影响HE染色细胞形态的因素探讨
H_E_染色切片质量影响因素分析
H.E.染色切片质量影响因素分析杜 辉1,王树迎2,徐淑敏2(1.泰山医学院组织胚胎教研室,山东泰安271000; 2.山东农业大学动物科技学院,山东泰安271018) H.E.切片染色是生物学和医学领域中组织学和细胞学等学科中最常见的切片染色方法。
染色质量的好坏直接影响到细胞观察的科学性和病理学诊断的准确性。
经过长时间的组织胚胎学H.E.染色切片的制作实践,对影响石蜡切片H.E.染色质量的因素进行了如下分析。
1 取材固定 取材要新鲜、迅速、避免机械损伤、大小适宜、厚薄均匀。
固定要及时、充分。
固定液一般采用10%中性缓冲福尔马林溶液和Bo nin氏液,但是检查糖元、黏液、尿酸结晶类物质最好用无水乙醇固定,固定24～48h,最短不短于30～60min。
固定时间应根据取材大小、性质以及类型有关,视具体情况而定。
固定时间过长或固定液的浓度过高,会使组织变硬,减弱了固定液对组织的渗透能力或造成组织中间部分固定不好。
如浓度太低,在正常固定时间内,蛋白质的沉淀和凝固不够充分,由胶状物变为不溶性的固体,必然固定也不充分,使细胞成分产生的光学差异不够显著,影响媒染效果,导致染色片子发生灰染现象。
若组织块大而厚,可以固定一段时间后切开再固定,也可适当的延长固定时间。
总之,固定是切片制作过程中的重要一环,它直接会影响后面的脱水、浸蜡、切片、染色等步骤,并直接影响观察结果。
2 脱水、透明、浸蜡 组织经过固定冲洗,组织含有较多的水分,只有将水分除去才能进行石蜡包埋,因为石蜡与水不相溶。
将组织中的水分利用脱水剂除去的过程称为脱水。
脱水时间应根据组织大小、性质和类型而安排。
在多种脱水剂中最常用的是乙醇。
它可与水任意混合,脱水力较强,又可硬化组织,但高浓度的乙醇对组织有强烈的收缩和脆化作用。
因此乙醇脱水一般从低浓度过渡到无水乙醇,一般由通讯作者:王树迎70%→80%→95%Ⅰ→95%Ⅱ→100%Ⅰ→100%Ⅱ的浓度梯度脱水。
组织切片HE染色发灰的原因分析及对策
组织切片HE染色发灰的原因分及对策
<正>2014年8月～2017年5月南京同仁医院病理科出现组织切片HE染色细胞核模糊,细胞质偏紫色,细胞核与细胞质对比度差,颜色不鲜艳现象,严重时部分区域(如子宫内膜腺体、胃镜活检标本的黏膜上皮)出现灰色云雾状现象,影响病理诊断。针对这种现象,本科室组织相关人员进行讨论并查阅相关资料,决定从影响组织切片染色各个环节入手进行原因查找,并制定相应的对策,现介绍如下。
he染色常见问题及解决办法 (3)
HE染色常见问题及解决办法问题一：染色不均匀问题描述染色结果不均匀，导致在组织切片中出现深浅不一致的染色效果。
可能的原因1.组织固定不充分：染色前，组织可能没有充分固定，导致染色时组织颜色不均匀。
2.染色时间不足：染色时间不足，可能会导致染料在组织中未完全着色。
解决办法1.可以尝试使用更加强力的组织固定剂，确保组织得到充分固定。
2.增加染色时间，确保染料充分渗透并与组织结合。
问题二：颜色过深问题描述染色结果过深，导致组织切片中细胞结构难以观察。
可能的原因1.染色时间过长：染色时间过长可能导致染料过度渗透，造成颜色过深。
2.染液浓度过高：染液浓度过高也会导致染色结果过深。
解决办法1.缩短染色时间，适当减少染色时间可以使染料渗透达到合适的程度。
2.调整染液浓度，根据实际情况尝试减少染液浓度。
问题三：背景杂色问题描述染色切片的背景出现杂色，影响组织结构的观察。
可能的原因1.去脱水不充分：组织在染色前的去脱水处理可能不充分，导致背景杂色。
2.染液污染：染液可能被外部杂质污染，导致出现背景杂色。
解决办法1.确保去脱水过程充分，使用足够的次数进行去脱水处理，确保组织完全脱水。
2.尽量避免染液的污染，严格控制实验操作的卫生条件。
问题四：细胞核染色不明显问题描述细胞核染色效果不明显，导致细胞核结构难以观察。
可能的原因1.染料浓度过低：染料浓度过低可能会导致细胞核染色效果不明显。
2.染色时间过短：染色时间过短，染料可能无法充分染色细胞核。
解决办法1.调整染料浓度，根据实际情况尝试增加染料浓度。
2.增加染色时间，确保染料充分染色细胞核。
问题五：组织失真问题描述染色后，组织出现失真现象，形状和结构不正常。
可能的原因1.组织切片过厚：组织切片过厚可能会导致在染色过程中组织形状出现失真。
2.染色时间过长：染色时间过长，细胞可能会发生变形和退缩，导致组织失真。
解决办法1.控制组织切片的厚度，尽量保持切片均匀薄片。
2.控制染色时间，避免过长的染色时间导致组织失真。
探讨HE染色不佳的原因
探讨HE染色不佳的原因
邢爱云
【期刊名称】《中国社区医师》
【年(卷),期】2014(030)005
【摘要】随着现代医学技术的发展,临床病理诊断在临床医学中起着举足轻重的作用,甚至是金指标,HE病理切片质量好与坏直接影响病理医生在显微镜下的观察诊断,导致HE病理切片质量欠佳的原因很多,尤其引起细胞核呈灰白模糊不清,组织机构松散,根本无法诊断.
【总页数】1页(P108)
【作者】邢爱云
【作者单位】241000 安徽芜湖市皖南医学院第二附属医院病理科
【正文语种】中文
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白细胞he染色形态
白细胞he染色形态白细胞是免疫系统中的重要细胞之一，其在维持机体内环境平衡和对外界病原体的抵抗能力有着至关重要的作用。
白细胞包括粒细胞、淋巴细胞、单核细胞等多种类型，每种类型的白细胞在形态学上均有其独特的特征。
本文将就白细胞HE染色的形态学特征进行详细介绍。
首先是中性粒细胞，中性粒细胞是一种常见的粒细胞，其细胞核呈“马蹄形”，细胞质内有多种颜色的颗粒，分别为嗜酸性颗粒、嗜碱性颗粒和中性颗粒。
嗜酸性颗粒的染色性质通常为淡红色或淡紫色，嗜碱性颗粒的染色性质为淡蓝色，而中性颗粒则不染色或染色不明显。
中性粒细胞的细胞质内颗粒含量与细胞状态有关，当细胞处于炎症状态时，其颗粒含量会大幅度增加。
此外，中性粒细胞是体内最多的一种白细胞，其在机体免疫防御中起到了至关重要的作用。
其次是嗜酸性粒细胞，嗜酸性粒细胞是一种特殊的粒细胞，其最大的特点就是细胞质内嗜酸性颗粒的数量显著增多。
嗜酸性粒细胞在形态学上表现出多样性，早幼嗜酸性粒细胞核呈珠子状，且颗粒不明显；而中幼嗜酸性粒细胞核呈杆状，颗粒逐渐增多，细胞成熟后，细胞核呈小裂片状，颗粒则更加明显。
嗜酸性粒细胞的形态变化与其功能相关，在过敏反应和寄生虫感染等情况下会显著增加。
再次是嗜碱性粒细胞，嗜碱性粒细胞由于细胞中含有的嗜碱性颗粒与众不同而得名。
嗜碱性颗粒酶在细胞质高度嵌入，并缺乏防御膜，因此嗜碱性粒细胞容易对组织和细胞造成伤害。
嗜碱性粒细胞的形态学表现相对简单，其细胞核呈多形态，大小不定，通常为梨形或杆状，细胞浆内含有颗粒，颜色为淡蓝色。
嗜碱性粒细胞数量相对于其他细胞比较少，常在变态反应、某些病毒感染、食物过敏等情况下出现。
接着是淋巴细胞，淋巴细胞是维护机体免疫力的重要细胞之一，其分为T淋巴细胞和B淋巴细胞。
T淋巴细胞的形态学表现为细胞核呈圆形和卵圆形，且核染色质紧密，染色性质为深紫色或深蓝色，具有深染性，而浆细胞则不显色或者稍显色。
B淋巴细胞则形态各异，其最显著的特征是浆细胞的存在。
HE染色常见问题与对策
HE染色常见问题与对策HE是最基本的也是最重要的病理学染色技术.一张质量上乘的HE切片是病理医生得以做出正确诊断的关键。
许多所谓的“疑难病理案例”，大多数是由于制片质量差所造成的。
制片质量差不仅在中小医院病理科会发生,有些大医院也会出现.因为, HE染色是一种多步骤、多因素决定的实验方法，无论是手工还是机器操作,都存在着许多影响因素,甚至会出现不理想的染色结果,从而导致误判和误诊。
所以,除提高病理医生的诊断水平外,培训病理技术人员、提高技术人员的业务素质也是当务之急。
本文对HE染色中常见的几个问题及其对策，进行分析与讨论如下。
1切片在脱蜡后出现大片白色的斑点原因:由于烤（烘)片温度太低，玻片在脱蜡前没有充分烤(烘)干；切片在二甲苯停留时间不足,或二甲苯使用过久,造成脱蜡不尽。
对策:如果玻片是由于没有烤（烘）,先用无水乙醇处理去除玻片上的水分,然后重新用二甲苯脱去石蜡。
如果烤（烘）干不足的现象比较严重，可能导致切片脱落,则无法补救。
如果白色斑点是由于切片在二甲苯停留时间不足造成,或使用的二甲苯过久，切片则需退回到二甲苯停留时间相对长些,或更换二甲苯，脱色、漂白、重新染色。
2细胞核染色苍白、暗淡，即苏木精染色太淡原因:此类问题可能有3个影响因素,切片在苏木精染色液停留时间太短；苏木精染色液过度氧化，失去染色能力，不能再继续使用;分化步骤处理时间过长。
如果是骨组织细胞核暗淡,则多数是由于脱钙过度造成。
对策:切片重新染色。
如果组织在酸性固定液如Zenker、Bouin及非中性缓冲甲醛液固定时间过长,细胞核染色能力将减弱，须增加其在苏木精染色液的时间,或用一些方法增加组织的嗜碱性,以改善细胞核的着色。
例如：建议上述组织切片最好使用Weigert铁苏木精染色液；如果组织是用Zenker液固定的,可将切片脱蜡后放在5%碳酸氢钠溶液3～4 h,流水冲洗5 min后染色；如果组织是用Bouin液固定的,可将切片脱蜡后放在5％碳酸锂1 h，流水冲洗10 min后染色。
皮肤组织形态学 he染色
皮肤组织形态学he染色亲爱的读者朋友们，今天，我们将带大家走进皮肤组织形态学的大门，深入了解一种常用的染色技术——He染色。
请跟随我们的脚步，一起探索皮肤微观世界的奥秘吧！一、引言皮肤是人体最大的器官，它不仅保护我们免受外界环境的侵害，还与众多生命活动息息相关。
皮肤组织形态学是一门研究皮肤组织结构、形态和功能的学科。
而He染色，作为一种常用的皮肤组织染色技术，能够清晰地展示皮肤组织的细微结构，为病理学、组织学和遗传学研究提供了重要的实验手段。
二、He染色的原理与步骤1. 原理：He染色是一种基于氢醌单缩盐酸盐染料的染色方法，通过特定的染色步骤，可以使得皮肤组织中的某些细胞器和细胞成分显色，从而清晰地显示出皮肤组织的形态结构。
2. 操作步骤：(1)取适量皮肤组织块，用甲醛溶液固定。
(2)将固定好的组织块经过一系列的脱水和透明处理。
(3)将组织块浸入He染液中，进行染色反应。
(4)染色完成后，进行镜下观察和拍照。
三、染色效果解析He染色能够清晰地显示出皮肤组织的各种细胞器和细胞成分，如细胞核、细胞质、线粒体、内质网等。
通过这种染色方法，我们可以观察到皮肤组织的微观结构，了解皮肤细胞的种类、分布和功能。
此外，He染色还可以用于病理学研究中，对皮肤病变进行形态学诊断。
四、应用与展望He染色技术在皮肤组织形态学研究中具有广泛的应用。
首先，它为皮肤科医生提供了诊断皮肤疾病的依据，如色素痣、银屑病等。
其次，在遗传学研究中，He染色可以帮助研究人员了解基因表达和调控机制，为基因治疗提供理论基础。
此外，He染色还可用于组织工程和药物筛选等领域。
未来，随着科学技术的发展，He染色技术将不断改进和完善，为皮肤组织形态学研究提供更多便利和可能。
我们相信，在未来的研究中，He染色将会发挥更大的作用，为人类健康和医学进步做出更多贡献。
总结：He染色作为一种常用的皮肤组织染色技术，通过其独特的原理和操作步骤，能够清晰地展示皮肤组织的微观结构。
常规HE染色易出现的问题、原因及解决方法
??技术交流??常规染色易出现的问题、原因及解决方法田玉旺李琳朱红艳邢宜苗金红北京军区总医院病理科北京关键词】染色问题方法中图分类号文献标识码】文章编号——一常规染色切片质量的好坏是病理技术人员时刻关注的问题。
影响染色切片质量的因素是多方面的本文从以下几个方面详细分析原因并提出具体的解决办法供同行参考。
染色中组织切片脱落的原因组织自身原因及处理不当①组织自身原因如凝血块、血栓、干涸或过硬的组织及组织碎屑等其切片染色时易脱落②组织脱水、透明不足以致石蜡不能浸入勉强切出的片子脱蜡时收缩入水或染色后又膨胀因而易脱落③组织脱水、透明过度浸蜡时间过长或温度太高引起组织收缩硬脆导致切片不完整染色时导致脱落。
对发脆的组织可选用下面方法处理使切片完整、不易脱片①用棉球蘸氨水或冰醋酸涂抹蜡块组织表面左右②蜡块修出组织面放人冰水混合液中几分钟或用冰块贴敷组织面。
切片①切片过厚组织附贴在载玻片上不平使切片与玻片之间存有一定间隙切片与玻片之间的吸附力减弱②破碎不整齐的切片③展片水温低切片有皱褶、附贴不牢或附贴时切片下含有气泡④烤片时间短或温度低、烤片温度过高或时间过长、组织被烤焦或收缩变形发生皱褶均易脱片⑤载玻片清洗不洁净含有油脂或混入脏东西等。
故载玻片应先放人清洗液内浸泡捞出后彻底水洗乙醇进一步脱脂而后干燥箱烘干备用。
现多采用免洗载玻片效果较好。
对于特殊组织要进行特殊处理如脑、脊髓等组织捞片后不能马上直接烤片待切片与载玻片之间水分充分沥干后再放到烤片箱的铁板上进行烤片以避免切片出现气泡。
染色①脱蜡后未经自高至低的各级乙醇缓冲调解逐渐入水②染色时用水冲洗过猛或振荡过度致切片与载玻片脱离③染液或试剂的酸碱度不适宜或在其中停留时间过久如染色所用的返蓝液碱性过大时易引起切片脱落。
针对这种现象我们可以采用自来水返蓝因为自来水多呈弱碱性同样可达到返蓝目的④染色过程中切片多用盐酸乙醇进行分化工作中发现脱片也易发生在盐酸乙醇分化后。
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J Clin Ex p Pathol
1999 Aug; 15( 4)
% 361 %
影响 H E 染色细胞形态的因素探讨
杨 枫 我科自 80 年代以来 , 逐渐将 H E 染色中的染色 后乙醇脱水、 二甲苯透明步骤简化为染色后 105 烤干、 中性树胶 ( 二甲苯稀释 ) 封片 , 以缩短制 片时 间, 减少接触二甲苯的机率, 取得一定效果。但该方 法制出的切片, 细胞有明显收缩, 核浓染, 细微结构 不甚清晰, 同时部分细胞核呈黑褐色 , 如 焦化! 状 , 经缩短苏木素染色时间和用盐酸乙醇分化, 都无明 显改进。因此, 我们针对制片程序中的其他与上述 图象形成有关的因素 , 如烤片温度、 苏木素伊红染色 后直接烤干封片等设计如下实验进行探讨。 1 材料和方法 1 1 组织及蜡块 选取腺癌及淋巴结组织, 由我科 色质量好( 图 2) ; 3 号切片同 1 号切片。 在 1 2 2 中, ∀ 号切片质量最好 , # 号 切片次 之 , ∃号切片更次之, 但差别不十分明显。 在 1 2 3 中, C 号切 片质量 最好 , B 号切 片次 之 , A 号切片更次之。 3 讨论
关键词 HE 染色 ; 制片 1001 7399( 1999) 04 0361 01 中国图书分类号 R446 8 文献标识码 A 文章编号
按常规制成的蜡块及同样组织的外院会诊用蜡块各 2 枚 , 共 4 块。分别作 4 m 连续切片, 按设计条件 同时进行烤片、 染色及封片。 1 2 实验条件 1 2 1 所有切片经 105 烤 15 min( 本实验前我科 用的烤片温度, 也即漂烘仪的最高烤片温度 ) , 然后 脱蜡至水, 在苏木 素伊红染色后用 不同方法处理 : ( 1) 过无水乙醇 , 105 烤干、 封片; ( 2) 乙醇脱水 , 二 烤干、 二甲苯 甲苯透明、 封片 ; ( 3) 过无水乙醇, 105
图2 图4
4 周 WK Y 平滑肌细胞。 & 20 000 16 周 WK Y 平滑肌细胞。 & 10 000
从 1 2 1 的结果可知, 苏木素伊红染色后烤干 脱水, 直接封片和乙醇脱水、 二甲苯透明、 封片对切 片的质量影响很大。80 年代末流行的烤干脱水、 直 接封片, 虽然能减少操作步骤、 节约乙醇和二甲苯, 减少对操作者的毒害作用 , 但它对切片染色质量的 不良影响也很明显 , 说明此方法是不可取的。 从 1 2 2 结果可知 , 62 烤片 6 h 效果最好 , 但 对于标本多的单位, 烤片用 6 h 时间会影响及~ 90 烤 15~ 30 min 是可取的。虽然烤片温度的 高低对切片质量有影响 , 但不影响观察结果。 由 1 2 1 和 1 2 3 的结果可知 , 切片经 62 烤 6 h, 脱蜡至水, 苏木素伊红染色后经乙醇脱水、 二甲 苯透明, 在二甲苯尚未挥发就封片是最佳方法。但 是 , 二甲苯对操作者有毒害作用 , 为此 , 增加 1 2 3。 在 1 2 3 中 C 号切片与 B 号切片的质量有区别 , 在 一般情况下区别不大; 而 A 号与 C 号切片间区别较 明显 , 因此, 日常染色取 B 号切片法就可以了 ( 即切 片经 90 烤 15 min、 脱蜡至水、 苏木素伊红染色、 乙 醇脱水、 二甲苯透明、 凉干后封片 ) 。 此外 , 在 1 2 3 中淋巴结的 B 号与 C 号切片发 现很明显的区别。长期以来, 人们在某些 HE 切片 中见到部分细胞核 呈褐色或黑色 , 结构不清 , 形似 焦化!的物质 , 在 B 号切片就有此物质( 图 3) , 在 A 号与 C 号切片均未见 ( 图 4) , 提示核的此种变化与 二甲苯有密切关系, 但它导致该变化的机制还有待 进一步的研究 , 可能是二甲苯 挥发不净 , 留下的结 晶 ; 也可能与细胞核的 pH 值有关。
收稿日期 : 1999 03 10 作者单位 : 安徽医科大学病理学教研室 , 合肥 作者简介 : 杨 枫 , 男 , 39 岁 , 主管技师 230032
( 图片见插页第 53 页)
临床与实验病理学杂志
J Clin Ex p Pathol
1999 Aug; 15( 4)
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影响 H E 染色细胞形态的因素探讨( 正文见第 361 页)
图1
腺癌 , 烤干封片。 HE & 400
图2
腺癌 , 湿封。 HE & 400
图3
淋巴结 , 凉干封片。HE & 400
图4
淋巴结 , 湿封。H E & 400
高血压冠状动脉平滑肌细胞的形态学变化( 正文见第 365 页)
图1 图3 图5
4 周 SHR 平滑肌细胞与同龄 WK Y 相似。 & 20 000 16 周 SHR 平滑肌细胞显著肥厚。 & 10 000 罗沙坦治疗后 SH R 平滑肌细胞与同龄 SHR 相似。 & 10 000
透明、 封片。 1 2 2 所有切片用不同温度烤片后, 苏木素伊红染 色, 再按 1 2 1 中 ( 2) 方法处理。烤片温度 分别为 ( ∀ ) 62 6 h; ( # ) 90 15 min; ( ∃) 105 15 min 。 1 2 3 所有切 片经 90 15 min 烤片, 脱蜡至水 , 苏木素伊红染色后按下列 不同方法脱水、 透明、 封 片: ( A) 乙醇脱水、 凉干、 封片 ; ( B) 乙醇脱水、 二甲苯 透明、 凉干、 封片 ; ( C) 乙醇脱水、 二甲苯透明、 不干 封片 ( 即湿封) 。 2 结果 在 1 2 1 中按 ( 1) 方法处理的切片 ( 简称 1 号 片, 以下依此类推) 染色质量差 , 细胞核浓染, 核结构 不清 ( 图 1) ; 2 号切片细胞大, 细胞及核结构清晰, 染