固体培养基稀释涂抹接种法
稀释倒平板法和涂布平板法的基本操作流程
稀释倒平板法和涂布平板法是微生物学领域实验室中常用的两种分菌方法。
它们在微生物菌落计数和分离纯种中起着至关重要的作用。
下面将介绍这两种基本操作流程。
一、稀释倒平板法的基本操作流程1.准备物品和培养基：首先要准备好所需的物品和培养基，包括试管、移液管、稀释液、平板培养基等。
培养基的选择应根据具体实验目的而定。
2.制备系列稀释液：将含有大量微生物的培养液加入到一系列含有无菌蒸馏水的试管中，使细菌的浓度逐渐减少。
一般采取稀2、稀4、稀6等倍数的稀释方法，以便后续操作。
3.取1ml细菌溶液：接种前述制备好的系列稀释液中，取出1ml的细菌溶液，并均匀涂布在含有固体培养基的平板上。
4.均匀涂布：用棉签将1ml的细菌溶液均匀涂布在平板表面，确保每一块培养基上都有细菌涂布。
5.培养：将涂布好的平板培养基在恒定的温度下进行培养，待菌落生长后进行计数和鉴定。
二、涂布平板法的基本操作流程1.准备物品和培养基：同样需要准备试管、移液管、液体培养基、平板培养基等。
培养基的选择也应根据实验目的做出合适的选择。
2.取适量细菌溶液：取出适量的细菌溶液，一般取0.1ml左右的细菌溶液即可。
3.均匀涂布：用棉签或者涂布器将细菌溶液均匀涂布在含有固体培养基的平板上，同样要确保每一块培养基上都有细菌涂布。
4.培养：将涂布好的平板培养基在适宜的温度下进行培养，待菌落生长后进行计数和鉴定。
通过以上内容的介绍，我们可以看到，稀释倒平板法和涂布平板法在操作流程上有着一定的相似性。
它们都需要准备物品和培养基、取适量的细菌溶液、进行均匀涂布，并最终在适宜的温度下进行培养。
然而，两种方法的区别在于稀释倒平板法是先稀释后倒平板再均匀涂布，而涂布平板法是直接涂布在平板上进行培养。
在进行微生物实验时，选择合适的分菌方法对于后续的实验结果具有重要意义。
通过掌握这两种分菌方法的基本操作流程，可以更加准确地进行微生物的定量分离，为微生物学实验研究提供有力支持。
微生物分离纯化方法
微生物分离纯化方法微生物的分离纯化是微生物学研究中的一项重要工作，也是微生物学实验的基础。
微生物的分离纯化方法主要包括：传代分离、菌落接种法、涂布法、稀释法、摇瓶分离法等。
下面将详细介绍这些方法。
1. 传代分离传代分离法是指将微生物涂布于固体培养基上，通过连续传代的方式分离纯化目标微生物。
这种方法适用于真菌和细菌的分离纯化。
首先，选择适当的固体培养基，可以是含有特定培养物质的普通富养基或特定选择性培养基。
然后，将待分离的微生物悬浮液均匀涂布在固体培养基表面。
在培养过程中，单个微生物菌落会逐渐生长并形成纯化菌落。
最后，将纯化菌落挑取至新的培养基上进行进一步培养和鉴定。
2. 菌落接种法菌落接种法是指以微生物营养琼脂平板为基础，在平板表面单独培养微生物，通过菌落形态和特征来分离纯化目标微生物。
首先，将待分离的微生物悬浮液均匀涂布在营养琼脂平板表面。
在培养过程中，微生物会形成单个菌落，每个菌落代表着一个细胞或一组具有相同基因型的细胞。
通过观察和鉴定菌落形态、色素、质地等特征来筛选出目标微生物的纯化菌落。
3. 涂布法涂布法是指将待分离的微生物悬浮液均匀涂布于特定培养基固体表面，通过菌落形态和特征来分离纯化目标微生物。
这种方法适用于分离纯化微生物群落中的特定微生物。
首先，选择适当的富养基或选择性培养基，将待分离的微生物悬浮液均匀涂布于固体培养基表面。
在培养过程中，微生物会形成不同的菌落，其中包含目标微生物。
通过观察和鉴定菌落形态、色素、质地等特征来筛选出目标微生物的纯化菌落。
4. 稀释法稀释法是指将待分离的微生物悬浮液通过连续稀释的方式进行纯化。
首先，将待分离的微生物悬浮液进行适当稀释，然后取一定体积的稀释液均匀涂布在固体培养基表面。
在稀释过程中，微生物会逐渐被稀释至单个细胞的数量，从而使目标微生物单独生长并形成纯化菌落。
5. 摇瓶分离法摇瓶分离法是指将待分离的微生物悬浮液均匀地放置在摇瓶中，并通过不同时间和速度的连续摇动来分离纯化微生物。
稀释培养测数法
稀释培养测数法（MPN）一、实验目的通过对好气性自生固氮菌的计数，了解稀释培养计数（MPN）的原理和方法。
二、实验原理 &n一、实验目的通过对好气性自生固氮菌的计数，了解稀释培养计数（MPN）的原理和方法。
二、实验原理最大或然数(most probable number，MPN)计数又称稀释培养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势，但却具有特殊生理功能的类群。
其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。
本法特别适合于测定土壤微生物中的特定生理群（如氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫化和反硫化细菌等。
见附表23-1）的数量和检测污水、牛奶及其他食品中特殊微生物类群（如大肠菌群）的数量，缺点是只适于进行特殊生理类群的测定，结果也较粗放，只有在因某种原因不能使用平板计数时才采用。
MPN计数是将待测样品作一系列稀释，一直稀释到将少量（如lm1）的稀释液接种到新鲜培养基中没有或极少出现生长繁殖。
根据没有生长的最低稀释度与出现生长的最高稀释度，采用“最大或然数”理论，可以计算出样品单位体积中细菌数的近似值。
具体地说，菌液经多次10倍稀释后，一定量菌液中细菌可以极少或无菌，然后每个稀释度取3—5次重复接种于适宜的液体培养基中。
培养后，将有菌液生长的最后3个稀释度（即临界级数）中出现细菌生长的管数作为数量指标，由最大或然数表（见附录九）上查出近似值，再乘以数量指标第一位数的稀释倍数，即为原菌液中的含菌数。
如某一细菌在稀释法中的生长情况如下；稀释度 lO-3 10-4 10-5 lO-6 10-7 10-8重复数 5 5 5 5 5 5出现生长的管数 5 5 5 4 1 0根据以上结果，在接种lO-3—10-5稀释液的试管中5个重复都有生长，在接种lO-6稀释液的试管中有4个重复生长，在接种10-7稀释液的试管中只有1个生长，而接种10-8稀释液的试管全无生长。
培养材料接种实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握培养材料接种的基本操作流程。
2. 学习不同接种方法的特点和应用。
3. 了解培养过程中可能出现的污染及预防措施。
二、实验原理培养材料接种是微生物实验的基本操作之一，通过将微生物接种到培养基上，可以观察其生长、繁殖和代谢情况。
接种方法主要有平板划线法、稀释涂布平板法等。
三、实验材料1. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、LB培养基等。
2. 接种工具：接种环、接种针、移液枪、无菌棉签等。
3. 微生物：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等。
4. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、超净工作台等。
四、实验方法1. 材料准备a. 将培养基在高压蒸汽灭菌器中灭菌，灭菌后取出，待其冷却至50℃左右时，倒入无菌培养皿中，待凝固。
b. 将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌分别接种到牛肉膏蛋白胨培养基和LB培养基中，培养24小时。
2. 接种操作a. 平板划线法1. 将接种环在火焰上灼烧，待冷却后，蘸取少量金黄色葡萄球菌培养液，在无菌平板上划线。
2. 将接种环再次灼烧，待冷却后，蘸取少量大肠杆菌培养液，在平板上划线。
3. 将平板倒置，放入恒温培养箱中培养24小时。
b. 稀释涂布平板法1. 将金黄色葡萄球菌和大肠杆菌分别进行10^-3、10^-5、10^-7倍的稀释。
2. 取适量稀释液，用无菌涂布棒均匀涂布在平板上。
3. 将平板倒置，放入恒温培养箱中培养24小时。
3. 结果观察a. 观察平板上菌落的生长情况，记录菌落数量。
b. 比较不同接种方法所得菌落数量的差异。
五、实验结果与分析1. 平板划线法平板划线法接种得到的菌落数量较少，分布较密集，便于观察菌落特征。
2. 稀释涂布平板法稀释涂布平板法接种得到的菌落数量较多，分布较均匀，便于计数。
六、实验讨论1. 平板划线法适用于观察菌落特征，但计数不准确。
2. 稀释涂布平板法适用于计数，但菌落特征观察不便于。
3. 在实验过程中，要注意无菌操作，避免污染。
七、实验结论本实验成功掌握了培养材料接种的基本操作流程，学习了不同接种方法的特点和应用，了解了培养过程中可能出现的污染及预防措施。
细菌的接种方法和有何用途
细菌的接种方法和有何用途细菌的接种方法和用途是微生物学和生物工程领域非常重要的研究内容之一。
有许多不同的接种方法可以用来培养细菌，并且这些方法对于特定的研究目的和应用也存在差异。
下面将介绍一些常见的细菌接种方法以及它们的应用。
1. 微量接种法（streak plate method）：这是最常用的细菌接种方法之一。
首先，将待接种的细菌用聚合物环形均匀涂布在固体培养基表面上。
然后，用环形接种棒连续划线穿过之前的细菌，以使细菌被逐渐稀释并分离成单个菌落。
这种方法适用于分离和纯化微生物种群，以便进一步研究它们的特性和功能。
2. 液体培养基接种法（broth inoculation）：该方法常用于需要大量细菌培养的实验，以及一些需要收集细菌液体培养物的实验。
首先，需要准备含有适当营养物的液体培养基。
然后，将细菌接种至培养基中，通过旋转摇床或培养瓶静置培养来增殖细菌。
利用该方法可以大量生产细菌以备进一步实验分析。
3. 深层接种法（stab inoculation）：这一方法常用于某些需要测试细菌产生气体的实验中。
细菌培养基放置在立体感应槽中，而不是平面表面。
然后使用无菌的未经破裂的商用棉签，将细菌直接从试管或培养瓶中沿着培养基表面扎人培养基内。
这使得细菌在培养基的底部生长，并产生气体，形成透明或气泡区域。
4. 器械接种法（loop inoculation）：该方法通常用于细菌的定量接种和血清抗体试验中。
通过利用加热的弯曲线圈接种棒，将细菌移入培养基中。
细菌的数量可以根据环形接种棒的大小和细菌悬浮液的稀释倍数来控制。
这种方法可以很好地控制细菌接种的数量和均匀性。
细菌的应用十分广泛，以下是一些常见的用途：1. 医学：细菌在医学领域的应用非常重要。
医疗细菌学通过研究细菌在人体中的作用和感染机制，为疾病的治疗和防控提供基础数据。
例如，培养菌株可以用于检测细菌感染，治疗原理的研究，以及抗生素敏感性测试。
2. 环境：细菌在环境中起着重要的生态角色。
第一章 第二节 第1课时 目标微生物的分离和纯化
判断正误
(1)采用划线的方法接种时，每划一条线前都要用接种环蘸取菌液( × ) (2)多次连续平行划线时，接种环已灭菌，整个划线过程中不再灭菌( × ) (3)用浸泡在75%酒精中的涂布器直接涂布( × ) (4)与平板划线法相比，稀释涂布平板法更容易得到单菌落( √ )
核心探讨
突破重难 强化素养
D.图乙中连续划线的起点是上一次划线的末端(除第一次划线外)
解析 平板划线法中多次划线的目的是降低菌种浓度，经过连续划线才 有可能得到由单一的细胞繁殖而成的菌落，这种菌落才符合要求，C错 误。
二、活动：接种、培养并分离酵母菌
教材梳理
预习新知 夯实基础
1.目的要求
(1)用 平板划线 法或稀释涂布平板法接种酵母菌。
③多次连续平行划线：划线分 3～4 次进行。将培养皿旋转一定角度后， 不需再次蘸取菌种，只需在上一次划线的 末端区域 直接开始划线即可。 (2)培养结果 经过培养，在划线的 尾部 就能得到单菌落。 3.稀释涂布平板法 (1)涂布方法 先将菌液进行 梯度稀释，并在培养皿侧面或底面做好标记后，将稀释度 不同菌液各取 0.1 mL ，加在固体培养基表面，然后用涂布器将菌液均匀 地涂布在培养基平面上进行培养。 (2)涂布结果 在稀释度适当的固体培养基表面能得到单菌落。
第1课时 目标微生物的分离 和纯化
学习目标 1.概述分离和纯化微生物的平板划线法和稀释涂布平板法。 2.尝试分离和纯化酵母菌。
素养要求
1.生命观念：认识平板划线法和稀释涂布平板法是分离 和纯化微生物的重要方法。
2.科学探究：学会平板划线法和稀释涂布平板法。
内容索引
一、采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的 分离和纯化
4.判断液体培养基中接种酵母菌成功的依据是什么？ 提示 和对照组相比，培养基变浑浊。 5.平板倒置的目的是什么？ 提示 防止水分过快挥发，防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
土壤稀释涂布平板法
实验概要分离、纯化及初步鉴定土壤中的拮抗植物病原菌的放线菌。
实验原理土壤是微生物的“天然培养基”，也是最丰富的菌种资源库，我们可以从中分离出众多放线菌，尤其是可以从耕作土壤中筛选出拮抗植物病原菌的放线菌。
以耕作有武运粳和苏沪香粳的土壤为样品，应用稀释涂布平板法分离各种微生物。
菌落计数后，通过菌落形态观察并挑取放线菌进行划线分离纯化，多次重复后得到单菌落。
在进行放线菌形态等初步鉴定后，将纯化的菌株接入斜面传代保藏。
最后，分离纯化的放线菌，初步鉴定其拮抗性。
拮抗植物病原菌的放线菌的分离纯化在农业增产、作物种植等方面都有着重要的意义。
主要试剂1. 培养基：高氏1号培养基、马铃薯葡萄糖培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基2. 其他试剂：银染液A液B液（细菌鞭毛染色） 40%KOH 5%α-萘酚（V.P.实验）主要设备培养皿试管锥型瓶接种环移液管震荡器电炉载玻片超净工作台恒温培养箱高压蒸汽灭菌锅显微镜等实验材料土样：苏沪香粳1，2组杨稻6号93113，4组武运粳5，6组实验步骤1.稀释涂布平板法(Spread Plate Method)稀释涂布平板法是一种将菌体按比例制备成若干个稀释度，再分别经涂棒涂布培养而进行微生物分离纯化的方法。
(1) 倒平板；(2) 制备土壤稀释溶液连续不断稀释，得到不同稀释度的土壤溶液；(3) 涂布分别吸取三种稀释度菌液，均匀涂于培养基表面；(4) 培养；(5) 划线分离，直到获得纯培养。
2. 平板菌落计数法平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个单细胞。
计数时，先将待测样品作一系列稀释，再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，使其均匀分布于平皿中的培养基内，经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品中的含菌数。
这种计数法的优点是能测出样品中的活菌数。
此法常用于某些成品检定（如杀虫菌剂），生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。
微生物分离培养技术
一、工业生产对种子的要求
菌种细胞生长活力强，移种至发酵罐后能迅 速生长，延滞期短，发酵周期短； 生理性状稳定 抗性强，无杂菌污染 有稳定的生产能力 菌体总量能满足大容量发酵罐的生产要求
二、种子制备工艺
保 藏 种 斜 面 种 一级种子 二 级 种 子 罐 三 级 种 子 罐
发 酵 罐
23
2.4种子质量的控制措施
精选原料、制好培养基 严格无菌操作，严禁种子污染杂菌 掌握好培养条件 做好生产种子的稳定性检查，定期分离纯化
①液体稀释法
首先将待分离的样品进行连续稀释,目的是得到高度稀 释的效果,使一支试管中分配不到一个微生物.如果经过 稀释后的大多数试管中没有微生物生长,那么有微生物 生长的试管得到的培养物可能就是由一个微生物个体繁 殖而来的纯培养物. 这种方法适合于细胞较大的微生物.
2.1接种方法与接种量
保藏种到斜面种：接种环 一级种到种子罐：火焰接种法 种子罐到种子罐：压差接种法 接种量：为发酵液体积的1%-20%，经常 采用10% 2.2种龄：是指种子的培养时间 一般取对数期的种子作为菌种
2.3影响种子质量的因素
1.原材料的质量 2.种龄和接种量 3.培养条件 温度、PH、通气、泡沫、染菌控制 4.种子罐级数
⑶划线法：
二、液体培养基的分离与纯化—稀释法
1.接种物在液体培养基中进行顺序稀释 2.高度稀释，一支试管分配不到一个微生物 3.必须在同一个稀释度的许多平等试管中，大 多数（95%以上）表现为不生长 4.有微生物生长的试管得到的培养物就认为是 纯培养。
三、选择培养分离
分离特定微生物 或抑制大多数微生物的生长或者造成有利于 该菌生长的环境，再通过稀释平板方法进行 纯培养。 通过选择培养进行微生物纯培养分离的技术 称为选择培养分离
大学专科--发酵工程复习提纲
发酵工程第一章绪论掌握概念，理解内容***发酵工程是指，采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种新技术。
发酵工程的内容包括：菌种的选育、培养基的配制、灭菌、扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯等方面。
理解发酵工程的特点，发酵工程的发展史第二节发酵工程的特点①发酵工程使用的原料来源广泛，多为农副产品，其中以碳源为主，只加入少量有机和无机氮源，不含有毒物质。
②发酵工程的反应过程比较温和，通常在常温、常压下进行。
而且，反应过程是以生物体的自身调节方式进行，多个反应就像是一个反应一样，可在单一设备中进行，因此一种设备可有多种用途。
③容易进行复杂的高分子化合物的生产，如酶、化学活性体等。
④能够高度选择性地进行复杂化合物在特定部位的反应，如团体化合物的氧化、还原等。
⑤生产产品的微生物菌体本身也可作为发酵产物。
例如，富含蛋白质、酶、维生素的单细胞蛋白等。
⑥发酵过程是纯种培养过程。
生产中使用的设备、管道、截门和培养基都必须严格灭菌，通入的空气也应该是无菌空气。
在操作中应特别注意严格防止染菌，尤其要防止噬菌体的侵入，否则，会引起重大的损失。
⑦在不增加任何设备投资的情况下，通过菌种选育，改良菌种的生产性能来提高生产能力，可以达到事半功倍的效果。
⑧在发酵生产中，还可以通过改进工艺技术和设备来提高产品的产量和质量。
(了解）第三节发酵工程的应用范围微生物菌体酶制剂代谢产物生物转化微生物特殊机能的利用利用微生物消除环境污染利用微生物发酵保持生态平衡微生物湿法冶金利用基因工程菌株开拓发酵工程新领域通气搅拌发酵技术的建立标志：纯种培养深层发酵生产青霉素（理解）第四节发酵工程发展简史1. 1900以前天然发酵阶段2. 1900—1940 Pure culture：人为控制微生物发酵过程（第一个转折点）3. 1940—1950 通气搅拌技术：第二个转折点4. 1950—1960 代谢控制发酵技术：第三个转折点5. 1960—1970 开拓发酵原料时期6. 1970年以后利用基因工程菌进行发酵：第四个转折点第二章工业发酵菌种的选育第一节工业发酵生产菌种一、工业发酵微生物及其代谢产物(一)微生物代谢产物的类型：微生物通过初级代谢途径，产生微生物自身生长繁殖所必需的代谢产物，这些产物称为初级代谢产物。
高中生物选修一：纯化大肠杆菌(平板划线法、稀释涂布平板法)Jesse
灼烧试管口 塞上棉塞
在第1区域划线
３.为什么每次划线之前都要灼烧接种环？
答：为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种， 使下一次划线时的菌种来自上次划线的末端。
４.在划线操作结束时，为什么仍然要灼烧接种环吗？ 答：及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染 环境和感染操作者。
灼烧—第2区域划线—灼烧……第5区域划线—灼烧
单菌落
恒 温 培 养 箱
细菌：30~37 ℃，1~2 d
（二）稀释涂布平板法
（1）系列稀释操作
1 ．将分别盛有9 mL水的6支试管灭菌，并按101~106的顺序编号。
2．用移液管吸取1 mL培养的菌液，注入101倍稀释的试管中。用手 指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。 3 ．从101倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注入102倍稀释的试管 中，重复第二步的操作。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。
二、纯化大肠杆菌
平板划线法 方法 稀释涂布平板法
（一）平板划线法
通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，使聚集
的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后，可以分离到
单菌落。
平板划线法
灼烧接种环
冷却接种环 打开棉塞
灼烧试管口
沾取一环菌液
1．为什么在操作的第一步要灼烧接种环？ 答：为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物。
注意：
• 移液管需要灭菌。
• 操作时，试管口和移液管应在离火焰1~2 cm处。
（2）涂布平板操作
Hale Waihona Puke 稀释涂布平板法常用来统计样品中活菌的数目。 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来 源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能 推测出样品中大约含有多少活菌。 为了保证结果准确，一般选择菌落数在30 ~ 300的平板进行 计数。 注意：统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。这是因为当 两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
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1
需要使用的仪器——震荡机
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2
吸取准备好欲稀释的菌液
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3
吸取充分均匀后的菌液
业精于勤荒于嬉 行成9mL无菌水之试管，将试管口过火灭菌。 将菌液置入，此时试管须做记号为第一次稀释。
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5
将 试 管 于 震 荡 机 上 ， 使 菌 液 混 合 均 匀
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6
取出试管中的第一次十倍稀释菌液1mL，
加入另一个新的含9mL无菌水的试管中。
重复此步骤直至所需要的稀释浓度。
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7
由最后稀释菌液中以玻璃吸管取出 0.1mL
菌液，置入准备好的无菌琼脂内。
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8
將三角玻璃棒浸於酒精中
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9
將三角玻璃棒在火焰上燃烧 须注意勿使燃烧中的酒精滴入酒精瓶中，引起燃烧）
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10
使用玻璃棒将菌液均匀涂布开来，将培养皿置于恒温培养箱 中隔天观察菌落数目，再依照稀释倍数推算出菌液浓度。
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11
华夏得普（北京）科技发展有限公司 中央电教馆资源中心 2019.7
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