培养基制备的基本方法和注意事项 (2)
实验一 培养基的制备
实验一培养基的制备一、目的与要求（一）学习制备培养基的基本技术。
（二）制备牛肉膏蛋白琼脂培养基。
二、原理牛肉膏蛋白培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌培养基，这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，可供作繁殖之用，制作固体培养基时须加2%琼脂，培养细菌时，应用稀酸或稀碱将PH调至中性或微碱性。
牛肉膏蛋白培养基的配方：牛肉膏0.5%，蛋白胨1%，NaCl0.5%，pH7.4～7.6。
三、材料与仪器（一）试剂牛肉膏，蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。
(二)其他试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，漏斗，乳胶管，弹簧夹，纱布，棉花，牛皮纸，线绳，pH试纸，电炉，台称。
四、操作步骤（一）称量根据用量按比例依次称取成分，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯，蛋白胨易吸湿，称量时要迅速。
（二）溶解在烧杯中加入少于所需要的水量，加热，ZHU一加入各成分，使其溶解，琼脂在溶液煮沸后加入，融化过程需不断搅拌。
加热时应注意火力，勿使培养基烧焦或溢出。
溶好后，补足所需水分。
（三）调PH 用1mol/L NaOH或1mol/L HCl把PH调至所需范围。
（四）过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利于某些实验结果的观察，如无特殊要求时可省去此步骤。
（五）分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三解瓶内，分装装置如实验图8所示；分装时注意，勿使培养基沾染在容器口上，以免沾染棉塞引起污染。
1．液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜，分装三角瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的1/2为宜。
2．固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，斜面长度不超过管长的1/2。
分装三解瓶，以不超过容积的1/2为宜。
3．半固体分装装置以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
（六）加棉塞分装完毕后，在试管口或三解瓶口塞上棉塞（或泡沫塑料塞及试管帽等，以阻止外界微生物进入培养基而造成污染，并保证有良好的通气性能。
培养基的制备
注意事项：1、压力适当； 2、无菌条件下进行； 3、防止渗透现象。
辐射灭菌：
原理：紫外线波长在200－300nm，具有杀菌作用，以
265-266杀菌力强。此段波长易被细胞中核酸吸收；可 产生臭氧和过氧化氢。杀菌效力与强度和时间的乘积成 正比。
曲霉属
青霉属
几种常见霉菌
主要特征
分布
作用与用途
菌丝无隔,单细胞 常长在淀粉类食 迅速蔓延,有假根, 品上如馒头、面 孢子囊呈黑色,产 包、甘薯等
生孢子囊和接合 孢子
能将淀粉转化为 糖，用于生产糖 化酶，酿造甜酒
等
菌丝分隔，分生 空气、谷物、土
孢子梗顶端膨大， 壤和各种有机物
顶囊上生辐射状
上
小梗菌落疏松、
步骤： 1、倒平板：牛肉膏蛋白胨培养基，高氏I号培养基，查氏 培养基冷却至55-60℃时，混匀后倒平板，牛肉膏蛋白胨培养 基倒4皿，高氏I号培养基和查氏培养基各倒3皿。 2、制备污水稀释液：10g土样，加入90ml无菌水中，在三 角瓶中振摇20min。取0.5ml 加入盛有4.5ml无菌水的试管中， 以此类推，制成不同稀释度。 3、涂布：将上述每种培养基平板底面标记稀释度，然后用 无菌吸管从最后三种稀释度，即10-4、10-5和10-6的试管中吸 取0.1ml对号放入平板上，用玻棒涂布。 4、培养：高氏I号和查氏倒置培养于28℃培养箱中培养35days，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在37℃培养1-2days。 5、挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存。
观察菌落形态并记录
序号 来源 大小 形状 边缘 颜色 表面 代谢物 种 类
制备培养基的操作要点和注意事项
制备培养基的操作要点和注意事项制作培养基就像微生物实验室的家常便饭，培养基配成后一般需测试并调节pH，还须进行灭菌，培养基由于富含营养物质，易被污染或变质，配制过程中有多个注意事项和操作要点需要我们掌握。
一、什么是培养基？培养基，是指供给微生物、植物或动物（或组织）生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。
一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）、维生素和水等几大类物质。
培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是细胞生长和繁殖的生存环境。
二、培养基的种类。
培养基种类很多，根据配制原料的来源可分为自然培养基、合成培养基、半合成培养基；根据物理状态可分为固体培养基、液体培养基、半固体培养基；根据培养功能可分为基础培养基、选择培养基、加富培养基、鉴别培养基等；根据使用范围可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基、真菌培养基等。
三、培养基配制须知。
培养基配成后一般需测试并调节pH，还须进行灭菌，通常有高温灭菌和过滤灭菌。
培养基由于富含营养物质，易被污染或变质。
配好后不宜久置，最好现配现用。
四、玻璃器皿的清洗在制备培养基的过程中，首先要使用一些玻璃器皿，如试管、三角瓶、培养皿、烧杯和吸管等。
这些器皿在使用前都要根据不同的情况，经过一定的处理，洗刷干净。
有的还要进行包装，经过灭菌等准备就绪后，才能使用。
1新购的玻璃器皿除去包装沾染的污垢后，先用热肥皂水刷洗，流水冲净，再浸泡于１～２％的工业盐酸中数小时，使游离的碱性物质除去，再以流水冲净。
对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒置于洗涤架上将水空干，即可使用。
2用过的玻璃器皿凡确无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用后可随时冲洗，吸取过化学试剂的吸管，可先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。
有可能被病原菌污染的器皿，必须经过适当消毒后，将污垢除去，用皂液洗刷，再用流水冲洗干净。
微生物培养及实验基本操作技术
微生物培养及实验基本操作技术一、培养基配制培养基是指人工配制的、适合于微生物生长繁殖或累积代谢产物所需的各种营养物的混合基质。
配制培养基是进行微生物检验工作的基础,甚至是任何与微生物有关工作的基础。
注意事項–灭菌锅的使用①加水盖过底部铁板—②放入东西—③关门—④調整溫度時間—⑤关紧泄压阀灭菌結束後，等压力降回零時才可打開門進入灭菌锅之物品，蓋子不可關太緊或太鬆拿滅菌後物品請記得帶耐熱手套培养基中的主要成分及其作用：营养物质：N源、C源、无机盐、生长因子、水常用的N源：蛋白胨、牛肉膏、肉浸汁、酵母膏常用的C源：糖、醇类物质（单糖：葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖双糖：蔗糖、麦芽糖、乳糖；多糖：淀粉、纤维素、菊糖；醇类：甘露醇、卫茅醇、甘油）水：用蒸馏水，不能用自来水凝固剂：琼脂、明胶、血清等抑制剂：1、作用：鉴定细菌、抑制杂菌的生长繁殖，增加待检菌的检出率2、种类：盐类：氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾（钠）、亚硒酸钠等染色剂类：煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、孟加拉红、玫瑰红胆盐类：猪（牛、羊）胆盐、混合胆盐、三号胆盐、去氧胆酸盐、胆石酸盐抗菌素：青霉素、链霉素、杆菌肽、多粘菌素指示剂1、作用：用于指示鉴别细菌可否利用分解糖醇类物质和含氮化合物，产酸产碱的能力。
2、常用的指示剂：酚红、溴甲酚紫、中性红、中国蓝、甲基红、复红、伊红、美蓝、孔雀绿等。
培养基的类型：●根据培养基的物理状态来区分：1、液体培养基：主要用于增菌培养、鉴别性培养2、固体培养基：用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定3、半固体培养基：观察微生物的动力，有时用来保藏菌种4、脱水(商品)培荞基：脱水培养基也称为商品培养基、预制干燥培养基。
●将各种营养成分按比例配制完全,制成脱水的干粉状,装瓶出售;使用时只需按比例加人定量的水溶化、灭菌便可。
●根据培养基的用途来区分：➢增殖培养基选择培养基鉴别培养基1、增殖培养基：在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的营养物质，以增加这种微生物的繁殖速度，逐渐淘汰其它微生物，这种培养基称为增殖培养基。
培养基制备
一、玻璃器皿的清洗在制备培养基的过程中，首先要使用一些玻璃器皿，如试管、三角瓶、培养皿、烧杯和吸管等。
这些器皿在使用前都要根据不同的情况，经过一定的处理，洗刷干净。
有的还要进行包装，经过灭菌等准备就绪后，才能使用1、新购的玻璃器皿除去包装沾染的污垢后，先用热肥皂水刷洗，流水冲净，再浸泡于１～２％的工业盐酸中数小时，使游离的碱性物质除去，再以流水冲净。
对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒置于洗涤架上将水空干，即可使用。
2、用过的玻璃器皿凡确无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用后可随时冲洗，吸取过化学试剂的吸管，可先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。
有可能被病原菌污染的器皿，必须经过适当消毒后，将污垢除去，用皂液洗刷，再用流水冲洗干净。
若用皂液未能洗净的器皿，可用洗液浸泡适当时间后再用清水洗净。
洗液的主要成份是重铬酸钾和浓流酸，其作用是将有机物氧化成可溶性物质，以便冲洗。
洗液有很强的腐蚀作用，使用时应特别小心，避免溅到衣服、身体和其他物品上。
二、培养基的类型在实验室中配制的适合微生物生长繁殖或累积代谢产物的任何营养基质，都叫做培养基(Media).由于各类微生物对营养的要求不同，培养目的和检测需要不同，因而培养基的种类很多。
我们可根据某种标准，将种类繁多的培养基划分为若干类型根据对培养基组成物质的化学成分是否完全了解来区分，可以将培养基分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。
1天然培养基天然培养基是指利用各种动、植物或微生物的原料，其成分难以确切知道。
用作这种培养基的主要原料有：牛肉膏、麦芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麸皮、各种饼粉、马铃薯、牛奶、血清等。
用这些物质配成的培养基虽然不能确切知道它的化学成分，但一般来讲，营养是比较丰富的，微生物生长旺盛，而且来源广泛，配制方便，所以较为常用，尤其适合于配制实验室常用的培养基。
培养基的配制 (2)
培养基的配制简介培养基是在实验室中广泛使用的一种生物学培养材料，它提供了生长微生物和其他细胞的所需营养物质和理想的环境条件。
培养基的配制是制备培养基的过程，通过合理的配比和操作，可以获得高质量的培养基。
培养基的组成培养基的组成是根据所培养的微生物或细胞的生理特点和营养需求来确定的。
一般来说，培养基由以下几个组分组成：1.碳源：提供微生物或细胞生长所需的碳质物质，常见的碳源有葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等。
2.氮源：提供微生物或细胞生长所需的氮质物质，常见的氮源有氨基酸、尿素、氯化铵等。
3.磷源：提供微生物或细胞生长所需的磷质物质，常见的磷源有磷酸二氢盐、磷酸氢二钠等。
4.硫源：提供微生物或细胞生长所需的硫质物质，常见的硫源有硫酸铵、硫酸钠等。
5.微量元素：为微生物或细胞提供必需的微量元素，如铁、锰、锌等。
6.维生素：提供微生物或细胞生长所需的维生素，如维生素B群。
7.pH调节剂：维持培养基的理想pH值，如磷酸盐缓冲液。
8.凝胶剂：使液态培养基凝固成凝胶状，常用的凝胶剂有琼脂和洋菜。
培养基的配制步骤1. 准备所需实验器材和试剂在开始培养基的配制之前，需要准备好所需的实验器材和试剂。
常见的实验器材包括量筒、烧杯、移液管、培养皿等；试剂包括碳源、氮源、磷源、硫源、微量元素、维生素等。
2. 确定培养基组成根据所培养的微生物或细胞的生理特点和营养需求，确定培养基的组成，并计算各组分的配比。
3. 配制培养基按照确定的配比，依次称取所需试剂并溶解于适量的去离子水中，然后使用量筒或烧杯调整总体积。
4. 调节pH值使用pH计测量培养基的pH值，并根据需要使用适当的酸碱溶液进行调节，直到达到理想的pH值。
5. 凝胶化培养基（可选）如果需要制备凝胶状的培养基，可以在配制好的液态培养基中加入适量的凝胶剂，并在加热过程中充分混合，待其冷却凝固。
6. 灭菌配制好的培养基需要进行灭菌处理，常见的方法有高温灭菌和滤过灭菌。
高温灭菌通常使用高压高温的压力罐进行，滤过灭菌则需要使用0.22微米的滤膜进行过滤。
培养基的制备注意事项
培养基的制备注意事项培养基是细菌、真菌、植物等在实验室中生长繁殖的基础，制备好的培养基质量的优劣直接关系到后续实验的效果。
下面是制备培养基时需要注意的几个方面：1.原料选择：培养基的原料应选择优质的，可能污染的原料要经过严格的消毒处理。
一般情况下，培养基的基本成分有蛋白质源、碳源、氮源、矿物质盐和水。
一般可以选择酪蛋白、蛋白胨、肉蔻蛋白、玉米粉、葡萄糖、蔗糖、硝酸铵等。
2.无菌操作：培养基制备的过程中需要进行无菌操作，以免杂菌的污染。
在实验室的流水槽和工作台上进行消毒，使用一次性无菌胶手套、面罩和无菌吸管等。
还需要准备好高压蒸汽锅和高压反应釜来进行高温高压灭菌，以杀死培养基中可能存在的微生物。
3.配制方法：按照实验要求，将不同的成分按照一定比例配制成培养基。
在配制过程中，需要掌握好各种成分的化学性质和操作方法，在配制过程中遵循标准的步骤和操作规程，严格控制各种成分的加量和质量，确保培养基的稳定性和可靠性。
4.调节pH值：培养基pH值的调节是培养基制备中必不可少的一个步骤。
不同的微生物对pH值有不同的要求，一般细菌和真菌的培养基pH值在6-8之间比较适宜。
可以使用pH计或酸碱滴定法来进行准确的pH值测定和调节。
5.灭菌方法：经过上述步骤制备好的培养基需要进行灭菌处理，以杀死培养基中可能存在的微生物。
常用的灭菌方法有高温高压灭菌、滤器灭菌、化学灭菌等。
灭菌的时间和温度要掌握好，以避免对培养基成分的破坏。
制备培养基需要严格按照操作规程进行，注意消毒、无菌操作、配制比例、pH调节和灭菌等环节。
只有优质的培养基才能够提供良好的生长环境，确保实验的准确性和可靠性。
实验教案 培养基的制备
实验一培养基的制备一目的要求1 明确培养基的配制原理2 通过对基础培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤二基本原理不同培养基中含有不同的微生物生长所需要的营养物质，其可供微生物生长繁殖用，为微生物提供C源、能源、N源和维生素。
在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。
琼脂在常用浓度下96度溶化，实际应用时，一般在沸水中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免烧焦，琼脂在40度时凝固，通常不被微生物分解利用，固体培养基中琼脂含量根据琼脂的质量和气温的不同有所不同。
牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏：3.0g,蛋白胨10.0g,NACl5.0g,水1000ml,pH 7.2-7.4.马铃薯培养基是霉菌的基本培养基，培养基配方如下：马铃薯100g 蔗糖10g 琼脂10g 水500ml pH 自然三器材：1试剂或溶液：马铃薯、蔗糖、琼脂、蒸馏水。
2仪器或其它用具：试管、三角瓶、烧杯、玻璃棒、天平、牛角勺，纱布、麻绳、牛皮纸、高压灭菌锅四操作步骤1称量：依次称取马铃薯块、蔗糖、，切碎的琼脂放入三角瓶中并加入500ml蒸馏水2 把三角瓶放入锅中，锅盖好后放在电热炉上加热，等琼脂溶解后取出三角瓶3过滤：趁热用多层纱布过滤，去除里面的杂质4分装：将配制好的培养基分装入试管。
5加塞：分装完后在试管口塞上塞子，以阻止外界微生物进入培养基造成污染，并保证有良好的勇气性能。
6包扎：用牛皮纸再包扎瓶口，以防灭菌时弄湿棉塞。
7灭菌：用高压蒸汽锅在0.1MP下灭菌20min8搁置斜面：趁热将试管里的培养基斜面，注意斜面的长度大约为试管长度的1/29无菌检查五：注意事项1培养基配制后，必须立即灭菌2分装过程中，注意不要使培养基沾在管口上，以免沾在塞子上而引起污染实验二革兰氏染色法一目的要求1学习并初步掌握革兰氏染色法2了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性二基本原理革兰氏染色法是1884年丹麦病理学家christain Gram 创立的而后作了些改进，革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
培养基制备的基本方法和注意事项
1.培养基配方的选定
同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。
因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外．一般均应尽量收集有关资料．加以比较核对．再依据自己的使用目的加以选用，记录其来源。
2 ．培养基的制备记录
每次制备培养基均应有记录，包括培养推各称，配方及其来源．和各种成份的牌号。
最终pH 值、消毒的温度和时间制各的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。
3.培养基成分的称取
培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱．最好一次完成，不要中断。
可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。
完全称取完毕后．还应进行一次检查。
4.培养基各成份的混合和溶化
培养基所用化学药品均应是化学纯的。
使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。
最好使用不锈钢锅加热溶化．也可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。
在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动，以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。
待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化．迄至煮沸。
如为琼脂培养基，应先用一部分水将琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混合。
在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。
5.培养塞pH 的初步调整
培养基各成分完全溶解后，应进行pH 的初步调正，因培养基在加热消毒过程中、pH 会有所变化，例如，牛肉浸液约可降低pH0.2.而肠浸液pH 却会有显著的升高。
因此，对这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的最终pH ，保证培养基的质量。
pH 调正后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基沉淀物的析出。
6．培养基的过滤澄清
液体培养基必须绝对澄清，琼脂培养基也应透明无显著沉淀，因此，须要采用过滤或其它澄清方法以达到此项要求。
一般液体培养基可用滤纸过滤法，滤纸应拆叠成折扇成漏斗形，以避免因液压不均匀而引起滤纸破裂。
琼脂培养基可用清洁的白色薄绒布趁热过滤。
亦可用中间夹有薄层吸水棉的双层纱布过滤。
新制肉、肝、血和土豆等浸液时、则须先用绒布将碎渣滤去，再用滤纸反复过滤。
如过滤法不能达到澄清要求、则须用蛋清澄清法。
即将冷却至55-60℃ 的培养基放入大的三角烧瓶内，装入量不得超过烧瓶容量的1/ 2 ，每1000ml 培养基加入1-2个鸡蛋的蛋白．强力振摇3-5 分钟，置高压蒸汽灭菌器中、121℃加热20分钟、取出趁热以绒布过滤即可。
若能自行沉淀者，亦可静置冰箱中1-2日、吸取其上清液即可。
7.培养基的分装
培养基的分装，应按使用的目的和要求，分装于试管、烧瓶等适当容器内。
分装量不得超过容器装盛量的2/ 3 。
容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵，其外还双用防水纸包扎（现试管一般多有用螺旋盖者）。
分装时最好能使用半自动或电动的定量分装器。
分装琼脂抖面培养基时，分装量应以能形成2 / 3 底层和1/ 3 斜面的量为恰当。
分装容器应予先清洗干净并经干烤消毒，以利于培养基的彻底灭菌。
每批培养基应另外分装20ml 培养基于一小玻瓶中，随该批培养基同时灭菌，以为测定该批培养基最终pH之用。
8.培养基的灭菌
一般培养基可采用121℃ 高压蒸汽灭菌15分钟的方法。
在各种培养基制备方法中，如无特殊规定，即可用此法灭菌。
某些畏热成分，如糖类，应另行配成20% 如或更高的浓液，以过滤或间歇灭菌法消毒，以后再用无菌操作技术、定量加于培养基。
明胶培养基亦应用较低温度灭菌。
血液、体液和抗生素等则应从无菌操作技术抽取和加入于经冷却约50℃ 左右的培养基中。
琼脂斜面培养基应在灭菌后立即取出、待冷至55-60℃时，摆置成适当斜面、待其自然凝固。
9. 培养基的质量测试
每批培养基制备好以后．应仔细检查一遍：如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。
并测定其最终pH。
将全部培养基放入36±1℃ 恒温箱培养过夜，如发现有菌生长，即弃去。
用有关的标准菌株接种1-2 管或瓶培养基，培养24- 48 小时，如无菌生长或生长不好。
应追查原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培养基即应弃去，不能使用。
10.培养基的保存
培养基应存放于冷暗处，最好能放于普通冰箱内。
放置时间不宜超过一周，倾注的平板培养基不宜超过3天。
每批培养基均必须附有该批培养基制各记录副页或明显标签。