是否与仪器连接牢固；•检查柱体是否有异味；•检查柱体表面是否晶莹剔透；•检查柱尖是否损坏；•对柱子进行表面清洁后，观察柱子是否有损伤或表面划痕等。
2. 使用时注意在使用色谱柱的过程中，也要注意以下安全操作：•在操作之前要戴好手套、面罩和护目镜等安全装备；•操作前，要熟悉试剂的性质，并对一定会产生危险的试剂进行特别注意；•操作人员必须严格遵守操作规程，确保自己和周围人员的安全；•操作期间禁止抽烟、喝饮料或进食等易造成创伤的行为。
3. 停用后处理停用后的色谱柱，也需要特别处理才能保障安全：•在停用之前，要将流路关闭，把柱子从仪器上拆下来；•在取下柱子后，在空气中晾干4~5个小时，使得柱子干燥，避免受潮；•在存放的时候，避免阳光直接曝晒。
保养规程色谱柱是分析样品的基础设备，在使用过程中，需要在保证其性能的同时，进行正确的保养，以确保其寿命和性能一直处于在稳定的状态。
1. 清洗柱子在使用前后，需要对色谱柱的柱体进行清洗处理。
步骤如下：•先将柱子插入，确保流路紧闭，电压关断；•开启胶管瓶，在样品成功进入废柱处时关闭胶管瓶；•反向从样品向废针冲洗；•开启旋钮，调整反向泵和正向泵的比例为3:7时，开始正向注入清洗溶液洗脱样品，连续运行3个扫描周期长度；•调整正向和反向泵的比例为1:1，清洗溶液在整个柱子内循环1个小时左右（视污染程度而定）；•关闭胶管瓶，将柱子拿出来，用纯水和90%甲醇交替冲洗，保证柱子表面干净；•最后，将柱子放置在胶盖里面干燥。
2. 保养柱子在使用色谱柱一段时间之后，为了保持柱子的性能，在必要的时候还需要对柱子进行保养处理。
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公司
标准操作规程编号：STD-SOP－EM－033－00题目液相色谱柱使用维护与保养规程颁发部门分析测试中心
制定日期
审核日期
批准日期
分发分析测试中心研发部
目的：建立HPLC色谱柱使用、维护与保养规程
范围：HPLC色谱柱
职责：分析测试中心对本规程的实施负责
正文：
1.色谱柱的构造
色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝等组成。
2.液相色谱柱的使用：
色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。
2.1样品的前处理：
2.1.1最好使用流动相溶解样品。
2.1.2使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
2.1.3使用0.45μm（或0.45μm以下）的过滤膜过滤除去微粒杂质。
2.2流动相的配制：
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此
要求流动相具备以下的特点：
2.2.1流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
2.2.2流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。
2.2.3流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效果；同时降低柱压降，延长液体泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
2.2.4流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
2.2.5流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
2.2.6在流动相配制好后，一定要进行脱气。
除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
2.3流动相流速的选择：
因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。
对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。
对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml／min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml／min为佳。
当选用最佳流速时，分析时间可能延长。
可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。
注意：
2.3.1由于甲醇廉价，对于反相柱推荐使用甲醇体系(必须使用乙腈的场合除外)。
2.3.2对于正相柱推荐使用沸程为30-60℃的石油醚或提纯后的己烷作流动相，没有提纯的己烷不得使用。
用水最好使用超纯水(电阻率大于18兆欧)，去离子水及双蒸水中含有酚类杂质，有可能影响分析结果。
2.3.3含水流动相最好在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不
要过夜。
最好加入叠氮化钠，防止细菌生长。
2.3.4流动相要求使用0.45 μm（或0.45μm以下）滤膜过滤，除去微粒杂质。
2.3.5使用HPLC级溶剂配制流动相，使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命，提高柱性能。
2.4.色谱柱的使用
2.4.1一般反相柱使用方法：先以甲醇：水=10：90（V：V）冲洗柱子45分钟，再换上流动相平衡45分钟，根据基线情况进样（基线漂移不符合要求时应延长平衡时间），分析样品完毕，流动相继续20分钟（或20分钟以上），再换上甲醇：水=10：90（V：V）冲洗柱子45～60分钟，然后再用100％甲醇走40分钟，再放置保存。
2.4.2使用缓冲液（或含盐）作流动相，每天实验完成后，应用10倍柱体积的不含且可溶解缓冲盐的流动相（反相柱：如用10％甲醇（V：V））冲洗色谱柱，便色谱柱中的盐完全洗掉。
应特别注意：不能用纯有机溶剂直接冲洗色谱柱，以防止盐析出，堵塞色谱柱或仪器管路，而使色谱柱报废。
2.4.3一般正相柱使用方法：最常使用的流动相是水和乙腈混合物。
先以乙腈：水=85：15（V：V）冲洗柱子45分钟，再换上流动相平衡45分钟，根据基线情况进样（基线漂移严重应延长平衡时间），分析样品完毕，流动相继续20分钟（或20分钟以上），再换上乙腈：水=85：15（V：V）冲洗柱子45～60分钟，放置保存。
2.4.4葡聚糖凝胶柱使用。
Sephadex G型葡聚糖凝胶只适合在水中使用。
用于聚合物的分析检测：（流动相A一般为磷酸盐缓冲液；流动相B常为水）先以水冲洗柱子60分钟，根据基线情况，取对照溶液适量进样分析，分析完毕，再换上流动相A平衡，根据基线情况进样（基线漂移不符合要求时应延长平衡时间），分析样品完毕，流动相继续20分钟（或20分钟以上），再换水冲洗柱子60分钟，然后再用5％迭氮化钠走40分钟，再放置保存。
3.色谱柱的维护与使用
3.1对于反相柱, 长期保存保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇（或70％甲
醇），柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。
绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。
正相柱可以储存于严格脱水后的纯正乙烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度最好是室温.
3.2柱子在装卸、更换时，动作要轻，接头拧紧要适度。
必须防止较强的机械振动，以免柱床产生空隙。
3.3如果仪器用来做常规分析，样品种类有限，但分析次数多，则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱，这样有助于延长柱子的寿命。
3.4免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。
温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能湖缓。
3.5应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱柱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。
3.6如使用柱温控制装置时，应注意在通入流动相后才能升温。
3.7一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。
否则反冲会迅速降低柱效。
3.8选择使用适宜的流动相，以避免固定相破坏。
有时可以在进样器前面连接一个预柱。
3.9避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱住之间连接一个保护柱。
保护柱一般是填有相似固定相的短柱。
保护柱可以而且应该经常更换。
3.10经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。
在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过度，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50～75ml。
3.11色谱柱使用过程中，如果压力升高，一种可能是烧结滤片被堵塞，这时应
更换滤片或将其取出进行清洗；另一种可能是大分子进入柱内，使柱头被污染；如果柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大。
3.12在完成分离分析工作之后，不应立即停机，需及时对色谱分析系统进行冲洗，一般半小时以上，以除去色谱柱内的杂质。
4.色谱柱的再生
因为高效液相色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，当出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰时，一般来说可能是柱效下降。
4.1反相柱的再生：采用以甲醇：水=95：5（V：V），纯甲醇，二氯甲烷等溶剂作流动相，顺序冲洗，每种流动相经色谱柱的量为20～30倍色谱柱体积然后再以相反顺序冲洗色谱柱。
4.2正相柱
顺次以20-30倍色谱柱的体积的正已烷，异丙醇，二氯甲烷，甲醇作为流动相冲洗色谱柱（因异丙醇的粘度较大，冲洗过程中请随时注意调整冲洗流速），然后再以相反的顺序冲洗色谱柱。
要注意上述溶剂必须严格脱水。
4.3离子交换柱的再生
长时间在高PH值和高离子强度缓冲溶液中使用，将导致色谱柱离子交换能力降低。
用稀酸缓冲溶液冲洗使阳离子柱再生；用稀碱缓冲溶液冲洗可使阴离子柱再生。
5.色谱柱保管与领用
5.1新买的色谱柱，应有专人保管，并有专用的保管及领用纪录。
各小组领用时，务必填写领用纪录、日期及签名。
5.2各小组领用色谱柱后，应妥善保管色谱柱（即使色谱柱因正常损耗而坏），备日后查询。
5.3各小组应保管好现有的新色谱柱及旧色谱柱，并自行登记。
如小组间借用，应纪录，待项目完成归还或方便日后查询。
5.4如色谱柱丢失，由领用的小组负责；如已借出，由登记收到的小组负责。
6.附：反相柱与正相柱区分
6.1反相柱：填料是非极性的，官能团为烷烃，例如：C18(ODS)、C8、C4、C6H5
（Phenyl）等。
6.2正相柱：填料是极性的，官能团为－CN氰基、－NH2氨基等。
6.3 “C18”，简称“ODS”，即十八烷基硅烷键合硅胶填料（Octadecylsilyl，简称ODS）。
这种填料在反相色谱中发挥着极为重要的作用，它可完成高效液相色谱70～80％的分析任务。
由于C18(ODS)是长链烷基键合相，有较高的碳含量和更好的疏水性，对各种类型的生物大分子有更强的适应能力，因此在生物化学分析工作中应用的最为广泛，近年来，为适应氨基酸、小肽等生物分子的分析任务，又发展了CH、C3、C4等短链烷基键合相和大孔硅胶（20～40μm）。