毒理学大蒜根尖染色体观察.
大蒜根尖细胞多倍体观察与制片
大蒜根尖细胞多倍体观察与制片一．实验目的1.通过实验掌握人工诱导多倍体植物的方法和技术,观察多倍体的特点2.利用染色体分析的方法对多倍体细胞做出准确判断。
二.实验原理物种的基本特征之一:生物体的细胞核中都有相对稳定的染色体数目，这些染色体组成染色体组，或称基因组。
三.实验步骤1.取材:取大蒜(洋葱，蚕豆，小麦等)发根至0.5-1cm然后转入盛有0.15%秋水仙素水溶液的培养皿中继续培养24小时，待观察到根部有膨大时取出固定，与在水中培养的材料做对照2.固定:在卡诺固定液中固定24小时，移至70%乙醇中保存或备用3.解离：植物的分生组织如根尖、茎尖等需要经过处理以便除去细胞之间的果胶层并使细胞壁软化，经解离的组织才能使压片步骤顺利进行。
解离常用酸解法和酶解法。
①酸解法:固定后的材料用清水洗漆后用1MHCl在60°C水浴中恒温处理5-10min.在酸解过程中一定要掌握好温度和时间，若解离不够，则压片不是分散。
若解离太过，在下一步处理材料的由于材料过软而易丢失。
然后水洗3次。
②酶解法：用10-20g/L的果胶酶，或与10-50g/L的纤维素酶混合使用4.染色：切取根尖分生组织区，用改良苯酚品红染色15min5.压片:将染色后的材料盖上盖玻片,在盖玻片上盖上两层吸水纸，用一个双面刀片,插到盖片与载片之间的一角，用左手食指压紧盖片,防止滑动，用右手持解剖针，用针柄轻敲盖片，使材料均匀分散开。
然后将刀片轻轻撤出，再用针柄重敲盖片，使细胞分散压平。
一张制片好的细胞染色体制片至少符合如下条件:①在一张制片中应有较多的中期分裂相。
②染色体分散而不重叠。
③染色体不断裂、扭曲、有溢痕，随体清晰④染色体着色较深而细胞质不着色或着色很浅，背景清晰无过多杂质。
选择中期分裂相好的细胞观察,通过观察和计数中期染色体数目,确定细胞类型。
五.实验结果六．结果分析所制的片子好多细胞未破裂，有的染色体溢出，应该是压片不好所致，这样就导致所观察的染色体条数不对。
大蒜核型分析
实验二植物染色体组型分析一、实验目的1. 学习并掌握根尖处理、染色、压片及制片观察的方法。
2. 观察有丝分裂各时期染色体的形态变化，了解有丝分裂全过程。
3.观察分析植物细胞有丝分裂中期染色体的长短、臂比和随体等形态特征；学习染色体组型分析的方法。
二、实验原理植物根尖的分生细胞的有丝分裂，每天都有分裂高峰时间，此时把根尖固定，经过染色和压片，再置放在显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。
各种生物染色体的形态、结构和数目都是相对稳定的。
每一细胞内特定的染色体组成叫染色体组型。
染色体组型分析就是研究一个物种细胞核内染色体的数目及各种染色体的形态特征，如对染色体的长度、着丝点位置、臂比、随体有无等观测，从而描述和阐明该生物的染色体组成，为细胞遗传学、分类学和进化遗传学等研究提供实验依据。
染色体组型分析大都采用植物根尖等分生组织的有丝分裂中期细胞，染色体制片要求分裂相为染色体分散，互不重叠，能清楚显示着丝点位置。
然后通过显微摄影，测量放大照片上的每个染色体的长度和其它形态特征，依次配对排列，编号，并对各对染色体的形态特征作出描述。
三、实验材料1.材料：大蒜2.用具：载玻片，盖玻片，50ml烧杯，温度计，恒温水浴锅，试剂瓶，镊子，解剖针，吸水纸，剪刀，绘图，纸胶水等。
3.药品：Carnoy固定液，无水酒精，70％酒精，1mol/L HCL解离液，苯酚品红染液四、方法与步骤（一）植物有丝分裂1、材料处理1）、大蒜发根将大蒜鳞茎置于盛有清水的小烧杯口上发根，待根长到1.5-2.0 cm左右时备用（在此过程注意换水）。
2）、根尖预处理在分裂高峰期前（大蒜根尖分裂高峰期为早上八点以及下午两点左右），剪下根尖，置于盛有少量蒸馏水的烧杯并放入冰箱(0—4 ℃)中预处理24h。
预处理的作用，主要是阻碍纺锤丝的形成，使染色体缩短，改变细胞质的粘度，在压片时，有利于染色体的分散。
2、材料固定经过预处理的根尖，再放到Carnoy液中固定24h以内。
毒理学大蒜根尖染色体观察.
微核试验一、研究的目的与意义：1：知道微核产生的原理。
2：学会识别微核以及计算微核率。
3：学用微核试验来评价药物、放射线、有毒物质等对人体细胞或体外培养细胞遗传学损伤。
4：了解不同化学试剂对细胞各个分裂期的影响。
由于大量新的化合物的合成，原子能应用，各种各样工业废物的排出，使人们很需要有一套高度灵敏，技术简单的测试系统来监视环境的变化。
真核测试系统能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害。
利用微核实验这种遗传毒性试验方法可以检测检测染色体或者有丝分裂器损伤，计数细胞的微核率。
检测已存在或潜在的危害。
二、研究内容与技术路线2.1 研究内容：通过观察不同浓度的1,2,4-三氯苯和铬以及它们的交互作用对大蒜根尖细胞微核率以及不同分裂期细胞的比例的影响，来判断其遗传毒性。
2.2 技术路线：冷冻保存24h孚尔根染液配制三、实验方法3.1实验材料大蒜、甲醇、冰乙酸、碱性品红、偏重亚硫酸钠、比重 1.18 的浓盐酸、蒸馏水、酒精、重铬酸钾、氯苯、丙酮、显微镜、载玻片、盖玻片、定性滤纸、烧杯、100毫升容量瓶、200 毫升容量瓶、镊子、刀片、纱布、青霉素小瓶、移液管、试管3.2试剂准备：1、1mol/LHCl ：用10mL 移液管量取8.69mL 浓盐酸加入100mL 容量瓶，用在蒸馏水定容至100mL 。
2、50mg/L、100mg/L、：称取170mg重铬酸钾，加水溶解，在200mL容量瓶中定容，配制300mg/L的Gr 6+母液，然后稀释到50mg/L、100mg/L。
3、卡诺式固定液：将甲醇：冰乙酸按3:1 比例混合配制5、Schiff 氏试剂：称取0.5g 碱性品红加入到100mL 煮沸的蒸馏水中，时时振荡，继续煮5min，使碱性品红充分溶解。
冷却致50C，用滤纸过滤，滤液中加入10ml1mol/LHCI，冷却致25C，加入1.5g偏重亚硫酸钠，充分振荡，塞紧瓶塞，在室温暗处静置至少24h ，用粗滤纸过滤于棕色瓶中，封瓶塞，外包黑纸。
微核实验-毒理学-洋葱根尖染色体观察
微核试验摘要：利用大蒜根尖细胞微核染色与计数技术测定不同浓度6价铬和1.2,4-三氯苯以及它们的不同浓度混合液对大蒜根尖分生区细胞微核率和细胞分裂各期的影响。
以蒸馏水为对照组，设置的实验组为3组不同浓度的6价铬和三氯苯以及它们的混合液。
用孚尔根染液法对不同试剂及各浓度的处理的根尖进行染色。
在显微镜下观察各试剂各浓度处理下的微核率以及不同分裂期细胞的比例。
关键字：孚尔根染色法、微核、微核率、分裂期细胞Abstract:Use of garlic root tip cell micronucleus dyeing and counting technology . Different concentrations of chromium 6 and 1,2, 4 - t hree hlorobenzene as well as their different concentration mixture to garlic root tip meristematic cells in the areas of micronucleus rate and the influence of each stage of cell division.With distilled water as control group, the group set up for the three groups of different concentrations of chromium 6 and 3 chlorobenzene and their efu's root dye solution for different reagent and the concentration of the treatment of root tip for dyeing. Under the microscope to observe the reagent concentration under the treatment of micronucleus rate and different proportion of split phase cellsKey Words：Fu's root staining method、micronucleus、Micronucleus rate、Split phase cells一、研究的目的与意义：1：知道微核产生的原理。
大蒜根尖诱导多倍体观察实验报告
大蒜根尖染色体观察实验报告高熹168615140001实验目的：1、了解利用秋水仙素诱导植物多倍体的方法。
2、掌握大蒜根尖制片的方法。
3、通过对玻片的观察，统计染色体数目。
4、对比不同的大蒜根尖染色体数目，理解二倍体和四倍体的区别。
实验背景：在自然条件下，机械损伤，射线辐射，温度骤变，及其它一些化学因素刺激，都可以使植物材料的染色体加倍，形成多倍体种群。
近几十年来，随着人们对多倍体诱导机制研究的深入，由人工模拟自然条件来诱导多倍体植物获得了长足进展，形成了不少由价值的人工多倍体种群。
实验原理：用秋水仙素溶液处理植物的种子或幼苗，是常用的人工诱导多倍体的有效方法。
秋水仙素是从百合科秋水仙属的一个种，秋水仙的种子及器官中提取出来的一种生物碱，其分子式为C22H25NO6，秋水仙素可以阻止微管蛋白的聚合，从而使有丝分裂中期纺锤体不能正常形成，但是姐妹染色单体照常想成，只是没有被拉向两级，于是染色体数目加倍。
当药剂的作用消除后，由于多倍体细胞继续分裂，便得到多倍体组织，以后则产生新的多倍体植株。
实验器材：刀片，镊子，双目显微镜，载玻片，盖玻片，烧杯，滤纸。
实验材料：经秋水仙素处理过的大蒜根。
（秋水仙素溶液配制取秋水仙素1g（先用少量95%乙醇助溶），溶于250～500ml蒸馏水中，配成浓度为0.2～0.4%的溶液，冰箱中保存。
将大蒜架在盛水的烧杯中进行水培。
待根尖长到1cm时，将大蒜盛在0.4%秋水仙素溶液的瓶盖或小烧杯上，避光处理24小时，然后再水培24小时加倍后根尖很肥大。
）实验试剂：1mol/L的HCl溶液，改良苯酚品红溶液。
实验步骤：1、取2-4根大蒜根放入烧杯中，加入1mol/L的HCl浸没，60℃水域水解5min。
2、弃掉HCl，自来水冲洗大蒜根三次，冲洗干净表面的HCl。
3、在载玻片上切下2-3mm的根尖，用纸吸去多余的水分，在载玻片上用刀片切碎根尖，滴加1滴改良苯酚品红溶液，染色15min。
实验：观察根尖分生组织细胞的有丝分裂
再用高倍镜观察
依次观察分裂中期、前期、 后期、末期、的细胞间期、
思考： ⑴为何只截取根尖2—3mm？ 原本细胞都是叠加在一起 有利于找到分生区细胞 ⑵解离的目的： 细胞小，排列密而整齐，细 的，在显微镜下很难观察清楚， 使组织中的细胞相互分离开。 胞壁薄，细胞核大，细胞质浓， ⑶漂洗的目的： 酒精和盐酸就是使细胞分散分 无液泡。具有很强的分裂能力， 洗去药液，防止解离过度。 离并杀死细胞，显微镜观察的 ⑷用碱性染料染色目的： 能够不断的分裂产生新细胞， 是死亡的细胞那时处于的状态， 使染色质和染色体着色，便于观察。 再由这些细胞分化形成其他组 ⑸制片的目的： 所以，有的细胞正处于中期， 使细胞分散开（成一层细胞），利于观察。 织。 有的处于间期。 （6 ）分生区的特点是什么？ （7）本实验所观察到的细胞还能继续分裂吗？
二、材料用具：
1、洋葱（或大蒜）根尖，
2、显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管等， 3、解离固定液 ：盐酸和酒精混合液(1:1） 4、染色：龙胆紫溶液（或醋酸洋红液）
三、实验步骤
1.生根培养：将切除老根的洋葱或 大蒜的磷基置于盛水
的小烧杯上， 于22－25℃下进行生根培养。
磷 基
培养根尖：应每天换水 (防止水中缺氧烂根)
2.有1位同学做根尖有丝分裂实验，在显微镜中观察到 的图像如图所示。造成这种情况的原因可能是
C
①取材位置不合适 ⑤视野选择不合适 ②取材时间不合适
③制片时压片力量不合适 ④解离时间不合适 A.②③
C.①②⑤
B.②⑤
D.①③④
⑤染色：染液（0.01g/mL的龙胆紫或0.02g/mL的醋酸洋 红）;时间为3－5分钟；目的是使染色体或染色质被碱性 染料染成深色，便于观察。
新疆大蒜染色体核型分析
8
8
年
2 月
浙江 农 村技 术 师 专 学 报
自然 科 学版 )
第 期
新疆 大 蒜 染 色 体 核 型 分 析
张 忠 新
浙 江 农 村技术师 专 )
季
青
(
新 疆农 科 院 )
摘
木文 根 据新疆 大蒜体 细 胞染色体 的 观 察 与核 型 分析 的 结果 其染色体核 型 为
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表 明 大蒜染色体 数 为 乞 n
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据悉
大蒜根尖染色体观察实验
大蒜根尖染色体实验报告一、实验目的与实验要求1、掌握洋葱培养的方法，掌握利用秋水仙素诱导植物多倍体的方法。
2、掌握洋葱根尖制片的方法，复习染色、压片的基本操作。
3、通过对于有丝分裂相的观察，统计洋葱染色体数目，加深对于细胞有丝分裂过程的理解。
4、对比进行多倍体诱导前后的洋葱根尖，理解四倍体与二倍体的区别，认识微核和植物细胞分裂期的各形态特征。
5、体验开放式实验教学，培养生物实验意识，提高学习的主动性、获取实验知识的能力和撰写实验报告水平。
二、实验方案1、实验仪器显微镜、载玻片、盖玻片、试管、烧杯、小塑料管、滤纸、刀片、解剖针、滤纸等2、实验药品新鲜、健康的洋葱鳞茎一个；0.02%秋水仙素、1mol/L HCl、醋酸洋红染液、卡诺氏固定液，碱性品红、乙酸，乙醇等。
3、实验原理(1)洋葱的根尖洋葱根尖的整体结构如右图，其中只有分生区的初生分生组织由于细胞始终处于持久而强烈的有丝分裂之中而作为我们的观察对象，其余部分在制片时都应当尽量剔除来保证观察效果。
(2)多倍体的诱导多倍体的诱导使用秋水仙素，秋水仙素可以阻止微管蛋白的聚合，从而使有丝分裂中期纺锤体不能正常形成，但是姐妹染色单体照常想成，只是没有被拉向两级，于是染色体数目加倍。
各步骤的作用：固定液可以迅速杀死细胞，保持细胞形态在有丝分裂相。
解离可以破坏细胞的胞间层（果胶），使细胞之间的联系变松散，有利于压片和染色。
漂洗可以洗去过量的盐酸，防止解离过度破坏细胞结构或影响染色效果（盐酸是酸性，而醋酸洋红是碱性染料）。
(3)有丝分裂完整的有丝分裂相包括G1期（合成前期）、S期（合成期）、G2期（合成后期）和M期（分裂期），其中G1期、S期和G2期合称间期，细胞完成DNA的复制以及有丝分裂的准备，而M期又可以分为前期、中期、后期和末期，为了形态观察的方便，本实验采用后一种分法。
如表一。
表一植物有丝分裂各时期特点4、实验步骤(1)将大蒜剥皮后放进垫了滤纸的培养基中，加入清水，放进25℃恒温培养箱中2~3天，催化大蒜生根。
大蒜根尖在植物染色体压片法实验教学中的应用
作者： 郑燕丹
作者机构： 广东揭阳职业技术学院应用生物工程系,522000
出版物刊名： 实验教学与仪器
页码： 31-31页
主题词： 染色体组;实验教学;植物;应用;大蒜;细胞周期;教学要求;实验材料
摘要：植物染色体压片技术是遗传学实验要求掌握的基本技术之一，常用于观察植物染色体，另外，它也是研究染色体组型、染色体分带、染色体畸变和姊妹染色体单体变换的基础。
植物染色体压片法实验教学要求所制作的装片能观察细胞周期各个时期的主要特征，尤其是染色体的行为变化。
由于种种原因，实验中所制作的装片往往存在实验材料处于分裂期的细胞少，染色效果差，。
大蒜根尖培养微核--洗衣粉
利用大蒜根尖培养微核一、实验目的1.学习化学因素诱发植物染色体变异及产生微核的实验技术；2.检验诱变剂量与诱变效应的相关性3.检测洗衣粉、洗发水对大蒜的遗传毒理效应二、实验原理植物细胞微核技术是根据遗传学上染色体畸变的原理而建立的一种环境污染的生物监测方法。
植物细胞在有丝分裂或减数分裂的早前期,如受到有害因子的攻击,可能发生染色体断裂,产生染色体片断,这些片断就游离在细胞质中,形成大小不同的小核,即微核。
环境中的诱变物越多,形成的微核就越多,因此可以根据微核的多少,说明诱变物强弱。
【1】微核是真核生物细胞中的一种异常结构，在间期呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核的1/3以下。
微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断片产生，一整条或好几条染色体也能形成。
这些断片或染色体在细胞分裂末期被两个子细胞核所排斥，便形成了第三个核块。
微核率大小同用药剂量或辐射积累效应呈正相关，因此可用简易的间期微核技术来代替繁杂的中期染色体畸变计数。
三、实验材料大蒜根尖四、仪器、药品、用具显微镜、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、吸水纸、电子天平、量筒、冰箱、恒温箱或水浴锅、培养皿、青霉素小瓶、镊子、洗瓶等卡诺氏固定液、95%酒精、1N盐酸、改良苯酚品红染液五、实验内容和方法1、大蒜培养大蒜浸水催根将剥皮的大蒜放入培养皿中，倒入清水使大蒜根部没入水中，置于25℃下培养 48 小时，待初生根长出 1-2cm 左右，根毛发育良好，即可用来检测。
【2】在材料剪取前将大蒜移入4 ℃冰箱内处理24 h，经低温处理后再移出室温下恢复培养，待根尖长至1.5～2.0 cm后即可进行观察。
其原因是经过接近0 ℃的低温处理后，可抑制纺锤体的形成，因此，在4 ℃时，不仅大蒜根尖积累了很多前、中、后、末期的细胞，而且染色体比较粗短，典型的分裂相大大增多。
（这步可省略）【3】2、待测液处理（1天）取材最好在上午10点3、恢复培养将处理过2 d的洋葱再次移入蒸馏水中继续培养1 d。
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微核试验
一、研究的目的与意义：
1：知道微核产生的原理。
2：学会识别微核以及计算微核率。
3：学用微核试验来评价药物、放射线、有毒物质等对人体细胞或体外培养细胞遗传学损伤。
4：了解不同化学试剂对细胞各个分裂期的影响。
由于大量新的化合物的合成，原子能应用，各种各样工业废物的排出，使人们很需要有一套高度灵敏，技术简单的测试系统来监视环境的变化。
真核测试系统能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害。
利用微核实验这种遗传毒性试验方法可以检测检测染色体或者有丝分裂器损伤，计数细胞的微核率。
检测已存在或潜在的危害。
二、研究内容与技术路线
2.1 研究内容：
通过观察不同浓度的1,2,4-三氯苯和铬以及它们的交互作用对大蒜根尖细胞微核率以及不同分裂期细胞的比例的影响，来判断其遗传毒性。
2.2 技术路线：
冷冻保存
24h
孚尔根染液配制
三、实验方法
3.1实验材料
大蒜、甲醇、冰乙酸、碱性品红、偏重亚硫酸钠、比重1.18的浓盐酸、蒸馏水、酒精、重铬酸钾、氯苯、丙酮、显微镜、载玻片、盖玻片、定性滤纸、烧杯、100毫升容量瓶、200毫升容量瓶、镊子、刀片、纱布、青霉素小瓶、移液管、试管
3.2试剂准备：
1、1mol/LHCl：用10mL 移液管量取8.69mL 浓盐酸加入100mL 容量瓶，用在蒸馏水定容至100mL 。
2、50mg/L、100mg/L、：称取170mg 重铬酸钾，加水溶解，在200mL 容量瓶中定容，配制300mg/L的Gr 6+母液，然后稀释到50mg/L、100mg/L。
3、卡诺式固定液：将甲醇：冰乙酸按3:1比例混合配制
5、Schiff 氏试剂：称取0.5g 碱性品红加入到100mL 煮沸的蒸馏水中，时时振荡，继续煮5min ，使碱性品红充分溶解。
冷却致50℃，用滤纸过滤，滤液中加入10ml1mol/LHCl，冷却致25℃，加入1.5g 偏重亚硫酸钠，充分振荡，塞紧瓶塞，在室温暗处静置至少24h ，用粗滤纸过滤于棕色瓶中，封瓶塞，外包黑纸。
贮存于冷暗处（4℃冰箱中）备用。
3.3实验过程：
3.3.1、材料准备：
将大蒜剥皮后放进垫了滤纸的培养基中，加入清水，放进25℃恒温培养箱中2~3天，催化大蒜生根。
选择根长0.5~1cm且不定根生长情况差不多的大蒜分为10组
3.3.2、Schiff 氏试剂检验：
在大蒜生根之后，先选取一些根尖放进卡诺式固定液中固定3个小时，用Schiff 氏试剂染色，镜检，观察染色体是否能染上色以及染色效果。
若染色效果不行，则重新配制Schiff 氏试剂，直至染色效果良好，然后将其贮存于4℃
冰箱中准备使用。
3.3.3、大蒜根尖处理：
将分好组的大蒜分别用清水、50mg/L Gr 6+、100mg/L Gr 6+、浓度分别为
50mg/L Gr6+和秋水仙素的混合液、100mg/L Gr6+和秋水仙素的混合液培养24小时。
清水组为对照组。
3.3.4、固定：
在早上有丝分裂旺盛的时候，将处理过的大蒜根尖剪下，分别放入青霉素小瓶中，加入卡诺氏固定液固定3个小时，然后放入4℃冰箱内保存，以备使用。
3.3.5、解离：
取出部分经过固定的根尖先用酒精和清水洗涤，加入1mol/LHCl覆盖根尖，放入60摄氏度水浴锅内水浴加热7~10分钟，取出用清水洗涤3次，每次5分钟。
3.3.6、染色制片：
取出解离后的根尖，放在载玻片上，用刀片切下根尖乳白色的分生区部分，滴加1滴Schiff 氏试剂染色10分钟，然后盖上盖玻片，吸干染液，并用镊子钝的一端在盖玻片上轻轻敲击，将细胞打散。
3.3.7、镜检:
将制备好的根尖放在显微镜下观察，统计微核数目、以及有丝分裂间期、前期、中期、后期、末期细胞数目并计算有丝分裂指数以及微核率。
每组浓度细胞计数400个。
微核识别标准：
（1）在主核大小的1/3以下，并与主核分离的小核。
（2）小核着色与主核相当或稍浅。
（3）小核形态为圆形、椭圆形或不规则型。
4实验结果与分析
有丝分裂前期有丝分裂中期
有丝分裂后期有丝分裂末期
微核双倍体
5实验结果：
1、初步观察结果
经过初步观察统计，经过Cr 6+溶液处理过的根尖细胞有一定的机率发生变异，与清水培养的相比，经过六价铬处理过的根尖细胞，出现前期、中期、末期这三个时期机率较小，而有丝分裂中期的出现机率明显增大。
并且经过六价铬处理的根尖细胞发生变异，出现微核，可能六价铬对大蒜根尖细胞有抑制分裂的作用，并且对大蒜根尖细胞的分裂有致畸作用，因为实验数据过少，不能说明问题。
6小结：
实验的每一个小步骤都不容忽视，这些都是关乎实验成败的关键点。
因为我们对这个实验不熟悉，在染色制片这个步骤中，不能很好的掌握力度及实验技巧，导致重做了几次，浪费了很多时间。