母种分离常用培养基
食用菌实验1
5、质量检验
对分离、引进或转管扩大的菌种，应经过质量 鉴定，选优去劣，方可使用。 检验方法： ①外观鉴定
优良菌种：菌丝浓白、粗壮、富有弹性，则生命 力强。
老化菌种：菌种已收缩、干燥或菌丝体自溶产生 了大量红褐色液体，说明生活力弱，不可使用。
②显微镜检验 挑取少许菌丝于载玻片上，加蒸馏水1滴，盖 上盖玻片，观察菌丝形态是否为培育的菌种。 ③菌丝生长速度 将其接种到适宜斜面培养基上，在适温下培 养。凡菌丝生长较快、整齐、浓密而健壮的就 是优良母种。 ④出菇试验 进行子实体产量和品质评比。 经以上检验，通过综合评比，选出菌丝生长速 度较快，子实体生长健壮、品质好、产量高的 母种，即可供生产上使用。
营养物质→调节pH（用HCl或NaOH）→分装试管→
塞上棉塞→捆扎→灭菌（高压蒸气灭菌15-30min）→ 制成斜面→检查灭菌效果（即28~30℃培养2~3d）
（3） 作业
（1）每人制5支试管斜面。
（2）什么叫食用菌菌种？它又有哪些类型？ （3）食用菌菌种生产常用的设备和用具有哪些？ （4）写出食用菌的制种程序。 （5）常用的消毒药品有哪些？
茶树菇 Agrocybe aegerita
鸡腿菇
鸡腿菇
Coprinus comatus
担子菌纲食用菌
真姬菇
担子菌纲食用菌
虎掌菌：Sarcodon imbricatus
猪苓菌：Grifola umbellata
别名：猪苓花、猪灵芝。 特征：子实体丛生，肉质，味道鲜美，地下部分的菌核即是中药材的 猪苓，菌核不规则、块状，棕黑色至黑色。 药用功效：猪苓及猪苓多糖对肝炎、肺癌、食管癌、白血病、乳腺癌 及淋巴肉瘤有显著的治疗效果。
杏鲍菇：Pleurotu seryngii
怎样制备黑木耳菌种
怎样制备黑木耳菌种
黑木耳菌种制作包括母种、原种、栽培种的制作三个程序。
一、母种的分离和培养
1.母种培养基。
配方为马铃薯葡萄糖琼脂。
配制成试管斜面，经常规灭菌，即可使用。
2.母种分离和培养。
分离方法有孢子分离法、耳木分离法和组织分离法，无论哪种方法，都可获得菌种。
①孢子分离法：这种方法获
得的菌种变异较大，适合于育种采用。
②耳木分离法：成功率高，种性较稳定，生产中多用此法。
③组织分离法：选片大、肉厚、成
丛生长的鲜耳或当年生长经晒干的干耳再经清水泡胀，洗净，进行无菌操作分离。
以上方法均在28℃下培养。
分离得到的母种必须经过转管纯化，质量评定，出耳试验，才能作进一步扩大生产。
二、原种制作
培养基配方：木屑78%，米糠20%，蔗糖1%，石膏粉1%，水65%，pH为6。
把各种培养料拌匀，调至适当水分，装瓶，灭菌。
灭菌后
待瓶温降至30℃送入接种室，无菌操作，接入母种块。
在28℃下培养。
三、栽培种制备
栽培种是直接在生产中使用的菌种，由原种进一步扩大生产而得到。
黑木耳的栽培种有几种类型。
常用培养基配方汇总
常用培养基配方汇总1. 营养琼脂培养基 (Nutrient Agar)- 夏洛特奥康纳 (Charlote A. O'Connor) 配方:-蛋白胨:5克-麦芽提取物:3克-胰蛋白酶胨:1.5克-硫酸镁:0.2克-地膜:15克-pH值调整到7.2-7.4-用1L水来溶解以上成分，加热煮沸后冷却并灭菌。
2. 肉蔗糖琼脂培养基 (Tryptic Soy Agar, TSA)- 条件反射琼脂 (孟德尔和赛尼·特鲁斯 ('Sneath and Tres') 配方):-牛肉蛋白胨:17克-大豆酪蛋白胨:3克-肉汤提取物:5克-葡萄糖:2.5克-地膜:15克-pH值调整到7.2-7.4-用1L水来溶解以上成分，加热煮沸后冷却并灭菌。
3. MAC琼脂培养基 (MacConkey Agar)- 麦康奈 (MacConkey) 配方:-紫胆杆菌胨:17克-葡萄糖:1.5克-硫酸盐:1.5克-中性红:0.03克-石蕊:0.3克-氯化钠:5克-地膜:10克-pH值调整到7.1-7.5-用1L水来溶解以上成分，加热煮沸后冷却并灭菌。
4. LB琼脂培养基 (Luria-Bertani Agar)- 古斯塔夫·诺维斯 ('Gustaf Novis') 配方:-研磨大豆饼粉:10克-酵母提取物:5克-部分脱脂酪蛋白:5克-氯化钠:1克-地膜:15克-pH值调整到7.2-7.4-用1L水来溶解以上成分，加热煮沸后冷却并灭菌。
5. 马铃薯葡萄糖琼脂培养基 (Potato Dextrose Agar, PDA)- 林登麦卡蒂 ('Lindenmuth and McCarty') 配方:-马铃薯提取物:4克-葡萄糖:20克-地膜:15克-pH值调整到5.6-5.8-用1L水来溶解以上成分，加热煮沸后冷却并灭菌。
这些是一些常用的培养基配方，适用于细菌和真菌的培养。
蘑菇食用菌培养基知识
根据各种食用菌生长时对营养物质的要求，用人工方法配制而成的营养基质，供菌丝生长发育。
把这种营养物质叫培养基。
它如同农作物需要土壤一样。
（一）培养基种类目前，人们采用的培养基相当多，种类各不相同。
不论哪种培养基都有共同特点：一般都含有水分、碳源、氮源、无机盐以及生长因素等。
水分是食用菌的组成成分，食用菌在生理活动中，需要在有水的情况下进行。
碳源是构成细胞物质的主要元素，也是食用菌生长发育所需能量来源。
碳源的主要原料是糖类、淀粉、纤维素物质。
代表物质是葡萄糖、蔗糖、玉米粉、麸皮、米糠、锯木、棉籽壳等。
氮源是食用菌细胞质和细胞核中蛋白质和核酸的主要元素，蛋白质和核酸是生命的基本物质。
一切生命活动都离不开这些物质。
氮源主要有氨基酸、蛋白胨、尿素、硫酸铵、含有氮素的物质有玉米、棉籽壳。
培养基中的无机盐虽用量不多；但不可缺少。
它主要是酶类的组成成分，调节各种生命代谢活动。
如磷酸二氢钾、硫酸镁。
生长因素需要量很少，是培养基中的特殊营养物质，它是维持食用菌正常生长所不可缺少的生长因素。
如马铃薯、麸皮、米糠等都含有丰富的生长因素，维生素也属此类。
。
（二）食用菌母种分离用培养基的制作食用菌的母种就是从孢子分离培养或组织分离培养获得的菌丝体。
一般常在琼脂培养基上培养。
1.马铃薯——蔗糖——球脂培养基（PDA）：马铃薯煮汁1000毫升蔗糖20克琼脂 20克PH值5.5～6.0 制法：先将新鲜无病害的马铃薯洗净，去皮后切成小薄片，称200克，加水1000毫升，煮沸20分钟后过滤，其滤汁为马铃薯煮汁。
然后加琼脂和蔗糖煮溶，后补足水分至1000毫升，装管（瓶）灭菌备用。
食用菌母种怎么提取-
食用菌母种怎么提取?
食用菌母种：子实体中分得的菌种称为母种.
可以找专门做食用菌的实验室帮你做.一般用PDA培养基或者水琼脂培养基就可以.
仪器设备有：75%和95%的酒精,次氯酸钠,超净工作台,平皿,试管,滤纸,解剖刀,镊子,干热或湿热灭菌设备.
方法：
1制备培养基：称马铃薯200g,琼脂20g,蔗糖或葡萄糖20g,琼脂20g,取马铃薯削皮洗净,切成拇指大的小块,加入1000ml水煮至马铃薯块一触即烂,用四层纱布过滤,将滤液继续加热放入琼脂并搅拌直至琼脂完全溶解,加入蔗糖,装置容器内（一般为三角瓶,如是试管可直接分装）灭菌.
2灭菌后,如是试管直接摆斜面,如是平皿在超净工作台内分装,待培养基凝固即可用.
3开始分离母种：将采集到的野生菌,与要用的所有仪器试剂一起放入超净工作台内,紫外杀菌30mim,采用子实体分离方法,用酒精盯烧过的镊子和刀取菌种中未接触到空气的部分,黄豆粒大小,放入平皿培养基内,封号口放入26度的培养箱内3-5天,如未染菌,则在菌肉周围会有菌丝长出,此为母种.在超净工作台内,用接种针将菌丝挑出,放入试管中,继续纯化培养,放入，分离成功!
- 1 -。
食用菌的制种(母种的分离和培养)
食用菌的制种（母种的分离和培养）()---食用菌菌种质量的优劣，直接影响到栽培的成败和产量的高低，只有优良的菌种，才能获得优质高产的食用菌。
因此食用菌的制种，是生产中一项极其重要的工艺。
食用菌的菌种按培养阶段和来源的不同，可分母种、原种和栽培种三种。
从食用菌的孢子分离培养或从组织分离培养、基内菌丝分离培养所得到的第一代菌丝体，称为母种。
从母种扩大培养的菌丝体，称为原种。
从原种扩大培养直接用于生产上播种的菌丝体；称为栽培种。
一、母种的分离和培养（一）母种培养基的配制1.母种培养基的种类母种是菌种生产的关键，要求纯度高，不能混生杂菌，同时母种的菌丝体较为纤细，分解培养料的能力较弱。
因此，母种菌丝体需要培养在营养丰富，易被吸收，表面光滑易于鉴别有无杂菌感染的琼脂培养基上。
适合母种菌丝生长的琼脂培养基种类很多，常用的有下列几种：（1）马铃薯——葡萄糖——琼脂培养基马铃薯（去皮） 200克琼脂 20克葡萄糖（或蔗糖） 20克水 1000毫升（2）麦芽汁——葡萄糖——琼脂培养基干麦芽 250克琼脂 15～20克葡萄糖（或蔗糖） 10克水 1000毫升（3）胡萝卜——葡萄糖——琼脂培养基胡萝卜 100克琼脂 20克葡萄糖（或蔗糖） 20克水 1000毫升（4）蘑菇汁——葡萄糖一一琼脂培养基（适用于蘑菇）鲜蘑菇 250克琼脂20克葡萄糖（或蔗糖） 20克水 1000毫升（5）蛋白胨——葡萄糖——琼脂培养基蛋白胨 2克葡萄糖 20克磷酸氢二钾 2克维生素B1（硫胺素） 0.5毫克磷酸二氢钾 0.5克琼脂 18克硫酸镁 0.5克水l000毫升2.母种培养基的制法兹以最常用的马铃薯——葡萄糖——琼脂培养基的制法为例介绍如下：先将马铃薯去皮，洗涤，切成小块，加水1000毫升，煮沸15～20 分钟，取双层纱布过滤，取其滤液，加入琼脂和葡萄糖（或蔗糖），用文火加热使其溶化，最后补足水分，使其容量仍为1000毫升。
趁热分装于试管中，装量约为试管长度的1/5左右，装管时要注意不使培养基沾污试管壁和试管口。
菌种的分离与培养
菌种的分离与培养在自然界里，食用菌都不是单独存在的，而是和许多细菌、放射菌、霉菌等生活在一起的。
所谓菌种分离，就是把这些和食用菌一起生活的杂菌分离出来，通过培养，获得纯的优良菌种。
菌种分母种、原种、栽培种。
(一）母种的分离培养食用菌母种的分离，可分为孢子分离法、组织分离法以及基内菌丝分离等。
1.孢子分离法孢子分离法，是用食用菌的有性孢子或无性孢子萌发成菌丝，培养成菌种的方法。
这种菌种生活力较强，但孢子个体之间有差异，且自然分化现象较严重，变异大，需经出菇试验才能在生产上应用。
（l）单孢分离法：是每次或每支试管只取一个担孢子，让它萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法。
蘑菇和草菇用单孢分离得到的菌丝，有结实能力，可采用此法分离生产纯菌种。
单孢分离生产上较少采用，而且技术复杂，一般采用多孢分离法。
（2）多孢分离法：就是把许多孢子接种在同一培养基上，让它们萌发、自由交配来获得食用菌纯菌种的一种方法。
具体操作方法，有以下几种：①种菇孢子弹射法：选择个体健壮、朵形圆正，无病虫害、出菇均匀、高产稳产，适应性强的八九分成熟的种菇，切去大部分，菌柄用无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的纱布或脱脂棉、滤纸吸干表面水分。
在接种箱或无菌室内，把种菇的菌褶朝下用铁丝倒挂在玻璃漏斗下面，漏斗倒盖在培养皿上面；上端小孔用棉花塞住。
培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上，静置12～20小时，菌褶上的孢子就会散落在培养皿内。
形成一层粉末状孢子印（平菇极淡紫色，蘑菇、草菇为褐色，香菇、金针菇孢子印白色）。
用接种针沾取少量孢子在试管中的琼脂外面或培养皿上划线接种。
待孢子萌发，生成菌落时，选孢子萌发早、长势好的菌落进行试管培养。
还可用孢子采集器收集孢子。
方法是选好种菇后，按上述程序，轻轻掀开玻璃钟罩，将种菇柄朝下插在孢子采收器的钢丝架上，放在培养皿正中央。
随即盖好玻璃罩，用纱布将钟掌周围塞好。
并在纱布上倒少许升汞或无菌水。
移入20℃左右恒温箱培养。
②褶上涂抹法：按无菌操作分离时；应选择成熟的种菇，用接种针直接插入褶片之间，轻轻抹取褶片表面子实体尚未弹射的孢子，再在培养基上划线接种。
种菇分离母种的几种常用方法
种菇分离母种的几种常用方法种菇分离母种常用的几种方法？下面让我们一起看一看：菌种的来源，即指菌种最初的分离与获得。
在自然界中，食用菌始终和许多细菌、放线菌、霉菌等生活在一起。
因此，要获得高纯度的优良菌种，就必须用科学的方法，把食用菌从这些杂菌的包围中分离出来。
常用的科学分离方法有孢子分离法、组织分离法和基内菌丝分离法三种，可根据不同的菌类和生产条件分别选用。
（1）孢子分离法?孢子分离法是利用菇体成熟的有性孢子（担孢子）或无性孢子（厚垣孢子、节孢子、粉孢子等）萌发成菌丝，来获得纯菌种的一种方法。
孢子分离法又分为单孢分离和多孢分离两种方法。
单孢分离法是取单个担孢子，接种在培养基上让它萌发成菌丝体，而获得纯菌种的方法；多孢分离法是把许多孢子接种在同一培养基上，让其萌发，自由交配来获得纯菌种的一种方法。
（2）组织分离法?组织分离法是采用子实体组织，进行分离获得纯菌丝的一种方法。
子实体是由菌丝体扭结成具组织化的菌丝，从生物学的角度来看，组织分离犹如高等植物的组织培养和农作物的扦插繁殖。
它们均具有较强的再生能力和保持本种性的能力，属无性繁殖范畴。
组织分离取材广泛、操作简便、易于成功，经组织分离所得到的后代不易发生变异，一般继代能保持亲本的优良种性。
它不仅适用于那些孢子不易萌发或单孢分离难度大的食用菌所采用，而且即使得到的纯菌丝后代和杂交育种获得的新菌株，也需用组织分离方法将其遗传性稳定下来。
因此，组织分离是一种获得食用菌纯菌种的简便分离方法。
（3）基内菌丝分离法?基内菌丝分离法利用菇体生育的基质，作为分离材料而获得纯菌丝的一种方法。
其分离材料可从人工栽培出菇的木段或从栽培袋群体中，选择长有子实体的菌袋作为分离材料。
在木材或菌袋上割去子实体，从木质部或培养基等部位，分离出菌丝，接入试管内培育而成母种。
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母种分离常用培养基
培养基都含有水分、碳源、氮源、无机盐以及生长因素等。
碳源的主要原料是糖类、淀粉、纤维素物质。
代表物质是葡萄糖、蔗糖、玉米粉、麸皮、米糠、锯木、棉籽壳等。
氮源是食用菌细胞质和细胞核中蛋白质和核酸的主要元素。
氮源主要有氨基酸、蛋白胨、尿素、硫酸银、含有氮素的物质有玉米、棉籽壳。
培养基中的无机盐虽用量不多；但不可缺少。
它主要是酶类的组成成分，调节各种生命代谢活动。
如磷酸二氢钾、硫酸镁。
生长因素需要量很少，是培养基中的特殊营养物质，它是维持食用菌正常生长所不可缺少的生长因素。
如马铃薯、麸皮、米糠等都含有丰富的生长因素，维生素也属此类。
食用菌母种分离用培养基
一、通用培养基
1、马铃薯——蔗糖——球脂培养基（PDA）：马铃薯煮汁1000毫升蔗糖20克琼脂20克PH值5.5～6.0
制法：先将新鲜无病害的马铃薯洗净，去皮后切成小薄片，称200克，加水1000毫升，煮沸20分钟后过滤，其滤汁为马铃薯煮汁。
然后加琼脂和蔗糖煮溶，后补足水分至1000毫升，装管（瓶）灭菌备用。
一般食用菌母种的分离和培养都适合此培养基。
2.、葡萄糖——麦芽膏——酵母膏培养基（GMY）：麦芽膏10克葡萄糖11克酵母膏4克琼脂18克水加至1000毫升PH值自然麦芽膏可用麦芽汁代替，10克麦芽膏可用麦芽汁代替。
二、粮食类
3、高粱培养基（特别适于平菇类生长）：高粱粉30克琼脂10克水1000毫升
4、麦粒培养基：小麦粒200克糖5克碳酸钙15克水500毫升PH值自然
制法：取小麦200克洗净，置锅中加水500毫升，煮沸20分钟，用纱布过滤，加入其他成分，煮5分钟，水汁分装至试管的1／3长度为好。
5、玉米粉培养基：玉米粉30克蛋白胨20克蔗糖20克琼脂18克水1000毫升pH值自然
6、黄豆饼粉培养基：黄豆饼粉40克葡萄糖或蔗糖20克琼脂18克水1000毫升PH值自然
制法：称黄豆饼粉40克用清水调成糊状，再加水1000 毫升，煮沸后30分钟，过滤，用热水补足1000毫升，加入琼脂蔗糖溶化即可分装试管。
7、每管大米3克，水4毫升，摆成斜面装入高压锅内，1.2公斤/平方厘米压力下灭菌40分钟，或装入家用高压锅内，自孔口喷射水蒸汽时盖上限压阀，开始计算时间，维持50分钟即可。
8、稻谷或麦粒若干，先煮透，要求熟而不烂，然后捞起沥干，加入1%石灰粉拌匀，装入试管。
9、玉米800克，葡萄糖20克，琼脂20克，淘米水1500毫升。
先将玉米粒置于淘米水中煮至有少量玉米粒爆裂时过滤，在滤液（如滤液不足1000毫升则加清水补足）中加入琼脂、葡萄糖，加热，搅拌，至琼脂全部溶化，然后分装试管，灭菌后取出摆斜面即成。
10、酸性培养基（供分离菌种及培养猴头菌）：马铃薯（去皮）200～250克糖20克琼脂25克柠檬酸1％～5％（灭菌后加人）水1000毫升。
11、麸皮2/3，玉米粉1/3，石灰适量。
将麸皮、玉米粉、石灰加水润湿至含水量65%，然后装入试管，压成斜面。
三、粪草类
12、粪汁培养基（供筛选蘑菇菌种）：马厩肥150克玉米粉（取汤）30克琼脂20～30克水1000毫升。
13、粪草培养基（适于制作蘑菇菌种）：粪草(粪：草=6：4、堆积发酵15～20天) 90斤米糠或麸皮 8
斤碳酸钙 1斤糖 1斤水适量。
14、羊屎培养基（蘑菇）：在侵漉屎中，加入1％～3％碳酸钙或1％石灰。
四、木屑类
15、木屑米糠培养基（适宜各种木生食用菌的制作）：阔叶树木屑 70％～80％米糠或麸皮 20％～28％碳酸钙 1％蔗糖 1％石膏 1％水调至适量 4.棉皮培养基（平菇、凤尾菇户）棉籽壳 99％石膏粉 1％
16、梧桐树木屑90%，玉米粉9%，石灰粉1%，加水拌匀后分装试管。
木屑粗约3毫米见方。
此法利于保藏菌种。
五、秸秆类
17、玉米芯培养基：玉米芯 99％石膏粉 1％ 6.稻草培养基：稻草 94％麸皮 5％石膏 1％蔗糖 1％19.玉米秆粉培养基: 玉米秆 78％麸皮 21％石膏 1％。
18、棉皮木屑培养基：棉皮 78％木屑 20％蔗糖 1％石膏 1％水料比为 1.2～1.3：1 8。
19、棉子壳80%，麸皮19%，石灰1%，加水拌匀后分装试管（可压斜面）。
此法有两大优点：一是原种、栽培种同时制备，不需另取原料；二是菌丝长势良好，不易老化。
六、其它
20、鲜平菇或菇脚200克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000毫升。
制法同PDA。
5.木汁麦麸（米糠）培养基：麦麸（米糠）100克硫酸铁1克蔗糖20克琼脂20克水1000毫升pH 值5～6。
制法：将木屑用双层纱布包严煮沸20分钟取出木屑包，补足1000毫升水，加入琼脂、糖等拌匀溶化即可。
21、杏汁培养基（适合朴菇子实体的发生）：干杏25克琼脂15—30克水1000毫升PH值自然
22、胡萝卜培养基（代替马铃薯）：胡萝卜100克糖18～25克琼脂20克水1000毫升。
23、苹果培养基（适于草菇生长）：苹果（压碎）100克蛋白胨2克蔗糖20克琼脂20克水1000毫升。