19脑脊液标本细菌学检验标准操作规程
脑脊液标本细菌学检验标准操作规程
脑脊液标本细菌学检验标准操作规程1.目的规范脑脊液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2.适用范围脑脊液培养。
3.标本3.1标本类型脑脊液。
3.2 标本采集由临床医师以无菌要求做腰椎穿刺，抽取脑脊液2-3ml，盛于无菌容器中送检。
脑膜炎奈瑟菌离体后能产生自溶酶，迅速自溶，肺炎链球菌及流感嗜血杆菌离体后也易于死亡。
因此，脑脊液无论涂片或培养，必须于采集后立即送检。
3.3 标本拒收标准3.3.1 标本标识与化验申请单不符。
3.3.2 标本未用无菌试管留取。
3.4 标本保存采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置于室温，放置时间不应超过2小时，切勿放冰箱，否则影响检出率。
4. 试剂、仪器4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、麦克凯平板、相关生化试剂等。
．4.2 VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（GNI+）、革兰阴性菌药敏卡（GNS）、革兰阳性菌鉴定卡（GPI）、革兰阳性菌药敏卡（GPS）、药敏纸片、TBA板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。
4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO2培养箱等。
5. 细菌鉴定和药敏质控参见《质量管理程序》6. 检验步骤接收标本后，立即对标本进行编号、登记。
6.1 涂片检查6.1.1 一般细菌涂片检查外观浑浊或脓性脑脊液可直接涂片，无色、透明的脑脊液，应3000r/min离心10-15分钟后取沉淀物涂片、革兰染色、就、镜检。
根据染色及形态特征，常可初步提示细菌的种类。
6.1.2 结核分枝杆菌涂片检查参见《分支杆菌属检验标准操作规程》6.1.3 新生隐球菌涂片检查取脑脊液的沉淀物作墨汁负染色，或取脑脊液的离心沉淀物接种于沙氏培养基，置于35摄氏度培养2~5日，根据菌落特性，涂片染色镜检作出报告。
必要时可作生化反应进一步鉴定。
分离培养6.2．6.2.1用接种环挑取混浊脑脊液或经离心沉淀的沉淀物，分别接种于血琼脂平板、巧克力琼脂平板和麦康凯平板，置于5%~10%CO2环境中35摄氏度培养18~24小时，观察细菌生长情况，根据菌落特点、形态与染色及生化反应鉴定细菌，并作药敏试验。
脑脊液检验标准操作程序SOP文件
文件编号：ABCD-SOP-07-25版序：2005-01页码：第1 页，共7 页[标本采集]1．标本送检必须及时，收到标本后应即将检验。
久置可致细胞破坏，影响细胞计数及分类检查；葡萄糖分解使含量降低；病原菌破坏或者溶解。
2．细胞计数管应避免标本凝固，遇高蛋白标本时，可用 EDTA 盐抗凝。
[操作步骤]一、常规检验：1、 (CSF)颜色检查[正常参考值] 无色水样液体。
[临床意义](1)红色：常见于蛛网膜下腔出血、脑出血、硬膜下血肿等。
如腰椎穿刺时观察到流出的脑脊液先红后转无色，为穿刺损伤性出血。
(2)黄色：见于陈旧性蛛网膜下腔出血及脑出血、包囊性硬膜下血肿、化脓性脑膜炎、脑膜粘连、脑栓塞；椎管梗阻；脑、脊髓肿瘤及严重的结核性脑膜炎；各种原因引起的重症黄疽；心功能不全、含铁血黄素沉着症、胡萝卜素血症、早产儿等。
(3)乳白色：见于化脓性脑膜炎。
(4)微绿色：见于绿脓假单胞菌性脑膜炎、甲型链球菌性脑膜炎。
(5)褐色或者黑色：见于中枢神经系统的黑色素瘤、黑色素肉瘤等。
2、透明度检查[正常参考值] 清晰透明。
[临床意义](1)微混：常见于乙型脑炎、脊髓灰质炎、脑脓肿(未破裂者)。
(2)混浊：常见于化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎等。
(3)毛玻璃状：常见于结核性脑膜炎、病毒性脑膜炎等。
(4)凝块：见于化脓性脑膜炎、脑梅毒、脊髓灰质炎等。
(5)薄膜：常见于结核性脑膜炎等。
3、细胞计数[正常参考值]成人： (0-8) × 106/L；儿童：(0-15)×106/L；新生儿：(0-30)×106/L。
文件编号：ABCD-SOP-07-25版序：2005-01页码：第2 页，共7 页[临床意义](1) 细胞数明显增高(＞200×106/L)：常见于化脓性脑膜炎、流行性脑脊髓膜炎。
(2)中度增高(＜200×106/L＝：常见于结核性脑膜炎。
(3)正常或者轻度增高：常见于浆液性脑膜炎、流行性脑炎(病毒性脑炎)、脑水肿等。
脑脊液检测流程
脑脊液检测流程脑脊液检测流程标本采集：脑脊液标本主要由临床医师采集，一般行腰椎穿刺，必要时丛小脑延髓池或侧脑室穿刺采集。
采集后无特殊处理要求，应立即送检，不超过1小时。
操作步骤：1）认真观察并记录脑脊液颜色、透明度及是否有凝块。
颜色：正常为无色，病理情况下可有红色、黄色、米汤样、棕色、绿色、褐色或黑色透明度：正常为清澈透明；病理情况下可有不同程度的浑浊，脑脊液中细胞数大于300X106/L或含大量细菌、真菌时呈不同程度浑浊。
结核性脑膜炎时呈毛玻璃样浑浊；化脓性脑膜炎时呈脓性浑浊；正常脑脊液可因穿刺过程中带入红细胞而成轻度浑浊。
2）潘式试验：取潘氏试剂2-3ml。
置于小试管内，用毛细滴管滴入经5分钟2000转离心的脑脊液上清液1-2滴，衬以黑背景，立即观察结果。
阴性：清晰透明，不显雾状极弱阳性（±）：微呈白雾状，在黑色背景下才能看到。
阳性：（+）为白色云雾状；（2+）为白色浑浊；（3+）为白色浓絮状沉淀；（4+）为白色凝块。
3）细胞计数非血性标本：小试管内加入冰醋酸1-2滴，转动试管，使内壁沾有冰醋酸后倾去，然后滴加混匀脑脊液3-4滴，数分钟后，混匀充入计数池，按血液白细胞计数法计数。
血性标本：将混匀脑脊液用1%冰醋酸溶液按血液白细胞计数法稀释后进行计数。
4）细胞分类直接分类法：白细胞计数后，将低倍镜换为高倍镜，直接在高倍镜下根据细胞核形态分别计数单个核细胞（包括淋巴细胞、单核细胞）和多个核细胞，应数100个白细胞，并以百分率表示。
若白细胞少于100个，应直接写出单个核、多个核细胞的具体数字。
染色分类法：将脑脊液离心沉淀，取沉淀物2滴，加正常上清1滴，推片制成均匀薄膜，置室温或37℃温箱内待干，行瑞士染色后用高倍镜或油镜分类。
脑脊液常规检查标准操作程序
脑脊液常规检查标准操作程序1 检验目的鉴别诊断及预后观察神经系统疾病及其并发症。
2 检测原理一般性状检查采用目测法；细胞学检查采用显微镜手工检查法。
3 性能参数脑脊液常规检查是手工试验，目前还没有试验性能指标。
4 标本采集与接收4.1 脑脊液标本由临床医生进行腰椎穿刺采集，必要时可从小脑延脑池或侧脑室穿刺获得。
第一管作细菌学检查，第二管作化学或免疫学检查，第三管作常规检查。
4.2 标本采集后要立即送检，因为放置时间过久，其性质可能发生改变，可能影响检验结果。
采集的脑脊液标本应尽量避免混入血液。
5 设备和试剂5.1 仪器：复星公司 ACT-2000 超高倍显微镜系统，Sysmex XT-4000i 分析仪。
5.2 试剂：冰醋酸。
5.3 设备：血细胞计数池。
6 容器和添加剂脑脊液常规检查试验的容器为消毒的玻璃试管，一般情况下无任何添加剂(如遇高蛋白标本时，可用 EDTA 盐抗凝)。
7 操作步骤7.1 检验申请单及标本的审核整理脑脊液常规检验申请条码及标本，审核合格后，对脑脊液检验申请单姓名和标本标识进行复查，确认一致后进行检测。
7.2 一般性状检查：脑脊液的颜色和透明度测量采用目测法。
7.3 细胞计数7.3. 1 手工法：对澄清的脑脊液混匀后用滴管直接滴入一次性计数板，用低倍镜计数全部方格内细胞数；混浊或带血的脑脊液可用细胞稀释液或者生理盐水稀释后加入事先准备好的管壁带有冰乙酸的小试管中，混匀后滴入一次性计数板内，用低倍镜计数全部方格内细胞数。
7.3.2 仪器法：取混匀好的标本直接在 XT-4000i 上用体液模式进行检测，并记录结果。
7.3.3 有核细胞分类计数7.3.3.1 直接分类法：如果白细胞数不超过 0.015×109/L，可不分类计数；如超过 0.015×109 /L 应分类计数。
在高倍镜下根据细胞核的形态分别计数单核细胞(包括淋巴细胞和单核细胞)与多核细胞，计数100 个白细胞，以百分比表示。
脑脊液检验操作规程
脑脊液检验操作规程湖南省肿瘤医院检验科作业指导书文件编号:HNZLYY-JYK-ZY-LJ -001 脑脊液常规检验标准操作程序第1页共5页脑脊液常规检验操作程序1．目的保证脑脊液常规检测结果准确、可靠、及时。
2．适用范围脑脊液常规检测，标本类型为脑脊液。
3．职责3..1脑脊液标本由临床医护人员采集检验人员向临床提供脑脊液标本量、保存条件、注意事项、生物参考范围及临床意义等。
3.2脑脊液标本的运送由临床卫生员运送。
3.3收集与处理检验后脑脊液标本由检验卫生员统一送到医院垃圾处理站按相关程序进行处理。
4. 检验程序4.1脑脊液理学检验:4.1.1颜色正常脑脊液为无色液体。
当有病变时可出现红色、黄色、绿色、乳白色、黑色等颜色。
4.1.2透明度正常脑脊液清晰透明,当脑脊液中有形物增加时,透明度降低,透明度可按清晰透明,微浑、浑浊三级报告。
4.1.3凝固或薄膜正常脑脊液没有凝块,化脓性脑膜炎时可出湖南省肿瘤医院检验科作业指导书文件编号:HNZLYY-JYK-ZY-LJ -001 脑脊液常规检验标准操作程序第2页共5页现，脑膜炎时可出现薄膜,可用无凝块、胶冻样、有薄膜形成、有凝块等方式报告。
4.2脑脊液化学检验:(一)潘氏(pandy)定性试验4.2.1【原理】蛋白质与石碳酸结合成不溶性蛋白盐而下沉,产生白色浑浊或沉淀。
4.2.2【试剂】5-7%石碳酸溶液。
4.2.3【方法】取试剂2－3毫升置于小试管内,用毛细滴管滴入脑脊液1－2滴,衬以黑色背景下观察结果,出现白色浑浊为阳性。
4.2.4【结果判断】透明无变化(一)阴性微呈白雾状(〒)极弱阳性灰白色云雾状(+)弱阳性白色浑浊(++)阳性白色浓絮状沉淀(+++)强阳性湖南省肿瘤医院检验科作业指导书文件编号:HNZLYY-JYK-ZY-LJ -001 脑脊液常规检验标准操作程序第3页共5页白色凝块(++++)最强阳性4.3【注意事项】试剂和脑脊液应按一定比例进行试验,若脑脊液浑浊,应离心沉淀后取上清液试验。
脑脊液送检规范标准最新
脑脊液送检规范标准最新脑脊液（Cerebrospinal Fluid, CSF）是存在于脑室和蛛网膜下腔的无色透明液体，其送检对于诊断多种神经系统疾病具有重要意义。
以下是脑脊液送检的最新规范标准：一、样本采集1. 采集前应确保患者处于平静状态，避免情绪波动或身体活动影响样本质量。
2. 采集应在无菌条件下进行，使用一次性无菌腰椎穿刺针。
3. 采集量一般为10-20毫升，分装至两个无菌试管，一个用于生化和细胞学检查，另一个用于微生物学检查。
二、样本处理1. 采集后立即送检，避免样本暴露于室温过长时间，以免影响细胞活性和生化成分。
2. 如不能立即送检，应将样本置于2-8°C冷藏，但不宜超过2小时。
3. 避免剧烈摇晃或离心，以免破坏细胞形态。
三、样本检测1. 细胞计数：评估红细胞、白细胞的数量和分类。
2. 生化分析：检测蛋白质、葡萄糖、氯化物等含量。
3. 微生物学检查：包括细菌培养、病毒检测等。
4. 免疫学检测：如有必要，进行脑脊液免疫球蛋白检测。
四、结果解读1. 结果应结合患者的临床表现、病史及其他辅助检查结果综合分析。
2. 注意区分生理性变化和病理性变化，避免误诊。
五、质量控制1. 实验室应建立严格的操作规程和质量控制体系。
2. 定期对设备进行校准和维护，确保检测结果的准确性。
3. 对操作人员进行专业培训，提高检测技能和质量意识。
六、安全措施1. 严格遵守生物安全规范，防止交叉感染。
2. 处理样本时，工作人员应穿戴适当的个人防护装备。
3. 废弃物应按照医疗废物处理规定进行处置。
七、记录和报告1. 详细记录样本信息，包括患者姓名、年龄、性别、采集时间等。
2. 报告应清晰、准确，包含所有检测项目的结果及必要的解释说明。
八、患者指导1. 向患者解释脑脊液检查的目的、过程及可能的风险。
2. 提供术后护理指导，如需要时指导患者如何缓解穿刺部位的不适。
以上规范标准旨在确保脑脊液送检的准确性和安全性，为临床提供可靠的诊断依据。
脑脊液标本细菌学检验
脑脊液标本细菌学检验1. 检验目的规范脑脊液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2. 适用范围脑脊液培养3. 标本采集与运送3.1 标本采集：由临床医师以无菌要求做腰椎穿刺，抽取脑脊液2-3ml,盛于无菌容器中送检。
3.2 标本运送3.2.1 采集标本后立即送到细菌室，不能及时送检可置室温或保温，放置时间不应超过2h。
切勿放冰箱，否则影响检出率。
3.2.2 非细菌室工作时间，标本应送急诊化验室进行标本保温。
4. 检验步骤4.1 涂片检查：外观浑浊或脓样脑脊液直接涂片。
无色、透明的脑脊液，应3000rpm/min离心10-15min后取沉淀物涂片。
涂片后革兰染色、墨汁染色、抗酸染色。
镜检阳性应立即以电话的方式将镜检结果告知临床医生，并登记到危急值登记本。
4.2 接种：在生物安全柜中用一次性无菌接种环挑取浑浊脑脊液或离心沉淀的沉淀物按照分区划线的方法接种血平板和巧克力平板。
血平板和巧克力平板需要预先置于室温平衡30min。
4.3 培养：血平板、巧克力平板置35℃二氧化碳培养箱培养18-48h。
4.4 培养结果观察4.4.1 培养24h无菌生长需继续培养24h,如仍然无菌生长，则报告“无菌生长”。
4.4.2 培养出细菌，挑取单菌落革兰染色镜检，将镜检结果以电话方式告知临床医生，并登记到危急值登记本。
4.4.2.1 血平板上菌落呈浅灰色、不溶血，或者菌落呈粘稠状，菌落附近呈灰绿色。
在巧克力平板上的菌落光滑整齐、圆形凸起、半透明、露滴状菌落。
革兰染色镜检为肾形或咖啡豆装的革兰阴性双球菌，应怀疑为脑膜炎奈瑟菌，常见于脓性脑脊液。
4.4.2.2 血平板上呈现草绿色溶血、灰色、圆形、略扁的菌落，同时革兰染色为革兰阳性链球菌，疑为肺炎链球菌。
4.4.2.3 镜下可见革兰阴性小杆菌，多形性，巧克力平板可见较多的透明、湿润革兰阴性杆菌，做卫星试验。
血平板卫星+，MH卫星-，报告“流感嗜血杆菌”。
4.4.2.4 新生儿脑膜炎多由大肠埃希菌、B群溶血性链球菌和脑膜败血黄杆菌引起的，特别是早产婴儿。
细菌室中枢神经系统感染病原体检验操作规程
细菌室中枢神经系统感染病原体检验操作规程
l、标本采集以无菌方法采集脑脊液2～5ml，盛于无菌瓶中送检。
2、直接检查脑脊液可直接涂片、革兰染色或抗酸染色等，然后镜检。
无色透明的脑脊液，应作离心取沉淀物涂片、染色镜检。
3、检验步骤：
3.1、一般细菌涂片检查除结核性脑膜炎外，由其它细菌引起的化脓性脑膜炎，脑脊液明显混浊，可直接涂片，革兰染色镜检。
无色透明的脑脊液，应离心后涂片、染色、镜检，根据染色及形态特征可初步提示细菌的种类。
结核分枝杆菌涂片检查：取脑脊液的离心沉淀物(3000r／min。
30min)作抗酸染色。
新型隐球菌涂片检查：取脑脊液的离心沉淀物作墨汁负染色。
3.2、分离培养用接种环挑取混浊脑脊液或经离心沉淀的沉淀物，分别接种于血平板、巧克力平板，巧
5、脑脊液培养常见病原菌
革兰阳性菌革兰阴性菌
金黄色葡萄球菌脑膜炎奈瑟菌
A、B群链球菌卡他布兰汉菌
肺炎链球菌流感嗜血杆菌
结核分支杆菌
肠杆菌科菌种
产单核李斯特菌脑膜败血性黄杆菌
新型隐球菌假单胞菌
白色念珠菌
6、报告结果
无论是涂片还是培养，一但见到阳性菌应立即通知临床医师。
培养并经鉴定的结果报告“××菌”，同时报告药敏试验结果。
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直接涂片找到细菌或培养阳性均作危急值报告。若检测出脑膜炎奈瑟菌则应做传染病报告。
编 写： 审 核： 批 准：
日 期： 年 月 日
1
规范脑脊液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。
2
脑脊液培养。
3
3.1
3.2
3.2.1
3.2.2
3.3
4
4.1
4.2
4.3
5
参见《质量管理程序》。
6
接收标本后，立即对标本进行编号、登记。
6ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ1
6.1.1
6.1.2
6.1.3
6.2
6.2.1
6.2.2
7
8
无论是徐片还是培养，一旦检测到阳性细菌应立即电话或书面通知临床医师。查见细菌，报告菌名和药敏结果。经培养48小时，仍无细菌生长者，报告“培养2日无细菌生长”。
9
9.1
9.2
10
正常人的脑脊液是无菌的，检出细菌提示细菌性（急性化脓性或结核性等）脑膜炎。化脓性脑膜炎最多见脑膜炎奈瑟菌，肺炎链球菌居第二位。3个月至5岁儿童细菌性脑膜炎的主要致病菌是流感嗜血杆菌，新生儿脑膜炎多由大肠埃希菌,B群溶血性链球菌和脑膜败血黄杆菌引起的，特别是早产婴儿。.结核分枝杆菌引起结核性脑膜炎。85脑脓肿病人脑脊液培养可检出厌氧菌，有时可为厌氧菌和需氧菌混合感染。