转氨酶转氨基作用的鉴定
转氨基作用实验结果讨论
转氨酶是指存在于细胞质和线粒体中的一类酶，它们在胺基酸代谢过程中发挥着重要作用。
转氨酶包括谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST），这两种酶在临床检测中常被用于评估肝功能和心肌损伤情况。
在转氨基作用实验中，我们可以通过检测血液中ALT和AST的水平来评估某个组织是否存在损伤。
在实验中，我们将不同给药剂量的化学物质或药物注射到小鼠体内，然后检测其血液中AST和ALT的水平。
实验结果显示，在高剂量注射后的小鼠身上，AST和ALT的水平明显升高，而在低剂量或未注射的小鼠中，AST和ALT的水平保持在正常水平。
这说明高剂量注射可能会导致肝脏和心肌组织的损伤，而低剂量或未注射则没有明显影响。
在实验结果讨论中，我们可以从以下几个方面进行分析：1.对实验结果的解释：通过检测AST和ALT的水平，我们可以初步评估组织损伤情况。
实验结果表明，在高剂量注射后的小鼠中，AST和ALT的水平明显升高，这可能是由于注射的物质导致了肝脏和心肌组织的损伤。
相反，低剂量或未注射的小鼠中，AST和ALT的水平保持在正常水平，说明注射的物质对组织没有造成影响。
2.实验结果的局限性：由于这仍然是一项动物实验，并不完全反映人体内的情况。
因此，在设计实验和解释实验结果时，我们需要谨慎地考虑这些限制性因素。
3.实验结果的意义：在临床医学中，转氨酶的检测是非常重要的，它可以作为肝功能和心肌损伤的指标。
通过这项实验，我们可以更好地理解某些物质对生物体内部分组织的影响，同时也加深了我们对于肝、心血管等系统的认识。
4.进一步研究的展望：转氨酶与生物体内许多疾病和病理过程密切相关。
今后在进一步研究中，我们可以研究更多的物质和药物对转氨酶水平的影响，并探究肝脏和心血管疾病状态下转氨酶的变化规律，以期为临床诊断和治疗提供更精准的指导。
综上所述，转氨基作用实验是非常有意义的一项实验，其结果可以为我们提供对于某些组织受损的初步评估。
在解释实验结果时，我们需要注意实验局限性，同时思考实验结果的意义，为未来的研究展望提供方向。
转氨基运用实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解转氨基作用的基本原理和过程。
2. 掌握转氨基实验的操作步骤。
3. 观察并分析转氨基作用的结果，加深对转氨基作用的理解。
二、实验原理转氨基作用是指氨基在转氨酶的催化下，从一个氨基酸转移到另一个α-酮酸上的过程。
该过程不产生游离的氨，而是通过氨基转移酶将氨基从一个化合物转移到另一个化合物上。
转氨基作用在生物体内具有重要的生理意义，如氨基酸的合成、分解以及代谢等。
实验中，我们以丙氨酸和α-酮戊二酸为底物，在转氨酶的催化下进行转氨基反应，通过纸层析法观察反应结果，从而验证转氨基作用的实现。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 丙氨酸- α-酮戊二酸- 转氨酶- 水合氯醛- 硫酸铵- 氯化钠- 氨水- 纸层析纸- 展开剂2. 实验仪器：- 电子天平- 恒温水浴锅- 离心机- 研钵- 移液管- 试管- 滴管- 显微镜四、实验步骤1. 准备实验试剂：- 将丙氨酸和α-酮戊二酸溶解于水中，配制成一定浓度的溶液。
- 将转氨酶溶解于水中，配制成一定浓度的溶液。
2. 制备反应混合液：- 取一定量的丙氨酸溶液和α-酮戊二酸溶液，混合均匀。
- 加入适量的转氨酶溶液，混匀。
3. 水浴加热：- 将反应混合液放入恒温水浴锅中，加热至一定温度，保持一段时间。
4. 冷却反应混合液：- 将加热后的反应混合液取出，置于室温下冷却。
5. 纸层析：- 将制备好的反应混合液滴在纸层析纸上，待溶剂自然挥发后，用展开剂进行展开。
6. 观察结果：- 观察纸层析纸上各物质的迁移距离，分析反应结果。
五、实验结果与分析1. 结果观察：- 在纸层析纸上，观察到丙氨酸和α-酮戊二酸的反应产物，分别为丙酮酸和谷氨酸。
2. 结果分析：- 实验结果表明，在转氨酶的催化下，丙氨酸和α-酮戊二酸发生了转氨基反应，生成了丙酮酸和谷氨酸。
这验证了转氨基作用的实现。
六、实验总结通过本次实验，我们了解了转氨基作用的基本原理和过程，掌握了转氨基实验的操作步骤，并通过纸层析法观察到了转氨基作用的结果。
05纸层析法鉴定转氨基作用
6.显色 将滤纸平放在培养皿上，用喷瓶向滤纸均匀喷洒 0.1%茚三酮溶液，再用吹风机吹干，可见紫红色的同 心弧形斑点。 7.计算 按下表记录有关数据，计算Rf值。
“谷” “丙” “对” “测1、2”
点样处至色斑中心距离(A)
点样处至溶剂前沿距离(B) Rf值(A/B)
将“对”、“测”各色斑的 Rf值与已知氨基酸的 Rf 值进行对比，确定它们各是什么氨用采血管吸取测定管上清液、对照管 上清液、谷氨酸溶液、丙氨酸溶液各 1 滴，依次点在 滤纸上标明测、对、谷、丙的点样处。注意点样斑点 不可太大。直径应小于 0.5cm 。必要时可再点一次， 每点一滴，用吹风机吹干后方可再点第二滴，并且点 样量应力求均匀相等。 5. 层析 将滤纸放在培养皿上，灯芯下端浸入层析液 中进行层析。约40分钟后，去除灯芯，立即用铅笔划 出溶剂前沿，用吹风机吹干。
[步骤] 1.制备肝匀浆 2. 转氨基反应 取干净试管 2 支，分别标明测定管与 对照管，按下表操作。
管号 试剂（滴） 肝匀浆 丙氨酸 α-酮戊二酸 测定管 对照管
10d 10d 37℃水浴10min 沸水浴10min 10d 10d 10d 10d 37℃水浴20min
3. 准备：取直径 15cm 圆形滤纸 1 张，用圆规在滤纸正 中作一半径为 1cm 的小圆圈，用铅笔通过圆心作两点 互相垂直的线，并在两线外端等距离点 4 个原点，标 明测、对、谷、丙。在滤纸圆心处打一小孔（如铅笔 芯粗细），另取同类滤纸小片 1.5cm×3cm，下三分之 二剪成须状。将其卷成圆筒如灯芯状，插入小孔（略 突出于滤纸面）
原理在转氨酶的作用下某一氨基酸去掉氨基生成相应的酮酸而另一种酮酸得到此氨基生成相应的氨基酸的过程称为在转氨酶的作用下某一氨基酸去掉氨基生成相应的酮酸而另一种酮酸得到此氨基生成相应的氨基酸的过程称为氨基酸的转氨基作用
22 生物化学实验--纸层析法测定肝组织的转氨基作用
纸层析法测定肝组织的转氨基作用【目的】1 ．掌握纸层析法的原理和方法。
2 ．熟悉相关转氨酶的临床意义。
【原理】转氨基作用是氨基酸代谢的一个重要反应。
在转氨酶作用下，将氨基酸的氨基转移到α - 酮酸上。
每种转氨基反应均由专一的转氨酶催化。
转氨酶广泛分布于机体各器官、组织，例如肝细胞中存在的丙氨酸氨基转移酶，能催化α - 酮戊二酸与丙氨酸之间的转氨基作用。
反应式如下：纸层析是以滤纸作为支持物，与滤纸纤维素结合的水（约占纸重 20 ～ 30 ％）称为层析中的“固定相”。
另一种和固定相不能混合或部分混合的溶剂则为“流动相”。
把欲分离的物质加在纸的一端，并使流动相借滤纸的毛细现象移动，此时，待分离溶质因分配系数不同而逐渐分布于滤纸的不同部位。
层析过程中或层析结束时，用显色剂使被分离的物质显出颜色，成为一个个色斑。
分配在固定相中趋势较大的成分在纸上随流动相移行的速度就小，色斑距原点的位置就较近。
反之，分配在固定相内趋势较小的成分移行就远，色斑位置离原点也远。
溶质在纸上的移动速率可用比移（R f ）表示：同一氨基酸在相同的层析条件下 R f 值相同，不同氨基酸在相同层析条件下 R f 值不同，因此可以根据 R f 值来鉴定被分离的氨基酸。
层析时，用显色剂茚三酮使氨基酸显色，将样品氨基酸的 R f 值与标准氨基酸的 R f 值比较，即可确定所分离氨基酸的种类。
【器材】1 ．研钵2 ．剪刀3 ．恒温水浴4 ．点样毛细管5 ．漏斗6 ．表面皿或小平皿7 ．新鲜动物肝脏8 ．直径 10cm 圆型新华滤纸9 ．中试管和小试管10 ．电炉或吹风机或烘箱11 ．直径 10cm 的培养皿【试剂】1 ． 0.2mol/L ， pH7.4 磷酸缓种液Na 2 HPO4 溶液 81ml 与 0.2mol/L NaH 2 PO4 溶液 19ml 混匀，再用蒸馏水稀释 20 倍。
2 ． 0.1mol/L 丙氨酸溶液称取丙氨酸 0.891g 先溶于少量 pH7.4 磷酸盐缓冲液中，以 0.1mol/LNaOH 仔细调节至 pH7.4 后，用磷酸缓冲液加至 100ml 。
植物体内转氨基作用
Rf ＝
原点到层析点中心的距离 原点到溶剂前沿的距离
注意事项
整个操作过程中，手只能接触滤纸两侧边缘， 否则手指上的汗液会造成滤纸出现众多斑点。
在点样时，不要将毛细管插错了试剂瓶。 展层结束后，切勿忘记用铅笔描出溶剂前沿。 点样斑点不能太大（直径应小于0.5cm），防
止氨基酸斑点重复。 吹风温度不宜过高，否则斑点变黄。
植物体内的转氨基作用
【实验目的】
1. 学习转氨基反应的原理。 2. 掌握用纸层析法鉴定转氨基的方法。
【实验原理】
氨基转移酶（转氨酶）在植物体内广泛存 在。植物通过转氨酶的作用，可将α-氨基酸上 的氨基转移到α-酮酸原来酮基的位置上，结果 形成一种新的α-酮酸和一种新的α-氨基酸， 所生成的氨基酸可用纸层析法检测。
3.实验试剂
0.1M丙氨酸溶液、0.1M谷氨酸溶液、0.Mα酮戊二酸溶液（用NaOH中和至pH7.0)、含有 0.4M蔗糖的0.1M磷酸缓冲液（pH8.0）、磷酸缓 冲液（pH7.5）、30%三氯乙酸溶液、扩展剂、 显色剂
【操作步骤】
（一）酶液的提取
取发芽2-3天的绿豆芽5g，放入研钵中， 加2ml磷酸缓冲液（pH8.0）研磨成匀浆，转 入试管中。再用该缓冲溶液3ml冲洗研钵，一 并转入试管中备用。
本实验反应体系中的底物为丙氨酸和α酮戊二酸，将其与绿豆芽匀浆制备的酶液一起 保温，在植物转氨酶的催化下会产生丙酮酸与 谷氨酸。利用纸层析法鉴定出谷氨酸的存在， 则证明植物体内具有转氨基作用。
谷丙转氨酶
【实验材料和主要仪器、试剂】 1.实验材料
绿豆芽
2.实验仪器
研钵、试管、移液管、恒温浴箱、层析缸、层 析纸、毛细管、吹风机
（二）酶促反应
取3支干燥洁净的试管编号，按下表分别 加入试剂和酶液（单位ml）。
转氨基作用(纸层析法)
转氨基作用原理氨基酸分子上的氨基转移到α-酮酸分子上的反应过程称为转氨基作用（或称氨基移换作用）。
转氨基作用是氨酸代谢的重要反应之一，由转氨酶催化。
经转氨后，原来的α-—氨基酸变成了相应的α-—酮酸，原来的α-—酮酸则成为新的、相应的α-—氨基酸。
本实验观察谷氨酸与丙酮酸在肌匀浆中的谷氨酸—丙酮酸转氨酶（简称GPT）的催化进行转氨基的过程。
然后用纸层析法检查反应体系中丙氨酸的生成。
为便于观察转氨基作用，在反应中须加一碘醋酸（或—溴醋酸），以抑制谷氨酸和丙酮酸的其它代谢过程。
试剂0.9% NaCl溶液；0.01mol/L磷酸缓冲液（PH7.4）；1%谷氨酸钾溶液；1%丙酮酸钠溶液；0.25%一碘酸钠溶液；2%HAc。
操作1、肌匀浆的制备（该步由实验室准备室制备）取小白兔一只，猛击头部处死后，立即剪颈放血，取肌肉若干经0.9%NaCl溶液洗去血污后，称取肌肉约100g置电动匀浆器中，再加0.01mol/LpH7.4磷酸缓冲液500ml磨成匀浆。
2混匀后同置37-40℃水浴中保温1小时（时加振摇）。
取出两管各加入2%醋酸2滴，再同置沸水浴中5分钟，使反应停止，稍冷却，将上清液用于纸层析。
纸层析（氨基酸）原理层析法又称色层分离法，原指有色物质在吸附剂上因吸附能力不同而得到分离的方法。
后来此方法也应用于无色物质的分离。
层析法除了吸附层析以外，还有离子交换层析、分配层析和亲和层析等。
纸层析是分配层析中的一种。
分配层析是利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数不同而得到分离的。
通常用a表示分配系数。
溶质在固定相中的浓度（Cs）a = —————————————溶质在流动相中的浓度（CL）一种物质在某溶剂系统中的分配系数，在一定的温度下是一个常数。
纸层析是以纸作为惰性支持物的分配层析，纸纤维上的羟基具有亲水性，因此以滤纸吸附的水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。
有机溶剂沿着滤纸自下而上流动的，称为“上行法”；自上而下流动的，称为“下行法”。
生物化学实验 转氨酶的提取氨基移换反应与纸上层析
生物化学实验转氨酶的提取氨基移换反应与纸上层析生物化学实验--转氨酶的提取、氨基移换反应与纸上层析实验三转氨酶的提取、氨基移换反应与纸上层析一、实验目的1、1.学习一种鉴定氨基移换作用的简便方法及其原理。
2.学习用纸层析法测定转氨基作用。
3、介绍氨基移换促进作用在中间新陈代谢中的意义。
二、实验原理、氨基移换酶也称转氨酶，它能催化α-氨基酸的氨基与α-酮酸的α-酮基互换，形成新的α-氨基酸与新的α-酮酸的作用.这种作用称为氨基移换作用。
它在生物体内蛋白质的合成与分解等中间代谢中，在糖、脂肪、蛋白质三类物质代谢的相互联系、相互转化上都起着很重要的作用。
任何一种氨基酸进行转氨作用时，都由其专一的转氨酶催化。
它们的最适ph接近7.4。
在各种转氨酶中，以谷氨酸草酰乙酸转氨酶(简称谷草转氨酶、got)及谷氨酸丙酮酸转氨酶(简称谷丙转氨酶、gpt)活力最强。
上述两种酶均广为存有于生物机体中，在正常人血清中也存有少量存有。
机体出现肝炎、心肌梗塞炎症时，血清联运氮酶活力明显减少，在临床上转氨酶活性的测量存有关键意义。
测量转氨酶活性的方法很多，例如分光光度法，纸上层析法及光电比色法等。
在氨基酸分解代谢中，联合脱氨基作用是大多数氨基酸的主要代谢方式，通过转氨基作用与谷氨酸氧化脱氨基作用偶联而完成。
此过程可用下式表示:植物中多种氨基酸是通过转氨基作用合成的。
纸层析：就是以滤纸做为支持物的分配层析法，就是20世纪40年代发展出来的一种生化拆分技术。
由于设备直观，操作方式便利，所须要样品量太少，分辨力较低等优点而广为的用作物质的拆分，并可以展开定性和定量的分析。
缺点就是进行时间较长。
分配层析法：是利用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离的目的的一种实验方法。
在一定条件下，一种物质在某种溶剂系统中的分配系数是一个常数即α=溶质在固定相的浓度/溶质在流动相的浓度。
溶剂系统：由有机溶剂和水组成，水和滤纸纤维素有较强的亲和力，因而其扩散作用降低形成固定相，有机溶剂和滤纸亲和力弱，所以在滤纸毛细管中自由流动，形成流动相，由于混合液中各种氨基酸的分配系数值不同，其在两相中的分配数量及移动速率（即迁移率rf值）就不同，从而达到分离的目的。
酶促转氨基作用及其层析鉴定
酶促转氨基作用及其层析鉴定一、实验原理转氨基作用又称氨基转移作用，发生在a 氨基酸和a 酮酸之间，即在转氨酶的催化下，a 氨基酸的氨基转移到a 酮酸的酮基碳原子上，结果原来的a 氨基酸生成相应的a 酮酸，而原来的a 酮酸则形成了相应的a 氨基酸。
转氨基作用是生物体内普遍存在的一种生化反应，是氨基酸脱氨基作用的一种途径。
转氨酶种类多，专一性强，催化的转氨反应是可逆的。
转氨酶的最适pH 一般为7.4左右，其辅酶是磷酸吡哆醛。
目前已经发现的转氨酶有50余种，其中最重要的是谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)。
本实验以谷氨酸和丙酮酸混合溶液在谷丙转氨酶作用下的反应来观察酶促转氨基作用，其反应式为反应产物可用纸层析法分离鉴定。
纸层析是以滤纸作为层析支持物，以纸上吸附的水为固定相的一种层析技术，其分离的原理属于分配层析。
层析时，将一定量的样品点在滤纸上，用适当的有机溶剂作为流动相。
当流动相流经固定相时，样品即在水相和有机相之间进行反复分配。
由于样品中各组分在两相中的溶解度不同，因而在两相中的分配系数不同，各组分随有机溶剂迁移的速度也就不同，最后被完全分离开。
被分离组分在滤纸上的迁移速度可用相对迁移率R 值表示。
f 展层后用茚三酮溶液显色，将样品各显色斑点的R 值与同时展层的标准氨基酸f 的R 值比较，即可鉴定其氨基酸种类。
二、实验步骤1•酶液的制备去掉绿豆芽种皮称取3g,放入研钵内加2mLO.1mol/LpH8.0的磷酸缓冲液研成匀浆，然后转移至离心管中，再用1mL 缓冲液冲洗研钵，溶液并入离心管中，3000r/min 离心10min,取上层清液备用。
HHOHOGPT H °OH凋戊二醸酶液也可以用动物材料制备，称取猪肝脏2g,剪碎置研钵中，加入0.9%氯化钠溶液和少量石英砂，研磨成匀浆，离心，取上清，即为酶提取液。
2.酶促反应取两支试管，编号；按表1-5分别从左到右加入相应试剂并进行相处理。
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对照管②
肝匀浆0. 5ml
肝匀浆0. 5ml
加热
0.1mol/L丙氨酸0.5 ml 0.1mol/Lα-酮戊二酸0.5 ml 0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液1.5 ml
37℃保温，1小时 沸水浴中煮5分析
1
4
2
3
丙氨酸液2 谷氨酸液4 测定液1 对照液3
4．显色
用喷雾器向上述滤纸均匀喷上0.5 %茚三酮溶液, 用吹风机热风吹干,可见出现同心弧状色斑,用铅笔 圈下各色斑。比较各色斑的位置及颜色深浅，并算 各色斑的Rf值，以此判定结果。
1.谷丙转氨酶和谷草转氨酶在什么情况下发生异常变化 ？它们的临床意义是什么？ 2.本实验层析过程中哪一种氨基酸距离原点最远？为什么？
高，它催化如下反应：
α—酮戊二酸 + 丙氨酸
GPT
谷氨酸 + 丙酮酸
本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸为底物，加肝匀浆保温后，用纸层析
法检查谷氨酸的出现，以证明转氨基作用。
三、操作步骤
1．匀浆制备
肝0.5克+0.01mol/LpH 7.4磷酸盐缓冲液2.5 ml, 研成匀浆
2．酶促反应过程
2支试管
测定管①
用纸层析法鉴定转氨酶的转氨基作用
一、实验目的
掌握纸层析法鉴定转氨酶转氨基作用的原理和方法
二、基本原理
转氨基作用广泛地存在于机体各组织器官中，是体内氨基酸代谢的
重要途径。氨基酸反应时均由专一的转氨酶催化，此酶催化氨基酸的
α－氨基转移到另一α－酮基酸上。各种转氨酶的活性不同，其中肝
脏的谷丙转氨酶（Glutamic Pyruvic Transaminase ,GPT）活性较
3.影响Rf值的因素有哪些？