肉毒梭菌
肉毒毒素基本知识
主要内容
肉毒毒素介绍
保妥适配制注意事项
历史发展
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结构
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作用机理
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药理 毒理 免疫原性
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目前商用的肉毒素及保妥适的特点
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什么是肉毒毒素? (肉毒神经毒素,肉毒杆菌神经毒素，肉毒梭菌毒素 )
皱眉纹标准剂量： 20U
保妥适®是局部用药
Aoki, Neurology 2003; 60(5 Suppl 1):A212-A213 ABS-P03. 088
本研究的临床相关性有待明确
BOTOX®
弥散
效应
剂量
靶肌肉
邻近 肌肉
全身 作用
在治疗剂量内， 血液中检测不到肉毒素
肉毒素结构
前体毒素－900 KD 复合体 HA (Haemagglutinin) ,血凝素 NTNH non-toxic non-haemagglutinins 非血凝素蛋白
Reljia 试验结果
组1：25 U
组2：50U
组3：100 U
组4：150 U
疼痛和斜颈均无变化
斜颈无改变，但疼痛改善
疼痛改善1周后改善 斜颈2周后改善
结论： 保妥适可能有直接止痛效果，独立于其肌肉放松的效果
还阻滞其它物质的释放
SNAP-25
Ca++ Channels
Syntaxin
VAMP/ synaptobrevin
COOH
NH2
NH2
COOH
S-S
SS
Heavy Chain 重链
LC 轻链
致病菌检验-肉毒梭菌.
三、检验方法
1、检验标准：GB 4789.12-2003
2、培养基和试剂 培养基： 庖肉培养基、卵黄琼脂培养基、明胶磷酸盐缓冲液。 试剂： 肉毒分型抗毒诊断血清、胰酶（活力1:250）、革兰 氏染色液。 另需实验动Байду номын сангаас（小白鼠）。
3、检验程序
①报告(一)：检样中有无肉毒毒素以
及有何型肉毒毒素。(如仅为了肉毒中 毒诊断，即可结束检验) ②报告(二)：对增菌产毒培养物，一
2、培养特性
最严格的厌氧菌 生长最适温度：28 ℃ ～37 ℃ ：pH为6.8~7.6，产毒的最适pH为7.8 ~8.2。 产毒培养温度：不同菌型产毒的最适培养温度不完全相同。C、D型 温度高些为宜，35℃ 培养3d即可，而E型菌低温度长时间培养效果较好。 对营养要求不高 ：在普通培养基上都能生长。
致病菌检验——
肉毒梭菌
肉毒梭状芽孢杆菌检验
一、肉毒梭状芽孢杆菌的生物学特性 1、形态与染色 肉毒梭菌属于厌氧性梭状芽胞杆菌属，革兰氏染色阳性， 约为4×1μm的大杆菌， 多单在，偶见成双或短链，两侧平行， 两端钝圆，直杆状或稍弯曲，芽胞为卵圆形，大于菌体宽度， 位于次极端，使菌体呈匙形或网球拍状，偶有位于中央，常 见很多游离芽胞。 有4~8根周生鞭毛，运动迟缓，无荚膜。
中毒方式
• 食物媒介 • 吸入：极罕见的中毒类型 • 创伤感染：肉毒梭菌污染创伤部位，在局 部发芽繁殖，产生毒素，引起肉毒中毒。 • 肠道感染：根据肉毒梭菌能否在肠道内产 毒而引起人的都读中毒。
临床症状
• 肉毒中毒的潜伏期短着仅2h，长者可达10 天左右，通常约12-18h • 前期症状可能出现头昏、头痛、恶心、甚 至呕吐、腹泻等。 • 基本属于神经麻痹表现，最早是视觉障碍， 继而全身无力、呛噎、眼睑下垂、伸舌和 张口困难、抬头费力、瞳孔散大、咀嚼障 碍、不能下咽、胸内烦闷、有恐惧感、重 者晚期呼吸困难，最后死于呼吸麻痹。
有效控制肉毒梭菌滋生的方法
有效控制肉毒梭菌滋生的方法嘿，咱今儿就来说说这肉毒梭菌！这玩意儿可不好惹呀，要是不小心让它滋生起来，那可麻烦大啦！你想想看，肉毒梭菌就像个偷偷摸摸的小捣蛋鬼，一不小心没看住，它就在食物里安了家。
那怎么有效控制它呢？首先呢，清洁卫生可得做好。
就好比你家里要是脏兮兮的，那老鼠蟑螂不就都跑来了嘛。
厨房得干干净净的，餐具啥的都得洗得亮晶晶的。
做菜的时候，那些食材可得好好处理，别带着脏东西就下锅啦。
还有啊，储存食物也有讲究呢！你不能随随便便把食物扔在那儿不管呀。
该冷藏的冷藏，该冷冻的冷冻。
这就好比给食物找了个舒服的小窝，让肉毒梭菌没机会靠近。
你要是把食物就那么敞着放，那不就等于给肉毒梭菌发了邀请函嘛！烹饪食物的时候也要注意火候和时间。
别半生不熟的就端上桌啦，那不是给肉毒梭菌留机会嘛！要把食物煮得透透的，烤得香香的，让肉毒梭菌根本没法存活。
你说，咱总不能让这小捣蛋鬼得逞吧？再说说加工食品，咱自己做罐头啥的可得小心。
密封得严严实实的，别给肉毒梭菌留一丝缝隙钻进去。
这就像给宝贝东西上了一把锁，谁也打不开。
咱平时吃的那些个腌制食品，也得注意呀！盐不能少放，但也别放太多啦。
就像调味得恰到好处，不然味道不好不说，还可能让肉毒梭菌有可乘之机。
你说要是不小心让肉毒梭菌滋生了，那后果得多严重呀！轻的可能就是肚子疼、拉肚子，重的那可不得了，说不定会危及生命呢！这可不是开玩笑的呀！所以呀，咱可得把这些方法都记住喽，别不当回事。
就像打仗一样，咱得时刻警惕着肉毒梭菌这个小敌人，不能让它有机会攻进来。
咱要把厨房变成一个坚固的堡垒，让肉毒梭菌无从下手。
大家都行动起来吧，为了自己和家人的健康，好好控制肉毒梭菌滋生，让我们的生活远离这个小坏蛋的骚扰！这可不是小事儿呀，咱可得认真对待，你说是不是呢？。
肉毒梭菌食物中毒诊断标准及处理原则
肉毒梭菌食物中毒诊断标准及处理原则肉毒梭菌是一种产生肉毒毒素的细菌，常常存在于土壤和沉积物中，也可存在于一些动物肠道中。
当食物受到肉毒梭菌的感染后，细菌会产生肉毒毒素，这种毒素能够引起食物中毒，且肉毒毒素是一种非常强力的毒素，只需少量就能够引发严重的中毒症状。
肉毒梭菌引起的食物中毒通常被称为肉毒梭菌食物中毒，该中毒一旦发生，病情严重且很容易传播。
对于肉毒梭菌食物中毒的诊断标准和处理原则至关重要，以便能够迅速检测和处理中毒病例，防止疾病的扩散。
一、肉毒梭菌食物中毒的诊断标准1. 病史和症状分析：患者通常在食用受感染食品后6-48小时出现中毒症状。
症状包括恶心、呕吐、腹泻、腹痛、头痛、眩晕、视力模糊、眼肌麻痹、喉部肌肉无力等。
当病人有食用可能感染肉毒梭菌的食物，并出现与肉毒梭菌食物中毒相关的症状时，应怀疑为肉毒梭菌食物中毒。
2. 实验室检查：可通过检验患者的血液、呕吐物、粪便等标本，来确定肉毒梭菌是否存在。
毒素测定可以通过孵育血清、胃液等进行，也可以通过PCR技术来进行。
二、肉毒梭菌食物中毒的处理原则1. 紧急处理：一旦发现中毒症状，应立即就医。
病人被送入医院后，需要进行一系列的治疗措施，以防止中毒症状的进一步发展。
2. 及时排除毒素：采取洗胃、导泻等措施，以尽快排出体内的肉毒毒素。
要保持充足的饮水量，以加速体内的毒素排出。
3. 抗毒素治疗：根据病情严重程度，可以使用抗毒素进行治疗。
肉毒毒素抗毒素可用于中毒的早期治疗，能够中和体内的肉毒毒素，减轻病情。
4. 对症治疗：根据个体病情，对症给予相应的支持性治疗。
如对呼吸系统受损的患者可给予呼吸机辅助通气；对眼肌麻痹患者可给予眼护理，定期滴眼液等；对患者出现的其他症状，也需给予相应的支持性治疗。
5. 预防传播：减低疾病传播的风险是阻断疾病扩散的关键。
应隔离患者，防止疾病传播给其他人。
要对可能被肉毒梭菌污染的食物进行严格的检测和控制，以防止重新感染。
肉毒梭菌食物中毒的诊断标准主要是根据病史和症状分析，结合实验室检查结果来确定。
肉毒梭菌培养工艺流程
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16肉毒梭菌
G+粗短杆菌，芽孢呈椭圆型， 粗于菌体，位于次级端，使菌 体呈网球拍状 庖肉培养基：肉渣变黑 抵抗力： 芽孢：抵抗力强，100℃5小时，干热180℃15 分钟，高压灭菌121.3℃30分钟才能杀死 肉毒毒素：不耐热、煮沸1分钟可破坏
肉毒梭菌的致病性
致病物质：肉毒毒素
早期注射足量的肉毒多价抗毒素
作 业
1、肉毒梭菌的致病性如何？引起哪些疾病？
剧毒（对人致死量为0.1µg) 为神经毒素
肉毒毒素
阻碍乙酰胆 碱的释放
肉毒梭菌的致病性
所致
发酵面制品、罐头、火腿等
婴儿肉毒病：病儿表现为便秘，吮奶无力、
吞咽困难、眼睑下垂、全身肌张力减退，严重 者造成婴儿猝死
肉毒梭菌的防治原则
食品食用前加热
肉毒梭菌食物中毒演示ppt课件
发病急骤，以中枢神经系统症状为主，初期表现为头痛、头 晕、乏力、恶心、呕吐等，继而出现视力模糊、复视、眼睑 下垂、吞咽困难、声音嘶哑等症状。
主要症状与体征
神经系统症状
主要表现为对称性颅神经损害的 症状，如视力模糊、眼睑下垂、 眼球运动障碍、吞咽困难、发音 困难等。严重者可出现呼吸困难
，甚至呼吸衰竭。
国际合作与交流加强
加强与国际组织和其他国家的合作与交流，共同研究肉毒 梭菌食物中毒的防控策略和技术标准，提高全球食品安全 水平。
THANK YOU
肉毒梭菌的生物学特性
01
形态与染色
肉毒梭菌为细长杆菌，宽约0.6-1.0微米，长2.0-10.0微米。革兰氏染色
阳性，菌体中央部分较粗，两端渐尖。
02 03
培养特性
肉毒梭菌在厌氧条件下生长良好，可形成芽孢。在适宜的培养基上，肉 毒梭菌可形成圆形、光滑、凸起的菌落，菌落周围常有一圈透明的溶血 环。
生理生化特性
肉类和腌制品。
个人卫生
保持良好的个人卫生习惯，饭 前便后洗手，避免用手直接接
触食物。
宣传教育
加强对公众的宣传教育，提高 食品安全意识，了解肉毒梭菌 食物中毒的危害和预防方法。
及时处理
一旦发现疑似肉毒梭菌食物中 毒事件，应立即停止食用可疑
食物，并及时就医治疗。
06
肉毒梭菌食物中毒的流行病学 特征
流行地区与时间分布
肝脏代谢
肉毒毒素进入人体后，主要在肝脏中进行代谢，部分毒素可能被分解失活。
肾脏排泄
经过代谢后的肉毒毒素及其代谢产物，通过肾脏以尿液的形式排出体外。同时 ，部分毒素也可能通过汗液等途径排出。
04
肉毒梭菌食物中毒的临床表现
肉毒杆菌
生物分型
肉毒杆菌菌家族分为A、B、C、D、E、F、G七个 亚型。根据生理学特征，可分为蛋白分解高株和非蛋白分解菌株。前者包括A型及某些B、F型肉毒杆菌；后者包 括B型及部分E、F型肉毒杆菌。
生长繁殖
通常，肉毒杆菌在有氧环境中、低于4°C或pH<4.5条件下不生长。只有在厌氧、低盐、偏酸的特殊条件下， 才可生长繁殖并产生肉毒毒素。其中，具有蛋白分解功能的肉毒杆菌最适产毒培养温度为37°C，不具有蛋白分 解功能的菌株最适产毒培养温度为30°C，甚至在3~4℃的低温条件下也可产生肉毒毒素。
科学家和美容学家正是看中了肉毒杆菌毒素能使肌肉暂时麻痹这一功效。医学界原先将该毒素用于治疗面部 痉挛和其他肌肉运动紊乱症，用它来麻痹肌肉神经，以此达到停止肌肉痉挛的目的。可在治疗过程中，医生们发 现它在消除皱纹方面有着异乎寻常的功能，其效果远远超过其他任何一种化妆品或整容术。因此，利用肉毒杆菌 毒素消除皱纹的整容手术应运而生，并因疗效显著而在很短的时间内就风靡整个美国。
肉毒中毒
婴儿肉毒中毒
食源性肉毒中毒
伤口肉毒中毒
最早出现在18世纪初，因食入被肉毒毒素污染的食物引起。这些食物在制作过程中被肉毒杆菌或其芽孢污染， 制成后又未彻底灭菌，导致肉毒杆菌或芽孢在厌氧环境中发芽繁殖产生毒素。食源性肉毒中毒的临床表现与其他 食物中毒不同，胃肠道症状很少见，不发热，主要为神经末梢麻痹。临床典型症状包括视力模糊、复视、眼睑下 垂等眼麻痹症状，以及张口、伸舌、吞咽困难等肌肉麻痹症状，后期出现膈肌麻痹、肌肉松弛，直至呼吸困难死 亡。潜伏期从2h到10d以上，一般为12~48h。在国外引起中毒的食物以罐头、香肠、海产品和蔬菜为主，国内则 以发酵豆制品、面制品为主。但近年来随着生活水平提高，因香肠、火腿、罐头等动物毒性食品引起的肉毒中毒 在我国也时有发生。
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抵抗力：
A型毒素经60℃2分钟加热，差不多能被完全破坏，而B 、E二型毒素要经70℃2分钟才能被破坏；C、D二型毒 素对热的抵抗更大些；C型毒素要经过90℃2分钟加热 才能完全破坏，不论如何，只要煮沸1分钟或75℃加热 5~10分钟，毒素都能被完全破坏。肉毒毒素对酸性反 应比较稳定，对碱性反应比较敏感。某些型的肉毒毒 素在适宜条件下，毒性能被胰酶激活和加强。
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肉毒梭菌的检出（增菌产毒培养试验）
取庖肉培养基三支，煮沸10min～15min，做如下处理： 第一支：急速冷却，接种检样均质液1 mL～2 mL；
第二支：冷却至60℃，接种检样，继续于60℃ 保温10 min，急速冷却； 第三支：接种检样，继续煮沸加热10 min，急速冷却。
以上3支试管于30℃厌氧培养5d，若无生长，可再培 养10d。培养到期，若有生长，取培养液离心，以其 上清液进行毒素检测试验，方法同上，阳性结果证 明检样中有肉毒梭菌存在。
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5
葡萄糖鲜血琼脂（A型）
（C型）
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6
3．生化特性
肉毒梭菌能分解葡萄糖，麦芽糖及果糖，产酸产气， 能液化明胶，缓慢液化凝固血清，使牛乳消化，产生 H2S，但不能使硝酸盐还原为亚硝酸盐。肉毒梭菌的生 化性状很不规律，即使同型，也常见到株间的差异。
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分类：
4.抵抗力
肉毒梭菌能产生外毒素即肉毒毒素（大分子蛋白），根据毒 素的抗原特异性将其分为A、B、C （1、2） 、D、E、F、G 七个型别。
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4
2、培养特性
5.在含有肉渣的液体或者半流动培养基中，肉毒梭菌生 长旺w盛el且co产me生t大o u量se气th体e，seAP、owBe、rPFo三in型t t表em面pl浑at浊es，, N底ew部 有粉C状on和te颗nt粒de状si沉gn淀, 1，0 并ye能ar消s e化xp肉er块ie，nc变e 黑有臭味；而 C、D、E三型表明清亮，絮片状生长，粘贴于管壁。 6.在葡萄糖鲜血琼脂平板上，菌落较小，扁平，颗粒状 。中央低落，边缘不规则，有的菌落还有大的溶血环。 7.在卵黄琼脂平板上生长，菌落及其培养基周围表面覆 盖着特有的彩虹样薄层，但G型没有
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14
Thank you!
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报告 （一）
毒素。报告检样中有无肉毒梭菌以及
有何型肉毒梭菌。（有些样品如土壤、
泥沙等基本上不可能含有毒素，则应
从培养着手）
③报告(三)：欲获纯菌株，可用增菌
产毒培养物进行分离培养，对所得纯
菌株进行形态、培养特性等观察及毒
素检测，其结果可证明所得纯菌为何 型肉毒梭菌。（一般情况下，没有必
毒素检测
要从检样中分离纯的菌株，但研究或
注射液中若有肉毒毒素存在，小白鼠一般多在注射后24 h内发病、死亡。 确证试验
毒力测定
定型试验
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分离培养
选取证实含有肉毒毒素的增菌产毒培养物（必要时可重复一次适宜 的加热处理）接种卵黄琼脂平板，35℃厌氧培养48 h。肉毒梭菌在卵黄 琼脂平板上生长时，菌落及周围培养基表面覆盖着特有的虹彩样(或珍珠 层样)薄层，但G型菌无此现象。
4.2.7 肉毒梭菌
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制作：白俊强
1
本节主要内容：
肉毒梭菌的主要特征 肉毒梭菌致病机理 肉毒梭菌的检验
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2
一、生物学特性：
1.形态及染色
肉毒梭菌属于厌氧性梭状芽胞杆菌属，革兰氏染色阳性(老龄菌 是阴性），约为4×1μm的大杆菌， 多单在，偶见成双或短链， 两侧平行，两端钝园，直杆状或稍弯曲，芽胞为卵圆形，大于 菌体宽度，位于次极端，使菌体呈匙形或网球拍状，偶有位于 中央，常见很多游离芽胞。 有4~8根周生鞭毛，运动迟缓，无荚 膜。
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二． 致病机理
肉毒毒素是一种神经麻痹毒素，主要抑制神经末 梢释放乙酰胆碱，引起肌肉松弛麻痹，特别是呼 吸肌麻痹导致死亡。
肉毒毒素的毒性极强，是目前已知在天然毒素和 合成毒剂中毒性最强的生物毒素，据称，精制毒 素1克能杀死400万吨小白鼠，一个人的致死量大 概1微克左右。
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9
三、检验方法
特殊需要例外）
精选文本
增菌、产毒培养 30℃，5 d
毒素检测 报告（二）
观察生长性状， 染色镜检
分离培养
增菌产毒培养 30℃，5 d
观察菌落性状 染色镜检
培养检查
报告（三）
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肉毒毒素检测
液态或固体（明胶磷酸盐缓冲液）样品经过适当处理后离心，取上清液实验 上清液及其胰酶激活处理液
分别进行小白鼠腹腔注射，各3只，每只0.5 mL，观察4 d
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3
2、培养特性
1.最严格的厌氧菌
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2.生长最适温度：28 ℃ ～37 ℃ ：pH为6.8~7.6，产毒的最适
pH为C7o.8nt~e8n.2t。design, 10 years experience
3.产毒培养温度：不同菌型产毒的最适培养温度不完全相同。 C、D型温度高些为宜，35℃ 培养3d即可，而E型菌低温度长 时间培养效果较好。 4.对营养要求不高 ：在普通培养基上都能生长。
培养基：庖肉培养基、卵黄琼脂培养基、明胶磷 酸盐缓冲液。
试剂：肉毒分型抗毒诊断血清、胰酶（活力 1:250）、革兰氏染色液。
实验动物：小白鼠
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10
检验程序
检样
①报告(一)：检样中有无肉毒毒素以 及有何型肉毒毒素。(如仅为了肉毒中
毒素检测
毒诊断，即可结束检验)
②报告(二)：对增菌产毒培养物，一 方面做生长特性观察，同时检测肉毒
根据菌落形态及菌体形态挑取可疑菌落，接种庖肉培养基，于30℃ 培养5d，进行毒素检测及培养特性检查确证试验。
（1）毒素检测：试验方法同上。 （2）培养特性检查：接种卵黄琼脂平板，分成两份 ，分别在35℃的需氧和厌氧条件下培养48 h，观察生 长情况及菌落形态。肉毒梭菌只在厌氧条件下生长而 在需氧条件下不生长。