培养基的制备与接种1
培养基的制备与微生物接种技术(1)
培养基的制备与微生物接种技术（1）培养基的制备一、实验目的1、了解人工培养基的主要成分及一般制备原则。
2、掌握基础培养基的制造方法和过程。
二、实验原理培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖的营养基质。
培养基要具备以下条件：①要有适宜的营养物质和水分；②具有适宜的PH值；③配制后应经灭菌呈无菌状态。
培养基按物理状态可分液体培养基、固体培养基、半固体培养基。
常用琼脂作凝固剂。
培养基制备的基本程序：配料、溶化、测定及矫正PH、过滤、分装、灭菌、无菌检验三、仪器设备试管、刻度吸管、纱布、滤纸、三角瓶、培养皿、量筒、漏斗、棉塞、电炉、天平、包装纸、棉线、ph试纸、玻棒。
试剂：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、琼脂条、0.1mol/L和1mol/L氢氧化钠、0.1mol/L和1mol/L的盐酸溶液、蒸馏水等。
四、相关知识点一、配制原则和种类（一）培养基配制原则1、培养基：培养基是提供食用菌等生物生长发育所需的营养与特定环境条件的基质，如蘑菇菌是有机营养型中的草腐生菌。
制备培养基不仅要考虑它所需要的含碳化合物、含氮化合物、矿物盐类、生长因子，还要考虑水与pH环境，同时还应考虑它们培养方式是固体培养还是液体培养。
因此，可以把按菌类生长发育需要比例配制的灭菌营养基质，称为培养基。
换言之，培养基必须具备三个条件：含有菌株生长发育所需要的营养物质；具有菌类生长环境条件；经过灭菌，并保持无菌状态。
2、培养基的选择：在整菌种制备过程中，从母种到原种、栽培种，各个阶段的目的要求有所不同，所选用的培养基的配比也应有所区别。
一般母种初生菌丝较嫩弱，分解养分能力差，要求营养丰富、完全，氮源、维生素的比例应高。
须选用易于被菌丝吸收利用的物质，如葡萄糖、蔗糖、马铃薯、蛋白胨、无机盐类及生长素等为等而原种、栽培种所需数量较多，且菌丝分解能力强，可利用大量农作物秸秆、粪草、棉籽壳、麸皮、米糠等原料作为培养基。
（二）培养基的种类1、根据营养物质的来源，可以把培养基分炎天然培养基、半合成培养基和合成培养基。
微生物限度检测操作步骤
微生物限度检测是对产品中微生物数量进行定量或定性检测的过程。
以下是一般的微生物限度检测操作步骤：
1. 准备工作：
-清洁和消毒实验室设备、试剂瓶和工作台等。
-准备所需的培养基、培养基平板和培养基管等。
2. 样品处理：
-取得待检样品，确保样品的采集和保存符合规范和要求。
-如果需要，将样品稀释到适当的浓度，以便在培养基上形成可数的菌落。
3. 培养基制备和接种：
-准备所需的培养基，并按照说明书的要求进行制备。
-将适量的培养基倒入无菌平板或管中，并在适当温度下固化。
-在培养基表面均匀涂布待检样品，或将待检样品滴于培养基管中。
4. 培养和孵育：
-将培养基平板放置在恒温培养箱中，按照规定的时间和温度进行培养。
-监控培养过程中的温度和湿度，确保适宜的条件。
5. 菌落计数和鉴定：
-培养结束后，观察培养基上的菌落情况。
-使用显微镜进行菌落计数和鉴定，根据形态、颜色、大小等特征确定菌落类型。
6. 结果分析和报告：
-根据菌落计数和鉴定结果，判断样品的微生物限度是否符合规定的标准。
-撰写检测报告，将结果详细记录并汇总，包括样品信息、检测方法、结果和结论等。
以上是一般微生物限度检测的操作步骤。
具体的操作可能会因实验室和产品类型而有所不同，需要根据相关标准和方法进行调整和执行。
在进行微生物限度检测时，应严格遵守实验室的操作规程和安全要求，确保检测结果的准确性和可靠性。
培养基制备的流程
培养基制备的流程
培养基制备的流程主要包括以下几个步骤：
1.计算配方：根据所需培养基的种类和实验需求，计算各成分的比例和用量。
2.称量：准确称取各种成分，如蛋白胨、牛肉膏、琼脂等。
3.溶解：将称取的成分放入适量的水中，搅拌均匀，使其充分溶解。
对于一些
不易溶解的物质，如琼脂，可能需要加热辅助溶解。
4.调pH：根据微生物的生长需求，调整培养基的pH值。
一般而言，细菌培养
基的pH值范围在6.5-7.5，真菌培养基的pH值范围在4.8-5.8。
5.过滤：将溶解好的培养基通过过滤器过滤，以去除可能存在的杂质。
6.分装：将过滤后的培养基倒入无菌的培养皿或瓶子中，注意留出适当的空隙，
以利于蒸汽的排出。
7.灭菌：将分装好的培养基进行灭菌处理，常用的方法有高压蒸汽灭菌和干热
灭菌。
灭菌过程中要注意保持培养基内部的温度和压力，确保微生物被有效杀灭。
8.检验：对制备好的培养基进行质量检验，如观察培养基的外观、透明度、pH
值等，确保符合实验要求。
9.储存：将检验合格的培养基在适当的条件下储存，如4℃冰箱或阴凉干燥处。
在使用前，如需再次检验，可进行细菌或真菌的接种试验。
需要注意的是，在培养基制备过程中要严格遵循无菌操作规程，避免微生物污染。
同时，根据实验需求选择合适的培养基类型和配方，以满足不同微生物的生长需求。
实验 LB培养基制备及大肠杆菌的接种
划线分离具体步骤：
1. 取菌种前灼烧接种环，消灭接种环上的微生物，冷却；
2. 用接种针挑取单菌落，迅速送入培养皿内，培养基的一边 划Z线。划线时，接种针应与平板表面成30°角左右。不 要使接种针碰到培养皿边缘，也不要将培养基划破；
3. 灼烧接种环，待接种环冷却后，转动培养皿约70°角，用 烧过冷却的接种针，通过第1次划线部分作第2次划线；
LB培养基的配方如下： 酵母提取物：5 g 蛋白胨： 10 g NaCl： 10 g 琼脂： 15～20 g 水： 1000 mL pH 7.0
四、实验方法
平板划线分离法 细菌的接种方法有很多种，如划线法、涂布法、倾注法、
斜面接种法、液体培养基接种法、螺旋接种法等。 平板划线分离接种环冷却后，用同样方法，通过第二次 划线部分作第三次划线和通过第三次划线部分作第四次划 线；
5. 划线完毕后，盖上皿盖，以封口条将培养皿封好，标注日 期；
6. 灼烧接种环； 7. 培养皿倒置于恒温箱培养。
灼烧接种环 灼烧接种环 灼烧接种环 灼烧接种环 灼烧接种环
五区 四区
冷却
培养基灭菌
五、实验步骤
LB液体培养基、LB固体培养基、培养皿高压灭 菌。
制作平板 扩大培养 划线分离
菌种保存
超净工作台中，将灭菌后冷却到60℃左右的LB 固体培养基倒入灭菌培养皿中，敞盖冷却，备 用。
将大肠杆菌接种到LB液体培养基中，于37℃摇 床中震荡培养12h。
以接种环取震荡培养后的菌液，在固体培养基 上划线，封口。培养皿倒置与37℃的恒温培养 箱中培养12~24h，观察划线末端的菌落生长情 况；用接种环挑取单菌落，用划线法接种于斜 面上，在37℃的恒温培养箱中培养24h。
细菌培养基的制备、灭菌及接种、培养技术ppt课件
目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法，从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
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实验材料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2
支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶，活性污泥或土壤或湖水1瓶， 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 其它：接种环、酒精灯、恒温箱。
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c. 第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保无菌仍要放 在37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。
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实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
过滤除菌法： 不能用加热灭菌的 液体物质（如维生 素、血清），一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
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第二部分 细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求 实验材料 实验程序
9
实 验 程 序2
（培养基的配制方法和步骤） 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.6，用精 密pH试纸对照。 4. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部 倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 6. 灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h，确定无菌生长，方可使用。
实验二
细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术
1
第一部分 细菌培养基的制备、灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
2
目的要求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
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实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。
细菌的接种与培养—培养基的制备(微生物检验课件)
培养基的主要成分及其作用
营养物质：蛋白胨、肉浸液及牛肉膏、糖类、血液、鸡蛋与动物血清、无机盐、 生长因子
水分 凝固物质：琼脂、明胶、卵白 抑制剂：常用的有胆盐、煌绿等抑制革兰阳性菌生长；亚碲酸盐、四硫磺酸盐
及多种抗生素等 指示剂：为了观察细菌是否利用分解糖类、氨基酸等物质，常在某些培养基中
培养基的制备程序
制备程序：调配、溶化、矫正pH、过滤澄清、分装、灭菌、鉴定7个主要步骤 分装量：琼脂斜面分装量约为试管容量的1/4，斜面长度约为试管长度的2/3；液
体培养基和半固体培养基为试管长度的1/3；琼脂平板平皿内径为9cm，倾注培 养基13-15ml，若内径为7cm，倾注培养基7-8ml 灭菌：高压蒸汽灭菌法最常用
原料称量
加热溶化
pH矫正
水
酚红 指示剂
培养基
培养基
比色管
目视
pH矫正
蒸 待馏 测水 管
标培 准养 比基 色
管
过酸
蒸 待 测馏 水 管
标准比培养基 色
管
相同
蒸 待馏 测水 管
标培 准养 比基 色
管
过碱
培养基分装
培养基的包扎
培养基的包扎
细菌生长繁殖的条件有哪些？ 叙述培养基的制备程序。 简述培养基的种类及用途。
加入一定种类的指示剂，如酚红、溴甲酚紫、增菌培养基 选择培养基 鉴别培养基 厌氧培养基
按物理性状分类 • 液体培养基 • 固体培养基 • 半固体培养基
基础培养基
基础培养基
含有基础生长所需的基本营养成分，最 常用的是肉浸液，俗称肉汤，主要成分 含牛肉浸液和蛋白胨。
生长繁殖方式：无性繁殖方式，即二分裂。 生长繁殖速度：多数细菌分裂一代需20～30min。结核分枝杆菌需
培养基制备实验报告
培养基制备实验报告培养基制备实验报告一、引言培养基是微生物学研究中不可或缺的工具，它提供了微生物生长所需的营养物质和环境条件。
本实验旨在探究培养基的制备方法以及其对微生物生长的影响。
二、实验材料与方法2.1 实验材料- 葡萄糖- 蛋白胨- 磷酸二氢钾- 氯化钠- 硫酸镁- 碳酸钠- 琼脂- 紫菜酸钠- 菌种2.2 实验方法1. 按照所需培养基的成分配比，称取相应质量的试剂。
2. 将葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、氯化钠、硫酸镁、碳酸钠等试剂溶解于适量的去离子水中，得到培养基溶液。
3. 将培养基溶液倒入培养瓶中，加入适量的琼脂并充分搅拌均匀。
4. 用无菌纱布过滤培养基溶液，排除其中的固体颗粒。
5. 将过滤后的培养基溶液分装至无菌培养皿中，每个培养皿约倒入20 mL。
6. 在培养皿中加入适量的紫菜酸钠，以供微生物生长所需的营养物质。
7. 用无菌技术将菌种接种于培养皿中，封闭培养皿并进行培养。
三、实验结果与分析经过一段时间的培养，我们观察到培养皿中出现了微生物的生长。
这表明我们制备的培养基具备了支持微生物生长的营养物质和环境条件。
实验中添加的紫菜酸钠也能提供微生物所需的特殊营养物质，促进微生物的繁殖。
对于培养基的制备，我们需要注意以下几点：1. 成分配比：培养基中各种营养物质的配比需要根据不同微生物的需求进行调整。
不同的微生物对营养物质的需求不同，因此制备不同种类的培养基时需要根据实际情况进行配比调整。
2. pH值调节：微生物对pH值的敏感度较高，因此在制备培养基时需要根据微生物的需求调节其pH值，以提供适宜的生长环境。
3. 琼脂的添加：琼脂是为了使培养基凝固，便于微生物的生长观察。
在制备培养基时，需要充分搅拌琼脂，使其均匀分布于培养基中。
4. 紫菜酸钠的添加：紫菜酸钠是一种富含多种维生素和微量元素的营养物质，可以提供微生物所需的特殊营养物质。
在某些微生物的培养中，添加适量的紫菜酸钠可以促进微生物的生长和繁殖。
实验二细菌的接种、培养及代谢产物
实验二细菌的接种、培养及代谢产物（B a c t e r i a l I n o c u l e t i o n a n d A r t i f i c a l C u l t u r e a n dM e t a b o i c p r o d u c t s）一、细菌的人工培养（A r t i f i c a l C u l t u r e o f B a c t e r i a）在适当条件下，绝大多数细菌可用人工方法培养，使其繁殖，通过人工培养，获得纯种细菌，是进一步观察研究各种细菌具有不同特性的基础。
(一)常用培养基的制备1、肉汤培养基：是常用的液体培养基，也是制备某些其他培养基的基础。
材料：（制备100m l肉汤培养基的用量）(1)培养基的成分：牛肉50g蛋白脂1g氯化钠0.5g磷酸氢二钾(K2H P04·12H20)0.1g蒸馏水100m1(2)玻皿、试剂、比色管、比色架、吸管、1N与1／20N 的N a O H、三角烧瓶、漏斗、中试管、酚红指示剂、滤纸、卷筒、天平、蒸馏水。
方法：（1）将已去筋膜脂肪并经绞碎鲜牛肉50g，加蒸馏水100m l，放入冰箱中过夜。
（2）加热45—50℃一小时，并煮沸半小时，用数层纱布或滤纸过滤，滤液用蒸馏水补足其量为100m1。
（3）于滤液中加氯化钠0.5g，蛋白脂1g、磷酸氢二钾0.1g，加热使之完全溶化。
（4）测定酸碱度并调整至P H7.6，必要时用滤纸过滤。
（5）按需要分装于试管或烧瓶内，加棉花塞并包装后，置高压蒸汽灭菌器内经15磅／寸220—30分钟灭菌。
（6）灭菌后置37℃温箱，孵育24h，无杂菌生长，即可应用。
或放冰箱备用。
2、普通琼脂培养基它是最常用的固体培养基。
材料：肉汤、琼脂方法：(1)在肉汤中加入2％琼脂，熔化后调整P H7.6，必要时用棉花纱布过滤。
(2)于琼脂凝固前，分装于试管或小烧瓶内，然后加棉塞并包装。
(3)放入高压蒸汽灭菌器内，经15磅/寸220分钟灭菌。
半固体培养基穿刺接种原理
半固体培养基穿刺接种原理一、前言半固体培养基穿刺接种是微生物学实验中常用的一种方法，它能够在不破坏微生物菌落形态的前提下，快速地获得纯菌株。
本文将详细介绍半固体培养基穿刺接种的原理。
二、半固体培养基的制备1. 培养基成分半固体培养基主要由肉汤、琼脂、葡萄糖和其他微量元素组成。
其中，肉汤为菌落提供了必需的营养物质，琼脂则是使培养基凝固的关键成分。
2. 制备方法（1）将适量肉汤加入适量蒸馏水中，并加热至沸腾。
（2）将琼脂加入热肉汤中，并搅拌至完全溶解。
（3）加入适量葡萄糖和其他微量元素，并再次搅拌均匀。
（4）将制好的半固体培养基分装到试管或平板中，等待凝固即可使用。
三、穿刺接种原理1. 原理概述半固体培养基穿刺接种是通过将菌落内部的细菌移植到新的培养基上，从而获得纯菌株的方法。
穿刺接种可以保持原有的菌落形态，同时也能够有效地避免不同菌株之间的杂交。
2. 穿刺接种步骤（1）准备好需要接种的半固体培养基和待检测样品。
（2）取一根无菌铁针或酒精灭菌后的医用针头，在烧热后冷却至适宜温度。
（3）将铁针或针头消毒后，沿着待检测样品上下方向划过数次，使细菌附着在针头上。
（4）将带有细菌的铁针或针头插入半固体培养基中，并旋转数圈，使细菌均匀地分布在培养基中。
（5）将试管或平板放置在恰当的温度和湿度条件下进行培养。
四、注意事项1. 铁针或针头必须严格消毒，以避免外源性污染。
2. 在穿刺接种时，应尽量避免将细菌带到培养基的表面上，以免影响菌落形态。
3. 培养条件应根据不同的菌株进行调整，以获得最佳的生长效果。
五、总结半固体培养基穿刺接种是微生物学实验中常用的一种方法，它能够在不破坏微生物菌落形态的前提下，快速地获得纯菌株。
在进行穿刺接种时，应注意铁针或针头的消毒和操作规范。
同时，在培养过程中也需要注意适当调整温度和湿度等条件，以获得最佳的生长效果。
液体培养基接种法步骤
液体培养基接种法步骤液体培养基接种法是微生物学实验中常用的一种方法，用于培养细菌、真菌等微生物。
接下来将详细介绍液体培养基接种法的步骤。
一、准备工作在进行液体培养基接种实验之前，首先要准备好所需的试剂和实验器具。
试剂包括培养基、生长因子等，实验器具包括试管、移液管、培养皿等。
二、制备培养基根据实验需要，选择合适的培养基配方，并按照所需比例将培养基粉末溶解于适量的蒸馏水中。
然后，将溶液倒入试管或其他容器中，并用自动灭菌器或高压灭菌锅进行灭菌处理。
三、接种微生物1. 选择待接种的微生物菌株，可以是细菌、真菌等。
在接种前，可以通过显微镜观察菌落形态、颜色等特征，确保选择到正确的菌株。
2. 取一小块含有待接种微生物的培养基，称为接种物。
接种物可以来自已培养的菌落或是冻存的菌株。
3. 使用无菌的移液管，将接种物转移到已经灭菌的培养基中。
注意避免接种物与外界环境接触，以防止污染。
4. 将接种好的培养基用无菌的塞子或膜覆盖，以防止外界细菌或真菌的污染。
5. 将接种好的培养基放置在恰当的温度和湿度条件下进行培养。
四、培养过程管理1. 在培养过程中，要定期观察培养基的变化，如颜色、透明度等。
如果出现异常现象，如菌落变色、液体变浑浊等，可能表示有外来微生物的污染。
2. 在培养过程中，可以根据需要添加适当的营养物质，如氮源、糖类等，以促进微生物的生长。
3. 根据实验的要求，可以在培养基中添加抗生素或其他抑菌剂，以抑制其他微生物的生长。
五、培养基的收获和应用1. 经过一定时间的培养，微生物会在培养基上生长形成菌落。
可以通过观察菌落的形态、大小等特征，初步判断微生物的种类。
2. 如果需要进一步分离和纯化菌株，可以通过移液管或接种环等工具，将单个菌落转移到新的培养基上进行培养。
3. 培养基中的微生物可以用于进一步的实验研究，如鉴定微生物的生理特性、生化反应等。
4. 培养基中的微生物还可以用于生产工业产品，如抗生素、发酵酒精等。
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培养基的制备与接种
一、目的与要求
（一）学习制备培养基的基本技术。
（二）制备牛肉膏蛋白琼脂培养基。
（三）掌握微生物分离、接种操作步骤。
二、原理
牛肉膏蛋白培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌培养基，这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，可供作繁殖之用，制作固体培养基时须加2%琼脂，培养细菌时，应用稀酸或稀碱将PH调至中性或微碱性。
牛肉膏蛋白培养基的配方：
牛肉膏0.5%，蛋白胨1%，NaCl0.5%，pH7.4～7.6。
三、材料与仪器
（一）试剂牛肉膏，蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。
(二)其他接种环、试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，漏斗，乳胶管，弹簧夹，纱布，棉花，牛皮纸，线绳，pH试纸，电炉，台称。
四、操作步骤
（一）称量根据用量按比例依次称取成分，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯，蛋白胨易吸湿，称量时要迅速。
（二）溶解在烧杯中加入少于所需要的水量，加热，ZHU一加入各成分，使其溶解，琼脂在溶液煮沸后加入，融化过程需不断搅拌。
加热时应注意火力，勿使培养基烧焦或溢出。
溶好后，补足所需水分。
（三）调PH 用1mol/L NaOH或1mol/L HCl把PH调至所需范围。
（四）过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利于某些实验结果的观察，如无特殊要求时可省去此步骤。
（五）分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三解瓶内，分装装置如实验图所示；分装时注意，勿使培养基沾染在容器口上，以免沾染棉塞引起污染。