LAMP技术在病毒检测中的应用
环介导等温可视扩增(LAMP)检测禽肺炎病毒方法的建立
LAMP技术在病原微生物检测中的应用
作者单位:1.南华大学医学院病原生物研究所,湖南衡阳421200; 2.珠海市疾病预防控制中心 通讯作者:魏泉德,E2mail:weiqd99@ ・综述・LA MP技术在病原微生物检测中的应用张如胜1,2综述,魏泉德2审校 【摘要】 环介导等温扩增(l oop2mediated is other mal a mp lificati on,LAMP)技术是近年来发展出的一种敏感、特异、方便快捷的核酸扩增技术。
与传统PCR方法相比,LAMP不需要热循环,为等温扩增,且由于LAMP反应中产生大量的副产物-白色焦磷酸镁沉淀,扩增产物可不经过电泳,通过肉眼观察或浊度计即可判定结果。
因此LAMP是一种不需要热循环仪、肉眼即可判定结果的高度特异和敏感的DNA扩增方法,适合于现场、战时野外或条件较差的实验室进行病原微生物的快速检测。
近年LAM P技术在病原微生物检测方面已有广泛应用,本文就这一方面的研究进展作一综述。
【关键词】 环介导等温扩增; 病原微生物 中图分类号:R37 文献标识码:A 文章编号:1671-5039(2007)05-0045-05 目前对病原微生物的检测主要依靠病原体分离法、免疫学方法和各种PCR方法。
病原体分离虽然是金标准,但繁琐费时;免疫学方法的特异性和敏感性均较低;PCR方法敏感、准确、快速,可替代病原学检测,但由于需要昂贵的仪器设备、较高检测费用以及对检测人员较高的技术要求而使其不适用于现场快速检测及基层普及应用。
NOT OM I等[1]于2000年报道了一种新型的等温核酸扩增方法,即环介导等温扩增法(l oop2mediated is other mal a mp lifica2 ti on,LAMP),该法针对靶基因的6个区域设计4条特异引物,利用一种链置换DNA聚合酶(B st DNA poly merase)在恒温条件(65℃左右)保温约60m in,即可完成核酸扩增反应,扩增出LAMP特征性梯状条带。
LAMP技术在动物病毒病原检测中的应用进展
（ １ ．Ｃｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｂ ｏ ｅ ｇ ｒ ” ｇ，Ｈｅ ｎ ａ ｎ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｔｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇｙ，Ｚｈ ｅ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ ４ ５ ０ ０ ０ １ ，Ｃｈ ｉ ｎ ａ
中 图分 类号 ： Ｒ ３ ７ ３ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ２ —２ ６ ９ ４ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ２ ｎ ｍｅ ｄｉ ｃ ｉ ｎａ ｌ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ｅ ｓ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｂ ｙ ｌ ｏ ｏ ｐ。 ｍｅ ｄ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ ｉ ｓ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ｍａ ｌ ａ ｍ ｐｌ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎｏ ｌ ｏ ｇ ｙ
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对虾白斑综合征病毒可视化环介导等温扩增(LAMP)检测技术的建立与应用
岸 检疫 ， 甚至 海洋 生态监 测 中对 ＷＳ Ｓ Ｖ进行 现场检 疫 。 关键 词 对虾 ， 白斑综 合征病 毒（ ｗｓ ｓ ｖ ） ， 环 介导 等温扩 增技 术（ Ｌ Ａ ＭＰ ） ， 检 测
Ｄｅ ｖ ｅ ｌ ｏ ｐ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｎ ｄ Ａｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｖｉ ｓ ｕ ａ ｌ Ｌｏ ｏ ｐ Ｍ ｅ ｄ ｉ ａ ｔ ｅ ｄ Ｉ ｓ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ｍａ ｌ
焦 磷酸 根 离子 ， 此时 焦磷 酸 根 离子 竞 争性 与 Ｍｎ 结合 ， 形 成稳 定 的不溶 性焦 磷 酸盐 沉 淀 ， 钙黄 绿 素被 释
放 而发 出 肉眼可 见 的黄 绿色 荧 光 。该 扩 增一 次 性反 应 约 ６ ０ ｍｉ ｎ即可 完 成对 待检 样 品 的检 测 。经 测 定 ， 本 方法 能特异 性地检 测 出 阳性样 品 中的 ＷＳ Ｓ Ｖ 目的基 因 ， 并 能通过 扩增 产物所 产生 的黄绿 色变 化与 阴性 样 品 区别 ； 本 技 术对 目的基 因的 最低 检测 量 为 １ ｆ ｇ 。在 临 床检 测试 验 中， ＷＳ Ｓ Ｖ － Ｌ Ａ ＭＰ与 世 界动 物 卫生 组 织（ ＯＩ Ｅ ） 推 荐 的 ＷＳ Ｓ Ｖ － Ｐ Ｃ Ｒ检测 方法均 能从 ２ ５ ０ 份对 虾样 品中， 同时检测 到 １ ５ 份编 号相 同的阳性 样 品， 符 合 率达 １ ０ ０ ％。除 此 之 外 ， ＷＳ Ｓ Ｖ － Ｌ Ａ ＭＰ还 能 从 另 外 ３ 份Ｐ Ｃ Ｒ检 测 为 阴性 的样 品 中检 测 到 目的基 因 。
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LAMP方法及其在病原微生物检测中的应用_吴禹熹
LAMP
LAMP（环介导等温扩增）技术2011-07-28 11:46 来源：北京蓝谱点击次数：1341 关键词：LAMP PCR技术环介导等温扩增分享到：收藏夹腾讯微博新浪微博开心网PCR方法在人类及动植物疾病基因诊断、食品分析和环境监测等领域发挥着举足轻重的作用，其灵敏度高、特异性好，是目前最精准的基因诊断方法。
然而PCR方法操作起来较复杂，对仪器和人员要求比较高，不适合基层或现场快速诊断，因此在国内的推广速度并不是很快。
2000年日本学者Notomi在Nucleic Acids Res杂志上公开了一种新的基因诊断技术，即LAMP (L oop-mediated isothermal amplification),中文名为“环介导等温扩增反应”，受到了世卫组织WHO、各国学者和相关政府部门的关注，短短几年，该技术已成功地应用于SARS、禽流感、HIV等疾病的检测中，在这次甲型H1N1流感事件中，日本荣研化学公司接受WHO的邀请进行H1N1 LAMP试剂盒的研制。
通过荣研公司近十年的推广，LAMP技术已广泛应用于日本国内各种病毒、细菌、寄生虫等引起的疾病检测、食品化妆品安全检查及进出口快速诊断中，并得到了欧美国家的认同。
LAMP方法的优势除了高特异性、高灵敏度外，操作十分简单，对仪器设备要求低，一台水浴锅或恒温箱就能实现反应，结果的检测也很简单，不需要像PCR那样进行凝胶电泳，LAMP反应的结果通过肉眼观察白色浑浊或绿色荧光的生成来判断，简便快捷，适合基层快速诊断。
可以预见，在未来的基因诊断领域，LAMP方法将占据大壁江山。
目前，在万方数据库搜索LAMP文章500多篇。
详见：/paper.asp x?q=loop-mediated+isothermal+amplification&o=sortby+CitedCount+CoreRank+date+relevanc e%2fweight%3d5&f=top&n=10&p=11. 优缺点介绍：LAMP方法优点：灵敏度高（比传统的PCR方法高2～5个数量级）；反应时间短（30～60min就能完成反应）；临床使用不需要特殊的仪器（试剂盒研发阶段推荐用实时浑浊仪）；操作简单（不论是DNA还是RNA，检测步骤都是需将反应液、酶和模板混合于PCR管中，置于水浴锅或恒温箱中63℃左右保温30～60min，肉眼观察结果）。
环介导等温扩增技术在植物寄生线虫检测中的应用
环介导等温扩增技术在植物寄生线虫检测中的应用王一椒（上海辰山植物园，上海201602）摘要植物寄生线虫是世界各地农林业生产中一种重要的生物胁迫，在早期快速、准确地鉴定出植物寄生线虫种类是减少其危害的重要前提。
环介导等温扩增（LAMP）技术因在实际操作中具有简易、快速和灵敏等特点，已被广泛应用于多种植物病原体的检测和诊断。
本文主要就LAMP技术在伞滑刃线虫、根结线虫、孢囊线虫、短体线虫、滑刃线虫、粒线虫等重要植物寄生线虫检测中的应用研究情况进行了综述，以期为针对不同的植物寄生线虫开发和选用最佳的LAMP检测方法提供参考。
关键词环介导等温扩增（LAMP）技术；植物寄生线虫；检测中图分类号S433文献标识码A文章编号1007-5739（2023）11-0105-05DOI：10.3969/j.issn.1007-5739.2023.11.029开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Application of Loop-mediated Isothermal Amplification Technology in Detecting PlantParasitic NematodeWANG Yijiao(Shanghai Chenshan Botanical Garden,Shanghai201602)Abstract Plant parasitic nematode is an important biological stress in agricultural and forestry production around the world.Rapid and accurate identification of plant parasitic nematode species in the early stages is an important prerequisite to reduce their harm.Loop-mediated isothermal amplification(LAMP)technology has been widely used in the detection and diagnosis of many plant pathogens due to the advantages of simpleness,quickness and acuteness in operation.This paper reviewed the research progress on the application of LAMP in important plant parasitic nematodes, such as Bursaphelenchus,Meloidogyne,Heterodera,Pratylenchus,Aphelenchoides and Anguina,in order to provide a reference for developing and selecting the optimal LAMP detection method for different plant parasitic nematodes.Keywords loop-mediated isothermal amplification(LAMP)technology;plant parasitic nematode;detection植物寄生线虫是指能寄生于植物的根系、幼芽、茎、叶、花、种子等组织，使植物发育不良，并且在感染寄主的同时会传播其他植物病原，造成植物出现疾病症状的一类线虫。
马视LAMP技术对人乳头瘤病毒18亚型检测的应用价值研究
Hale Waihona Puke ・ 论 著 ・ 目视Ｉ Ａ ＭＰ 技术对人乳头瘤病毒１ ８ 亚型 检测 的应用价值研 究
唐 宏 霞 熊学峰 秦 志 强 周 晓农 １ ． 湖南省益阳市赫 山区妇幼保健 院， 湖南益阳 ４ １ ３ ０ ０ ２ ； ２ ． 中国疾病预 防控制中心寄生虫病预 防控制所， 上海 ２ ０ ０ ０ ２ ５
Ｈｕ ｍａ ｎ ｐ ａ ｐ ｉ ｌ ｌ ｏ ｍａ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ｔ ｙ ｐ ｅ ｌ ８ （ ＨＰ Ｖ １ ８ １ ｆ ｒ ｏ ｍ ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｍｅ ｎ ｓ ． Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ Ｉ ｔ ｉ ｓ ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｚ ｅ ｄ ｂ ｙ ｅ ｍｐ ｌ ｏ ｙ ｉ ｎ ｇ ａ ｓ ｅ ｔ
【 摘要 】目的 探 讨环介 导等 温扩 增技术 用于 检测 临床标本 乳 头瘤病 毒 ＨＰ Ｖ１ ８ 亚 型 的应用价 值 。 方法 设计 针对
Ｈ Ｐ Ｖ１ ８ － Ｌ １基 因序列 中 ６ 个 区段 的 ４条特异 引物 ， 在等温 条件下 （ ６ ５ ℃） 进 行核酸 扩增反应 １ ｈ ， 在扩增前加入 钙黄
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LAMP技术在病毒检测中的应用发表时间：2013-01-31T16:04:31.107Z 来源：《医药前沿》2012年第31期供稿作者：吴昊1 孙立新2 叶松1 陆军1 杨庆贵2[导读] LAMP（Loop-mediated Isothermal Amplification）环介导等温扩增技术，是近年来新兴的分子生物学检测技术吴昊1 孙立新2 叶松1 陆军1 杨庆贵2（1安徽理工大学医学院病原生物教研室安徽淮南 232001）（2江苏出入境检验检疫局医学媒介生物监测实验室江苏南京 210001）【摘要】LAMP（Loop-mediated Isothermal Amplification）环介导等温扩增技术，是近年来新兴的分子生物学检测技术。
因其特异性强、等温扩增，反应灵敏、操作简单、产物易检测，此项技术已被用于多种病原微生物的检测。
本文综述了LAMP技术的原理以及其在几种常见病毒检测项目中的应用。
【关键词】 LAMP 技术原理病毒检测【中图分类号】R319 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）31-0064-02病原微生物带来的卫生问题时常出现，各种检测手段也不断更新。
但由于非特异性扩增、反应操作程序复杂、及仪器昂贵等问题，很多方法在疾病爆发时筛查现场和监测站点的应用受到限制。
LAMP技术是由日本学者Notomi等[1]在2000年开发的一种新型快速的扩增技术，它能在一定温度范围内，通过一个步骤在短时间内对目的片段进行大量有效扩增。
其具有高特异性、高效性、快速、低成本、易检测、结果易观察等特点，被广泛用于各种病原体检测和研究中并取得了一定的成就。
1 LAMP技术原理1.1 扩增机制LAMP技术利用能够特异性识别靶序列上的6个独立区域的两对内、外引物，及具有链置换活性的BstDNA聚合酶启动循环链置换反应来进行靶序列的扩增[1]。
反应中，先由外部引物将内部引物扩增所需要的模板扩增出来，然后由内部引物对靶基因片段进行引导合成。
由于内部引物所扩增出的片段含有与该引物5’端DNA片段的反相互补序列，因此这些反相互补序列之间形成茎-环结构，同时，另外一条内部引物与也可形成茎-环结构，片段的两端形成哑铃状结构，如此循环往复的过程最后形成花椰菜形状的茎-环结构，可在15min-60min之内实现109-1010倍的括增[2]。
1.2 结果观察扩增后可以通过琼脂糖电泳后染色进行观察，更可通过扩增衍生物焦磷酸镁进行观察：阳性的样本会出现白色浑浊沉淀，而阴性则无此现象。
同时也可以应用SYBR Green I染色，呈现绿色的为阳性，橙色的为阴性[2]。
2 病毒检测2.1 日本脑炎病毒日本脑炎又称乙脑，是由日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus)引起的一种常见的蚊媒传染病。
JEV的检测方式很多，如血清学，病毒分离等，但耗时繁琐、敏感性特异性都较低。
TORINIWA等[3]利用LAMP技术原理建立了快速Real-time RT-LAMP方法，该方法通过扩增JEV病毒的包膜（E）蛋白基因来定量检测JEV病毒，可将检测用时缩短至1h，检测下限为1PFU并与常规RT-PCR具有相似的敏感性。
且不需特殊设备、操作方便，有利于推广其在基层的应用。
2.2 西尼罗河病毒西尼罗河病毒（West Nile Virus，WNV）是引起西尼罗河热的病原体，近年来在世界部分地区的流行并造成了重大的损失。
PARIDA 等[4]创立了一种一步法来检测WNV，通过凝胶电泳或者浊度仪来对扩增结果进行判定。
结果显示其敏感性比常规RT-PCR高10倍。
2.3 甲型流感病毒甲型流感病毒（AIV)具有高度传染性，致病性，以及致死率。
对甲流病毒的检测方法主要为病毒分离，抗原和抗体检测以及PCR方法，但是过程费时繁琐。
POON等[5]设计了特异性引物，利用LAMP技术成功的检测了H1-H3型的AIV，与PCR方法比较阳性符合率为100%，敏感度可达传统方法的100倍。
LAMP技术由于其检测的简便快速且高度敏感，可更多的用于现场检测。
2.4 禽流感病毒的检测禽流感是由禽类A型流感病毒引起的一种急性、高接触性的传染病，可带来重大损失。
禽流感检测方法有各类血清学试验以及免疫学实验等。
这些方法都存在着如试验周期较长，操作繁琐，检测材料受限制等不足。
国内李启明等[8]对H5N1亚型禽流感病毒进行了RT-LAMP检测，验证和分析后证明其特异性与常规方法一致，并且其灵敏度可达到10个拷贝。
侯佳蕾等[6]根据H5亚型禽流感病毒血凝素基因序列设计了引物，并建立了一种针对性的检测诊断方法。
结果表明，该方法的灵敏度高于一步RT-PCR法。
2.5 口蹄疫病毒的检测口蹄疫是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的一种急性，热性，高度接触性传染病，主要侵害偶蹄兽并给经济带来极大威胁。
血清学检测不足以确定整群动物是否带毒而PCR方法由于需要专门的仪器。
吴绍强等[7]以灭活的亚洲I型口蹄疫细胞培养病毒为材料，设计引物并建立了口蹄疫病毒RT-LAMP检测法，为口蹄疫现场快速检测提供了有效的方法。
2.6 丙型肝炎病毒（HCV）的检测HCV是一种常见的病毒，传播途径为母婴传播和血液传播。
目前最常用的方法是ELLSA法检测抗原抗体或PCR法。
但是由病毒的抗原量极少，所以常规免疫学方法常无法检测出病毒。
PCR方法操作复杂繁琐，特异性较低。
李启明等[8]利用LAMP技术的原理，利用特殊引物进行了LAMP扩增，成功的检测HCV基因，实验结果阳性符合率高达98%。
这一成果证实了LAMP技术的优势。
2.7 严重急性呼吸窘迫综合征冠状病毒（SARS-CoV）的检测SARS带来的阴影提醒人们对此类病毒检测的重要性。
目前临床上对其检测的方法主要有2种。
一是检测SARS-CoV抗体，虽然此法灵敏度较高，但在发病初期不能检出。
二是Real-time PCR，这种方法可在发病早期检测出SARS-CoV，但是其需要熟练操作技术以及高成本仪器，不适于常规筛查。
POON等[9]利用改良LAMP法对人群的鼻咽分泌物样本进行了检测。
结果显示SARS病人中的SARS-CoV检出率为64%，且随着病情的发展检出率进一步提高。
HONG[10]等根据LAMP原理设计的方法对来自越南河内SARS流行期间的病人和健康人标本进行检测，结果证明RT-LAMP法的灵敏度是RT-PCR的100倍，且更加省时，经济简便。
2.8 其他病毒的检测LAMP技术还在诺瓦克病毒、单纯疱疹病毒、腮腺炎病毒、乙型肝炎病毒、小颗粒病毒、病毒性出血性、败血症病毒、伪狂犬病毒、尧新城疫病毒等的检测中得到了应用。
3 结语综上所述，LAMP技术是一种不需要特殊仪器设备且便捷灵敏而又快速的检测手段。
能够在现场对样本进行快速准确的检测。
但由于其易受污染导致假阳性，所以相关的技术以及体系需要进一步的优化和革新。
相信LAMP技术会在不远的将来得到更加广泛的应用和更高的价值体现。
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