高效液相色谱法测定石杉碱甲缓释微丸的含量
高效液相色谱法测定石杉碱甲片的含量
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解放 军 药学学报
第 １ ８卷 第 ４期
高效 液相 色谱法 测定 石杉 碱 中厅 明含量
孙建 绪
・２ １ ・ ３
・
研 究 简 报 ・
高效液相色谱法测定石杉碱甲缓释贴片中石杉碱甲的含量
（ Ｐ Ｃ ｏ ｇｌ ｔ ｏｂｘＥ ｉｓ Ｘ — ｃｌｍ ｉ ． ｔｅ ｙ ｍｉ ｐ ０ ， Ｈ Ｌ ） ｎＡ ｉ ｎ ｒａ ｈｐｅＤ Ｂ Ｃ ｏｕ ｎｗｔ ０８ ｒ ｔ ｌ ｎ ｎ １． ｅ Ｚ ｈ ％ ｉｈ ａ ｅ（ ５
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Ｑ 年９ 月第 １ 卷第 ９ Ｃ ｉ ｓ Ｒｍ ｄ ｓ ｌｉ １ 期 ｈ ｅ ｅ ｅｉ ＆ｃｉｃ ｎｅ ｅ ｓ
高效液相色谱法测定石杉碱 甲缓释贴 片 中 石杉碱 甲的含量
吴 婷 张 军 储继红 居 文政 许 美娟 陈 玟 谈恒 山
【 摘
要 】 目的 测定石杉碱 甲 释贴片 中石杉碱 甲的含量。 缓 方法 采用高效液相色谱法（ Ｐ ｃ ，ｇｅｔ Ｈ Ｌ ）Ａ ｉｎ ｌ
【 关键词 】 色谱法 ， 高压液相 ；迟效制剂 ；质量控制 ；石杉碱 甲
Ｄｅ ｅ ｍｉ ａ ｉ ｎ ｏ ｕ ｅ ｚ ｎ ｉ ｕ ｅ ｚｎ ｓ ｓａ ｎ ｄ－ ｅｅ ｓ ａ ｃ ｅ ｙ ｈ ｇ ｅ ｆ ｒ ｎ ｅ ｌ ｕ ｄ ｃ ｒ － ｔ ｒ ｎ ｔｏ ｆ ｈ ｐ ｒ ｉ ｅ Ａ ｎ ｈ ｐ ｒ ｉ ｅ Ａ ｕ ｔ ｉ ｅ ｒ ｌａ ｅ ｐ ｔ ｈ ｓ ｂ ｉ ｈ ｐ ｒｏ ｍａ ｃ ｉ ｉ ｈ ｏ ｑ
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HPLC法测定巍山扁枝石松中石杉碱甲的含量
【 中图分类号】 ２６０ Ｒ ８．２
【 文献标识码】 Ａ
【 文章编号 】６２ ５３２０ ）２ ０４ — ２ １７—８ｌ（０９０ — １６ ０
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高效液相法测定石杉碱甲在大鼠血浆和脑组织中的浓度
Ch inese Journa l of New D rugs 2009, 18( 4)
mL - 1 ,脑组织中为 2. 5 ng·g- 1 。 7 回收率和精密度
取 3个不同浓度的对照品标准液分别加入 到空白 血 样 和 脑 样 中 , 各 浓 度 均 为 5 份 。按 样 本处理方法操作 ,另配制相应浓度的标准溶液 , 不经萃取直接以等量进样 ,分别测其峰面积 ,两 组峰面积 进 行 比 较 , 计 算 血 浆 和 脑 组 织 中 H up A 的绝对回收率 。以 标 准 曲 线 方 程 计 算 其 检 出 量与加 入 量 的 比 值 , 得 其 相 对 回 收 率 。日 内 重 复 5 次 ,连续 3 日 ,得 日 内 日 间 精 密 度 。结 果 见 表 1。
仪器与试药
岛津 LC 10A 高效液相色谱仪 (双泵 , SCL 10A 系统控制器 , SPD 10A 紫外检 测器 , CTO 10A恒温箱 ) ;浙大 N2000色谱工作站 (浙江大学智 能工程研究所 ) 。
Hup A 对照品 (浙江省药品检验所标化 ,浙江 万邦药业有限公司生产 ,批号 : 060103) ; Hup A 原料 (浙江万邦药业有限公司 ,批号 : 050509) ;内标石杉 碱乙 (Huperzine B , Hup B )由上海药物研究所提供 。 甲醇为色谱纯 ,其他试剂均为分析纯 。
浓 度
血浆 / ng·mL - 1
2. 5
50
100
脑组织 / ng·g - 1
2. 5
10
40
表 1 回收率和精密度试验结果
在上述色谱条件下 ,获得给药前空白血浆 、空白 脑组织及大鼠 Hup A 鼻腔给药后的样品色谱图 ,结 果见图 1,可见 Hup A 保留时间约为 12. 0 m in,内标 Hup B 保留时间约为 10. 7 m in。各峰分离良好 ,无 杂峰干扰测定 。
高效液相色谱法定量测定中药千层塔提取物中的石杉碱甲
高效液相色谱法定量测定中药千层塔提取物中的石杉碱甲张敬彩;魏杰;钟虹敏;郭志谋;张华【摘要】建立了高效液相色谱快速定量测定中药千层塔提取物中石杉碱甲含量的分析方法.千层塔提取物经甲醇/水/甲酸(10/90/0.2,v/v/v)提取并定容后,过滤膜后直接分析.色谱分离选用XCharge C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),以水(含0.1％三氟乙酸)和乙腈(含0.09％三氟乙酸)为流动相进行梯度洗脱,流速为2mL/min,于310 nm波长下检测,可在10 min内完成石杉碱甲的快速分离分析.结果表明,石杉碱甲在2.12 ～106mg/L范围内线性关系良好(相关系数为0.9999)；平均加标回收率为102.34％,相对标准偏差(RSD)为0.46％；日内及日间精密度均小于2％,满足定量要求.该方法简便、快速,结果可靠,重现性好,可作为千层塔提取物质量评价的依据.%A high performance liquid chromatographic ( HPLC) method was established to determine the Huperzine A in the extract of Huperzia serrata. After extracted by methanol/ water/formic acid (10/90/0. 2, v/v/v) , the sample was filtered for HPLC analysis. The separation was performed on an XCharge C18 column (150 mm ×4. 6 mm, 5 μm) by gradient elution with water (containing 0. 1% (v/v) trifluoroacetic acid) and acetonitrile (containing 0.09% (v/v) trifluoroacetic acid) as the mobile phases. Rapid separation was achieved within 10 min at a flow rate of 2 mL/min with ultraviolet absorption detection at a wavelength of 310 nm. Under the optimized conditions, good linearity was obtained in the range of 2. 12 - 106 mg/L with the correlation coefficient (R2) of about 0. 999 9. The average recovery was 102. 34% with the relative standard deviation (RSD) of 0.46%. The intraday and interday precisions were all below 2%.The results demonstrate that this method is simple, rapid and accurate with good reproducibility, and can be used to evaluate the quality of Huperzia serrata.【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2013(031)001【总页数】4页(P79-82)【关键词】高效液相色谱法;生物碱;石杉碱甲;千层塔;中草药【作者】张敬彩;魏杰;钟虹敏;郭志谋;张华【作者单位】大连理工大学化学学院,辽宁大连116023;中国科学院大连化学物理研究所,辽宁大连116023;大连理工大学化学学院,辽宁大连116023;中国科学院大连化学物理研究所,辽宁大连116023;大连理工大学化学学院,辽宁大连116023【正文语种】中文【中图分类】O658中药千层塔为石杉科石杉属多年生草本植物蛇足石杉Huperzia serrata(Thunb）T.的全草，出自《植物名实图考》，功能主治清热解毒、止血定痛散瘀。
高效液相色谱法测定石杉碱甲胶囊溶出度
高效液相色谱法测定石杉碱甲胶囊溶出度
郑国钢;李会林
【期刊名称】《医药导报》
【年(卷),期】2009(028)010
【摘要】目的建立石杉碱甲胶囊溶出度的高效液相色谱方法.方法以盐酸溶液(9→1000)100mL为溶出递质,转速为35r·min-1,取样时间为30min,采用溶出度第三法测定.结果石杉碱甲在0.13～1.02μg·mL-1的浓度范围内,线性关系良好.线性方程为:A＝103.95C-0.15(r＝1.0000);平均回收率为98.0%(RSD＝0.7%);4批样品30min平均溶出度均＞80%.结论该方法简便、准确、重现性好,可用于石杉碱甲胶囊的质量控制.
【总页数】3页(P1351-1353)
【作者】郑国钢;李会林
【作者单位】浙江省食品药品检验所,杭州,310004;浙江省食品药品检验所,杭州,310004
【正文语种】中文
【中图分类】R971;R927.1
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张艺馨;程平;张秀英
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高效液相色谱法测定蛇足石杉中石杉碱甲的含量
高效液相色谱法测定蛇足石杉中石杉碱甲的含量顾月华;吴庆庆【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2005(21)8【摘要】目的建立了蛇足石杉中石杉碱甲含量的测定方法并比较植物不同药用部位石杉碱甲的含量.方法采用DiamonsilTm C18柱(200 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇:0.08 mol·L-1醋酸铵缓冲液(40:60,pH=6.0),检测波长为308 nm,流速为1.0 ml·min-1,柱温为室温.结果石杉碱甲在5～100 mg·L-1浓度范围线性关系良好(r=0.9997),平均回收率为98.10%,RSD为2.44%(n=5),对蛇足石杉不同药用部位的进行了石杉碱甲含量测定,结果表明,叶中石杉碱甲含量最高,茎次之,根最低.结论本法简便、准确、重复性好.石杉碱甲集中分布在植物的地上部分中.【总页数】2页(P1017-1018)【作者】顾月华;吴庆庆【作者单位】中国科学技术大学生命科学学院,安徽,合肥,230027;中国科学技术大学生命科学学院,安徽,合肥,230027【正文语种】中文【中图分类】R282.71;R284.1;R446.1;R927.2【相关文献】1.LC-MS法测定不同产地蛇足石杉石杉碱甲含量 [J], 李关艳;苏有勇2.UFLC法测定蛇足石杉不同部位的石杉碱甲含量 [J], 张方方;郑雅媗;黄小强;谌赛男;吴水生3.HPLC法测定蛇足石杉及闽浙马尾杉不同部位的石杉碱甲含量 [J], 郑雅媗;刘海元;张方方;吴水生;4.HPLC法测定不同产地蛇足石杉中石杉碱甲含量 [J], 陈燏5.HPLC法测定蛇足石杉中石杉碱甲含量 [J], 孙远明;余红英;杨跃生;杨金易;张明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法定量测定中药千层塔提取物中的石杉碱甲
ｍ 微孔 滤膜 于液相 小瓶 中备用 。
１ ． ２ ． ３ 色谱 条件 色谱柱 ： Ｘ Ｃ ｈ ａ ｒ ｇ ｅ Ｃ １ ８柱 （ １ ５ ０ ｍｍ ｘ ４ ． ６ ｍＥ ， ５ Ｉ ｘ ｍ） ； 流动相： ０ ． １ ％ 三 氟 乙酸 水 溶 液 （ Ａ） 和
正 电 荷 能 显 著 改 善 碱 性 化 合 物 的 峰 形 和 载 样
定 的局 限性 … 。我们 研 究 发 现 在 Ｃ １ ８柱 表 面 引 入
精 密称 取 ２ ０ ． ０ ｍｇ ２个 千层 塔提 取 物 各 ３份 ，
于 ５ ０ ｍＬ容 量 瓶 中 ， 用 甲 醇／ 水／ 甲酸 （ １ ０ ／ ９ ０ ／ ０ ． ２ ， ｖ ／ ｖ ／ ｖ ） 溶液 定 容 。超 声 ｌ ０ ａｉ ｒ ｎ ， 取上清液 过 ０ ． ２ ２
量 ’ ” 。北京 华谱新 创 公 司 和 Ｗａ ｔ ｅ ｒ ｓ公 司分 别 推
０ ． ０ ９ ％ 三 氟 乙酸 乙 腈 （ １ ３ ） ； 梯度 洗脱 ： ０～ｌ ０ ｍｉ ｎ，
５ ％ Ｂ ～８ ％ Ｂ； 流速 ： ２ ． ０ ｍＬ ／ ｍｉ ｎ； 检测 波 长 ： ３ １ ０
质量 浓度 为 １ ０ ６ ． ０ 、 ５ ３ ． ０ 、 １ ０ ． ６ 、 ５ ． ３ 、 ２ ． １ ２ ｍｇ ／ Ｌ的标
准溶 液 。 １ ． ２ ． ２ 供 试 品溶液 的配 制
低ｐ Ｈ下 进行 分 离 ， 使 用末 端 未 封 尾 的 ｃ１ ８柱 依 然 存在色谱峰 拖尾 、 保 留 时 间 较 短 的 问 题 。 因 此， 选择 能获得对 称 峰 形 的 色谱 柱 和合 适 的流 动 相 对 于石杉 碱 甲的色谱 分离 分析 十分 重要 。改善 封尾 效果 和引 入极性 基 团是两 种常 用的 降低色谱 柱分 离 碱性 化合 物时 峰形 拖 尾 的 主要 途 径 ， 但是 都存 在 一
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高效液相色谱法测定石杉碱甲缓释微丸的含量目的: 建立石杉碱甲缓释微丸含量测定方法。
方法:采用反相高效液相色谱
法,以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相,乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾(20:80,含0.02 mol/L三乙醇胺)为流动相;检测波长:312 nm;流速:1 ml/min;进样量:20 μl。
结果:利用选定的色谱条件,可使石杉碱甲与其酸、碱分解产物、热分解产物、石杉碱乙等杂质达到有效分离。
石杉碱甲的回收率为99.8%。
在浓度为 5.0～15.0 μg/ml 范围内呈良好的线性关系。
回归方程为:A=2 022.96+16 192.5C,r=0.999 1。
结论:本方法操作简便,准确,重现性好,为该制剂的含量测定提供了依据。
标签：石杉碱甲;微丸;高效液相色谱法;含量
石杉碱甲是从石杉科植物蛇足石杉中分离出的生物碱之一。
临床主要应用于治疗老年性痴呆症。
石杉碱甲片剂规格为50 mg/ 片,剂量为1～2 片/次,每天3 次。
为了提高患者的顺应性,更好地发挥药效,笔者将石杉碱甲制成1天服用1次的缓释微丸,使药物作用时间延长,疗效好,患者顺应性提高。
本文在文献基础上,建立了石杉碱甲的RP-HPLC含量测定方法,以方便制剂的研究和质量的控制。
1 仪器与试药
HR-120电子天平(日本岛津);TU-1901紫外可见分光光度计(北京普析);高效液相色谱仪,日本岛津LC-10ATVP;石杉碱甲原料(含量:99.5%;浙江温岭制药厂),石杉碱甲精制品(含量:99.7%;浙江温岭制药厂),石杉碱甲缓释微丸(自制);试验中所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 检测波长的确定
称取石杉碱甲对照品适量,用甲醇配置成每1毫升中含10 μg的溶液,按紫外分光光度法(《中国药典》2000版二部附录IV A)在200～400 nm波长范围内,绘制紫外光谱,石杉碱甲在231 nm和312 nm处有最大吸收。
空白辅料可能在231 nm 波长有干扰,所以将测定波长确定为312 nm。
2.2 色谱条件及系统适用性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.05 mol/L 磷酸二氢钾(20∶80含0.02 mol/L三乙醇胺)为流动相;检测波长:312 nm;流速:l ml/min;进样量:20 μl。
理论塔板数按石杉碱甲计应不低于1 500。
2.3 准确度试验
石杉碱甲对照品溶液的配制:精密称取石杉碱甲对照品约10 mg,置10 ml量
瓶中,以乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀。
按处方比例精密称取石杉碱甲对照品溶液及辅料分别配制成每包约含石杉碱甲0.08、0.1、0.12 mg的三种样品各3份,按含量测定项下所述方法测定回收率。
结果见表1。
2.4 线性关系试验
精密称取石杉碱甲对照品,以流动相配制成每毫升约含5.0、7.5、10.0、12.5、15.0 μg的溶液,分别精密量取上述各溶液20 μl注入液相色谱仪,记录色谱图,将测定结果以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标进行线性回归,计算回归方程为:A=2 022.96+16 192.5C,r=0.999 1。
2.5 精密度试验结果
可取线性关系试验中,中间浓度的溶液,重复进样5次,记录峰面积,结果石衫碱甲峰面积的RSD[2]为1.26%,表明方法的精密度良好[1]。
2.6方法的专属性试验
2.6.1取石杉碱甲约10 mg,加0.5 mol/L硫酸10 ml,加热煮沸约10 min,使分解再取该溶液1 ml以流动相稀释成每毫升约含20 μg的溶液。
按上述色谱条件测定。
2.6.2取石杉碱甲约10 mg,加0. 5 mol/L氢氧化钠10 ml,加热煮沸约10 min,使分解再取该溶液1 ml以流动相稀释成每毫升约含20 μg的溶液。
按上述色谱条件测定[2-3]。
2.6.3取石杉碱甲约10 mg,直火加热使分解,再取该破坏后的残渣以流动相稀释成每毫升约含20 μg的溶液。
按上述色谱条件测定。
试验结果表明,石杉碱甲在用上述条件破坏后产生的杂质,可在本色谱系统得到较好的分离,说明本色谱系统适用于石杉碱甲缓释微丸的质量控制。
2.7 测定法
取本品10个包装,倾出内容物,研细。
精密称取该细粉适量(约相当于石杉碱甲0.1 mg),置锥形瓶中,精密加入流动相10 ml使溶解摇匀,滤过,滤液作为供试液。
另精密称取105℃干燥至恒重的石杉碱甲对照品10 mg,以流动相稀释成每1毫升含10 μg的溶液,作为对照液。
分别精密量取供试液和对照液各20 μl,注入液相色谱仪中,按上述条件测定,外标法计算,即得。
3 讨论
为了使主成分与相关的杂质达到有效分离,我们主要调整了流动相中强冲洗
组分乙腈的比例:如20%、25%、30%,观察石杉碱的分离情况。
结果表明增大乙腈的比例石杉碱甲的保留时间由原来的约10 min缩小至约5 min。
这样将不利于与相关的杂质的分离[4]。
而将乙腈的比例定为20∶80则比较合适。
[参考文献]
[1]刘小林,程春荣,曹威,等.石杉碱甲的药理作用与临床应用研究进展[J].医药导报,2006,25(2):90-95.
[2]孙远明,余红英,杨跃生,等. HPLC法测定蛇足石杉中石杉碱甲含量[J].中草药,2002,33(12):1078-1079.
[3]孙建绪,翁骏,高永良.高效液相色谱法测定石杉碱甲片的含量[J].解放军药学杂志,2002,18(4):52-53.
[4]赵志刚,哈伯因.石杉碱甲片[J].中国新药杂志,1998,7(3):193.。