中药制剂的含量测定

第四章 中药制剂的含量测定
药物分析教研室
第一节 含量测定的目的与意义
▪ 在我国药品质量标准中，[鉴别]、 [检查] 和[含量测定]项目是判定中药制剂质量优劣的 标准。
▪ 中药制剂的鉴别是研究某种原料药或成分 的存在与否，从而判定药物的真伪，而含量 测定项目是研究某种成分的含量高低是否符 合规定来判定药物的优劣。中药制剂的含量 测定是质量控制中的一项重要指标。
▪ 通过测定制剂中有效成分、毒性成分或某 些指标性成分的含量来衡量其制剂工艺的稳 定性和中药材的质量优劣，以保证中药制剂
第二节 含量测定样品的处理
中药制剂样品的基质和成分组成十分复杂，而且样品 中被测成分往往含量较低，因此需要对样品进行各种处理， 使其符合所选定分析方法的要求。 样品处理的主要作用有： 将被测成分有效地从样品中释放出来，并制成便于分析测 定的稳定试样。 除去杂质、纯化样品，以提高分析方法的重现性和准确度。 富集浓缩或进行衍生化，以测定低含量被测成分。衍生化 不仅可提高检测器的灵敏度，还可以提高方法的选择性。 使试样的形式及所用溶剂符合分析测定的要求。
1）它可分为共水蒸馏法（即直接加热法）、通水蒸汽蒸馏 法和水上蒸馏法。如中药制剂中的挥发油，某些小分子生物碱 （麻黄碱、於碱、槟榔碱）及丹皮酚等，都可用蒸馏法提取和 分离净化。
2）为了使挥发性成分更完全地蒸馏出来，有时也可用盐析 作 用 ， 即 在 蒸 馏 液 中 加 入 一 定 量 的 无 机 盐 ， 常 用 NaCl 、 NaSO4、MgSO4等。
4) 同一种SF在不同温度和压力下可以提取极性或分子 大小都不相同的化学成分。SF的密度、粘度和扩散系 数等都与温度、压力和流体组成有关。温度和压力稍 高于临界点时，SF的压缩系数最大，压力的微小变化 将导致较大的密度变化，而控制密度就可控制SF对溶 质的溶解能力，目前也常用升压力（即升密度）提取 法进行分步提取。
第二节 含量测定样品的处理
（二）回流提取法 它是将冷浸法中的带塞容器换成回流装置，
用单一溶剂或混合溶剂于水浴上加热回流提取， 其余操作方法同冷浸法。 优点： 1、提取效率高于冷浸法；
2、且可缩短提取时间，每次提取时间为 0.5～2小时，直至提取完全为止。 缺点：1、提取杂质较多； 2、该法对热不稳定或具有挥发性的成分 不宜使用。
其中经典微柱色谱，也称固相萃取或液—固萃取（LSE）具有 设备简单，使用方便，快速，净化效率较高而最常用，将在此做 一简介。
LSE通常是指样品溶液加到装有合适固定相（净化剂）的长 5`～15cm，内径0.5～1cm的色谱柱中，将被测成分保留于柱上， 洗去杂质后，再洗脱被测成分进行测定，或者是使杂质强烈保留 于柱上，直接洗脱被测成分进行测定。用这种选择性好而柱效较 低的方法进行样品的净化分离，尤其适用于一类总成分的含量测 定，也可将色谱柱流出的样品进一步用GC、HPLC、TCL分离后 测定。
SFE不仅常用于热不稳定成分或挥发性成分的萃 取，而且也越来越多地用于热稳定性成分的萃取。 缺点：对设备要求高。
第二节 含量测定样品的处理
三、样品的分离净化
（一）沉淀法
原理பைடு நூலகம்它是基于某些试剂与被测成分或杂质生 成沉淀，分离沉淀或保留溶液以得到精制的方法。
这种方法须注意：
1）过量的试剂若干扰被测组分的测定，则应设 法除去；
冷浸法 回流提取法 连续回流提取法 超声提取法 超临界流体提取法
第二节 含量测定样品的处理
（一）冷浸法
按所需准确度要求称取一定量样品置于带塞容器内，摇匀 后放置，浸泡提取，溶剂用量为样品重量的10～50倍，并 称重。浸泡时间12～24小时，浸泡期间应注意经常振摇， 浸泡后再称重，补足溶剂充分摇匀，浸泡后的溶液，可取 部分测定，也可全部测定。
2）大量杂质以沉淀形式除去时，被测成分应不 因产生共沉淀而损失；
3）被测组分生成沉淀时，其沉淀经分离后可重 新溶解或直接用重量法测定。
第二节 含量测定样品的处理
（二）蒸馏法
原理：利用某些被测成分具有挥发性，可采用蒸 馏法，收集馏出液进行含量测定，或某些成分经蒸馏 分解生成挥发性成分，利用分解产物（要求结构明确） 进行测定。目前以水蒸气蒸馏法应用较多。
第二节 含量测定样品的处理
一、样品的粉碎
样品的粉碎有两个目的：
是保证含量测定所取样品均匀而有代表性，提高测定结果的精 密度和准确度；
是使样品中的被测组分能更快地完全提取出来。
粉碎时注意事项：
不要粉碎得过细。样品粉碎得过细，在样品提取时，会造成过 滤困难，因此可视实际情况进行粉碎过筛。
避免污染样品。在粉碎样品时，要尽量避免由于设备的磨损或 不干净等原因而玷污样品，
第二节 含量测定样品的处理
⒉键合相硅胶：
十八烷基键合相硅胶（简称C18或ODS）是常用的固体萃取剂， 其次有烷基、苯基、氰基键合相硅胶，可用来分开脂溶性和水 溶性杂质或成分。也常用于萃取，纯化水基质体液中憎水性药 物。该类LSE的一般操作程序为：
2) 有利于样品中的被测成分扩散进入SF中。SF的粘度与气体相 近，比液体的略低2个数量级，扩散系数却比液体的高1个数量 级以上，使其具有良好的传质性能；
第二节 含量测定样品的处理
3) SF能使提取效率和提取速度大大提高。SF的表面张 力几乎为零，而较容易渗透进样品基质空隙中，有利 于SF与样品的充分接触；
部分测定法（即等量法）是将浸泡后的溶液，用适宜滤器 过滤，精密量取一定量体积的滤液，与一定重量的样品相 当，进行测定。此法不适宜挥发性较大的提取溶剂。
全部测定法（即总量测定法）是将浸泡后的溶液滤过，滤 渣充分用溶剂洗涤至提取完全，合并滤液及洗液，浓缩或 蒸干得残留物用另一溶剂溶解，定量转入容量瓶，稀释至 刻度，摇匀，进行测定。此法可克服部分测定法的缺陷， 且提取时溶剂用量不必精密加入。
第二节 含量测定样品的处理
⒉ 离子对萃取法：其原理是在适当的pH介质中，某些有机酸（碱）性 物质形成的离子与带相反电荷的离子（也称离子对试剂）定量地结合成为 弱极性的离子对，而易溶于有机溶剂，使之萃取分离。
它最适合于高度电离的有机酸、碱化合物的萃取（不能用直接法萃取）， 在中药制剂分析中主要用于生物碱（B）的分析，其离子对试剂常为酸性染 料（In-）如溴麝香草酚蓝（BTB）和溴甲酚绿（BCG）等，在水相中的定 量反应为
第二节 含量测定样品的处理
（三）连续回流提取法
样品置索氏提取器中，利用遇热可以挥发的溶剂进 行反复提取（相当于总是在使用新鲜溶剂提取），一 般提取数小时方可完全。
优点：1）无需过滤，提取完全后取下虹吸回流管， 就可回收溶剂，再 用适宜溶剂溶解，定容， 进行测 定。
2）提取效率高，所需溶剂少，提取杂质少，操作 简便。
LSE的常用净化剂（填料）有氧化铝、氧化镁、硅藻土、硅胶、 活性炭、大孔树脂离子交换树脂、键合相硅胶C8、C18、聚酰胺 等。视其性质可分为亲脂型、亲水型和离子交换型填料。
第二节 含量测定样品的处理
⒈硅胶、氧化铝等：
它们是传统的吸附剂，多以0.07～0.15mm(200～100 目)的颗粒1～5g用于样品的净化处理，其作用机制为溶质在 吸附剂表面的极性吸附作用。通常是当溶于有机溶剂的样品加 到柱上时非极性或低极性的杂质先被洗出色谱柱，再用适当极 性的溶剂洗脱被测成分，而强极性的杂质仍保留在柱上。
BH+（水相）+In_(水相) BH+·In-（水相） BH+·In-（有机相）
形成的离子对BH+·In-常用成氢键能力强的氯仿或二氯甲烷提取。
由上反应可知要求水相中生物碱和酸性染料均有较高的离子化程度，因 此必须注意水相的pH和离子对试剂的选择。通常生物碱与BTB形成1∶1的 离子对，最好在pH5.2～6.4提取，而二元碱形成1∶2离子对，最好在 pH3.0～5.8提取（二元碱的碱性弱，需要在较低的pH下离子化后形成离 子对）。
若氯仿层中的微量水份引起浑浊，可通过加入少许乙醇或久置分层变得 澄清，也可分离有机相后加入脱水剂（常用无水Na2SO4）或经滤纸滤过 除去微量水份，另外液一液萃取时应尽量避免发生乳化现象。
第二节 含量测定样品的处理
（四）色谱法
吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶色谱皆可作为中药 制剂分析中的净化分离方法，其操作方式有柱色谱，薄层色谱和 纸色谱。
缺点：受热易分解的成分不宜使用。
第二节 含量测定样品的处理
（四）超声提取法
样品置适当的容器中，加入提取溶剂，放入超声振 荡器中进行提取。一般样品30分钟内即可完成，最多 不超过1小时。
优点：超声提取能使样品粉末更好地分散于溶剂中 提高提取效率和提取速度。（超声的助溶作用）
缺点：促使化学反应发生（如氧化还原反应、大分 子化合物的降解和解聚合作用等）。
直接萃取法常用的溶剂有氯仿，二氯甲烷，乙酸乙酯和乙醚等。可根据 被测组分疏水性的相对强弱来选择极性适当的溶剂，既保证被测组成的充 分萃取，又有很好的选择性。对于弱酸性成分应调节水相的pH≤Ka-2。 而弱碱性成分应调节水相的pH≥PKa+2（此处为其共轭酸的pKa），以 使弱酸、弱碱性成分主要以非离子化的游离酸、或碱形式存在，而提高萃 取率。在提取过程中也常利用中性盐的盐析作用，如水相用NaCl饱和， 使被测组分进入有机相而提高提取率。
它是以超临界流体（常用CO2）作提取溶剂，有效、快速提取 固体或半固体中的被测成分的样品预处理新技术。
超临界流体（SF）是指高于临界压力（Pc）和临界温度（Tc） 时所形成的单一相态，它既不是液体，又不是气体，而具如下 特性：
1) 对样品组分溶解能力强。超临界流体（SF）的密度与液体的 相近（如CO2超临界流体的密度为0.3～0.9g/cm3），而其具 有与液体相似的溶剂作用；
对于由浸膏制成的固体制剂，用上述方法提取时，通常是精 密称取适量药粉于量瓶中，定量加适当溶剂提取后，以干燥滤纸 过滤，弃去滤液，取续滤液（防止滤纸吸附或污染被测组分）， 按部分测定法测定。