培养基的配制与接种培养
培养基的配制
培养基的配制：由粉针车间按大豆胰蛋白胨每30g加1L纯化水的比例配制培养基(每批分装应＞3000瓶，每瓶灌装5ml，每批至少配制18L-19L培养基)。
培养基：乳糖＝5ml:1g 在百级下用规格为50ml的无菌针管分装8.2.1调整分装机步数，使分装装量为1.0g，分装于灭菌后的管制瓶中。
8.2.2在无菌分装室百级层流罩下，把准备好的无菌培养基用无菌注射器（规格为5ml）分装到各管制瓶中，每瓶分装5ml，然后加塞，轧盖。
8.2.3阴性对照：在模拟分装过程的前、中、后段，随机抽取10支装有培养基的管制瓶与试验样品同条件培养一起培养，作为阴性对照。
8.2.4阳性对照：在模拟分装过程的前、中、后段，随机抽取10支分装有培养基的管制瓶，其中5支接种浓度<100cfu/ml的枯草芽孢杆菌液，另5支接种浓度<100cfu/ml 的白色念珠菌液，作为阳性对照。
培养基的配制：由粉针车间按大豆胰蛋白胨每30g加1L纯化水的比例配制培养基(每批分装应＞3000瓶，每瓶灌装5ml，每批至少配制18L-19L培养基)。
培养基：乳糖＝5ml:1g 在百级下用规格为50ml的无菌针管分装8.2.1调整分装机步数，使分装装量为1.0g，分装于灭菌后的管制瓶中。
8.2.2在无菌分装室百级层流罩下，把准备好的无菌培养基用无菌注射器（规格为5ml）分装到各管制瓶中，每瓶分装5ml，然后加塞，轧盖。
8.2.3阴性对照：在模拟分装过程的前、中、后段，随机抽取10支装有培养基的管制瓶与试验样品同条件培养一起培养，作为阴性对照。
8.2.4阳性对照：在模拟分装过程的前、中、后段，随机抽取10支分装有培养基的管制瓶，其中5支接种浓度<100cfu/ml的枯草芽孢杆菌液，另5支接种浓度<100cfu/ml 的白色念珠菌液，作为阳性对照。
培养基的配制：由粉针车间按大豆胰蛋白胨每30g加1L纯化水的比例配制培养基(每批分装应＞3000瓶，每瓶灌装5ml，每批至少配制18L-19L培养基)。
大肠杆菌培养
大肠杆菌培养引言大肠杆菌（Escherichia coli）是一种广泛存在于自然界中的革兰氏阴性细菌。
它是一种常见的微生物实验室模型生物，在分子生物学研究、基因工程、生物技术等领域发挥着重要作用。
本文将介绍大肠杆菌的培养方法，包括培养基的配制、接种方法、培养条件的控制等。
培养基配制大肠杆菌培养基的配制是培养大肠杆菌的重要前提，不同的菌株和研究目的需要使用不同的培养基。
下面介绍两种常用的培养基配方：Luria-Bertani（LB）培养基LB培养基是最常用的大肠杆菌培养基之一，它是一种富含营养物质的培养基，适用于一般的大肠杆菌培养。
配方：•水：800 ml•Bacto-tryptone：10 g•Yeast extract：5 g•NaCl：10 g•琼脂：15 g将上述成分加入水中，搅拌均匀，然后加热至溶解，最后将pH调节至7.0 ± 0.2。
M9盐基培养基M9盐基培养基是一种缺乏有机碳源和氮源的无营养培养基，适用于研究大肠杆菌的生理特性或用于表达外源蛋白。
配方：•水：700 ml•Na2HPO4：12.8 g•KH2PO4：3 g•NH4Cl：1 g•NaCl：0.5 g•CaCl2：0.1 g•MgSO4：0.2 g•葡萄糖：2 g•琼脂：15 g将上述成分加入水中，搅拌均匀，然后加热至溶解，最后将pH调节至7.0 ± 0.2。
接种方法大肠杆菌的接种方法有多种，常见的有无菌接种环和无菌注射器接种法。
下面分别介绍这两种接种方法：无菌接种环接种法步骤：1.用火焰将无菌接种环烧红，冷却至适宜温度。
2.打开培养基瓶盖，用无菌接种环蘸取待接种的大肠杆菌菌株。
3.快速将无菌接种环插入含有培养基的琼脂平板（或试管）中，并迅速转动接种环1-2圈，使菌体均匀分布在琼脂平板（或液体培养基）表面。
4.关闭琼脂平板（或试管）盖子，使琼脂凝固后，将琼脂平板（或试管）置于适宜的培养条件下。
无菌注射器接种法步骤：1.用火焰将无菌注射器的针头烧红，冷却至适宜温度。
微生物常用培养基配制方法
微生物常用培养基配制方法常用培养基的配制方法可以根据其成分的类型来进行分类。
以下是一些常见的微生物常用培养基的配制方法。
1.琼脂培养基琼脂培养基是一种含有琼脂作为凝胶剂的液体培养基。
其配制方法如下：1）称取所需的琼脂粉量，加入适量的蒸馏水并充分搅拌溶解。
2）将溶解好的琼脂液装入培养瓶中，用胶栓封口，与蒸馏水瓶一同放入高压蒸汽灭菌器中进行高压蒸汽灭菌，通常是121℃，压力为1.05kg/cm²，蒸汽灭菌时间不低于20分钟。
3）取出蒸汽灭菌后的琼脂液，冷却至温度不会杀死微生物，快速倒入培养皿中。
4）待琼脂凝固成凝胶后，可以用于菌株接种。
2.液体培养基液体培养基是由各种有机和无机物质组成的溶液，可以用于微生物的培养和增殖。
液体培养基的配制方法如下：1）称取所需的各种营养成分如氨基酸、矿质盐等，分别加入适量的蒸馏水中。
2）将搅拌棒或磁力搅拌器放入培养瓶中，加热至微生物能够生长的温度。
3）将配制好的营养液煮沸2-3分钟，以杀死其中的微生物，同时带入一些空气中的微生物。
4）冷却至微生物能够生长的温度，迅速校准pH值。
5）将培养液分装入无菌试管或瓶中，用胶帽封口。
6）将分装好的培养液放入高压蒸汽灭菌器中进行高压蒸汽灭菌，通常是121℃，压力为1.05kg/cm²，蒸汽灭菌时间不低于20分钟。
7）取出蒸汽灭菌后的液体培养基，可以用于菌株接种。
3.固体培养基固体培养基是通过在液体培养基中添加琼脂来使其凝固。
配制方法如下：1）首先按照液体培养基的配制方法制备好液体培养基。
2）在液体培养基凝固之前，将琼脂粉加入培养基中并均匀搅拌溶解。
3）将溶解好的琼脂培养基充分混合，并倒入无菌培养皿中。
4）待琼脂凝固成凝胶后，可以用于菌株接种。
这里只列举了常见的琼脂、液体和固体培养基的配制方法，实际上在微生物研究中还有许多其他类型的培养基，如选择性培养基、富集培养基和不同用途的专用培养基等。
每种培养基的配制方法都有所不同，需要根据具体的要求和目的进行调整和改进。
培养基的配制实验报告
培养基的配制实验报告说到培养基的配制，哎呀，这可是个有趣又重要的过程，特别是对于那些喜欢搞生物的小伙伴们。
想象一下，你的实验室里弥漫着一股淡淡的营养液的香气，真是让人感到兴奋。
培养基就像是小细胞们的豪华餐厅，给它们提供了成长所需的一切。
你说，这多重要啊！配制培养基就像做饭，有时候得讲究些“火候”，要让这些小家伙们吃得舒舒服服，才能茁壮成长。
好吧，我们得准备好一切材料。
无论是琼脂、氨基酸，还是各种微量元素，都要准备齐全。
这个过程啊，别小看，搞不好就像挑剔的客人，要求特别高。
如果你遗漏了某种成分，那可就麻烦了。
就像做菜，盐放少了，味道就不好。
我们得把这些成分一一称量，准确得让人心惊肉跳。
有时候觉得自己简直像个化学天才，手里拿着天平，心里默念：“这次一定要完美！”接下来就是混合了，哇，那个感觉，真是像在调制一杯美味的鸡尾酒。
把琼脂粉倒入水中，搅拌的时候，小心翼翼，生怕飞溅到四周。
这个过程可不能急，得慢慢来，像是在呵护你的宝宝。
水和琼脂混合后，你会发现，它们渐渐融合成了一种神奇的液体，仿佛在对你眨眼。
然后加热！注意了，要让它们彻底溶解，不然等会儿冷却了，就成了一块块“石头”，那就真得哭了。
我们得加点“调味品”，比如说，营养盐。
这个时候，别小看这些微量元素哦，它们就像是料理中的香料，让整个培养基的“味道”更加丰富。
加的过程就像是在给你的作品增添光彩，心里想着：“今天的配方一定要让小细胞们满意！”搅拌均匀之后，闻一闻，嗯，感觉就是不一样，简直想把它喝下去。
一切都准备好之后，我们得进行灭菌，这可是个关键步骤。
把混合好的培养基放进高压锅里，那一刻，你简直能感受到自己是个顶尖科学家。
高温高压的环境就像是给细胞们制造了一个“温室”，确保它们能在最干净的环境下成长。
过了几分钟，听着高压锅“嘭嘭”的声音，心里满是期待，想知道它们会变得多么茁壮。
等到冷却了，终于可以倒入培养皿，嘿嘿，那种感觉简直太棒了，像是在给小细胞们铺床。
实验 LB培养基制备及大肠杆菌的接种
划线分离具体步骤：
1. 取菌种前灼烧接种环，消灭接种环上的微生物，冷却；
2. 用接种针挑取单菌落，迅速送入培养皿内，培养基的一边 划Z线。划线时，接种针应与平板表面成30°角左右。不 要使接种针碰到培养皿边缘，也不要将培养基划破；
3. 灼烧接种环，待接种环冷却后，转动培养皿约70°角，用 烧过冷却的接种针，通过第1次划线部分作第2次划线；
LB培养基的配方如下： 酵母提取物：5 g 蛋白胨： 10 g NaCl： 10 g 琼脂： 15～20 g 水： 1000 mL pH 7.0
四、实验方法
平板划线分离法 细菌的接种方法有很多种，如划线法、涂布法、倾注法、
斜面接种法、液体培养基接种法、螺旋接种法等。 平板划线分离接种环冷却后，用同样方法，通过第二次 划线部分作第三次划线和通过第三次划线部分作第四次划 线；
5. 划线完毕后，盖上皿盖，以封口条将培养皿封好，标注日 期；
6. 灼烧接种环； 7. 培养皿倒置于恒温箱培养。
灼烧接种环 灼烧接种环 灼烧接种环 灼烧接种环 灼烧接种环
五区 四区
冷却
培养基灭菌
五、实验步骤
LB液体培养基、LB固体培养基、培养皿高压灭 菌。
制作平板 扩大培养 划线分离
菌种保存
超净工作台中，将灭菌后冷却到60℃左右的LB 固体培养基倒入灭菌培养皿中，敞盖冷却，备 用。
将大肠杆菌接种到LB液体培养基中，于37℃摇 床中震荡培养12h。
以接种环取震荡培养后的菌液，在固体培养基 上划线，封口。培养皿倒置与37℃的恒温培养 箱中培养12~24h，观察划线末端的菌落生长情 况；用接种环挑取单菌落，用划线法接种于斜 面上，在37℃的恒温培养箱中培养24h。
细菌培养基的制备、灭菌及接种、培养技术ppt课件
目的要求
掌握从环境中分离培养细菌的方法，从 而获得若干种细菌纯培养技能。 掌握几种接种技术。
21
实验材料
无菌培养皿(直径90mm)10套、无菌移液管1mL2
支、10mL1支。
营养琼脂培养基1瓶，活性污泥或土壤或湖水1瓶， 无菌稀释水90mL1瓶、9mL5管。 其它：接种环、酒精灯、恒温箱。
22
c. 第三次蒸煮之后基本无菌，但为了确保无菌仍要放 在37℃恒温条件下培养24h，确定无菌才能使用。
18
实验程序4
（培养基和玻璃器材的灭菌方法）
过滤除菌法： 不能用加热灭菌的 液体物质（如维生 素、血清），一般 可用细菌过滤器进 行除菌。
19
第二部分 细菌纯种分离、培养和接
种技术
目的要求 实验材料 实验程序
9
实 验 程 序2
（培养基的配制方法和步骤） 3. 调pH值：用10％ NaOH调pH至7.6，用精 密pH试纸对照。 4. 分装：将培养基分装于5支试管，其余全部 倒入250mL锥形瓶中，分别塞上棉塞。注意 不要污染棉塞和瓶口。 5. 包扎成捆，挂上标签，注明何种培养基。 6. 灭菌备用：培养基灭菌后必须在37℃下恒 温培养24h，确定无菌生长，方可使用。
实验二
细菌培养基的配制、灭 菌及接种、培养技术
1
第一部分 细菌培养基的制备、灭菌
目的要求 实验材料 实验程序
2
目的要求
熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制备方法。 掌握高压蒸气灭菌技术。
3
实验材料
药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水等。
高压蒸气灭菌锅、烘箱、细菌过滤器、酒精灯。 其它：培养皿、试管、移液管、锥形瓶、烧杯、玻 璃珠等。
培养基配制
茎尖培养可看作是这方面较为特殊的一种方式。它采用极其幼嫩的顶芽的茎 尖分生组织作为外植体进行接种。在实际操作中，采用包括茎尖分生组织在内 的一些组织来培养，这样便保证了操作方便以及容易成活。 用靠培养定芽得到的培养物一般是茎节较长，有直立向上的茎梢，扩繁时主要 用切割茎段法，如香石竹、矮牵牛、菊花等。但特殊情况下也会生出不定芽，形 成芽丛。 2）不定芽的发育 在培养中由外植体产生不定芽，通常首先要经脱分化过程，形成愈伤组织的细 胞。然后，经再分化，即由这些分生组织形成器官原基，它在构成器官的纵轴 上表现出单向的极性（这与胚状体不同）。多数情况下它形成芽，后形成根。 另一种方式是从器官中直接产生不定芽，有些植物具有从各个器官上长出不 定芽的能力如矮牵牛、福禄考、悬钩子等。当在试管培养的条件下，培养基中 提供了营养，特别是提供了连续不断植物激素的供应，使植物形成不定芽的能 力被大大地激发起来。许多种类的外植体表面几乎全部为不定芽所覆盖。在许 多常规方法中不能无性繁殖的种类，在试管条件下却能较容易地产生不定芽 而再生，如柏科，松科，银杏等一些植物。许多单子叶植物储藏器官能强烈地 发生不定芽，用百合鳞片的切块就可大量形成不定鳞茎。 在不定芽培养时，也常用诱导或分化培养基。用靠培养不定芽得到的培养物， 一般采用芽丛进行繁殖，如非洲菊、草莓等。
配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。
（4）配制MS铁盐母液
一般配制成100倍MS铁盐母液。 依次称取 EDTA二钠 3.73g FeSO4·7H2O 2.78g
配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 所以MS母液有5种大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有机母液和MS铁盐 母液，共8种母液。 激素母液的配制 各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用
(完整版)大肠杆菌培养基配制及培养方法
大肠杆菌培养一、菌种冻存液的制备含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80o C冻存。
二、培养基制备LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）：10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH 7.4）液体培养基胰化蛋白胨 10.0g酵母粉 5.0g氯化钠 10.0g水 1000mlpH 7.4固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂三、平板的制备1）称取胰化蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7.4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）。
2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。
如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入2.5g琼脂）。
3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。
所有锥形瓶如上述操作。
用记号笔注明培养基名称、配制日期。
4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。
5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥后取出。
液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固，可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10-15mL（直径90mm），在培养皿中厚度大约4mm左右。
将平皿叠放在无菌操作台上，放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。
6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。
四、接种大肠杆菌1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。
2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈，最后中间划之字；接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上，用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字，涂布平板。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Company Logo
Company Logo
Company Logo
LOGO
Company Logo
5、微生物的恒温培养
Company Logo
5、微生物的恒温培养
Company Logo
Company Logo
Company Logo
WARNING警告: 警告: 警告
二．含有盐分的液体漏出或溢出时，一定要及时 擦干净，沿着盖子的密封圈要彻底擦干，否则会 腐蚀容器和管道。 三．在打开盖子前，确认压力已归于“0/npa”以 下。 四．绝对不许擅自改造这个产品。 五．不要在爆炸性气体附近使用该仪器。
Company Logo
Company Logo
无菌技术操作原则 （一）操作前准备
无菌操作前30分钟通风，停止清扫地面， 30分钟通风 1：无菌操作前30分钟通风，停止清扫地面，减少走 以降低室内空气中的尘埃，操作区要清洁、 动，以降低室内空气中的尘埃，操作区要清洁、 宽敞。 宽敞。 操作者应修剪指甲，洗手，必要时穿无菌衣、 2：操作者应修剪指甲，洗手，必要时穿无菌衣、戴 无菌手套。 无菌手套。 操作者进行无菌操作时须取下戒指、手表、 3：操作者进行无菌操作时须取下戒指、手表、手链 等手上的饰品
培养基的配制与纯种分离
09工业环保与安全技术 工业环保与安全技术
LOGO
原理:
1.单个微生物过小,一般采取菌落培养 法进行培养观察. 2.由于不同的微生物生长环境不同,种 群间有明显界限.一个菌落可认为是同 一菌种的集合.
Company Logo
选择培养基
Company Logo
Company Logo
Company Logo
2.灭菌与消毒
灭菌与消毒： 实验中所用于培养的培养基和接种等 用到的器具都需要进行灭菌，灭菌的方法 常用的有高压蒸汽灭菌和干热灭菌。 接种时，手需要用70%酒精消毒，接种 环或接种针需要灼烧灭菌。接种时，保持 在火焰周围（火焰周围5cm处）。 用于微生物培养与接种的区域需要用 紫外灯进行杀菌。
Company Logo
Company Logo
Company Logo
Company Logo
烘干锅内物）
10.取物（若发现包装被破坏，则需重新灭菌） 11.放水
Company Logo
WARNING警告: 警告: 警告
一．不能使用此高压蒸汽灭菌器消毒任何有破坏性 材料和含碱金属成份的物质。消毒这些物品将会 导致爆炸或腐蚀内胆和内部管道，以及破坏垫圈。 危险物品清单： 1.爆炸物质 2.可燃性物质 3.氧化剂 4.易燃物质
最常见的就是用培养皿，培养基中加 入琼脂，倒成平板，可用来筛选、计 数、鉴别、菌种复壮等。 还有液体摇瓶培养，这个一般用于扩 大培养、发酵、产物提取等。 试管斜面，可用于菌种短期保存。
Company Logo
培养条件
恒温生化培养箱 培养时间从几个小时到几天 特殊培养条件，如厌氧
Company Logo
原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因蛋白 质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的蒸气有潜 热存在。所以效果比同温度下干热好。 高压蒸汽灭菌法： 1、设备：高压灭菌锅 2、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。 3、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，也可用 于玻璃器皿的灭菌。 4、注意事项： 1）冷空气彻底go
Company Logo
Company Logo
操作流程
1.检查灭菌锅（清除锅内杂物） 2.加水（加之刻度处，不能少也不需多） 3.放入待灭菌物（不能太拥挤，盖上锅盖是，对角线旋紧螺丝） 4.接通电源（插座电源和灭菌锅电源同时打开） 5.放气（排除空气，知道有持续蒸汽排出为止） 6.升压（关掉排气阀门，使压力指针升至1.05kg/cm2 ，121℃） 7.保持（控制电源开关或者设定程序保持在121℃，30min） 8.降压（关电源） 9.烘干（等压力降至0后，打开螺丝，让锅盖移出部分空隙，让蒸汽
Company Logo
干热灭菌
干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌。 1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等， 试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。 2、热空气灭菌利用高温干燥空气（160－170 ℃ ）加热灭 菌1－2h，适用于玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白 质变性，与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝 固越快。 3、注意事项： 1）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法； 2）温度控制在<180 ℃ ； 3）物品不能太挤； 4）温度降至70℃时才开箱门。
常见的，培养细菌用肉汤培养基，培 养放线菌用高氏一号培养基，培养真 菌用马丁氏培养基。
具体看培养的菌种和用途，去查阅相关资 料，比如一些实验指导教材、专门的著作 或手册等。各种培养基的配方、用量、适 合培养什么菌，都可以查得到的。
Company Logo
培养 方法
Company Logo
基本操作程序
培养基的配制 灭菌 倒平板
微生物接种 恒温箱中培养
培养基的配制 菌种保存
Company Logo
操作内容
1.根据配方配制100ml牛肉膏蛋白胨培养基，溶解，调pH 值后，分装在三角瓶中，加塞包扎。 2.分装约50ml蒸馏水在三角瓶中，加塞包扎。 3.包装5个培养皿，待用。 4.将以上物品置于高压蒸汽灭菌锅内灭菌。121℃，20min。 5.检查桌面用品是否齐全。 6.等灭菌锅压力将为0后，打开灭菌锅。烘干培养皿，适当 6. 0 冷却培养基与无菌水。 7.在酒精灯火焰5cm内倒平板，待冷却后，倒置。 8.将土壤样品置于冷却后的无菌水中，摇匀。 9.在酒精灯火焰5cm内，用接种环划线分离菌株。 10.倒置培养于培养箱内。
Company Logo
无菌技术操作原则
（三）无菌物品保管 三
1：无菌物品和非无菌物品应分别放置。 无菌物品和非无菌物品应分别放置。 无菌物品必须存放在无菌容器或无菌包内， 2：无菌物品必须存放在无菌容器或无菌包内，无菌包外要注 明物品的名称、灭菌日期，物品按先后顺序放置。 明物品的名称、灭菌日期，物品按先后顺序放置。 定期检查无菌物品保存情况，无菌包在未被污染的情况下， 3：定期检查无菌物品保存情况，无菌包在未被污染的情况下， 保存期一般以7天为宜，过期或包布受潮应重新灭菌。 保存期一般以7天为宜，过期或包布受潮应重新灭菌。
Company Logo
无菌技术操作原则
（二）操作中保持无菌
1：工作人员应面向无菌区域，手臂保持在腰部水平以上，不 工作人员应面向无菌区域，手臂保持在腰部水平以上， 可跨越无菌区。操作时，不可面对无菌区讲话、咳嗽、 可跨越无菌区。操作时，不可面对无菌区讲话、咳嗽、打喷 嚏。 用无菌钳取无菌物品；无菌物品一经取出，即使未使用， 2：用无菌钳取无菌物品；无菌物品一经取出，即使未使用， 也不可放回无菌容器内；一套无菌物品，仅供一次使用， 也不可放回无菌容器内；一套无菌物品，仅供一次使用，防 止交叉感染。 止交叉感染。 无菌操作中，无菌物品疑有污染或已被污染，不可使用， 3：无菌操作中，无菌物品疑有污染或已被污染，不可使用， 应予更换或重新灭菌
Company Logo
高压蒸汽灭菌
高压蒸汽灭菌法 可杀灭包括芽胞在内的所有微生物，是灭菌 效果最好、应用最广的灭菌方法。方法是将需灭 菌的物品放在高压锅内，加热时蒸汽不外溢，高 压锅内温度随着蒸汽压的增加而升高。在 103.4kPa（1.05kg/cm2）蒸汽压下，温度达到 121.3℃，维持15～20分钟。适用于普通培养基、 生理盐水、手术器械、玻璃容器及注射器等物品 的灭菌。