多发性骨髓瘤患者IgH_MMSET基因的检测及其意义_姜华
血清游离轻链检测在多发性骨髓瘤的临床意义
血清游离轻链检测在多发性骨髓瘤的临床意义发表时间：2016-06-29T13:46:53.353Z 来源：《中国医学人文》2016年第4期作者：赵雪芸徐宁王强王艺任秀莲[导读] sFLC 检测是一种高度敏感的定量检测方法，与免疫固定电泳结合，可以提高疾病检出率，有助于 MM 患者的诊断。
赵雪芸徐宁王强王艺任秀莲（内蒙古包头市中心医院血液科 014040）【摘要】目的探讨血清游离轻链(sFLC) 检测对于多发性骨髓瘤(MM) 诊断的临床意义。
方法选择2012 年8 月至2015 年10 月在我院收治的32 例初发MM 患者；正常对照26 例，为我院体检中心体检结论正常的健康人。
采用免疫比浊法测定病例组及对照组sFLC-κ、sFLC-λ，计算sFLC-κ/λ 比值(rFLC)，比较两组间差异。
同时检测病例组尿轻链(uFLC )、血清总轻链(sTLC)、免疫固定电泳(IFE)、血清蛋白电泳(SPE)，分别与血清FLC 检测法比较敏感性。
结果病例组sFLC 及rFLC 与正常对照组比较有明显统计学差异(P<0.001)。
32 例初发MM患者sFLC、rFLC 31 例阳性，阳性率96.9%；应用血清总轻链法检测有24 例检测出异常轻链，检出率为75%，两组检出率比较存在统计学差异(P<0.05)。
应用尿轻链测定法检测25 例存在异常轻链，检出率为78%；应用SPE 检测有26 例为阳性，阳性率为84%，以上两种检测方法与血清FLC 法检出率比较均存在统计学差异(P<0.05)。
应用血清IFE 检测法有30 例为阳性，阳性率为 93.8%，与血清FLC 法检出率比较无统计学差异(P>0.05)。
结论 sFLC 检测是一种高度敏感的定量检测方法，与免疫固定电泳结合，可以提高疾病检出率，有助于MM 患者的诊断。
【关键词】多发性骨髓瘤；血清游离轻链；血清游离轻链比值【中图分类号】 R2 【文献标号】 A 【文章编号】 2095-9753（2016）4-0108-02多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM) 是一种恶性克隆性浆细胞肿瘤, 主要特征是正常免疫球蛋白分泌受抑制，出现了单克隆B淋巴细胞恶性增殖, 产生大量单克隆免疫球蛋白分子（Ig）, Ig 由2条重链和2 条轻链构成。
血清游离轻链检测在初发多发性骨髓瘤中的临床意义
ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ．Ｐａｔｉｅｎｔｓ
ａｓ
ｗｉｔｈ
ａ
ｓＦＬＣ ｒｅｓｕｌｔｓ ｈｉｇｈｅｒ
ｔｈａｎ
ｍｅｄｉａｎ
ｗｅｒｅ ｍａｒｋｅｄ
ｈｉｇｈ—ＦＬＣ，ｔｈｅ ｒｅｓｔ ｗｅｒｅ ｍａｒｋｅｄ ａｓ ｌｏｗ－ＦＬＣ，ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ
ａｎａｌｙｓｉｓ ｗｅｒｅ ｍａｄｅ ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｔｈｅ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ．
ｍｙｅｌｏｍａ（ＭＭ）．
Ｍｅｔｈｏｄ：Ｍｅｄｉｃａｌ
ｆｒｏｍ １／２０ １ ０
ｒｅｃｏｒｄｓ ｏｆ ４５
ｃａｓｅｓ
ｏｆ ｆｉｒｓｔ－ｏｎｓｅｔ
ＭＭ
ｗｅｒｅ ｇａｔｈｅｒｅｄ ｉｎ
ｏｕｒ
ｈｏｓｐｉｔａｌ
ｔｏ ６／２０ １ ２．ｓＦＬＣ一１ｃ ａｎｄ ｓＦＬＣ一九ｗｅｒｅ
ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｉｍｍｕｎｅ ｔｕｒｂｉｄｉｍｅｌｒｉｃ
参考文献：…………………………………………………………………………．２８
综述……………………………………………………………………………………………………………３３ 作者简历……………………………………………………………………………．４３
浙江大学硕士学位论文
前言
血清游离轻链检测在初发多发性骨髓瘤中的临床意义
这种检测方法的关键是采用了新型检测试剂该试剂是针对轻链隐蔽区抗原表位轻链通过二硫键与重链结合的表位进行特异性结合因此该试剂只与flc结合而不与完整的ig上的轻链结合与常用的m蛋白的其他检测方法相比具有敏感性高敏感度达34mgl水平特异性强检测自动快速可定量等优点在mm的诊断疗效评浙江大学硕士学位论文前言价病情监测预后判断等方面具有不可替代的优势5
ｗｅｒｅ ｌｏｎｇｅｒ ｉｎ ｇｒｏｕｐ ｗｉｔｈ ｌｏｗｅｒ ｓＦＬＣ ｌｅｖｅｌ
多发性骨髓瘤需进行哪些检查
多发性骨髓瘤需进行哪些检查
*导读：核磁共振成像（MRI）检查有助于判断是否存在脊髓压迫；计算机断层扫描（CT）检查有助于显示髓外病变；乳酸脱氢酶（LDH）、C反应蛋白（CRP）及β2-M在血清及尿中的含量可反应肿瘤的负荷，有助于判断患者的预后；正电子发射断层扫描（PET）有助于判断病变的范围；促红细胞生成素（EPO）水平的检测有助于决定是否需要进行EPO治疗。
骨髓穿刺活检及克隆研究和骨髓标本细胞遗传学研究对MM也有一定的意义。
……
考虑为骨髓瘤的患者首先应当进行下列各项化验、检查：
全血细胞计数及分类、血小板计数，血清尿素氮（BUN）、肌酐及电解质，血清钙和白蛋白，血清免疫球蛋白定量，血清蛋白电泳（SPEP）及免疫固定，β2微球蛋白（β2-M）， ESR和血黏度，游离轻链检测（本-周氏蛋白），骨骼标准X-线成像，尤其是轴骨。
其中，M蛋白鉴定、骨髓检查及影像学检查为诊断必备。
除此之外，核磁共振成像（MRI）检查有助于判断是否存在脊髓压迫；计算机断层扫描（CT）检查有助于显示髓外病变；乳酸脱氢酶（LDH）、C反应蛋白（CRP）及β2-M在血清及尿中的含量可反应肿瘤的负荷，有助于判断患者的预后；正电子发射断层扫描（PET）有助于判断病变的范围；促红细胞生成素（EPO）水平的检测有助于决定是否需要进行EPO治疗。
骨髓穿刺活检及克隆研究和骨髓标本细胞遗传学研究对MM也有一定的意义。
可根
据需要选择上述检查手段。
多发性骨髓瘤采用核医学影像诊断的临床价值
多发性骨髓瘤采用核医学影像诊断的临床价值【摘要】多发性骨髓瘤是一种恶性血液疾病，具有高度恶性和多样性的特点。
核医学影像在诊断多发性骨髓瘤中发挥着重要作用。
本文从骨髓瘤的影像学表现及诊断难点入手，介绍了核医学影像的原理及优势，探讨了核医学影像在多发性骨髓瘤诊断中的应用和各项核医学检查的比较。
探讨了如何通过核医学影像改进骨髓瘤患者的诊断和治疗方案。
核医学影像为多发性骨髓瘤的诊断提供了重要信息，具有临床意义。
文章最后讨论了未来的发展方向和挑战，呼吁更多的研究和临床实践以提高多发性骨髓瘤的诊断水平和治疗效果。
核医学影像在多发性骨髓瘤的诊断中扮演着重要的角色，为临床医师提供了更准确和全面的诊断信息。
【关键词】多发性骨髓瘤，核医学影像，诊断，临床价值，影像学表现，原理，优势，应用，比较，诊疗方案，临床意义，发展方向，挑战。
1. 引言1.1 多发性骨髓瘤的临床特点多发性骨髓瘤是一种常见的血液恶性肿瘤，主要发生在老年人身上，尤其是60岁以上的人群。
这种疾病的发病率在全球范围内逐年增加，给患者的生活质量和预后造成了严重影响。
多发性骨髓瘤具有以下临床特点：①骨痛是多发性骨髓瘤常见的临床表现，患者经常出现全身性骨痛、骨折或骨质疏松等症状；②贫血、感染和出血等并发症也常常伴随多发性骨髓瘤的发展；③患者可能出现高蛋白血症、高钙血症和肾功能不全等代谢紊乱表现；④多发性骨髓瘤的病情进展较快，易转变为终末期疾病。
这些临床特点使得多发性骨髓瘤的诊断和治疗面临严峻挑战，而核医学影像在诊断中的应用正是为了更准确地捕捉这些特点，并提供更精准的诊断和治疗方案。
在接下来的内容中，我们将会进一步探讨核医学影像在多发性骨髓瘤诊断中的作用及其临床意义。
1.2 核医学影像在诊断中的作用核医学影像是一种非侵入性的诊断技术，可以帮助医生对多发性骨髓瘤进行准确的诊断和评估。
在多发性骨髓瘤的诊断中，核医学影像的作用至关重要。
通过核医学影像，医生可以直观地观察到患者的骨骼结构、骨髓情况和其他相关组织的代谢情况，从而更准确地确定病变的范围、性质和严重程度。
11例多发性骨髓瘤的血清自由轻链及FISH分析
11例多发性骨髓瘤的血清自由轻链及FISH分析李倩;藤宁燕;孙川;宫剑【摘要】目的研究多免疫球蛋白、血清自由轻链检测值及比率改变和遗传学异常在多发性骨髓瘤(MM)中的意义.方法对11例初诊MM骨髓标本进行染色体R显带分析,以一组探针荧光原位杂交(FISH)方法进行检测:1q21、RB1、P53、D13S319、IgH.以免疫比浊法定量检测血清中免疫球蛋白、K、λ轻链值.结果 11例多发性骨髓瘤患者染色体核型10例正常,1例为52XY,+2,+3,+4,+5,+6,+18.FISH检测9例异常,2例正常.检出1种异常2例(例5、例7),IgH重排.2种异常2例(例1、例10),IgH重排、1q21扩增或RB1、D13S319缺失.3种异常2例(例9、例11),RBI、D13S319缺失和IgH重排或1q21扩增.4种异常2例(例3、6),IgH重排,1q21扩增,RB1、D13S319缺失.5种异常1例(例2).以IgH重排最多,7例,且基因断裂后信号点类型多样.RB1、D13S319缺失次之,6例.1q21扩增5例,P53缺失最少见,例2检测到P53扩增.5例血清IgG升高,3例K型,2例λ型.6例血清IgA升高,5例K型,1例λ型.11例MM患者K/λ比率在K组明显升高,在λ组显著降低.结论血清自由轻链及其比率测定结合染色体核型和FISH分析,在MM诊断及治疗监测中有重要意义.【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2013(042)006【总页数】5页(P164-168)【关键词】多发性骨髓瘤;荧光原位杂交;免疫球蛋白;血清自由轻链【作者】李倩;藤宁燕;孙川;宫剑【作者单位】325006 温州医学院附属第二医院检验科;325000 浙江省永嘉县人民医院检验科;570100海口,海南省农垦总医院;325006 温州医学院附属第二医院检验科【正文语种】中文多发性骨髓瘤(MM)发生率占血液恶性疾病的10%～15%，因国家和种族不同有所不同。
多发性骨髓瘤患者血清乳酸脱氢酶和C反应蛋白检测及临床意义
多发性骨髓瘤患者血清乳酸脱氢酶和C反应蛋白检测及临床意义目的探討在多发性骨髓瘤（MM）患者中血清乳酸脱氢酶（LDH）和C反应蛋白（CRP）水平测定的临床意义。
方法分别采用速率法和散射比浊法测定2013年7月～2015年9月蚌埠医学院第一附属医院收治的32例MM患者（Ⅰ期8例、Ⅱ期11例、Ⅲ期13例）及20名健康体检者的血清LDH和CRP水平，分析LDH和CRP与疾病临床进展及预后的关系。
结果MM患者血清LDH和CRP水平高于健康体检者（P 0.05）；不同分期MM患者LDH和CRP水平比较结果显示，LDH和CRP水平均为Ⅲ期明显高于Ⅱ期，Ⅱ期高于Ⅰ期，差异均有统计学意义（P 0.05）. The serum LDH and CRP of MM patients in different stages were respectively compared，which showed that the levels of LDH and CRP in stage Ⅲwere all higher than those of stage Ⅱ（P 0.05），具有可比性。
1.2 方法空腹采集静脉血5 mL，分离血清标本，测定LDH和CRP水平；经过2个周期的化疗以后，复查LDH和CRP指标。
LDH的检测采用速率法，测定采用美国Beckman Coulter LX20全自动生化分析仪，109～245 U/L为正常范围。
CRP 的检测采用散射比浊法，仪器为美国Beckman Coulter Array360特定蛋白分析仪。
CRP正常范围0.05）。
见表2。
2.3 不同分期MM患者LDH和CRP水平比较Ⅲ期MM患者血清LDH和CRP水平明显高于Ⅰ期和Ⅱ期（P < 0.05），Ⅱ期MM患者血清LDH和CRP水平明显高于Ⅰ期（P < 0.05）。
见表3。
表3 不同分期MM患者LDH和CRP水平比较（x±s）注：与Ⅰ期比较，*P < 0.05；与Ⅱ期比较，#P < 0.05；MM：多发性骨髓瘤；LDH：乳酸脱氢酶；CRP：C反应蛋白2.4 MM患者治疗前后LDH和CRP水平变化经过2个周期的化疗后，患者LDH和CRP水平均较治疗前显著下降（P < 0.05）。
多发性骨髓瘤患者血清游离轻链水平及其临床意义
[文章编号]1006-2440(2021)03-0254-03[引文格式]岑海燕,黄红铭,王信峰.多发性骨髓瘤患者血清游离轻链水平及其临床意义[J].交通医学,2021,35(3):254-255,258.多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是我国第三位常见的血液恶性肿瘤,随着全球范围内老年人口不断增加,MM发病率也随之逐年增高[1]。
MM以骨髓中恶性浆细胞克隆增殖为特征,起病隐匿,临床表现复杂,涉及多个系统,可表现高钙血症、肾功能不全、贫血或骨病等。
MM实验室诊断主要采用血清蛋白电泳(serum protein electrophoresis,SPE)和免疫固定电泳法(immunofixation electrophoresis,IFE)检测异常血清蛋白,但敏感性低,特异性不强,易造成漏诊[2]。
我国MM患者初诊时误诊率高达55.13%,国外仅50%患者发病6个月内明确诊断。
免疫球蛋白(Ig)由轻链和重链构成,血清游离轻链(serum freelight chain,sFLC)异常增高表明Ig合成异常。
有研究表明,sFLC水平与MM病情及预后密切相关[3]。
近年来临床广泛开展sFLC检测,在MM诊断和治疗中发挥重要作用[4-5]。
本研究收集2016年9月—2020年9月在南通大学附属医院及分院初诊MM患者43例,分析化疗前后sFLC水平的变化及其在疗效观察中的意义。
1资料与方法1.1一般资料初诊MM患者43例(MM组)均符合MM诊断标准,其中男性26例,女性17例;年龄42~80岁,平均65.2±7.9岁;临床分型:IgG型24例, IgA型13例,轻链型5例,无分泌型1例。
Durie-Salmon分期:Ⅰ期6例,Ⅱ期17例,Ⅲ期20例。
以健康体检者20例为对照组。
1.2治疗方法和疗效判断MM患者43例中32例接受化疗,采用硼替佐米为主方案(硼替佐米+地塞米松,硼替佐米+吡柔比星+地塞米松),治疗3~6个疗程,平均5个疗程。
iFISH技术检测多发性骨髓瘤遗传学异常及其临床意义
iFISH技术检测多发性骨髓瘤遗传学异常及其临床意义蒙珊;赵万红;杨云;张王刚;曹星梅;张龙进;蒙昕;田纬【期刊名称】《现代肿瘤医学》【年(卷),期】2018(026)003【摘要】Objective:To detect the chromosome aberrations in multiple myeloma (MM)patients using interphase fluorescence in situ hybridization (iFISH),and to explore their clinical significance and prognostic value. Methods:94 newly diagnosed MM patients were enrolled and iFISH panel probes of IGH,DLEU/ RB1,p53 and 1q21 were ap-plied to detect 14q32 translocation,del(13q14),del(17p13),and 1q21 application,respectively. The thresholds were established using 15 patients without hematopoietic malignancies. Results:A total of 74 patients of the whole 94 pa-tients (78. 72％)exhibited abnormal iFISH results. del(17p13)had the highest occurrence rate with the percentage of 60. 81％(45 / 74),followed by 1q21 application (59. 46％,44 / 74),14q32 translocation (41. 89％,31 / 74)and del(13q14)(37. 84％,28 / 74). It showed that del(17p13)was related with platelet count,albumin and globulin lev-els,14q32 translocation was related with albumin and myeloma cell burden,del(13q14)exhibited a correlation with hemoglobin,erythrocyte sedimentation rate,albumin and globulin levels,while 1q21 application did not show any rela-tions with these clinicopathological parameters. When patients were grouped by the therapeutic regimen,it showed that those whose iFISH were positive hadworse treatment responses in VAD group compared with those negative,whereas it did not show any differences in bortezomib group. Moreover,14q32 translocation was shown to related with patients'o-verall survival,and del(17p13)was predicted to be independently associated with patients' overall survival and progres-sion free survival.Conclusion:Chromosome aberrations exist in majority of myeloma patients with high occurrence rate of del(17p13),1q21 application and 14q32 translocation,which indicated unfavorable clinical features and poor outcome.%目的:采用iFISH技术了解多发性骨髓瘤染色体异常情况,分析染色体异常与多发性骨髓瘤部分临床资料、治疗效果及预后之间的关系.方法:采用组合探针(1q21、DLEU/RB1、p53、IGH)对94例初诊MM患者骨髓细胞进行iFISH检测,分析其细胞遗传学异常,探讨其与临床资料及治疗效果之间的关系,明确其预后价值.结果:94例患者中,74例(78.72％)检测出1种及1种以上细胞遗传学异常;其中1种异常的34例(34/74,45.95％),2种异常的15例(15/74,20.27％),25例存在3种及3种以上异常(25/74,33.78％).其异常的比例从高到低分别为:p53缺失(45/74,60.81％),1q21扩增(44/74,59.46％),IGH重排(31/74,41.89％),DLEU/RB1缺失(28/74,37.84％).分析发现,p53缺失与血小板计数、白蛋白及球蛋白水平有关,IGH重排与白蛋白及瘤细胞负荷有关,DLEU/RB1缺失与血红蛋白、血沉、白蛋白及球蛋白水平有关,未发现1q21扩增与各项临床指标之间的关系.将患者按照治疗方案分为VAD组和硼替佐米组,结果显示VAD组中iFISH阴性者的疗效明显优于iFISH阳性者,而在硼替佐米组未发现FISH阳性者和阴性者的疗效有差异.生存分析发现,IGH重排与总生存时间相关,而p53缺失与总生存时间和无病生存时间均明显相关,为MM患者的独立预后因素.结论:多数MM 患者存在细胞遗传学异常;1q21扩增、p53缺失及IGH重排的发生率较高;细胞遗传学异常与多种不良临床指标相关,并与临床治疗反应性相关,存在异常者治疗效果欠佳,预后较差.【总页数】6页(P440-445)【作者】蒙珊;赵万红;杨云;张王刚;曹星梅;张龙进;蒙昕;田纬【作者单位】西安交通大学第二附属医院血液科,陕西西安 710004;西安交通大学第二附属医院血液科,陕西西安 710004;西安交通大学第二附属医院血液科,陕西西安 710004;西安交通大学第二附属医院血液科,陕西西安 710004;西安交通大学第二附属医院血液科,陕西西安 710004;西安交通大学第二附属医院血液科,陕西西安 710004;西安交通大学第二附属医院血液科,陕西西安 710004;西安交通大学第二附属医院血液科,陕西西安 710004【正文语种】中文【中图分类】R733.3【相关文献】1.免疫组织化学联合荧光原位杂交技术检测多发性骨髓瘤分子细胞遗传学异常 [J], 杨璐璐;聂玉;刘欣;汪健;王晓秋;王志华;郑昌成;王兴兵;朱小玉2.荧光原位杂交技术检测一例多发性骨髓瘤五类分子细胞遗传学异常 [J], 孙毅;刘静芸;3.荧光原位杂交技术结合常规细胞遗传学方法检测多发性骨髓瘤患者的染色体异常[J], 姚玉华;李桑;孙冠星;王志林;曹祥山4.免疫磁珠分选和MLPA技术联合检测多发性骨髓瘤分子遗传学异常系统的建立[J], 雷鸣;马莉;邝丽萍;庞妍;伍九龙;肖芷芳;李力5.荧光原位杂交技术检测一例多发性骨髓瘤五类分子细胞遗传学异常 [J], 孙毅;刘静芸因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
β2微球蛋白在多发性骨髓瘤诊断中的检测价值
DOI：10.19368/ki.2096-1782.2023.12.023β2微球蛋白在多发性骨髓瘤诊断中的检测价值刘晶晶1，王云21.徐州矿务集团总医院检验科，江苏徐州221000；2.徐州医科大学第二附属医院检验科，江苏徐州221006[摘要]目的探讨临床诊断多发性骨髓瘤疾病通过β2微球蛋白值检测的应用价值。
方法选择2020年1月—2022年12月徐州矿务集团总医院收治的42例多发性骨髓瘤确诊患者作为观察组，选择同期于本院进行体检的健康体检者42例作为对照组，均利用免疫散射比浊法检测β2微球蛋白指标，记录并对比组间结果差异性。
结合观察组多发性骨髓瘤患者不同分期，比较β2微球蛋白结果的变化趋势。
整合计算β2微球蛋白用于诊断多发性骨髓瘤疾病的灵敏度、特异性及准确率。
结果观察组多发性骨髓瘤患者β2微球蛋白测定值（9.47±1.13）mg/L明显高于对照组体检者，差异有统计学意义（t=33.564，P<0.05）。
结合观察组患者肿瘤分期结果显示，Ⅲ期患者β2微球蛋白测定值明显高于Ⅱ期与Ⅰ期患者，差异有统计学意义（P<0.05）。
β2微球蛋白用于诊断多发性骨髓瘤疾病的灵敏度为95.24%、特异性为97.62%、准确率为96.43%。
结论通过检测β2微球蛋白指标可用于临床诊断多发性骨髓瘤疾病，同时根据测定结果辅助判断患者疾病分期，具有较高的灵敏度与准确性。
[关键词]β2微球蛋白；多发性骨髓瘤；诊断；检测价值[中图分类号]R551 [文献标识码]A [文章编号]2096-1782（2023）06(b)-0023-04The Detection Value of β2 Microglobulin in the Diagnosis of Multiple My⁃elomaLIU Jingjing1, WANG Yun21.Department of Laboratory Medicine, Xuzhou Mining Group General Hospital, Xuzhou, Jiangsu Province, 221000 China;2.Department of Laboratory Medicine, The Second Affiliated Hospital of Xuzhou Medical University, Xuzhou, Jiangsu Province, 221006 China[Abstract] Objective To explore the application value of β2 microglobulin value detection in clinical diagnosis of mul⁃tiple myeloma. Methods A total of 42 patients diagnosed with multiple myeloma treated in Xuzhou Mining Group Gen⁃eral Hospital from January 2020 to December 2022 were selected as the observation group. A total of 42 healthy sub⁃jects who underwent physical examination in the hospital during the same period were selected as the control group. All the indicators of β2 microglobulin were detected by immunoscattering nephelometric method, and the differences in the results between the groups were recorded and compared. Combined with the different stages of multiple myeloma pa⁃tients in the observation group, the change trend of the results of β2 microglobulin was compared. Integrative calcula⁃tion of the sensitivity, specificity, accuracy of β2 microglobulin in the diagnosis of multiple myeloma. Results The measured value of β2 microglobulin in multiple myeloma patients in the observation group (9.47±1.13) mg/L was sig⁃nificantly higher than that in the control group, and the difference was statistically significant (t=33.564, P<0.05). Combined with the results of tumor staging of patients in the observation group, the measured value of β2 microglobu⁃[作者简介] 刘晶晶（1986-），女，本科，主管技师，研究方向为医学检验。
多发性骨髓瘤患者IgH_MMSET基因的检测及其意义_姜华
·论著·多发性骨髓瘤患者IgH-MMSET基因的检测及其意义姜华 侯健 陈玉宝 丁思奇 【摘要】 目的 检测多发性骨髓瘤(MM)患者由于t(4;14)所形成的IgH-MMSET融合基因,探讨其在MM中的临床意义。
方法 采用RT-PCR法在25例MM患者骨髓标本和MM细胞系NCI-H929中检测IgH-MMSET融合基因,并且通过巢式PCR法提高反应的灵敏度。
PCR产物纯化后克隆到pGE M-T载体,并用引物M13Forward测序。
将PCR产物的序列与GenBank进行对照,进一步证实发生易位的基因。
结果 作为阳性对照的MM细胞系NCI-H929扩增出一明显条带,长度为438bp,经测序后证实为IgH基因与MMSET基因的融合产物。
14号染色体及4号染色体上的断裂点分别位于IgH基因的Cμ区及MMSET基因的第3内含子中。
25例MM患者的骨髓标本扩增后有3例(12.0%)呈现阳性,经分别测序后证实为IgH-MMSET融合基因,扩增产物的长度分别为237bp、239bp和239bp,三者第4染色体的断裂方式均与NCI-H929相同,其中1例缺失了MMSET基因的第4外显子的第74位碱基(A)和第75位碱基(T)。
结论 MM患者IgH-MMSET融合基因是由于t(4;14)所形成,其发生率为12.0%。
IgH-MMSET融合基因的出现可能是MM患者预后不良的指标之一。
【关键词】 多发性骨髓瘤; 基因融合,IgH-MMSET; 易位(遗传学)Detectio n of IgH-MMSET fusion gene in multiple myeloma patients and its significance JIA NG Hua,H O UJian,C HEN Yu-bao,DINGSi-qi.Department of Hematology,Chang zheng Ho spital,The Second Military M edicalUniversity,Shanghai 200003,China【Abstract】 Objective To detect the IgH-MMSE T fus ion gene resulted from t(4;14)translocation in mul-tiple myeloma and illuminate its significance.Methods IgH-MMSE T fusion gene was detected in bone marrowspecimens of25multiple myeloma(MM)patients and MM cell line NCI-H929using reverse-transcription PCR(RT-PCR)assay followed by nested PCR to increase the sensitivity.The purified PCR products were cloned into p GE M-Tvector and then sequenced usin g M13forward primers.The fragment sequences were compared with that in GenBankto find matched sequences.Results Only a438base pair long fragment was obtained after RT-PCR assay and wasconfirmed by sequencing to be a fusion gene product of IgH gene and MMSET gene in MM cell line NCI-H929.Thebreakpoints were located within the Cμregion of IgH gene on chromosome14and intron3of MMSET gene on chro-mosome4.IgH-MMSET hybrid transcripts were detected in3of25MM patients through nested PCR assay.The am-plified fragments of the3patients were237base pairs(bp),239bp and239bp in length,respectively.The break-points on chromosome4were identical to that of NCI-H929cell.Co nclusions The formation of IgH-MMSET fusiongene is resulted from t(4;14)translocation in MM.The incidence rate is12.0%.The presence of IgH-MMSET fu-sion gene may predict poor prognos is.【Key words】 Multiple myeloma; Gene fusion,IgH-MMSE T; Translocation(Genetics) 多发性骨髓瘤(MM)是浆细胞恶性增殖性疾病。
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·论著·多发性骨髓瘤患者IgH-MMSET基因的检测及其意义姜华 侯健 陈玉宝 丁思奇 【摘要】 目的 检测多发性骨髓瘤(MM)患者由于t(4;14)所形成的IgH-MMSET融合基因,探讨其在MM中的临床意义。
方法 采用RT-PCR法在25例MM患者骨髓标本和MM细胞系NCI-H929中检测IgH-MMSET融合基因,并且通过巢式PCR法提高反应的灵敏度。
PCR产物纯化后克隆到pGE M-T载体,并用引物M13Forward测序。
将PCR产物的序列与GenBank进行对照,进一步证实发生易位的基因。
结果 作为阳性对照的MM细胞系NCI-H929扩增出一明显条带,长度为438bp,经测序后证实为IgH基因与MMSET基因的融合产物。
14号染色体及4号染色体上的断裂点分别位于IgH基因的Cμ区及MMSET基因的第3内含子中。
25例MM患者的骨髓标本扩增后有3例(12.0%)呈现阳性,经分别测序后证实为IgH-MMSET融合基因,扩增产物的长度分别为237bp、239bp和239bp,三者第4染色体的断裂方式均与NCI-H929相同,其中1例缺失了MMSET基因的第4外显子的第74位碱基(A)和第75位碱基(T)。
结论 MM患者IgH-MMSET融合基因是由于t(4;14)所形成,其发生率为12.0%。
IgH-MMSET融合基因的出现可能是MM患者预后不良的指标之一。
【关键词】 多发性骨髓瘤; 基因融合,IgH-MMSET; 易位(遗传学)Detectio n of IgH-MMSET fusion gene in multiple myeloma patients and its significance JIA NG Hua,H O UJian,C HEN Yu-bao,DINGSi-qi.Department of Hematology,Chang zheng Ho spital,The Second Military M edicalUniversity,Shanghai 200003,China【Abstract】 Objective To detect the IgH-MMSE T fus ion gene resulted from t(4;14)translocation in mul-tiple myeloma and illuminate its significance.Methods IgH-MMSE T fusion gene was detected in bone marrowspecimens of25multiple myeloma(MM)patients and MM cell line NCI-H929using reverse-transcription PCR(RT-PCR)assay followed by nested PCR to increase the sensitivity.The purified PCR products were cloned into p GE M-Tvector and then sequenced usin g M13forward primers.The fragment sequences were compared with that in GenBankto find matched sequences.Results Only a438base pair long fragment was obtained after RT-PCR assay and wasconfirmed by sequencing to be a fusion gene product of IgH gene and MMSET gene in MM cell line NCI-H929.Thebreakpoints were located within the Cμregion of IgH gene on chromosome14and intron3of MMSET gene on chro-mosome4.IgH-MMSET hybrid transcripts were detected in3of25MM patients through nested PCR assay.The am-plified fragments of the3patients were237base pairs(bp),239bp and239bp in length,respectively.The break-points on chromosome4were identical to that of NCI-H929cell.Co nclusions The formation of IgH-MMSET fusiongene is resulted from t(4;14)translocation in MM.The incidence rate is12.0%.The presence of IgH-MMSET fu-sion gene may predict poor prognos is.【Key words】 Multiple myeloma; Gene fusion,IgH-MMSE T; Translocation(Genetics) 多发性骨髓瘤(MM)是浆细胞恶性增殖性疾病。
通过细胞遗传学及分子生物学技术检测发现MM的核型变化较其它类型的血液系统肿瘤更为复杂。
其中涉及人免疫球蛋白重链(IgH)基因定位的14号染色体(Chr14)的结构异常发生率为20%～60%。
大多数是由于伙伴染色体与Chr14交互易位造成的,基金项目:教育部高校骨干教师基金;上海市卫生局“百人计划”课题(98BR032);全军“九五”课题(98M082)资助项目作者单位:200003 上海,第二军医大学长征医院血液科从而形成MM特殊的标志染色体14q+和14号染色体缺失,即del(14)。
交互易位后形成IgH及其伙伴染色体的融合基因,融合基因的检测对于监测微小残留病(MRD)、评价临床疗效及预后等方面都具有重要意义。
文献中报道t(4;14)可见于10%～20%的MM[1-3],基因易位后造成IgH基因与位于4号染色体(Chr4)上的MMSE T(Multiple myeloma SE T do-main)基因相连接出现IgH-MMSET杂合转录。
我们采用RT-PCR及巢式PCR方法在25例MM患者中检测IgH-MMSET基因,现将结果报道如下。
病例和方法1 病例 25例MM患者中20例选自我科2002年1月至今的MM患者,2例为上海市第一人民医院的MM患者,2例为上海第二医科大学附属仁济医院的MM患者,1例为上海市长宁区中心医院的MM患者。
男18例,女7例,年龄36～75岁,中位年龄54岁。
按照M蛋白免疫学分型,IgG型10例,I gA型5例,IgD型1例,λ轻链型5例,κ轻链型2例,不分泌型2例。
按Durie-Salmon分期标准,Ⅰ期2例,Ⅱ期6例,Ⅲ期17例。
2 材料 MM细胞系NCI-H929,淋巴细胞分离液购于上海恒信化学试剂公司,RNA ZOL抽提液购于Life Technologies公司,RT-PCR试剂盒购于Promega公司,H6-1微型电泳槽、DY-A电泳仪购于上海西巴斯生物技术有限公司,FR-200紫外分析仪由上海复日生物实验技术研制所研制、Kubota2100台式离心机为Kubota公司产品。
3 RNA抽提 抽取患者骨髓3～4ml,注入含有肝素的离心管中(肝素终浓度约为25U/ml),加盖后摇匀,充分抗凝。
按常规方法分离单个核细胞。
用RP MI1640培养液重悬细胞后计数,取大约1×107个单个核细胞或NCI-H929细胞(作为阳性对照)加入约1.0ml RNA ZOL液,按说明书抽提总R NA。
用分光光度计测定RNA含量及纯度,A260/A280达到2.0左右合乎要求。
4 R T-PCR 反应体系为50μl,AMV/Tfl5×缓冲液10μl,10mmol/L4×dNTP1μl,AMV逆转录酶(5 U/μl)1μl,Tfl DNA聚合酶(5U/μl)1μl,25mmol/L MgSO42μl,细胞总RNA1～2μg,上游引物Iμ1和下游引物ms6r分别为50pmol。
引物序列如下:上游引物Iμ1:5′-AGCCCTTGTTAATGGACTTG-3′;下游引物ms6r:5′-CCTCAATTTCCCTGAAATTGGTT-3′。
反应条件:48℃5min,94℃2min,然后94℃30s,60℃1min,68℃2min,共40个循环,最后68℃7min。
5 巢式PCR 反应体系为50μl,1μl RT-PCR产物, 10×缓冲液5μl,2mmol/L4×dNTP5μl,Taq DNA聚合酶(2U/μl)1μl,25mmol/L MgCl22μl,上游引物Iμ2和下游引物ms5r各为25pmol。
引物序列如下:上游引物Iμ2:5′-CTTTGC AAGGCTCGCAGTGAC-3′;下游引物ms5r:5′-AAGAACTGTACGTGATACTG-3′。
反应条件:94℃30s,55℃30s,72℃1min,共35个循环。
6 PCR产物电泳 取10ml PCR产物,20g/L琼脂糖凝胶电泳,75V30～60min,紫外灯下观察并照相。
7 DNA测序 PCR产物纯化后克隆到Promega公司的pGE M-T载体,并用引物M13For ward测序(由上海中科开瑞科技股份有限公司帮助完成)。
然后将PCR产物的序列与GenBank进行对照,进一步证实发生易位的基因。
结果 RT-PCR产物电泳结果显示,作为阳性对照的MM细胞系NCI-H929扩增出一明显条带,长度约为440bp。
然后将上述25例患者的R T-PCR产物进行巢式PCR扩增后有3例(12.0%)呈现阳性,产物长度大致相同,为240bp左右(图1)。
1,5,7:3例阳性标本;2,3:NCI-H929细胞;4:Marker;6:阴性对照图1 巢式PCR检测IgH-MMSET融合基因的电泳图 将上述PCR产物分别进行测序,MM细胞系NCI-H929的RT-PCR产物长度为438bp,经过与GenBank对照,证实为IgH基因和MMSE T基因的融合产物。
Chr14及Chr4上的断裂点分别位于I gH的Cμ区及MMSE T基因的第3内含子中。
3例阳性患者的巢式PCR扩增产物的长度分别为237bp、239 bp和239bp。