大蒜根尖染色体观察实验

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大蒜根尖细胞多倍体观察与制片

大蒜根尖细胞多倍体观察与制片

大蒜根尖细胞多倍体观察与制片一.实验目的1.通过实验掌握人工诱导多倍体植物的方法和技术,观察多倍体的特点2.利用染色体分析的方法对多倍体细胞做出准确判断。

二.实验原理物种的基本特征之一:生物体的细胞核中都有相对稳定的染色体数目,这些染色体组成染色体组,或称基因组。

三.实验步骤1.取材:取大蒜(洋葱,蚕豆,小麦等)发根至0.5-1cm然后转入盛有0.15%秋水仙素水溶液的培养皿中继续培养24小时,待观察到根部有膨大时取出固定,与在水中培养的材料做对照2.固定:在卡诺固定液中固定24小时,移至70%乙醇中保存或备用3.解离:植物的分生组织如根尖、茎尖等需要经过处理以便除去细胞之间的果胶层并使细胞壁软化,经解离的组织才能使压片步骤顺利进行。

解离常用酸解法和酶解法。

①酸解法:固定后的材料用清水洗漆后用1MHCl在60°C水浴中恒温处理5-10min.在酸解过程中一定要掌握好温度和时间,若解离不够,则压片不是分散。

若解离太过,在下一步处理材料的由于材料过软而易丢失。

然后水洗3次。

②酶解法:用10-20g/L的果胶酶,或与10-50g/L的纤维素酶混合使用4.染色:切取根尖分生组织区,用改良苯酚品红染色15min5.压片:将染色后的材料盖上盖玻片,在盖玻片上盖上两层吸水纸,用一个双面刀片,插到盖片与载片之间的一角,用左手食指压紧盖片,防止滑动,用右手持解剖针,用针柄轻敲盖片,使材料均匀分散开。

然后将刀片轻轻撤出,再用针柄重敲盖片,使细胞分散压平。

一张制片好的细胞染色体制片至少符合如下条件:①在一张制片中应有较多的中期分裂相。

②染色体分散而不重叠。

③染色体不断裂、扭曲、有溢痕,随体清晰④染色体着色较深而细胞质不着色或着色很浅,背景清晰无过多杂质。

选择中期分裂相好的细胞观察,通过观察和计数中期染色体数目,确定细胞类型。

五.实验结果六.结果分析所制的片子好多细胞未破裂,有的染色体溢出,应该是压片不好所致,这样就导致所观察的染色体条数不对。

大蒜核型分析

大蒜核型分析

实验二植物染色体组型分析一、实验目的1. 学习并掌握根尖处理、染色、压片及制片观察的方法。

2. 观察有丝分裂各时期染色体的形态变化,了解有丝分裂全过程。

3.观察分析植物细胞有丝分裂中期染色体的长短、臂比和随体等形态特征;学习染色体组型分析的方法。

二、实验原理植物根尖的分生细胞的有丝分裂,每天都有分裂高峰时间,此时把根尖固定,经过染色和压片,再置放在显微镜下观察,可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞和染色体。

各种生物染色体的形态、结构和数目都是相对稳定的。

每一细胞内特定的染色体组成叫染色体组型。

染色体组型分析就是研究一个物种细胞核内染色体的数目及各种染色体的形态特征,如对染色体的长度、着丝点位置、臂比、随体有无等观测,从而描述和阐明该生物的染色体组成,为细胞遗传学、分类学和进化遗传学等研究提供实验依据。

染色体组型分析大都采用植物根尖等分生组织的有丝分裂中期细胞,染色体制片要求分裂相为染色体分散,互不重叠,能清楚显示着丝点位置。

然后通过显微摄影,测量放大照片上的每个染色体的长度和其它形态特征,依次配对排列,编号,并对各对染色体的形态特征作出描述。

三、实验材料1.材料:大蒜2.用具:载玻片,盖玻片,50ml烧杯,温度计,恒温水浴锅,试剂瓶,镊子,解剖针,吸水纸,剪刀,绘图,纸胶水等。

3.药品:Carnoy固定液,无水酒精,70%酒精,1mol/L HCL解离液,苯酚品红染液四、方法与步骤(一)植物有丝分裂1、材料处理1)、大蒜发根将大蒜鳞茎置于盛有清水的小烧杯口上发根,待根长到1.5-2.0 cm左右时备用(在此过程注意换水)。

2)、根尖预处理在分裂高峰期前(大蒜根尖分裂高峰期为早上八点以及下午两点左右),剪下根尖,置于盛有少量蒸馏水的烧杯并放入冰箱(0—4 ℃)中预处理24h。

预处理的作用,主要是阻碍纺锤丝的形成,使染色体缩短,改变细胞质的粘度,在压片时,有利于染色体的分散。

2、材料固定经过预处理的根尖,再放到Carnoy液中固定24h以内。

有丝分裂实验

有丝分裂实验

装片的制作:
解离 漂洗
盐 酸Biblioteka 使植物细胞之间的果胶质 层松散,细胞相互分离
洗去盐酸,便于碱性染料染色 使染色体着色,便于显 微镜下观察 使细胞分散开
放入请水中漂洗 龙胆紫溶液或醋酸 洋红等碱性染料 用镊子压扁,加盖 玻片,再加载玻片压 散细胞 先用低倍镜观察
染色 制片
(3)显微镜观察:
观察
在低倍镜下找到分升区细胞; 正方形、排列紧密
实验:观察根尖分生组织细胞有丝分裂
一、材料用具:
1.洋葱(或大蒜)根尖,
2.显微镜、载玻片、盖玻片、玻璃皿、 剪子、镊子、滴管。 3.解离液 : (质量分数为15%)盐酸 和(体积分数为95%)酒精混合液(1:1) 4.龙胆紫溶液(或醋酸洋红溶液)
二、实验原理:
1、 高等植物体内,有丝分裂常见根尖、茎尖等分 生区细胞。各个细胞的分裂是独立的。通过在显微 镜下观察各个时期细胞内染色体(染色质)的存在 状态,判断这些细胞各处于有丝分裂的哪个时期 (间期、前期、中期、后期和末期)。 2、碱性染料(龙胆紫溶液或醋酸洋红液)能将染 色体(或染色质)染成深色。 3、盐酸使植物细胞之间的果胶质层松散,用盐酸处 理植物的根尖,可以使根尖细胞彼此容易分离。
将“5cm”改成“2~3mm”;实验操作步骤应改为先漂洗后染色;将 “盖上载玻片”改成“盖上盖玻片后,再加一片载玻片”
4.在下列实验中,实验材料必须始终保持生活 状态的是 BD A.在光学显微镜下观察植物细胞有丝分裂 B.在光学显微镜下观察植物细胞质的流动 C.在光学显微镜下观察马蛔虫受精卵的有丝分裂 固定装片 D.在光学显微镜下观察植物细胞质壁分离和质 壁分离复原
注意:漂洗过程中,观察永久装片。
(三)洋葱根尖细胞有丝分裂的观察:

大蒜根尖诱导多倍体观察实验报告

大蒜根尖诱导多倍体观察实验报告

大蒜根尖染色体观察实验报告高熹168615140001实验目的:1、了解利用秋水仙素诱导植物多倍体的方法。

2、掌握大蒜根尖制片的方法。

3、通过对玻片的观察,统计染色体数目。

4、对比不同的大蒜根尖染色体数目,理解二倍体和四倍体的区别。

实验背景:在自然条件下,机械损伤,射线辐射,温度骤变,及其它一些化学因素刺激,都可以使植物材料的染色体加倍,形成多倍体种群。

近几十年来,随着人们对多倍体诱导机制研究的深入,由人工模拟自然条件来诱导多倍体植物获得了长足进展,形成了不少由价值的人工多倍体种群。

实验原理:用秋水仙素溶液处理植物的种子或幼苗,是常用的人工诱导多倍体的有效方法。

秋水仙素是从百合科秋水仙属的一个种,秋水仙的种子及器官中提取出来的一种生物碱,其分子式为C22H25NO6,秋水仙素可以阻止微管蛋白的聚合,从而使有丝分裂中期纺锤体不能正常形成,但是姐妹染色单体照常想成,只是没有被拉向两级,于是染色体数目加倍。

当药剂的作用消除后,由于多倍体细胞继续分裂,便得到多倍体组织,以后则产生新的多倍体植株。

实验器材:刀片,镊子,双目显微镜,载玻片,盖玻片,烧杯,滤纸。

实验材料:经秋水仙素处理过的大蒜根。

(秋水仙素溶液配制取秋水仙素1g(先用少量95%乙醇助溶),溶于250~500ml蒸馏水中,配成浓度为0.2~0.4%的溶液,冰箱中保存。

将大蒜架在盛水的烧杯中进行水培。

待根尖长到1cm时,将大蒜盛在0.4%秋水仙素溶液的瓶盖或小烧杯上,避光处理24小时,然后再水培24小时加倍后根尖很肥大。

)实验试剂:1mol/L的HCl溶液,改良苯酚品红溶液。

实验步骤:1、取2-4根大蒜根放入烧杯中,加入1mol/L的HCl浸没,60℃水域水解5min。

2、弃掉HCl,自来水冲洗大蒜根三次,冲洗干净表面的HCl。

3、在载玻片上切下2-3mm的根尖,用纸吸去多余的水分,在载玻片上用刀片切碎根尖,滴加1滴改良苯酚品红溶液,染色15min。

实验:观察根尖分生组织细胞的有丝分裂

实验:观察根尖分生组织细胞的有丝分裂

再用高倍镜观察
依次观察分裂中期、前期、 后期、末期、的细胞间期、
思考: ⑴为何只截取根尖2—3mm? 原本细胞都是叠加在一起 有利于找到分生区细胞 ⑵解离的目的: 细胞小,排列密而整齐,细 的,在显微镜下很难观察清楚, 使组织中的细胞相互分离开。 胞壁薄,细胞核大,细胞质浓, ⑶漂洗的目的: 酒精和盐酸就是使细胞分散分 无液泡。具有很强的分裂能力, 洗去药液,防止解离过度。 离并杀死细胞,显微镜观察的 ⑷用碱性染料染色目的: 能够不断的分裂产生新细胞, 是死亡的细胞那时处于的状态, 使染色质和染色体着色,便于观察。 再由这些细胞分化形成其他组 ⑸制片的目的: 所以,有的细胞正处于中期, 使细胞分散开(成一层细胞),利于观察。 织。 有的处于间期。 (6 )分生区的特点是什么? (7)本实验所观察到的细胞还能继续分裂吗?
二、材料用具:
1、洋葱(或大蒜)根尖,
2、显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管等, 3、解离固定液 :盐酸和酒精混合液(1:1) 4、染色:龙胆紫溶液(或醋酸洋红液)
三、实验步骤
1.生根培养:将切除老根的洋葱或 大蒜的磷基置于盛水
的小烧杯上, 于22-25℃下进行生根培养。
磷 基
培养根尖:应每天换水 (防止水中缺氧烂根)
2.有1位同学做根尖有丝分裂实验,在显微镜中观察到 的图像如图所示。造成这种情况的原因可能是
C
①取材位置不合适 ⑤视野选择不合适 ②取材时间不合适
③制片时压片力量不合适 ④解离时间不合适 A.②③
C.①②⑤
B.②⑤
D.①③④
⑤染色:染液(0.01g/mL的龙胆紫或0.02g/mL的醋酸洋 红);时间为3-5分钟;目的是使染色体或染色质被碱性 染料染成深色,便于观察。

多倍体鉴定实验报告

多倍体鉴定实验报告

一、实验目的1. 掌握化学诱导植物多倍体的原理和方法。

2. 学习利用秋水仙素诱导植物多倍体的一般方法及多倍体诱导在植物育种上的意义。

3. 学习利用细胞学方法观察鉴定多倍体的特点及诱导染色体加倍后的细胞学表现。

4. 利用染色体分析的方法对多倍体的细胞做出准确判断。

二、实验原理生物体的细胞核中都有相对稳定的染色体数目,这是物种的基本特征之一。

多倍体是指细胞中具有3个或3个以上的染色体组的生物体。

在植物育种上,利用多倍体可以改良作物的经济性状,同时还可以利用多倍体克服远缘杂交过程中的障碍。

秋水仙素是一种常用的化学诱导剂,可以抑制细胞有丝分裂过程中纺锤体的形成,使子染色体不能移向两极,从而诱导植物产生多倍体。

在适宜浓度的秋水仙素作用下,细胞经一定时期后仍可恢复正常,继续分裂,只是染色体数目加倍成为多倍性细胞。

三、实验材料与仪器1. 实验材料:大蒜根尖分生组织区2. 试剂:0.2%秋水仙素溶液、卡诺氏液、改良苯酚品红染液、盐酸酒精溶液3. 仪器:显微镜、载玻片、盖玻片、吸管、滴管、酒精灯、烧杯、剪刀、镊子、培养皿四、实验步骤1. 将大蒜根尖分生组织区剪取约0.5cm,放入装有0.2%秋水仙素溶液的培养皿中,处理48小时。

2. 将处理后的根尖用蒸馏水清洗3次,放入装有卡诺氏液的培养皿中固定30分钟。

3. 将固定后的根尖用蒸馏水清洗3次,放入装有盐酸酒精溶液的培养皿中解离10分钟。

4. 将解离后的根尖用蒸馏水清洗3次,放入装有改良苯酚品红染液的培养皿中染色10分钟。

5. 将染色后的根尖用蒸馏水清洗3次,制成临时装片。

6. 在显微镜下观察染色体的形态和数目,记录观察结果。

7. 将观察结果进行统计分析,判断多倍体诱导率。

五、实验结果与分析1. 实验结果在显微镜下观察,部分大蒜根尖细胞染色体数目加倍,形成多倍体细胞。

染色体数目加倍现象主要出现在有丝分裂中期。

2. 分析通过实验,我们成功利用秋水仙素诱导了大蒜根尖分生组织区的多倍体。

植物多倍体的诱发和鉴定

植物多倍体的诱发和鉴定一、实验目的通过实验,进一步了解人工诱导多倍体的原理,并初步掌握用秋水仙素诱发多倍体的一般方法及细胞学鉴定。

二、实验原理染色体是遗传物质的主要载体。

每一个物种都具有特定的形态特征。

各个物种细胞内染色体的数目都是相对恒定的,这是一个重要的生物学特征。

染色体数目和结构的改变,将会导致生物性状的改变。

遗传学中把二倍体生物配子中所具有的染色体成为一个染色体组,通常用n来表示。

而一个染色体组中包含的染色体数目成为染色体基数,用x表示。

同一个染色体组的各个染色体的形态、结构和连锁基因群都彼此不同,但它们构成一个完整而协调的体系。

细胞中染色体数目的变异类型有两类:整倍体变异和非整倍体变异。

整倍体变异指体细胞中染色体数目按染色体组的基数(x)成倍数增加或减少的现象。

具有两套染色体组的生物体成为二倍体,体细胞中含有三个或三个以上染色体组的整倍体为多倍体。

多倍体按其来源可以分为:同源多倍体和异源多倍体,同源多倍体是指具有三个或三个以上相同染色体组的细胞或个体:异源多倍体是体细胞中含有两个以上不同类型染色体组的多倍体。

自然界中的多倍体主要存在于植物中,动物中的多倍体很少。

多倍体可以在自然条件卞产生,也可以人工诱导形成。

人工诱导多倍体通常采用物理方法和化学方法。

物理方法有高温、低温、超声波、嫁接和切断等,化学方法是使用秋水仙素、异生长素、蔡骈乙烷来诱导多倍体。

在诱导多倍体的方法中,以应用化学药剂更为有效,其中以秋水仙素效果最好,使用广泛。

秋水仙素阻碍有丝分裂中细胞纺锤体的形成,这样细胞不能分离,产生染色体加倍的核。

本实验用适当浓度的秋水仙素处理洋葱或大蒜根尖,待根尖膨人后制片观察,可诱发多倍体。

三、实验材料大蒜根尖四、实验方法与步骤(一)根尖多倍体的诱发将人蒜去掉老根,置于盛水的培养皿上,25°C条件卞培养发根,待不定根长出1cm时取出洗净,把水晾干后移到0.1%秋水仙素溶液中,根尖朝下,使根部浸没在药液中,于10°C 培养箱中低温培养,直到根尖膨大为止。

大蒜根尖染色体观察实验.

大蒜根尖染色体实验报告一、实验目的与实验要求1、掌握洋葱培养的方法,掌握利用秋水仙素诱导植物多倍体的方法。

2、掌握洋葱根尖制片的方法,复习染色、压片的基本操作。

3、通过对于有丝分裂相的观察,统计洋葱染色体数目,加深对于细胞有丝分裂过程的理解。

4、对比进行多倍体诱导前后的洋葱根尖,理解四倍体与二倍体的区别,认识微核和植物细胞分裂期的各形态特征。

5、体验开放式实验教学,培养生物实验意识,提高学习的主动性、获取实验知识的能力和撰写实验报告水平。

二、实验方案1、实验仪器显微镜、载玻片、盖玻片、试管、烧杯、小塑料管、滤纸、刀片、解剖针、滤纸等 2、实验药品新鲜、健康的洋葱鳞茎一个;0.02%秋水仙素、1mol/L HCl、醋酸洋红染液、卡诺氏固定液,碱性品红、乙酸,乙醇等。

3、实验原理 (1 洋葱的根尖洋葱根尖的整体结构如右图,其中只有分生区的初生分生组织由于细胞始终处于持久而强烈的有丝分裂之中而作为我们的观察对象,其余部分在制片时都应当尽量剔除来保证观察效果。

(2 多倍体的诱导多倍体的诱导使用秋水仙素,秋水仙素可以阻止微管蛋白的聚合,从而使有丝分裂中期纺锤体不能正常形成,但是姐妹染色单体照常想成,只是没有被拉向两级,于是染色体数目加倍。

各步骤的作用:固定液可以迅速杀死细胞,保持细胞形态在有丝分裂相。

解离可以破坏细胞的胞间层(果胶),使细胞之间的联系变松散,有利于压片和染色。

漂洗可以洗去过量的盐酸,防止解离过度破坏细胞结构或影响染色效果(盐酸是酸性,而醋酸洋红是碱性染料)。

(3 有丝分裂完整的有丝分裂相包括G1期(合成前期)、S 期(合成期)、G2期(合成后期)和M 期(分裂期),其中G1期、S 期和G2期合称间期,细胞完成DNA 的复制以及有丝分裂的准备,而M 期又可以分为前期、中期、后期和末期,为了形态观察的方便,本实验采用后一种分法。

如表一。

表一植物有丝分裂各时期特点4、实验步骤(1 将大蒜剥皮后放进垫了滤纸的培养基中,加入清水,放进25℃恒温培养箱中2~3天,催化大蒜生根。

生物大蒜根尖实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 观察大蒜根尖细胞有丝分裂的过程。

2. 理解细胞周期中各阶段的特点。

3. 掌握制作临时装片和显微镜观察的基本技能。

二、实验原理细胞有丝分裂是生物体细胞增殖的重要方式,分为间期、前期、中期、后期和末期五个阶段。

本实验通过观察大蒜根尖细胞的有丝分裂,了解细胞周期的变化和各个阶段的特点。

三、实验材料与仪器1. 实验材料:新鲜大蒜头、盐酸、酒精、碘液、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、显微镜、酒精灯、滴管等。

2. 仪器:光学显微镜、显微镜载物台、显微镜镜筒、显微镜目镜、显微镜物镜等。

四、实验步骤1. 准备根尖:取新鲜大蒜头,用解剖针切下根尖约2-3毫米,放入盛有盐酸的试管中,在室温下浸泡10-15分钟。

2. 漂洗:将浸泡后的根尖用蒸馏水冲洗干净,去除盐酸。

3. 解离:将冲洗干净的根尖放入盛有盐酸和酒精混合液(1:1)的试管中,在室温下解离10-15分钟。

4. 漂洗:将解离后的根尖用蒸馏水冲洗干净。

5. 压片:将冲洗干净的根尖放在载玻片上,用解剖针轻轻压扁,盖上盖玻片。

6. 染色:在盖玻片边缘滴加碘液,用吸水纸吸取多余的碘液。

7. 观察:将载玻片置于显微镜下,观察大蒜根尖细胞有丝分裂的不同阶段。

五、实验结果与分析1. 间期:细胞核内染色质细长,呈丝状,细胞质均匀,无明显变化。

2. 前期:细胞核内染色质逐渐凝缩成染色体,染色体呈细长条状,细胞质无明显变化。

3. 中期:染色体排列在细胞中央,呈放射状,细胞质无明显变化。

4. 后期:染色体逐渐缩短变粗,向细胞两端移动,细胞质开始分裂。

5. 末期:染色体到达细胞两端,细胞质分裂成两个子细胞。

六、实验结论通过观察大蒜根尖细胞有丝分裂的不同阶段,我们可以了解到细胞周期中各阶段的特点。

本实验成功观察到了大蒜根尖细胞有丝分裂的各个阶段,为后续生物学研究提供了基础。

七、实验讨论1. 实验过程中,根尖浸泡在盐酸中,有助于软化细胞壁,便于观察。

2. 解离过程中,盐酸和酒精混合液的作用是使细胞分离,便于观察。

大蒜实验报告观察根尖

一、实验目的1. 学习和掌握制作临时装片的技能。

2. 观察大蒜根尖细胞有丝分裂的过程,了解细胞分裂的各个阶段。

3. 熟悉显微镜的使用方法。

二、实验原理细胞有丝分裂是细胞生命周期中的一个重要过程,通过观察细胞有丝分裂,可以了解细胞分裂的各个阶段及其特点。

大蒜根尖细胞具有分裂能力,可以用来观察细胞有丝分裂过程。

三、实验材料1. 大蒜根尖2. 显微镜3. 龙胆紫溶液4. 盐酸酒精混合液5. 生理盐水6. 刮刀7. 玻片8. 载玻片9. 吸水纸四、实验步骤1. 准备根尖:将大蒜根尖用刮刀刮取2-3mm,放入盛有生理盐水的玻璃皿中。

2. 解离:将根尖放入盛有盐酸酒精混合液的玻璃皿中,室温下解离3-5分钟。

3. 漂洗:将解离后的根尖用生理盐水漂洗2-3次。

4. 染色:将漂洗后的根尖放入盛有龙胆紫溶液的玻璃皿中,染色3-5分钟。

5. 制片:将染色后的根尖用吸水纸吸去多余的水分,将根尖放在载玻片上,用刮刀轻轻刮取根尖细胞,制成临时装片。

6. 观察:将临时装片放在显微镜下,先用低倍镜观察,找到合适的细胞,再换用高倍镜观察细胞有丝分裂的各个阶段。

五、实验结果与分析1. 解离:盐酸酒精混合液可以杀死细胞,并使细胞散开,便于观察。

2. 漂洗:漂洗可以去除细胞中的杂质,提高观察效果。

3. 染色:龙胆紫溶液属于碱性染料,可以将染色体着色,便于观察。

4. 制片:临时装片的制作要均匀、薄,避免影响观察。

5. 观察:通过观察大蒜根尖细胞有丝分裂的各个阶段,可以了解到细胞分裂的过程,包括前期、中期、后期和末期。

(1)前期:细胞核开始缩小,染色体逐渐凝聚,成为染色体。

(2)中期:染色体排列在细胞中央,形成赤道板。

(3)后期:染色体分离,向细胞两极移动。

(4)末期:染色体到达细胞两极,细胞开始分裂。

六、实验结论通过观察大蒜根尖细胞有丝分裂,我们了解了细胞分裂的各个阶段及其特点。

实验结果表明,盐酸酒精混合液、漂洗、染色和制片等步骤对观察效果有重要影响。

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大蒜根尖染色体实验报告
一、实验目的与实验要求
1、掌握洋葱培养的方法,掌握利用秋水仙素诱导植物多倍体的方法。

2、掌握洋葱根尖制片的方法,复习染色、压片的基本操作。

3、通过对于有丝分裂相的观察,统计洋葱染色体数目,加深对于细胞有丝
分裂过程的理解。

4、对比进行多倍体诱导前后的洋葱根尖,理解四倍体与二倍体的区别,认
识微核和植物细胞分裂期的各形态特征。

5、体验开放式实验教学,培养生物实验意识,提高学习的主动性、获取实
验知识的能力和撰写实验报告水平。

二、实验方案
1、实验仪器
显微镜、载玻片、盖玻片、试管、烧杯、小塑料管、滤纸、刀片、解剖
针、滤纸等
2、实验药品
新鲜、健康的洋葱鳞茎一个;0.02%秋水仙素、1mol/L HCl、醋酸洋红染
液、卡诺氏固定液,碱性品红、乙酸,乙醇等。

3、实验原理
(1)洋葱的根尖
洋葱根尖的整体结构如右图,其中只有分生区的初生分生组织由于细胞始终处于持久而强烈的有丝分裂之中而作为我们的观察对象,
其余部分在制片时都应当尽量剔除来保证观察效果。

(2)多倍体的诱导
多倍体的诱导使用秋水仙素,秋水仙素可以阻止微管蛋白的聚合,从而使有丝分裂中期纺锤体不能正常形成,但是姐妹染色单体照常想
成,只是没有被拉向两级,于是染色体数目加倍。

各步骤的作用:固定液可以迅速杀死细胞,保持细胞形态在有丝分裂相。

解离可以破坏细胞的胞间层(果胶),使细胞之间的联系变
松散,有利于压片和染色。

漂洗可以洗去过量的盐酸,防止解离过度
破坏细胞结构或影响染色效果(盐酸是酸性,而醋酸洋红是碱性染料)。

(3)有丝分裂
完整的有丝分裂相包括G1期(合成前期)、S期(合成期)、G2期(合成后期)和M期(分裂期),其中G1期、S期和G2期合称间
期,细胞完成DNA的复制以及有丝分裂的准备,而M期又可以分为
前期、中期、后期和末期,为了形态观察的方便,本实验采用后一种
分法。

如表一。

表一植物有丝分裂各时期特点
4、实验步骤
(1)将大蒜剥皮后放进垫了滤纸的培养基中,加入清水,放进25℃恒温
培养箱中2~3天,催化大蒜生根。

(2)选择根长0.5~1cm且不定根生长情况差不多的大蒜分为10组。

(3)在大蒜生根之后,先选取一些根尖放进卡诺式固定液中固定3个小时,
用Schiff氏试剂染色,镜检,观察染色体是否能染上色以及染色效果。

若染色效果不行,则重新配制Schiff氏试剂,直至染色效果良好,然
后将其贮存于4℃冰箱中准备使用。

(4)将分好组的大蒜分别用清水、50mg/L Gr6+、100mg/L Gr6+、150mg/L
Gr6+、30 mg/L 1,2,4-三氯苯、40 mg/L 1,2,4-三氯苯、50 mg/L 1,2,4-三
氯苯、浓度分别为50mg/L Gr6+和30 mg/L 1,2,4-三氯苯的混合液、
100mg/L Gr6+和40 mg/L 1,2,4-三氯苯的混合液、150mg/L Gr6+和50
mg/L 1,2,4-三氯苯的混合液培养24小时。

清水组为对照组。

(5)在早上有丝分裂旺盛的时候,将处理过的大蒜根尖剪下,分别放入青
霉素小瓶中,加入卡诺氏固定液固定3个小时,然后放入4℃冰箱内
保存,以备使用。

(6)取出部分经过固定的根尖先用酒精和清水洗涤,加入1mol/L HCL覆
盖根尖,放入60摄氏度水浴锅内水浴加热7~10分钟,取出用清水洗
涤3次,每次5分钟。

(7)取出解离后的根尖,放在载玻片上,用刀片切下根尖乳白色的分生区
部分,滴加1滴Schiff氏试剂染色10分钟,然后盖上盖玻片,吸干
染液,并用镊子钝的一端在盖玻片上轻轻敲击,将细胞打散。

(8)将制备好的根尖放在显微镜下观察,统计微核数目、以及有丝分裂间
期、前期、中期、后期、末期细胞数目并计算有丝分裂指数以及微核
率。

每组浓度细胞计数400个。

三、实验结果与数据处理
1、制片观察情况
图1 前期图2 后期
图3 末期图4 核崩解
图5 微核图6 双核
2、数据记录情况
表2 试验结果统计
前期数目中期数目后期数目末期数目微核数多核分裂数分组组别细胞总

50mg/L Cr6+ 1 384 2 0 1 2 6 9 5
2 398
3 0 2 1
4 12 6
1 379 8 0 6 6 0 1 20
50mg/L Cr6++
秋水仙素
2 395 5 0 4 4 2 2 1
3 100mg/L Cr6+ 1 401 0 0 0 0 0 5 5
2 396 0 0 0 0 0 2 2
100mg/L Cr6++
1 390 0 0 0 1 3 11 15
秋水仙素
2 389 0 0 0 0 0 8 0
清水 1 421 3 0 1 2 0 0 6
2 402 2 0 0 0 0 0 2
3、数据处理结果
表3 实验计算结果
分组30号% 前期中期后期末期微核多核分裂数
50mg/L Cr6+0.52±0.280±00.26±0.120.52±0.23 1.56±0.15 2.34±0.53 1.30±0.5750mg/L Cr6++秋
2.11±0.330±0 1.58±0.22 1.58±0.490±00.26±0.12 5.28±0.01水仙素
100mg/L Cr6+0±00±00±00±00±0 1.25±0.05 1.24±0.38100mg/L Cr6++秋
0±00±00±00.25±0.430.77±0.10 2.82±0.09 3.85±0.07水仙素
清水0.71±0.030±00.24±0.180.47±0.160±0.080±0 1.43±0.53
图1 分裂期及比例图
四、实验结论
1、数据评价
a.由上面图表可以看出50mg/L C r6+与50mg/L C r6++秋水仙素相比,后者
分裂期的数目增多,微核数和多核数没有太大的变化。

而100mg/L
的相比之下有所增加。

b.同是没有加秋水仙素的50与100mg的相比较,浓度增大微核和多核
数有增加。

2、原因分析
a.只有两个浓度,实验数据可比性不高。

b.压片不够熟练,导致计数不全面。

c.观察计数时存在计数误差。

五、实验心得体会
1.培养洋葱根尖时,水不可放多,待根尖长出后,使根尖分生区接触到水面即可;水至少一天一换,若有浑浊,立即更换。

2.剪下洋葱根尖时注意时间,正午时分最合适,因为此时洋葱根尖分生区有丝分裂最为活跃,此时固定,可以观察到最多的分裂相。

解离时间要控制好,时间太短,效果不够;时间太长,解离过度破坏细
胞。

3.漂洗不能少,染色时间要足够,否则染色不够深影响观察,但染色时间过长则细胞质也会部分被染色,影响观察效果
4.压片对于最终效果来说十分关键,需要尽力并用上多种手段,但是切记只可纵向压,不可横向搓。

5.这个实验关键在于压片,我们第一次压片不太好,力度没有足够会把细胞重叠在一起,不能计数,如果力度过大,细胞就会给压碎,细胞核
会被压出胞外,计数不准确,所以要多加练习。

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