DH5α大肠杆菌克隆菌株
最新大肠杆菌BL21和DH5α的区别(精品课件)
DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA1
BL21(DE3) 菌株
该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
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基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3）BL21(DE3) pLysS菌株
该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋
白和非毒性蛋白。
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基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3，pLysS ，Camr
最直接的区分就是克隆菌株和表达菌株的区别
大肠杆菌DH5α做克隆或保存质粒用，BL21用来做原核表达用。
当然也有人用DH5α做表达也能表达出来。
也有人用BL21保存质粒的，但时间久了，质粒容易丢失。
你要是做原核表达的话，应该会现用前者克隆得到重组质粒，转化入后者进行表达
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dh5α基因型
dh5α基因型
DH5α是一种大肠杆菌（Escherichia coli）的菌株，其基因型为F-φ80dlacZΔM15Δ(lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rK−, mK+) phoA supE44 λ−thi-1 gyrA96 relA1。
其中，F-表示其缺失了F因子，φ80dlacZ表示其带有一个lacZα基因的φ80质粒，ΔM15和Δ(lacZYA-argF)表示其不具有M15和(lacZYA-argF)的功能，U169表示其具有一个点突变，recA1表示其缺失了一个重组蛋白A，endA1表示其缺失了一个核酸内切酶，hsdR17表示其具有一个限制酶，phoA表示其具有一种碱性磷酸酶，supE44表示其具有一种抑制突变的基因，λ−表示其不具有λ噬菌体的能力，thi-1表示其具有一种硫代巴嘧啶合成酶的突变，gyrA96表示其具有一种DNA旋转酶A的突变，relA1表示其具有一种抑制蛋白的突变。
DH5α是一种常用的菌株，用于分子生物学和基因工程领域的研究中。
大肠杆菌DH5a使用说明
E.coli Competent CellsDH5α使 用 说 明 书Takara Code : D9057A 包 装 量 Competent Cells DH5α 100 μl × 10 支 Control DNA （pUC19，0.1 ng/μl ） 10 μl × 1 支 保 存 : -80℃ 制品说明 感受态细胞（Competent Cells ）是一种具有摄入外源DNA 能力的受容菌，它可以摄取外源的质粒DNA 等。
在进行基因重组实验时，使用感受态细胞的转化实验应用十分广泛。
在制作基因文库、重组质粒体以及进行亚克隆实验时，特别是在目的基因含量十分低的情况时，使用高效的感受态细胞显得十分重要。
Takara 公司在Hanahan 方法的基础上进行了改良，制备出了高效的感受态细胞（都为EK1系列的宿主大肠杆菌）。
Genotype F -,φ80d lac Z △M15, △(lacZYA-argF )U169, deoR , recA 1, endA 1, hsdR 17(r k -,m k + ), phoA , supE 44, λ-, thi -1, gyrA 96, relA 1 细胞种类 α-互补性选择宿主 E.coli DH5α E.coli DH5α在使用pUC 系列质粒载体进行DNA 转化时，由于载体DNA 产生的LacZ α多肽和DH5α编码的lacZ △M15相结合，从而显示β-半乳糖苷酶活性（α-互补性）。
利用这一特性，可以很容易鉴别重组体菌株。
DH5α可以用于制作基因库、进行亚克隆等，由于DH5α具有decR 变异，可以作为较大质粒的宿主菌使用。
细胞浓度 : 1～2×109 Bacteria/ml 质量标准 1. 使用1 ng 的质粒DNA 进行转化时： 100 μl Competent Cells DH5α/1 ng pUC19 Plasmid 进行转化时产生的菌落＞1×108 transformants/1 μg pUC19 Plasmid 2. β-半乳糖苷酶、α-互补性的确认 对E.coli Competent Cells DH5α使用pUC19 DNA 进行转化后，在含有100 μg/ml 的Ampicillin 、40 μg/ml 的X-Gal 的L-琼脂平板培养基上，产生蓝色菌落。
大肠杆菌基因工程菌常用类型
1、大肠杆菌DH5a菌株DH5a是世界上最常用的基因工程菌株之一。
由于DH5α是DNA酶缺陷型菌株，有利于基因克隆，保存质粒，但该菌株的蛋白酶没有缺陷，表达的蛋白容易被降解，因此通常不作为表达菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α-互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA12、大肠杆菌BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT，hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3）3、大肠杆菌BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3，pLysS ，Camr4、大肠杆菌JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α-互补，从而显示β-半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株。
基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]5、大肠杆菌TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
各种大肠杆菌菌株特点
各种大肠杆菌菌株特点1：DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA12：BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT，hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3）3：BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3，pLysS ，Camr4：JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’5：TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)，φ80 ，lacZΔM15，△lacⅩ74，recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697，galU ，galK ，rps，(Strr) endA1，nupG6：HB101菌株该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验基因型：supE44，hsdS20（rB-mB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-17：M110或SCS110大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基，后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶 C-5位置上引入甲基。
大肠杆菌DH5a感受态细胞转化率的改进
大肠杆菌DH5α感受态细胞转化率的改进桓明辉摘要：针对实验材料E．coli DH5α，对该茵株在不同生长时期的转化效率进行测定，确立了一个能制备高转化率感受态细胞的实验方案。
结果表明：在细茵的生长繁殖过程中，其转化率有很大变化；结果：得到了E．coil DH5α茵株制备感受态细胞的最佳条件。
关键词：大肠杆茵；感受态；转化率DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC 系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补，可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
感受态细胞的制备和转化是分子生物学实验室频繁使用的一项重要的常规操作。
对细菌而言，为达到高效转化，活细胞数务必少于l08细胞／m1。
对于大多数E.coli来说，相当与OD600为0.4左右，但由于转化是一个很复杂的过程，具体的作用机理仍在探究中。
有文献指出[1]，细菌的最佳感受态细胞制备期对于不同菌株是不同的，并不一定都是在活细胞浓度为l08细胞／ml的时候最适宜，有必要针对所使用的菌株确定其最佳转化条件。
1 材料与方法1.1 材料与试剂菌株与质粒：E．coli DH5α，pUC18质粒由本实验室保存。
X-gal，IPTG，LB培养基，氨苄青霉素溶液，0.1 mol／L CaCl2溶液，均按《分子克隆实验指南》的要求配制。
1.2 方法1.2.1大肠杆菌生长情况的测定：从平板上挑取单个菌落(直径2～3 mm)到含有30ml LB培养基的锥形瓶中，37℃下250 r／min培养过夜。
取出0.3 ml培养物到含有l5 ml LB培养基的摇菌试管中，继续振荡培养，每隔20 min 取出一支摇菌试管，放于冰箱．统一测定菌液的OD600，绘制生长曲线。
选取几个不同时相的菌液倍比稀释从lO-1～lO-6，各取0.1 ml 稀释液涂布LB平板培养基，37℃正向培养1 h后，倒置培养l2～16 h。
每个稀释度铺3个平板，计数，作OD600一活菌细胞浓度图。
常用大肠杆菌感受态的区别
常用大肠杆菌感受态JM109，DH5a，BL21等的区别1：DH5a菌株DH5a是一种常用于质粒克隆的菌株。
E.coli DH5a在使用pUC系列质粒载体转化时，可与载体编码的β－半乳糖苷酶氨基端实现α－互补。
可用于蓝白斑筛选鉴别重组菌株。
基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA12：BL21(DE3) 菌株该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。
T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。
该菌适合表达非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT，hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3）3：BL21(DE3) pLysS菌株该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。
PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。
该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。
基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3，pLysS ，Camr4：JM109菌株该菌株在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化或用M13 phage载体进行转染时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和JM09编码的LacZΔM15进行α－互补，从而显示β－半乳糖苷酶活性，由此很容易鉴别重组体菌株基因型：recA1，endA1，gyrA96，thi－1，hsdR17，supE44，relA1，Δ（lac－proAB）/F’[traD36，proAB+，lacIq，lacZΔM15]5：TOP10菌株该菌株适用于高效的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。
基因型：F- ，mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)，φ80 ，lacZΔM15，△lac Ⅹ74，recA1 ，araΔ139Δ(ara-leu)7697，galU ，galK ，rps，(Strr) endA1，nupG6：HB101菌株该菌株遗传性能稳定，使用方便，适用于各种基因重组实验基因型：supE44，hsdS20（rB-mB－），recA13，ara－14，proA2，lacY1，galK2，rpsL20，xyl-5，mtl-1，leuB6，thi-17：M110或SCS110大多数大肠杆菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶，前者可以在GATC序列中腺嘌呤N-6位上引入甲基，后者在CCA/TGC序列的第一个胞嘧啶C-5位置上引入甲基。
DH5a大肠杆菌克隆菌株使用说明
DH5a大肠杆菌克隆菌株编号 名称北京华越洋生物NRR01300 DH5a大肠杆菌克隆菌株基本信息：名称 DH5a大肠杆菌克隆菌株规格 300ul甘油菌类别 大肠杆菌克隆菌株抗性 无培养基 LB培养方式 37℃，有氧保存方式 20%甘油，-‐80℃基因型:F-‐ endA1 glnV44 thi-‐1 recA1 relA1 gyrA96 deoR nupG Φ80dlacZΔM15 Δ(lacZYA-‐argF)U169, h sdR17(rK-‐ m K+), λ–菌株简介:DH5α菌株是实验室最常用的感受态细胞。
缺失核酸内切酶(endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型(recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于蓝、白斑筛选。
DH5α菌株的缺点是生长缓慢，37℃需培12-‐14小时才能看见克隆；如需加快试验速度，请选用TG1，Mach1-‐T1，XL10-‐Gold等生长速度快的感受态细胞。
操作说明：1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。
也可以完全融解后使用，但随着冻融次数的增加，细菌的活力会逐渐下降。
2，为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆菌落进行后续操作。
冷冻管开封：用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。
菌株复溶：无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取1ml 左右复溶液，加入到冷冻管中。
轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。
菌株复壮：用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。
做好标识，在适宜温度下培养。
细菌在30-‐35℃培养箱中培养24-‐48h，真菌在23-‐28℃培养箱中培养24-‐72h （必要时，可适当延长培养时间）。
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产品信息：
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P1435
DH5α Strain
100μl
-20℃
基因型：
F-φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA
基本信息：
抗性：无
培养基：LB
菌株类别：大肠杆菌克隆菌
培养条件：37℃，有氧，LB
质粒转化：42℃热激
保存方式：20%甘油，-20℃
基本应用：用于基因克隆
备注：
菌株简介：
DH5α菌株是实验室最常用的菌株。缺失核酸内切酶(endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型(recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性；DH5α在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化时，由于载体DNA产生的LacZa多肽和DH5α编码的lacZ△M15相结合，从而显示β-半乳糖苷酶活性(α-互补性)，使DH5α可用于蓝、白斑筛选。DH5α可以用于制作基因库、进行亚克隆，同时于DH5α具有deoR变异，可以作为较大质粒的宿主菌使用。DH5α菌株的缺点是生长缓慢，37℃需培12-14小时才能看见克隆。