糖化血红蛋白定量检测标准操作规程(SOP)
PDQ PLus糖化血红蛋白标准操作程序
1 目的PDQ PLus TM用于体外诊断，定量检测全血中糖化血红蛋白含量。
2 范围糖化血红蛋白的含量检测。
3 职责3.1 生化实验室的检测人员负责糖化血红蛋白含量检测。
3.2质量监督员负责监督检测是否按照程序文件和作业指导书中检验过程的要求进行。
4 原理高压液相亲和层析：PDQ PLusTM采用了高压液相亲和层析将糖化血红蛋白分离出来，然后根据415nm 波长的吸光度的变化生成层析图，并记录和保存在内置的计算机里，仪器内置的软件程序会自动分析层析图并通过打印机输出结果。
5 标本采集、运输、保存静脉血或末梢血，推荐使用EDTA钾盐或肝素氨做抗凝剂。
在-20℃保存稳定6个月，5℃保存稳定2周，25℃保存稳定1周。
冷藏标本应放置至室温，混匀后操作，避免反复冻融。
注意：所有全血标本在分析前要完全混匀。
6 标本拒收标准6.1 不合格标签，包括没有标签，或标本信息不全，或编号错误。
6.2 未使用正确的容器。
6.3 凝结（如EDTA采血管）。
6.4 容量不足。
6.5 未能正确运送。
6.6 受污染。
6.7 检测申请不完全。
7 试剂及仪器设备普莱默斯糖化血红蛋白检测试剂，PDQ PLus TM糖化血红蛋白检测仪。
7.1 包装规格7.2 试剂成份试剂成份：5%酒精、磷酸盐缓冲液、蒸馏水、清洗液、0.001%叠氮化钠、羟基盐等。
7.3 试剂准备标本预处理：稀释模式：30μl的全血与3000μl稀释液混合（1：100），避免起泡沫。
室温孵育5分钟。
全血模式：标本不凝血、足量7.4 试剂储藏和稳定期未处理的标本：密闭保存2-4℃，稳定7天7.5 仪器设备PDQ PLus TM糖化血红蛋白检测仪8 操作步骤按仪器操作说明书输入正确的实验参数和试剂使用通道代号。
具体操作步骤参照PDQ 日常操作规程。
9 结果判断与分析对超出可报告范围的结果,可用稀释液稀释样品，再重新测定，结果乘以稀释倍数。
报告发出时必须经过双重审核，一人测试结果，另一人负责复核结果。
糖化血红蛋白定量测定试剂盒标准操作程序
糖化血红蛋白定量测定试剂盒标准操作程序1.摘要本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人全血中的糖化血红蛋白的百分含量。
2.适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测人全血中的糖化血红蛋白含量。
3.职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定总蛋白浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行，室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的糖化血红蛋白定量测定试剂盒采用的是酶法。
5.原理本试剂盒测定人全血糖化血红蛋白（HbA1c）的含量采用百分含量表示。
采用酶法测定，全血样本中血红蛋白（THb）被特定的蛋白酶裂解，其中糖化血红蛋白（HbA1c）裂解产生果糖氨基酸，然后果糖氨基酸在果糖氨基酸氧化酶（FAOD）作用下产生H2O2，H2O2经POD与发色剂偶联Trinder反应，在700nm测定其吸光度。
通过使用合适的校准品建立校准曲线，在一定浓度范围内糖化血红蛋白（HbA1c）百分含量与吸光度变化成正比。
6.仪器日立7600自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：R1a：MES缓冲液、蛋白酶R1b：MES缓冲液、NaClR2：FAOD、POD、发色剂溶血剂：MOPS缓冲液、表面活性剂糖化血红蛋白校准品a、b：由新鲜人EDTA或肝素抗凝全血（HBsAg，抗HIV1/2、抗HCV、TP抗体均为阴性）冷冻干燥制备而成，冻干品。
不同批号试剂盒各组分请勿混用。
7.3试剂稳定性：未打开试剂在2-8℃避光保存可至失效期。
校准品使用后应密封保存，以免液体挥发。
8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用某某公司的校准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品：某某公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。
Bio-Rad DiaSTAT糖化血红蛋白A1c测定仪SOP文件
Bio-Rad DiaSTAT糖化血红蛋白A1c测定仪SOP文件1．目的：Bio-Rad DiaSTAT糖化血红蛋白A1c测定仪可体外测定正常人和糖尿病人的糖化血红蛋白，用于糖尿病的辅助诊断和诊疗监控。
2．原理：DiaSTAT 使用低压离子交换液相色谱法，在梯度洗涤液的作用下，从人全血中分离出各种血红蛋白成分，分离出的血红蛋白经415 nm光谱吸收分析后，结果记录和存储在计算机上。
DiaSTAT软件随后对结果进行分析并打印结果报告。
DIASTAT血红蛋白A1c测定仪可从样品管中自动吸取标本，随后进行稀释和分析，每个样本在10分钟内即可完成测定。
3．仪器使用环境：1．无尘、换气良好的环境。
2．避免阳光直接照射。
3．室内相对湿度20~80%4．电源电压变动在220V±10V之内5．有保护性接地4．安全条款：1．使用对人体有危险或发生感染的样品时，请使用橡胶手套，不要直接接触。
如操作人员直接被污染时，用大量的水冲洗、消毒，必要时应及时看医生。
仪器污染时应随时清洗干净且消毒。
2．仪器上面和周围不要放置或使用易燃、易爆物品，避免引起火灾、爆炸。
3．仪器的操作、保养按规定程序进行。
5．标准操作过程5.1开机程序：1)确认试剂量和打印纸充足，废液桶倒空2)打开仪器后侧左下部的电源开关仪器自检后自动进入主菜单5.2关机程序如系统处于主菜单时，可直接关掉电源开关注: 尽量避免在Running状态突然关机5.3常规样本实验5.3.1 样本准备1）全血样本准备（EDTA抗凝全血）a. 将Diastat Dispenser 打开，预热15分钟以上。
b.注意溶血试剂是否用完。
c.将Dispenser对准溶血试剂瓶（注意防止污染），按住拇指开关，喷射四次，使管路通畅。
无气泡。
d.三灯齐亮状态下，可以吸取样本。
e.将Dispenser加样尖置入混匀好的样本管中，没入血样中一些，按住拇指开关一次，自动吸取20 ul样本。
单通道糖化血红蛋白 SOP文件
糖化血红蛋白项目没有经过稀释，不用修改稀释倍数，
6. 样本处理：10L 新鲜末梢血或者静脉全血，加入 1mL 溶血液中溶血；
7. 在测量杯中放入一粒搅拌子，加入 10ul 溶血后的样品，然后将测量杯置入测量室中，
加入 300L 的乳胶，开始自动计时 3 分钟； 注意：将样品加入测量杯时，要将样品置入测量杯的底部，不要将液体碰到测量杯的
在整个检测过程中，按[BACK]键，将回到前一检测步骤；按[ESC]键，将重新开始，
如需开始检测新的项目，按[ESC]键。 【仪器相关参数】：
光源：650 nm 红色激光
功率：0.5Mw
工作环境温度：15-30℃
电源要求：220V±10% AC 50Hz
测量杯：NEPHSTAR®特定蛋白分析仪专用测量杯 【参考范围】：
确保电源接通及仪器电源开关已打开 检查保险丝。如果保险丝熔断请更换保险丝
显示屏蓝屏,无文 字显示 将测量杯放入测量 室中,无“请加入试 剂”信息
加入试剂前就开始 测量空白
加入试剂后不读取 空白
5 分钟没有操作,仪器 进入屏保状态
测量杯未完全放入测 量室中
测量杯侧壁上粘有液 体或有大量气泡
仪器没有感应到试剂 的加入
壁上。否则，仪器可能会感应到液体的流动而自动进入测量程序。
版本:A0-201204
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8. 计时结束后，仪器将报警，并再次提示“请加入试剂”时，用电子移液器将 100L HbA1c
抗体 B 和 40L 抗体 A 一起加入测量杯中；
仪器将按程序进行空白测量和样品测量。测量时间以倒计时显示，倒计时结束后，仪器
病人准备：无特殊要求 样本要求：采用新鲜手指血，或者 EDTA 或肝素抗凝血进行测定，抗凝血在 2-8℃储存最长 不超过 72 小时，冷冻在-20℃或更低温度则可贮存更长时间。测试当天使用样品处理液处理 样品和检测。
HA-8180-校准SOP
有 效 期：1 年，见外包装上的标签内容。
5.2 溶离液 80B
用 途：本溶液用于 ARKRAY Factory, Inc.公司生产的 HA-8180 型全自动糖化血红
蛋白分析仪及 AH-8280 型全自动血糖/糖化血红蛋白分析仪的洗脱及缓
冲。
规 格：600mL×2 袋/盒
贮存方式：本溶液应在3～30℃之间密封保存。
4．标本的采集、收集与处理 4.1.样本采集 用 EDTA抗凝全血，肝素抗凝全血，不推荐草酸类，以及枸橼酸类抗凝剂。 4.2.样本保存 在2-8 °C下全血样本可保存7天；在室温下样本可保存3天。 -70°C下全血样本可保存一年，只允许1次复溶。 4.3.标本丢弃注意事项 丢弃使用后的样本时，需和一般的垃圾区别开，并按照当地废弃物相关管理规定来 处理。 4.4.样本准备 ①. 关于全血样本 请使用下列之一的抗凝剂：肝素、EDTA-2Na、EDTA-2K、EDTA-3K、NaF。为防止 层析柱的劣化，请勿使用含有碘醋酸抗凝剂的样本。 ②. 关于溶血样本 若溶血样本放置于室温下会慢慢变性，从而导致检测值的变化。请勿长时间放 置于室温下，要尽快检测。检测溶血样本时，请将血红蛋白的浓度调整在75～ 225 mg/dL（标准150 mg/dL）。超过此浓度范围时，会产生故障或导致仪器的 重复性变差。适当的改变稀释率或调整浓度后再进行检测（本仪器一般将全血 稀释101倍）。 ③. 关于去除血浆的样本 去除血浆后的样本不能放置于全血样本用试管架上检测。去除血浆的样本不能 稀释到适合的血红蛋白浓度，因此得不到正确的检测结果。需用专用的稀释液 溶血稀释，看作溶血样本来检测。
糖化血红蛋白仪SOP文件
AC6600型糖化血红蛋白分析仪使用说明简明操作规程一、准备1、将A、B、C、D洗脱液加满。
2、开机预热半小时、自检、进入系统清洗。
二、测量1、预处理样本：用EDTA抗凝全血，取出1只装有300ul溶血剂的冷冻管，然后加入IOILI的全血稀释并放入AC60电子预温器中预温5min（或37℃预温lOmin）。
2、，单个分析：放入ST位测量。
3、批量分析：设置盘号，开始位号，结束位号，按顺序将处理好的样本放在样品盘上。
三、结束l、倒空废液瓶。
2、检查层析柱剩余个数。
注意事项一、仪器的工作环境温度为15℃～30℃，最佳温度为20℃～25℃，如超出此温度范围将对测量值造成影响。
二、需每日工作前检查A、B、C、D洗脱液是否加满，以防在批量测量过程中因为试剂用完导致测试中止，延误报告时间。
三、只能使用本公司提供的废液管，不得剪短和加长或更换废液管。
四、样本只能选用EDTA二钾或二钠抗凝，应放入AC60电子预温器中预温5min(或37℃)预温lOmin)后方可测定。
五、注意全血取样时勿将移液嘴插入样本管过深，以防造成血样挂壁。
六、在测试过程中，如果A、B、C、D任何一种洗脱液用完，本次报告不打印，加人洗脱液后重新测量此样本，造成时间和试剂的浪费，切记每日工作前将洗脱液加满。
七、如遇图谱出现异常，此样本不能报告，需重做。
八、在更换预处理柱或层析柱时，恒温筒盖要拧紧，以防漏液。
九、更换预处理柱时切莫将层析柱的密封圈带走，以防漏液。
十、更换预处理柱和层析柱时，先将A洗脱液和IC卡拿出，否则液体会不慎滴入IC卡。
十一、换上层析柱后，需预测同一个样本2～3次，稳定后正常启用C1和C2校正后测量。
十二、不能在仪器运行过程中强行关机。
十三、关机间隔超过15分钟后再开机，需预热半小时，必须进入仪器自检和系统清洗程序。
十四、工作完成后，应每日检查层析柱剩余数，及时订货。
十五、每日工作后将废液瓶倒空，以防废液溢出，影响工作环境。
糖化血红蛋白的SOP
糖化血红蛋白检测的SOP预期用途适用于体外定量检测人手指末梢血、静脉全血样本中的糖化血红蛋白的浓度。
检验原理糖化血红蛋白检测试剂盒是硼酸亲和色谱层析法。
试剂盒由层析器、R1试剂、R2试剂组成。
R1试剂包括专门裂解红细胞和沉淀血红蛋白及一种结合糖化血红蛋白的蓝色硼酸共轭物。
当血液加至R1试剂中时，红细胞裂解，并且所有的血红蛋白沉淀，硼酸共轭物与糖化血红蛋白的顺式二醇配合物相结合。
一定量的反应混合物加入到层析器，所有沉淀的血红蛋白与糖化血红蛋白结合或未结合的硼酸共轭物残留到层析器膜上。
任何未结合的硼化物通过R2试剂移除。
该沉淀通过使用分析仪分别检测蓝色（糖化血红蛋白）和红色（总血红蛋白）的颜色强度进行定量分析，从而测定血液样本中糖化血红蛋白的百分比。
样本要求：加了抗凝剂（EDTA、肝素、柠檬酸钠）的样本可在2-8℃保存7天，不能用血红蛋白裂解的样本。
不能冻融。
没有添加抗凝剂的手指末梢血和静脉全血样本采样后要立即检测。
检验方法在检测之前所有的检测试剂应平衡至室温。
分析仪内置定标曲线，测试前不需要定标。
A采集5ul的全血样本至R1试管中，混合均匀，至少反应2分钟，最多不能超过3分钟。
B待全血样本与R1反应完毕后，再次摇晃该试管以便组分充分混合。
打开试管吸取25ul的混合物，加入到层析器中。
注意过程中不要触碰到层析器中的滤膜，也不能让样本有气泡产生。
C当步骤2中的混合物被层析器完全吸收后，再取25ul的R2试剂滴到层吸器上，反应大约10秒。
D待R2试剂被完全吸收后，把层析器放到托盘上，用分析仪进行分析。
E分析仪在每次开机时有自动校准功能，校准成功才能开展上述试验。
参考区间参考区间为：4.3-6.0％检验结果的解释血液中红细胞内的血红蛋白与血糖结合的产物是糖化血红蛋白，血糖和血红蛋白的结合生成糖化血红蛋白是不可逆反应，并与血糖浓度成正比，且保持120天左右，所以可以观测到120天之前的血糖浓度。
糖化血红蛋白测试通常可以反应患者近8至12周的血糖控制情况。
PDQ糖化血红蛋白分析仪SOP
二、检验目的1. 测定Hba1c数值三、实验原理高压液相。
四、样本要求EDTA-K2全血（2ml）1.五、操作过程2.启动仪器6分钟注：完成开机程序后, ’’Run sample”画面( 若未离开SYSTEM READY画面,仪器不会进入睡眠, 会不停以每分钟2mL速度消耗药水，浪费试剂！！！)3.标本测定全血稀释样本（1：100稀释）或者注：洗针专用试管放至转盘0的位置并且条形码朝内，机器会自动侦测试管、确认条形码，并自动清洗针及管路并做Shutdown。
整个流程约需15分钟。
7.更换层析柱更换层析柱需要做以下步骤：1. 更换柱子时，插盘前在主界面按7（Auxiliary）→5(Cycle Count)→1(Display Column Cycles)后在键盘上按打印按钮，会打印出Column Cycles以及Instrument Cycles(仪器测量记录)2. 更换柱子时必须复位柱子计数，即插入软盘，将柱子计数复位至9000，并打印记录提供给厂家。
步骤: 在主界面按7（Auxiliary）→4(Prime)→4(Change Column)后输入密码“1379”按回车后，输入操作者ID：01按回车，此时软驱灯呈绿色大概10秒后灯熄灭，此时按面板上的红色打印键会打印出以往更换柱子的记录，及每根柱子做的个数。
3. 更换下来的旧柱子，更换的新柱子的批号（手工写在层析图上面即可）；需打印的层析图，包括定标未通过的空白、高、低定标液的层析图；以及更换了柱子后的高低定标液的层析图；试剂批号（4个试剂的批号，手工写在层析图上面即可）；4. 维护记录（在主菜单下按[9]，输入密码：1379后即可打印）；5. 所有的图形,报告及更换下来的柱子需在一星期内邮寄到我公司。
注意：1.如果不用马上安装色谱柱，请将其储存在2°- 8°C 的冰箱中。
2.在安装到系统中前，请让色谱柱恢复至室温。
3.如果预计设备将停用7 天或更长时间，在关闭设备后将色谱柱取出。
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糖化血红蛋白定量检测标准操作规程（SOP）
1．项目名称、检验方法名称
●糖化血红蛋白
●微粒色谱法
2．方法学原理
本试剂盒包含多孔性滤膜装置，含试剂的试管和洗涤溶液。
试剂能溶解红细胞并特异性沉淀血红蛋白因子，其中蓝色的硼酸缀合物能和糖化血红蛋白上的Cis-diols相结合。
血液加入试剂中，红细胞立即溶解，使全部的血红蛋白都沉淀，硼酸缀合物就和糖化血红蛋白中的cis-diol结构相结合。
血液和试剂混合后加入滤膜装置，所有沉淀的血红蛋白，不管是和缀合物结合的或未结合的都保留在滤膜的顶部。
过量的显色缀合物就被洗涤液洗掉。
通过NycoCard READERⅡ金标定量仪测定蓝色（糖化血红蛋白）和红色（总血红蛋白）的强度，可以计算样品中的HbAlc的百分比。
3．试剂品牌、规格、内含物
●挪威Nycocard
●规格及内含物
1)反应板（含滤膜）1×24块
2)试剂R1 1×24×0.2ml 含有锌的甘氨酰胺缓冲液，染料硼酸缀合物及表面活性剂。
3)洗涤液R2 1×2.0ml 吗啉缓冲液及表面活性剂。
4)未提供的材料
〃5μl吸管或毛细管，用于加样品
〃25μl吸管，用于加反应混合物及洗涤液
4．仪器品牌、型号
●挪威Nycocard
●Reader II
5．操作步骤
1)分离血红蛋白和糖化血红蛋白加5μl全血于含R1的试管中，混匀，放置3分钟。
（注意：保证在混合后毛细管是完全空的。
）
2)样品的使用再混匀，得到均匀的悬液，用吸管加25μl悬液到反应板中，吸管头离反应孔0.5cm，将吸管内的液体快速加入反应孔的中部。
让悬液渗入滤膜，等候15－20秒。
（注意：避免气泡。
）
3)洗涤加25μl洗涤液R2于反应板，让洗涤液完全渗入滤膜。
等待10秒钟。
（注意：避免气泡。
）
4)结果测定在5分钟内用仪器NycoCard READER II读取结果。
6．参考范围
测量值范围：3 －18％HbAlc 正常值范围：4.5－6.3 % HbAlc 7．临床意义
1）糖尿病的诊断
2）有助于糖尿病并发症的发现和预防,降低并发症的危险性。
8．病人准备、标本要求
加抗凝剂或不加抗凝剂（EDTA、肝素和NaF）的毛细管血和静脉血均可应用。
9．注意事项
10．编写者
11．主任签名
12．日期。