交叉配血(凝聚胺法)
凝聚胺交叉配血原理
凝聚胺交叉配血原理凝聚胺交叉配血是一种常用的血型鉴定方法，用于确定血液供体和受体之间的血型匹配情况。
它基于凝集反应的原理，在试剂中加入指定的抗体，观察是否发生凝集反应来判断血型是否匹配。
凝聚胺交叉配血的原理如下：1. 凝集反应原理：凝集反应是指抗原与抗体结合形成凝集或沉淀的现象。
在血液中，红细胞表面存在着不同的血型抗原，而血浆中有相应的抗体。
当抗原与抗体之间存在亲和力时，它们会相互结合形成凝集物。
如果血液中的抗原和试剂中的抗体匹配，会发生凝集反应。
2. 凝聚胺的选择：凝聚胺交叉配血试剂中的抗体一般选择具有高特异性的抗体，可以与血型抗原结合并引起凝集反应。
常见的凝聚胺试剂包括抗A、抗B和抗Rh(D)。
3. 血型抗原和抗体：人类血液的主要血型系统有ABO和Rh系统。
在ABO系统中，血型分为A型、B型、AB型和O型，根据红细胞表面的抗原不同来进行分类。
在Rh系统中，分为Rh(D)阳性和Rh(D)阴性两种。
4. 实验操作：首先取一定量的受捐者的血液样品和供者的红细胞，然后分别与特定的凝聚胺试剂混合，观察是否出现凝集反应。
如果受捐者的血液样品与凝聚胺试剂发生凝集反应（凝结或沉淀），即表示受捐者的血型抗原存在于供者的红细胞中，血型匹配成功。
凝聚胺交叉配血的工作步骤如下：1. 准备试剂：制备含有特定抗体的凝聚胺试剂。
2. 取样本：取受捐者和供者的血液样本。
3. 混合试剂与血液：将受捐者的血液样本分别与A、B和Rh(D)的凝聚胺试剂混合，同时将供者的红细胞与凝聚胺试剂混合。
4. 观察凝集反应：置于理化条件下，如37C恒温水浴中孵育，观察试管内是否出现红细胞凝结或沉淀的现象。
5. 结果判定：根据血型抗原和试剂的凝集反应结果，分析受捐者和供者的血型匹配情况。
凝聚胺交叉配血的原理简单明了，操作简便，但也存在一些限制。
比如，它只能确定ABO和Rh(D)系统的血型匹配情况，而不能确定其他血型系统的匹配情况；另外，由于抗体抗原之间的互作用性，也会出现一些特殊的血型现象，如假性血型，需要进一步的检测和确认。
凝聚胺法交叉配血的临床意义
凝聚胺法交叉配血的临床意义
凝聚胺法交叉配血是一种常用于临床血液输注的方法，其主要作用是在进行输血前排除患者体内存在的抗体，以防止发生血液不相容反应。
这种方法基于血纤维蛋白凝集反应，可以通过观察血液凝结的程度来判断是否存在抗体，从而选择合适的血液供应者，提高输血的安全性和有效性。
凝聚胺法交叉配血在临床上具有重要的意义。
首先，凝聚胺法交叉配血可以避免血液不相容反应的发生。
血液不相容反应是指输注不匹配的血液成分后，患者体内的抗体与供血者的血液发生反应，导致溶血等严重后果。
通过使用凝聚胺法交叉配血，可以事先检测出患者体内的抗体，并将其与供血者的血液进行对比，从而避免使用不相容的血液成分，减少发生不良反应的风险。
其次，凝聚胺法交叉配血可以提高输血的安全性。
通过对患者体内的抗体进行筛查，并选择与之相匹配的供血者，可以显著降低输血相关的并发症和风险。
这种方法可以避免输注错误血型、不匹配的Rh因子等情况，减少输血引起的不良反应和并发症，更好地保障患者的生命安全。
此外，凝聚胺法交叉配血还可以提高输血的有效性。
通过事先排除患者体内的抗体，可以避免抗体与供血者的血液发生反应，血液成分的输注得到更好的保持和有效利用。
这将有助于提高患者的营养供给，增强免疫系统功能，促进恢复和康复。
总而言之，凝聚胺法交叉配血在临床上具有重要的意义。
通过排除患者体内的抗体，选择合适的供血者，可以避免血液不相容反应的发生，提高输血的安全性和有效性。
这种方法在临床实践中被广泛应用，为患者提供更安全、更有效的血液输注服务。
凝聚胺法交叉配血标准操作规程
凝聚胺法交叉配血标准操作规程1.目的规范凝聚胺法交叉配血标准操作程序。
2.原理红细胞表面带有大量的负电荷，以避免其产生自发性聚集，当红细胞悬浮在电解质时，阳离子会被红细胞的负电荷所吸引,此时红细胞则被扩散的双层离子云所围绕,而形成Zeta电位， Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。
凝聚胺技术首先利用低离子溶液（LIM），降低介质的离子强度，减少红细胞细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（血浆）中的抗体结合。
其后，加入凝聚胺(Polybrene)溶液，它是一种高阶阳离子多聚物、肝素中和剂，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性的凝聚。
最后加入悬浮液（Resuspending）， Resuspending具有中和凝聚胺(Polybrene)的作用，使正常的红细胞非特异性凝聚散开，试验结果为阴性；但如果红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。
3.试剂由珠海贝索生物技术有限公司生产的凝聚胺法试剂盒，其组成：3.1低离子介质(LIM) 2×130ml。
3.2凝聚胺(Polybrene)溶液2×20ml。
3.3 Resuspending溶液2×20 ml4.仪器4.1 80-2离心机：上海医疗器械有限公司4.2电热恒温水浴箱：上海精宏实验设备有限公司4.3 OLYMPUS显微镜：日本5.操作步骤及结果判断按照试管法血型鉴定检验标准操作程序进行受血者血型鉴定, 并将鉴定结果写于申请单，并签名。
以“同型输注”为原则，取相对应的成分血源进行交叉配血。
5.1取洁净小试管2支,分别标明主、次侧管。
5.2于主侧管中加入受血者血浆2滴和供血者3-5%红细胞悬液1滴,次侧管中加入供血者血浆2滴和受血者3-5%红细胞悬液1滴, 轻轻混匀离心1000r/分钟, 仔细观察有无凝集,无凝集则可进行下一步骤,若有凝集则查找原因。
交叉配血操作规程凝聚胺法
交叉配血操作规程凝聚胺法交叉配血是指将一定数量的输血者的红细胞与另一组供血者的血清进行混合，通过观察混合血后是否发生凝集反应来确定血型。
交叉配血操作主要采用凝聚胺法进行，以下是交叉配血操作规程的详细步骤。
1.准备工作a.配置所需试剂，包括输入血浆、配血瓶、试剂盘、标本管、溶血酶溶液、配血盘等。
b.通过测定输血者和供血者的血型，确认双方的血型信息，并记录在相关记录表中。
2.标本采集a.采集输血者和供血者的静脉血标本，放入标本管中，避免血样凝固。
b.标本采集的相关操作要符合严格的无菌原则，确保血样的无菌及安全性。
3.标本处理a.将标本管中的静脉血标本置于冰上，在4℃下保存。
b.用溶血酶溶液处理输血者的红细胞，将3滴红细胞加入到每一个配血瓶中，轻轻摇动混合均匀。
4.试剂配置a.将配血盘中的试剂盘取出，配置新鲜的抗血型血清和已知血型标准红细胞。
5.凝胶装配a.打开凝胶洞口，将配血盘的试剂盘放入凝胶洞中。
b.确保试剂盘的位置正确，使试剂液体触及到凝胶洞的底部。
6.样本混合a.取出保存在冰上的输血者和供血者的静脉血标本，放置于试剂盘的对应位置。
b.轻轻旋转试剂盘，使血样和试剂充分混合起来，注意避免搅拌过于激烈。
7.观察凝聚反应a.在一定的时间内，观察配血盘中是否发生凝聚反应。
b.根据凝聚反应的情况，判断输血者和供血者的血型是否兼容。
8.结果判读a.若输血者的红细胞与供血者的血清发生凝聚反应，表示两者的血型不兼容，不适合进行输血。
b.若输血者的红细胞与供血者的血清没有发生凝聚反应，表示两者的血型兼容，可以进行输血。
9.记录和报告a.记录每次交叉配血的操作过程和结果，包括输血者和供血者的血型信息、配血的凝聚反应情况等。
b.报告输血者的血型结果和是否适合进行输血。
交叉配血操作规程凝聚胺法主要是通过观察凝聚反应来判定血型的兼容性，该方法操作简单、结果可靠。
但需要注意的是，交叉配血结果只能作为指导输血的参考依据，还需要综合考虑患者的临床情况和输血指征等因素，确保安全有效地进行输血操作。
交叉配血凝聚胺法
交叉配血（凝聚胺法）1. 原理凝聚胺（polymatching）法首先利用低离子介质降低溶液的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，促进血清（浆）中的抗体与红细胞相应抗原结合，再加入带亚电荷的高价阳离子多聚物-凝聚胺溶液，中和红细胞表面的负电荷，缩短细胞间距，形成可逆的非特异性聚集，并使IgG 型抗体直接凝集红细胞。
加入中和液后，仅由凝聚胺引起的非特异性聚集，会因电荷中和而分散，而由抗体介导的特异性凝集则不会分散。
2. 标本采集：2.1 标本种类：抽取静脉血3-4ml待凝固后分离血清，将细胞配成5％盐水悬液将供血者血样以同样方法分离血清(浆)和红细胞悬液。
2.2 标本要求：抗凝和干燥管均可，如用抗凝血主张用EDTAK2（mg/dz）抗凝标本应无溶血，切标签齐全。
3. 标本储存：急诊标本30分钟内完成操作，标本应至4℃冰箱保存7天。
4. 标本运输：室温运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染。
溶血标本，标签不齐全不能作测定。
6. 试剂：6.1 试剂名称：凝聚胺试剂(polymatching)6.2 试剂生产厂家：(台资)珠海贝索生物技术有限公司。
6.3 试剂组成：试剂1. 低离子介质(LowLonic Medium，LIM).试剂打开使用后，可置室温贮存，未开封者2-25度贮存，有效期为2年。
试剂2. 凝聚胺溶液(PolybreneSolution).贮存及有效期同上。
试剂3. 重悬液(ResuspendingSolution).贮存及有效期同上。
试剂4. 8.5％生理盐水。
7. 仪器：7.1 血型血清离心机：80-2型离心机江苏金坛市大地自动仪器厂7.2 离心机：江苏金坛市大地自动仪器厂7.3 电热恒温水箱：江苏金坛市医疗器械厂7.4 显微镜：XSZ-H3(中国）8. 操作步骤及结果判断：8.1 供受者红细胞用生理盐水配成3-5％的细胞悬液。
加样量均为：血清2滴，红细胞悬液1滴。
主管：受血者血清+供者红细胞悬液;次管：受者红细胞悬液+供者血清;(阴阳对照管另设)。
血库输血科交叉配血试验 (凝聚胺法)
10．操作过程中，①必须先排好试管，并做好标记；②每进行一步操作，必须进行一次核对。
11．结果判断必须先肉眼观察，再进行显微镜观察。注意观察弱凝集和排除非特异性凝集。
6．如果不凝集，可能是标本中含有肝素。如洗肾病人的标本或其他干扰存在，此时需多加2-4滴*2凝聚胺溶液以中和肝素或干扰因子。
7．0.85%氯化钠溶液启用时，及时贴上启用时间；超期的溶液要及时更换。使用过程中，怀疑污染到溶液时或配血结果可疑时，必须更新该溶液。
8．受血者标本有效期为三天；若受血者抽取标本后，输用过血液或血液制品，且输用时间超过12小时的，必须重新采集标本。2%红细胞悬液要求准确，必要时用生理盐水洗涤红细胞后重新配制。
3．再滴入2滴*2凝聚胺溶液，轻轻混匀，于室温下静置15秒。
4．3400rpm离心1分钟，然后把上清液倒掉，管底保留大约0.1ml的液体。
5．目测红细胞有无变成凝块，如果没有凝块，则必须重做，（请看注意事项6）。重做后仍然没有凝集现象出现，可能试剂失效。
6．各滴入2滴*3复悬液，并轻轻混匀，观察结果。若为凝聚胺引起的非免疫性凝集，应该在1分钟内散开；若是异体抗体所引起的免疫性凝集，则不会散开。
7．倒在玻片上用显微镜观察有无凝集。如有凝集反应，表示不合，此供血者的血液不适合病人使用；如无凝集反应，表示供血者的血液适合病人输注。
ＸＸＸＸ医院
血库
文件编号：
ABCD-SOP-10
交叉配血试验（凝聚胺法）
版序：abcd
页码：第3页，共4页
如果想进一步检测Anti-K抗体，则必须继续做辅助性的抗球蛋白试验，步骤如下：
交叉配血试验
注 意 事 项
1.洗涤要迅速，中途不能停，洗彻底。 1.洗涤要迅速，中途不能停，洗彻底。 洗涤要迅速 2.严格把握离心速度和时间。 严格把握离心速度和时间 2.严格把握离心速度和时间。 3.观察结果时 观察结果时， 轻摇。 3.观察结果时，须轻摇。 4.冷凝集素 脐血有网织红细胞、洗涤不充分、 冷凝集素、 4.冷凝集素、脐血有网织红细胞、洗涤不充分、抗人球 蛋白血清中含有抗运铁蛋白 可使红细胞凝集。 抗运铁蛋白， 蛋白血清中含有抗运铁蛋白，可使红细胞凝集。 5.先盐水观察， 溶血标本弃用 先盐水观察 弃用。 5.先盐水观察，有溶血标本弃用。 6.加阳性 阴性对照。主侧次侧交叉结束后， 加阳性、 6.加阳性、阴性对照。主侧次侧交叉结束后，加1滴阳性 对照细胞，离心后应有红细胞凝集，若不凝需重做。 对照细胞，离心后应有红细胞凝集，若不凝需重做。 7.抗人球试验费时 繁琐， 灵敏度好、特异性强。 抗人球试验费时、 7.抗人球试验费时、繁琐，但灵敏度好、特异性强。
实验二 交叉 掌握凝聚胺交叉配血法的原理、方法。 原理 红细胞表面带有大量的负电荷，凝聚胺 溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞 表面的负电荷，缩短红细胞之间的距离，使 红细胞产生非特异性的集聚。悬浮液具有中 和凝聚胺的作用，使正常的红细胞非特异性 凝集散开，试验结果为阴性；如果红细胞被 相应的抗体致敏，则凝集就不会散开，试验 结果为阳性。
思考题
1、哪些因素可影响抗人球蛋白交叉 配血试验结果。 2、比较抗人球蛋白和凝聚胺交叉配 血试验的原理、方法和异同点。
镜、离心机、37℃水浴箱。 37℃水浴箱 37℃水浴箱
试剂 抗人球试剂（多抗）、生理盐水。 标本 静脉血。
操 作
1.标记试管 标记试管，标明主侧、次侧 标记试管 2.加样 加样 主侧管：供血者3～5%悬红1滴+受血者血清2滴 主侧管 + 次侧管：受血者3～5%悬红1滴+供血者血清2滴 次侧管 + 3.离心15秒,观察是否凝集 离心15 离心15秒 4.混匀，37℃水浴30min，盐水洗涤3次（快）， 扣干。 5.加抗人球蛋白试剂1滴，混匀，离心15秒。 6.轻摇 轻摇，观察结果。 轻摇
凝聚胺法交叉合血操作说明
凝聚胺检测试剂盒使用说明书【产品名称】通用名：凝聚胺测试剂盒英文名：Polybrene Kit【包装规格】100人份/盒【预期用途】本产品用于交叉配血、抗体的筛查及鉴定，不适用于血源筛查。
【检验原理】凝聚胺是一种多价阳离子氨基聚合物，它可以引起红细胞的可逆性凝集。
低离子介质促进红细胞与相应抗体的结合后，在凝聚胺作用下，红细胞发生凝集，加入再悬液后，如果存在不完全抗体，细胞将不会散开，发生不可逆凝集，表明交叉配血不合或存在不完全抗体；反之凝集的细胞将均匀散开，表明交叉配血相合或不存在不完全抗体。
【主要组成成份】1、凝聚胺溶液（0.5%凝聚胺、0.9%氯化钠）10mlx12、低离子介质（5%葡萄糖、0.2%乙二胺四乙酸二钠）10mlx23、再悬液(3.5%柠檬酸、2%葡萄糖) 10mlx14、阳性对照（效价为16的IgG型抗D试剂）1mlx1【储存条件及有效期】2~8℃ 保存，有效期为12个月。
试剂开封后2~8℃ 保存，自开封之日起3个月内使用。
【使用仪器】离心机离心力和离心转数的换算公式为：rpm=299√g/r（r为离心半径，单位：cm）。
【样本要求】1、交叉配血:静脉抗凝全血，抗凝剂为EDTA.Na2、柠檬酸等，2~8℃保存48小时。
2、抗体筛查：采集静脉血于血清分离管中，2000 rpm，离心5分钟，收集血清。
采集静脉血于抗凝管中，2000rpm，离心5分钟，收集血浆，抗凝剂为EDTA.Na2、柠檬酸等，2~8℃ 保存48小时，或-20℃ 保存12个月。
不能用于发生溶血、黄疸及高脂的样本检测。
【检验方法】操作前，将所有试剂平衡至室温。
一、交叉配血试验1、标识:取试管2支，分别标明主、次侧管；另取试管2支，分别标明阳性、阴性对照管。
2、加样：主侧管加受血者血浆100μl（两滴）、献血者红细胞（3~5%）50μl（一滴）、低离子介质200μl（4滴）；次侧管加献血者血浆100μl（2滴）、受血者红细胞（3~5%）50μl（1滴）、低离子介质200μl（4滴）；阳性对照管加阳性对照100μl（2滴）、O型RhD+红细胞（3~5%）50μl（1滴）、低离子介质200μl（4滴）；阴性对照管加生理盐水100μl（2滴）、O型RhD+红细胞（3~5%）50μl（1滴）、低离子介质200μl（4滴）。
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精心整理
交叉配血（凝聚胺法）
1.原理
凝聚胺（polymatching）法首先利用低离子介质降低溶液的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，促进血清（浆）中的抗体与红细胞相应抗原结合，再加入带亚电荷的高价阳离子多聚物-凝聚胺溶液，中和红细胞表面的负电荷，缩短细胞间距，形成可逆的非特异性聚集，并使IgG型抗体直接凝集红细胞。
加入中和液后，仅由凝聚胺引起的非特异性聚集，会因电荷中和而分散，而由抗体介导的特异性凝集则不会分散。
2.标本采集：
2.1标本种类：抽取静脉血3-4ml待凝固后分离血清，将细胞配成5％盐水悬液将供血者血样以同样方法分离血清(浆)和红细胞悬液。
2.2标本要求：抗凝和干燥管均可，如用抗凝血主张用EDTAK2（mg/dz）抗凝标本应无溶血，切标签齐全。
3.标本储存：急诊标本30分钟内完成操作，标本应至4℃冰箱保存7天。
4.标本运输：室温运输。
5.标本拒收标准：细菌污染。
溶血标本，标签不齐全不能作测定。
6.试剂：
6.1试剂名称：凝聚胺试剂(polymatching)
6.2试剂生产厂家：(台资)珠海贝索生物技术有限公司。
6.3试剂组成：
试剂 1.低离子介质(LowLonicMedium，LIM).试剂打开使用后，可置室温贮存，未开封者2-25度贮存，有效期为2年。
试剂2.凝聚胺溶液(PolybreneSolution).贮存及有效期同上。
试剂3.重悬液(ResuspendingSolution).贮存及有效期同上。
试剂4.8.5％生理盐水。
7.仪器：
7.1血型血清离心机：80-2型离心机江苏金坛市大地自动仪器厂
7.2离心机：江苏金坛市大地自动仪器厂
7.3电热恒温水箱：江苏金坛市医疗器械厂
精心整理
精心整理
7.4显微镜：XSZ-H3(中国）
8.操作步骤及结果判断：
8.1供受者红细胞用生理盐水配成3-5％的细胞悬液。
加样量均为：血清2滴，红细胞悬液1滴。
主管：受血者血清+供者红细胞悬液;次管：受者红细胞悬液+供者血清;(阴阳对照管另设)。
8.2各管分别加低离子介质0.65ml混匀置室温1分钟。
加凝聚胺溶液2滴，混匀，置室温15秒。
8.31000g(3400rpm)，离心10秒，弃上清液，管底保留约0.1ml液体。
轻摇
试管，目测红细胞有无凝集。
如无凝集，则重做前面试验。
8.4加入2滴重悬液，轻轻混合，肉眼或显微镜下观察结果。
8.5凝块在1分钟内分散，试验结果为阴性，供受者血液配合;反之，如依照为不同强度的凝块，试验结果判为阳性，供受者血液不配合。
实验结果必须在3分钟内判读。
9.操作性能：快速简便，特异性强，灵敏度较高，重复性好。
10.超出范围结果处理：
10.1细胞自凝：在冬天气温较低时，某些病人血清中含有冷凝集素而导致交叉配血假阳性;遇此现象可用37℃-40℃生理盐水洗涤红细胞并置37℃水溶中轻轻摇动，观察结果。
10.2若病人血清(血浆)含有肝素，如洗肾患者能影响配血，须多加4-6滴polybrene 溶液以中和肝素。
10.3红细胞悬液为5％为宜，过浓或过淡可使抗原抗体比例不适当，反应不明显易误判。
10.4各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集，部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。
11.方法局限性：
11.1试管，滴管吸头和玻片必须清洁干燥，防止溶血。
11.2操作方法应按规定，先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。
11.3离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。
11.4观察时应注意红细胞呈特异性凝集，继发性凝固及线状排列的区别。
精心整理。