虫草多糖的分离纯化及含量测定
虫草多糖的分离纯化及含量测定
虫草多糖的分离纯化及含量测定目的采用发酵法从冬虫夏草发酵液及菌丝体中提取、分离虫草多糖。
方法采用乙醇沉淀法分离冬虫夏草发酵液和菌丝体中的多糖；采用苯酚硫酸法测定样品中多糖含量。
结果采用此法进行制备、检测，方法简单快速，结果准确，适宜推广使用。
结论此法无需多糖纯品，具有快速简单、精确度高、灵敏度高、重现性较好的优点，是检测虫草多糖含量的较优方法之一。
标签：发酵液；虫草多糖；菌丝体虫草多糖；分离纯化；含量测定Purification and determination of Cordyceps polysaccharideCUI?Lixun1??ZHANG?Aihua1??SUN?Shouying21.Heilongjiang Biotechnology V ocational College，Harbin 150025，China；2.Heilongjiang New Yisheng Pharmaceutical Co.，Ltd，Jixi 158200，China[Abstract] Objective Using the method of inoculated fermentation to extract and separate the Cordyceps polysaccharide from the zymotic fluid and mycelium of Chinese caterpillar fungus. Methods Separated the polysaccharide of Chinese caterpillar fungus’ zymotic fluid and mycelium in ethanol precipitation；survey and evaluate the polysaccharide content of samples in phenol-sulfuric acid method. Results It is profitable for using widely because of the fast，easy method and exact result for producing and detecting. Conclusion This method is one of excellent ways for detectin g the Cordyceps polysaccharide contents and it doesn’t need the polysaccharide from pure product. The advantages are fast and easy，high accuracy and sensitivity，and good reproducibility.[Key words] Fermentation broth；Cordyceps polysaccharide；Mycelium of Cordyceps polysaccharide；Separation and purification；Content determination 冬虫夏草首载于本草从新，味甘，性温，归肺、肾经，具补肺益肾，止血化痰之功效。
九州虫草多糖的提取纯化、理化性质及免疫调节、抗氧化活性研究的开题报告
九州虫草多糖的提取纯化、理化性质及免疫调节、抗氧化活性研究的开题报告
一、研究背景
九州虫草（Cordyceps kyushuensis）是一种能够寄生在昆虫体内的蘑菇类真菌，其中所含有的多种有效成分被广泛应用于药用、保健品和食品等领域。
其中，虫草多糖是其中的主要成分之一，具有免疫调节、抗氧化、抗肿瘤等生物活性。
二、研究目的
本研究旨在通过对九州虫草多糖的提取、纯化和理化性质的研究，探究其生物活性中免疫调节和抗氧化的特性，为进一步开发利用虫草多糖提供科学依据。
三、研究内容和方法
（一）虫草多糖的提取和纯化
以九州虫草为实验材料，采取酸提法、醇析法等方法，对虫草多糖进行提取和纯化，获得高纯度的虫草多糖。
（二）虫草多糖的理化性质分析
通过对虫草多糖的分子结构、分子量、化学性质等方面进行分析，从化学结构角度深入研究虫草多糖的生物活性和应用前景。
（三）虫草多糖的免疫调节特性研究
通过体外细胞培养实验和动物模型实验等方法，探究虫草多糖的免疫调节机制和作用途径，并分析其对免疫功能的影响。
（四）虫草多糖的抗氧化活性研究
通过体外化学实验、细胞实验和动物模型实验等方法，分析虫草多糖在抗氧化方面的生物活性和作用机制。
四、研究意义
本研究对于深入了解九州虫草多糖的生物活性和应用前景，为其在药用、保健品和食品等领域的开发利用提供重要的科学依据。
同时，研究结果也将扩展虫草多糖在其他领域的应用，促进我国虫草产业的发展和提升其经济效益。
广东虫草菌丝体多糖的提取、分离纯化及结构初步研究的开题报告
广东虫草菌丝体多糖的提取、分离纯化及结构初步研究的
开题报告
1. 研究背景和意义：
广东虫草是一种珍贵的中草药材，具有很高的药用价值，常被用于滋补强身、改善免疫和提高生活质量。
目前已有不少研究表明，广东虫草中含有多种生物活性成分，其中多糖是其重要的成分之一。
因此，对广东虫草菌丝体多糖进行提取、分离纯化及
结构初步研究，不仅有利于更好地发挥其药用价值，也对广东虫草的开发利用具有重
要的现实意义。
2. 研究内容和方法：
本研究将采用超声波辅助提取的方式，提取广东虫草菌丝体中的多糖，并通过醇沉、离子交换层析和凝胶层析等方法进行分离纯化。
最终通过红外光谱、紫外光谱、
高效液相色谱和核磁共振等技术手段，对多糖的化学结构进行初步研究。
3. 研究重点和难点：
本研究的重点是对广东虫草菌丝体多糖进行高效提取、分离纯化，并对其结构进行初步研究。
其中，多糖的提取和分离纯化在技术上有一定难度，需要反复优化实验
条件才能得到较理想的结果。
而对多糖的结构研究，则需要掌握较高的核磁共振技术
和化学分析技能。
4. 研究预期结果和意义：
本研究预期可以得到广东虫草菌丝体多糖的高效提取、分离纯化和初步结构研究结果，并对其药理作用、保健功能以及产业化开发具有重要的参考价值。
同时也为更
深入地揭示广东虫草中的细胞成分和生物活性物质提供了技术支持，推动广东虫草的
研究和应用发展。
冬虫夏草多糖测定方法的研究进展
采用纸层析定性测定了部分样品的单糖组成 , 以气相色谱分析法定性和定量测定了单糖组成及比 例 。 PC Ⅰ中所含甘露醇 、半乳糖 、葡萄糖的摩尔比 为 1ζ 0. 65ζ 0. 30; PCA Ⅰ中含甘露糖和半乳糖的 摩尔比为 1ζ 1; PCB Ⅰ中含甘露糖和半乳糖的摩尔 比为 1ζ 0. 73; PCA Ⅱ中含甘露糖 、半乳糖 、葡萄糖 的摩尔比为 1ζ 0. 71ζ 0. 42; PCB Ⅱ中含甘露糖 、半 乳糖 、葡萄糖的摩尔比为 1ζ 0. 51ζ 0. 50。
多糖 (以葡萄糖计 ) (m g /100 mL )
=V1
/100
A ×V2
×1
000
×100
式中 : A 多糖含量 , V1 样品取样量 , V2 样品处
理液吸取体积 。
冬虫夏草多糖是一种复合多糖 ,葡聚糖含量高 , 可采用 490 nm 的葡萄糖比色范围比色 。当然 ,总多 糖的测定与葡萄糖有差别 ,需用换算因子换算 。 1. 2 蒽酮 2硫酸法 采用蒽酮 2硫酸法测定多糖的 含量 ,反应原理为多糖在浓硫酸作用下 ,水解成单糖 分子 ,并迅速脱水生成糠醛 ,然后糠醛与蒽酮缩合成 糠醛衍生物 ,呈蓝绿色 ,颜色稳定 ,在 625 nm 处有特 征吸收 。
(下转第 68页 )
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合理处方 ,对不合理用药及时予以干预 。这就从立 法上为临床药师在开展不合理处方分析等临床药学 工作方面奠定了基础 ,使临床药师在工作中能做到 有法可依 。当然临床药师要胜任临床药学工作 ,就 必须不断加强学习临床医学知识 ,掌握与医师和患 者沟通的能力 ,势必也会引起传统药学教育模式的 改革 。
蛹虫草多糖含量的测定与分析
蛹虫草多糖含量的测定与分析蛹虫草多糖是蛹虫草中含量很丰富的天然多糖，其中有不同类型的糖，可以充当润滑剂、增加饼干的韧度以及具有抗氧化、抗菌等的功效。
本文旨在探究蛹虫草多糖的测定及其分析。
一、蛹虫草多糖的测定1. pH值测定：采用标准电子称，使用混合蛹虫草多糖液体和蒸馏水混合到一定比例，使用pH试纸将液体pH值测定出来，做出pH 值曲线。
2.度测定：将蛹虫草多糖液体滴入10ml的17.5%稀硝酸溶液中，使用标准电子称测出其比重；将比重结果除以17.5%稀硝酸比重，得到蛹虫草多糖的碱度。
3.量测定：将蛹虫草多糖液体加入标准的热量计里，可测出蛹虫草多糖的总能量含量。
4.类组成测定：将蛹虫草多糖液体加入糖质组分检测器，可测出蛹虫草多糖中含有的各糖类成分。
二、蛹虫草多糖的分析1.量分离：将蛹虫草多糖液体加入色谱仪中，用熊猫柱仪分离出其中的各糖类成分，绘制出糖类成分分离曲线。
2.谱测定：通过色谱仪对各糖类组分进行分析，可以准确测出蛹虫草多糖中各糖类组分的含量及比例。
3.谱测定：使用高效液相色谱串联质谱技术，可以准确分析蛹虫草多糖中各糖类组分的定性和定量，有助于深入探究蛹虫草多糖的成分及其效果。
综上所述，蛹虫草多糖的测定及其分析是一项较为复杂的工作，需要综合运用多种科学技术方法，包括电子称测定蛹虫草多糖的基本性质，糖质组分检测器分析蛹虫草多糖中各糖类组分的含量及比例，色谱仪及高效液相色谱串联质谱技术来分析蛹虫草多糖的定性及定量。
这些技术对于我们对蛹虫草多糖的研究至关重要，从而有助于更好地保护和利用蛹虫草多糖的特性，发挥其在食品添加剂、工业原料等领域的重要作用。
总之，蛹虫草多糖是一种重要的天然产物，它可以提供我们巨大的突破和机遇，为我们带来绿色、可持续的技术发展方向。
虫草多糖的分离、纯化和初步药效活性研究
定保护作用。
关键 词 ： 连接方式 ； 虫草 ； 多糖 ； 离 分 中图分 类号 ：Ｑ ６ ． Ｔ ４４ １ 文献标识码 ： Ａ ７ （０ ８ ０ — ０ ９— ５
Ｓ ｐ ｒ ｔｏ ｅ ａ ａ ｉ ｎ，ｐｕ ｉ ｃ ｔｏ ｎｄ ａ ｔｖ ｔ ｆｐ ａ ｍ ａ ｏ ｙ ｍ ｉ ｒｆ ａ ｉｎ ａ ｃ ｉｉｙ ｏ ｈ ｒ ｃ ｄ ｎａ ｃ ｉ
维普资讯
第 ６卷第 １期 ２０ ０ ８年 １ 月
生
物
冬虫夏草多糖组份研究及药理试验
冬虫夏草多糖组份研究及药理试验在中国传统医学中，冬虫夏草（Cordyceps sinensis）被誉为上品珍药，它的功效博大精深，被应用于肝脏疾病，肾脏疾病，糖尿病和呼吸系统疾病等诸多疾病的治疗过程中。
冬虫夏草的多糖组份占其活性成分的很大比例，是冬虫夏草活性成分的重要组成部分。
本对冬虫夏草多糖组份进行了研究，并进行药理试验，以获取冬虫夏草多糖组份的活性成分及其药理作用，为深入研究冬虫夏草作为药物来源提供参考。
一、冬虫夏草多糖组份的研究1、来源和组成冬虫夏草多糖组份的来源有很多，但比较重要的来源是来自冬虫夏草孢子的木质部分。
研究表明，冬虫夏草孢子多糖组份主要由半乳糖、甘露糖、果糖、曲霉糖、葡萄糖等多种糖类物质组成。
其中，果糖含量最高，约为10.1%-13.1%。
2、分离纯化冬虫夏草多糖的分离纯化主要采用极压液体色谱，先用静态色谱将杂质和多糖分离出来，然后经过超声富集，再用极压液体色谱来分离出具有特定极性的多糖组份，利用多步流动色谱及其他电泳技术可以得到所需的多糖组份。
二、冬虫夏草多糖组份的药理试验1、细胞毒作用在大鼠肝细胞L-02靶细胞系中，研究发现冬虫夏草孢子提取液中的多糖组份有较强的细胞毒性作用，其细胞毒性IC50值为13.14ug/mL，亦显示出其具有较好的细胞毒性活性。
2、免疫调节作用考察冬虫夏草孢子抽提液中多糖组份对兔白细胞抗体产生能力的影响，研究发现，在实验期间，兔白细胞抗体显著增加，最大抗体产生量达到159.02 mg/ml。
可见，冬虫夏草孢子多糖组份具有促进免疫功能的作用。
3、抗氧化作用研究发现，冬虫夏草在超氧化物歧化酶（SOD）试验中，具有较强的抗氧化活性，其SOD活性达到14.32 U/g。
可见，冬虫夏草孢子多糖组份具有较强的抗氧化作用，可以有效抵御细胞对氧化伤害的损害。
综上所述，冬虫夏草多糖组份是冬虫夏草活性成分的重要组成部分。
通过研究，发现冬虫夏草孢子多糖组份具有细胞毒性作用、促进免疫功能的作用和抗氧化作用。
分光光度法测定北虫草提取物中多糖的含量
分光光度法测定北虫草提取物中多糖的含量摘要:目的:建立北虫草提取物中多糖的含量测定方法。
方法:采用将多糖水解成单糖,经与显色剂3,5-二硝基水杨酸试液显色后,在520nm处测定吸收度的分光光度法。
结果:虫草多糖在0.0006mg～0.030mg范围内时与吸收值有良好的线性关系,R=0.9992,平均加样回收率为99.54%,回收率的RDS为0.63%（n=11）。
结论:该方法操作简便、灵敏、准确、重现性好,适用于虫草多糖的质量控制。
目前国内的北虫草人工养殖规模不断加大,北虫草子实体及北虫草培养基中含有多种生理活性物质,其中的虫草多糖是含量最高的,可以占到总干重量的3%～8%[1],虫草多糖具有提高免疫功能、抗肿瘤、抗衰老、降血糖、抗放射、保护肾脏、抗病毒、降血脂、抗动脉粥样硬化、保肝、耐缺氧等作用[2] [3]。
北虫草提取物是以人工栽培的北虫草子实体及北虫草培养基为原料,经水提－醇沉工艺生产所得,为有效控制北虫草提取物的质量,采用分光光度法对北虫草提取物中多糖的含量进行了测定。
关键词:分光光度法北虫草提取物虫草多糖含量测定1、仪器与试剂北虫草提取物（黑龙江新医圣制药有限责任公司）;UV754N型可见—紫外分光光度计（上海精密科学仪器）;葡萄糖对照品（中国药品生物制品检定所,批号:110833-200902）;试剂均为分析纯,水为重蒸馏水。
2、方法2.1 单糖供试品溶液的制备取本品,研细,精密称取0.8g,置研钵中,加少量水研磨片刻,并用水分次转移至100ml 量瓶中,加水至刻度,摇匀,离心,取上清液,即得。
2.2 总糖供试品溶液的制备取本品,研细,精密称取0.8g置研钵中,加少量水研磨片刻,用盐酸溶液（1→2）10ml分次将糊状物转移至烧瓶中,加热回流30分钟,放冷,加40%氢氧化钠溶液调节PH值至中性,移入500ml瓶中,加水至刻度,离心,取上清液,即得。
2.3 北虫草多糖含量的测定精密量取对照品溶液与单糖、总糖供试品溶液各1ml,分别置25ml量瓶中,各加3,5-二硝基水杨酸试液2ml,摇匀,置沸水浴中加热5分钟,立即冷却。
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虫草多糖的分离纯化及含量测定
[摘要]目的采用发酵法从冬虫夏草发酵液及菌丝体中提取、分离虫草多糖。
方法采用乙醇沉淀法分离冬虫夏草发酵液和菌丝体中的多糖；采用苯酚硫酸法测定样品中多糖含量。
结果采用此法进行制备、检测，方法简单快速，结果准确，适宜推广使用。
结论此法无需多糖纯品，具有快速简单、精确度高、灵敏度高、重现性较好的优点，是检测虫草多糖含量的较优方法之一。
[关键词]发酵液；虫草多糖；菌丝体虫草多糖；分离纯化；含量测定
[中图分类号] r28???[文献标识码] b???[文章编号] 2095-0616（2012）21-95-02
purification and determination of cordyceps polysaccharide
cui?lixun1??zhang?aihua1??sun?shouying2
1.heilongjiang biotechnology vocational college，harbin 150025，china；
2.heilongjiang new yisheng pharmaceutical co.，ltd，jixi 158200，china
[abstract] objective using the method of inoculated fermentation to extract and separate the cordyceps polysaccharide from the zymotic fluid and mycelium of chinese caterpillar fungus. methods separated the polysaccharide of
chinese caterpillar fungus’ zymotic fluid and mycelium in ethanol precipitation；survey and evaluate the polysaccharide content of samples in phenol-sulfuric acid method. results it is profitable for using widely because of the fast， easy method and exact result for producing and detecting. conclusion this method is one of excellent ways for detecting the cordyceps polysaccharide contents and it doesn’t need the polysaccharide from pure product. the advantages are fast and easy， high accuracy and sensitivity，and good reproducibility.
[key words] fermentation broth；cordyceps polysaccharide；mycelium of cordyceps polysaccharide； separation and purification； content determination
冬虫夏草首载于本草从新，味甘，性温，归肺、肾经，具补肺益肾，止血化痰之功效。
冬虫虫草中含量最高的活性物质是虫草多糖，因其可以抗氧化、抗肿瘤和增强免疫力等功效而受广大人群青睐，由于天然的活性成分来源有限，现多采用人工发酵法生产制备。
作者用苯酚-硫酸法测定虫草多糖含量。
1?材料
1.1?供试材料
虫草菌株（青海省）；蒸馏水（双蒸水）、发酵液精多糖ⅰ和菌
丝体精多糖ⅱ；葡萄糖标准溶液（100 μg/ml）等。
1.2?仪器及设备
培养箱（常州市恒久仪器制造有限公司光照培养箱）；高压蒸汽灭菌设备（鸡西辰丰医疗器械制造有限公司yxq.l-75型立式压力蒸汽灭菌器）；大容量离心机（北京时代北利离心机有限公司
gtr10-2）；紫外分光光度计（上海悦丰仪器仪表有限公司）等。
1.3?培养基配方
1.3.1?活化培养基（g/ml）?蔗糖溶液1.30%，葡萄糖溶液1.30%，蛋白胨0.01%，酵母粉0.065%，琼脂0.5%，kh2po4 0.025%，mgso4·7h2o 0.012 5%，ph自然，培养温度27℃。
1.3.2?发酵培养基（g/ml）?葡萄糖1.75%，蛋白胨0.02%，酵母粉0.062 5%， kh2po4 0.025%，mgso4·7h2o 0.012 5%， ph自然，温度27℃[1]。
2?方法
2.1?配制培养基和灭菌
按体积向培养基中加入蒸馏水，加热煮沸，调节ph值至中性，趁热倒入容器中。
高压蒸汽灭菌，温度121.9℃，时间20 min。
灭菌完成，趁热倒在平板上。
2.2?活化菌种
在无菌条件下，将冷冻完好的菌种接到培养基上，无光条件下27℃培养，培养菌丝洁白并生长旺盛且无杂菌后备用。
2.3?配制发酵培养基及培养
把培养基上的菌种快速接入到发酵培养基中，在27℃条件下，无光培养192 h。
2.4?发酵液多糖的分离纯化[2]
2.4.1?发酵液及透析袋的处理?发酵液在4 000 r/min条件下离心20 min，过滤得到上清液和沉淀（菌丝体）。
将透析袋分成小段后，处理后在4℃条件下存放于冰箱保存待用。
2.4.2?发酵液多糖的提取?醇沉：将无水乙醇以3倍体积加于发酵液中，离心后得上清液，4℃条件静置12 h后，在4 000 r/min 离心15 min，过滤得沉淀，用乙醇洗涤。
脱蛋白：用热水将发酵液粗多糖溶解，冷却后反复3次去蛋白。
脱色：多糖溶液加1.5%活性碳去色素，透析：将脱色后的虫草多糖溶液装入透析袋中，在蒸馏水中透析24 h，将3倍体积乙醇加于透析后溶液中，在4℃条件下沉淀过夜，离心得沉淀物并干燥，制得发酵液精多糖[3]。
2.4.3?沉淀物的处理?用研钵研碎发酵所制得的菌丝体，加蒸馏水至体积的10倍，水浴加热96～100℃条件下浸提3 h，反复浸提3次并将滤液合并，加入95%乙醇至4倍体积并低温沉淀过夜，离心制得沉淀，然后用乙醇和丙酮各洗涤2次，干燥，得粗多糖。
2.5?发酵液多糖的测定[4]
2.5.1?制作葡萄糖标准曲线?将葡萄糖标准溶液（100 μg/ml）1.0、2.0、
3.0、
4.0、
5.0 ml加入试管中，加蒸馏水至10.0 ml。
用移液管分别移取2.0 ml加入比色管中。
滴入重蒸苯酚溶液1.0 ml，震动摇晃均匀，立即加入浓硫酸5.0 ml摇匀，静置10 min，水浴加热30 min，温度40℃。
在波长490 nm处，测定每个管的吸光度，得a值（以2.0 ml
蒸馏水作为空白）。
横坐标为蔗糖浓度，纵坐标为吸光度a做标准曲线，制得回归方程：y=0.004 3x+0.029 9。
2.5.2?测定样品含量?将干燥至恒重的发酵液精多糖50 mg，用减量法称取后放置在100 ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，作标号ⅰ。
取样品液ⅰ 1.0 ml，按刚制得的标准曲线方法，测定多糖溶液a值，平行测定3次。
计算得出含量[5]。
3?结果
3.1?虫草多糖含量测定
冬虫夏草的产地不同，提取率也不同，其有效成分多糖的含量用苯酚一硫酸法测定结果也不同，测定结果见表1。
3.2?与蒽酮一硫酸法比较
取北虫草子实体，用蒽酮一硫酸法进行测定，得到4个样品的多糖含量数值分别为3.29%、3.50%、3.39%、3.30%，但是这种测定方法对于测定虫草发酵液的胞外多糖重现性不好，对测定结果的少部分蛋白影响较大。
4?讨论
4.1?浓硫酸对测定结果的影响
必须快速滴加浓硫酸，这样才能使高温瞬时产生，有利于多糖完全水解，如果滴加硫酸过慢，则不能产生高温条件，则多糖水解不完全，会给测定结果造成误差[6]。
4.2?苯酚对测定结果的影响
苯酚应配制成一定浓度的溶液，并且在整个检测过程中滴加苯酚动作要迅速，避免苯酚氧化变性，对测定结果产生影响。
现在虫草多糖的检测方法中，主要测定是粗多糖含量。
用苯酚一硫酸法测定时，不需要虫草多糖的纯品和高级精密仪器，优点是灵敏度高、准确性高、精确度高、重现性好、简单快速等优点，可以作为对虫草多糖含量测定的最佳选择方法之一。
[参考文献]
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[3] 来永斌，王琦，孙月.蛹虫草多糖含量的测定及分析[j].中成药，2001，23（7）：517-518.
[4] 闫文娟，李泰辉，唐芳永.广东虫草多糖的提取及含量测定[j].华南农业大学学报，2004（30）：53-56.
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（收稿日期：2012-08-07）。