2种佐剂在传染性法氏囊病基因工程亚单位疫苗中的应用比较
鸡传染性法氏囊病亚单位灭活疫苗免疫SPF鸡琼扩抗体效价与攻毒保护相关性试验
鸡传染性法氏囊病亚单位灭活疫苗免疫SPF鸡琼扩抗体效价与攻毒保护相关性试验王雷;凌红丽;曲信芹;张园园【摘要】为了探讨鸡传染性法氏囊病(IBD)亚单位灭活疫苗琼扩抗体效价与攻毒保护之间的相关性,为血清学效力检验标准的制定提供依据,用试验室试制的3批鸡传染性法氏囊病基因工程亚单位灭活疫苗以不同剂量分别免疫21日龄SPF鸡,免疫后21日采血分离血清并用强毒攻击,将每只鸡的琼扩抗体效价与攻毒保护情况一一对应,结果显示IBD琼扩抗体效价不低于1:1的鸡均可以抵抗强毒攻击,表明琼扩抗体效价与攻毒保护具有一定的相关性.【期刊名称】《山东畜牧兽医》【年(卷),期】2016(037)002【总页数】2页(P2-3)【关键词】鸡传染性法氏囊病;琼扩抗体效价;攻毒保护;相关性【作者】王雷;凌红丽;曲信芹;张园园【作者单位】青岛蔚蓝生物股份有限公司山东青岛 266114;青岛蔚蓝生物股份有限公司山东青岛 266114;青岛蔚蓝生物股份有限公司山东青岛 266114;青岛蔚蓝生物股份有限公司山东青岛 266114【正文语种】中文【中图分类】S858.31鸡传染性法氏囊病(infectious bursal disease, IBD)是危害雏鸡的一种急性、高度接触性、病毒性传染病。
病原为鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease irus, IBDV)[1]。
目前该病已遍布全球养禽地区，在工业化养禽业发达地区尤为严重。
邝荣禄于1979年在广州首先发现我国存在该病，此后北京、上海等地发现了该病[2, 3]。
1990年以后，我国报道分离到IBD超强毒株和变异毒株，使该病出现了新的流行特点，给我国养禽业造成了很多的经济损失[4]。
常规疫苗存在的潜在免疫病理作用是无法克服的缺陷，对病毒不断变异也束手无策。
另一方面，基因工程疫苗或药物的生产越来简易并趋于产业化，这些都是传统疫苗无法比拟的。
VP2蛋白是IBDV的主要结构蛋白和宿主保护性抗原，也是病毒衣壳的主要成分，与病毒中和抗体的诱导与识别、病毒毒力变异、病毒的抗原漂移、细胞凋亡的诱导等有很大关系[5, 6]，为此，采用近年流行的超强毒株制备了IBDVP2亚单位灭活疫苗。
鸡传染性法氏囊病与巴氏杆菌病二价活载体疫苗的免疫原性及免疫效力研究
苗研 发 问世 ，这些 疫苗 多 以病‘ 毒为 活载 体 ，例 如 １ ９ ９ ５年报 道 的 Ｄａ ｒ ｔ ｅ ｉ ｌ 等在 实验室 条件 下 成 功构 建 的能表 达 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ ＶＰ ２抗 原 的重 组 火鸡疤 疹 病毒 ＨＴＶ 活疫苗 ［ ４ ］ ， 由于 Ｐ Ｍ 能被 动物 机体 的 免 疫 细胞吞 噬 ，具有 良好 的抗原 呈 递 性 能 ，使其 有 望 成 为 活菌 载 体 疫 苗 ，重 组 Ｉ Ｂ Ｄ 疫苗 与 Ｐ Ｍ 组 合 成
Ｂ ｕ ｒ ｓ ａ ｌ Ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ，Ｉ Ｂ Ｄ）是 由双链 Ｒ ＮＡ病 毒科 的传 染 性 法 氏囊 病 病 毒 （ Ｉ ｎ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｕ ｓ Ｂ ｕ ｒ ｓ ａ ｌ Ｄｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ Ｖｉ ｒ ｕ ｓ ， Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ）所 引起 的一种 鸡 的急性 暴发 性传 染病 ］ ，表 现为 中枢 免疫 器 官法 氏囊 的淋 巴细 胞坏 死 ，发病 率
水平不高。
［ 关 键 词 ］ 多杀 性 巴 氏杆 菌 （ Ｐ Ｍ） ；传 染 性 法 氏 囊 病 （ Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ） ；ＶＰ ２表 达 ； 活 载体 疫 苗 ； 免 疫试 验 ［ 中图 分 类 号 ］ ￥ ８ ５ ２ ． ４ ［ 文献标志码］Ａ ［ 文章编号］１ ６ ７ ３ —１ ４ ０ ９（ ２ ０ １ ３ ）０ ５ —０ ０ ４ ４— ０ ５
法 氏囊 病 的 二价 活 菌 载体 疫 苗 的 免 疫 效 力 。 结 果 显 示 ： （ １ ） 工 程 菌 体 外 表 达 可 用 琼 脂 双 向 免 疫 扩 散 实 验
法氏囊活性肽BPP—Ⅱ对传染性法氏囊疫苗的免疫增强作用
法氏囊活性肽BPP—Ⅱ对传染性法氏囊疫苗的免疫增强作用作者：高蕾蕾张聪张巫凡王臣来源：《农家科技下旬刊》2016年第09期摘要：本试验旨在研制具有良好免疫效果的免疫活性肽。
经人工合成法氏囊活性肽BPP-Ⅱ，将其作为佐剂添加到传染性法氏囊疫苗中免疫雏鸡。
通过对免疫雏鸡法氏囊指数和AGP 抗体水平的测定，来评价BPP-Ⅱ对传染性法氏囊疫苗的免疫效果的影响，结果表明BPP-Ⅱ对传染性法氏囊疫苗有显著免疫增强作用，为进一步的研究奠定了基础。
关键词：法氏囊；BPP-Ⅱ；法氏囊指数；AGP抗体传染性法氏囊弱毒疫苗，是一种常规传染性法氏囊疫苗，其免疫效果并不理想，仅能诱导机体的体液免疫应答而不能有效的刺激机体的细胞免疫应答。
因此如何研发一种修护受损（免疫抑制作用）免疫器官以及保障甚至激发机体内在免疫保护力的免疫佐剂，显得尤为重要和迫切。
法氏囊活性肽BPP-Ⅱ是法氏囊中新分离出来的一种新型的活性小肽[1—2]，结构简单，分子量小，无化学毒性，无免疫原性，制备简单，既可以从禽类的法氏囊分离，也可以人工合成。
本研究旨在评价BPP-Ⅱ对传染性法氏囊疫苗的免疫效果的影响，为开发一种新型免疫佐剂提供实验依据和理论基础。
一、材料与方法1.试验材料健康未免疫的1日龄来航鸡105只，购于洛阳峪口禽业有限公司；传染性法氏囊病弱毒苗购于辽宁益康生物制品有限公司；实验用法氏囊毒株为中国标准强毒株（BC6/85株100ELD50/只）由本实验室保存。
2.法氏囊活性五肽BPP-Ⅱ的设计及合成法氏囊活性五肽（BPP-Ⅱ）序列为Met-Thr-Leu-Thr-Gly，由上海科肽生物科技有限公司合成，纯度95%。
3.动物分组与免疫将105只鸡分为三组：PBS空白组、单独疫苗组、疫苗+BPP-Ⅱ组，每组35只。
采取注射免疫。
首免后间隔两周进行第二次免疫。
在首疫后14、21 d，对每组鸡进行心脏采血。
将采到的血液分离血清并保存。
4.雏鸡法氏囊指数的测定首免后14 d、21 d先从各组鸡笼随机抽取5只鸡，解剖后取鸡的法氏囊分装于EP管经电子秤称重后置于4℃冰箱保存。
鸡传染性法氏囊病的综合防控
养殖与饲料2023年第5期鸡传染性法氏囊病（IBD ）作为一种急性、高度接触性传染病，病原是传染性法氏囊病病毒（IBDV ），IBDV 可严重损伤法氏囊组织内未成熟的B 淋巴细胞，从而引起免疫抑制，鸡只极易继发大肠杆菌、新城疫（ND ）等细菌性和病毒性疾病，并且能够降低鸡机体对其他疫苗体液免疫应答能力，导致免疫失败[1]。
IBD 传播迅速、病程短，具有高致死率，已成为危害养鸡业的重要疾病之一。
1病原及流行特点1）IBDV 是一种双链RNA 病毒，其血清型有IBDV 血清I 型、IBDV 血清Ⅱ型（对鸡无致病性），IBDV 血清I 型根据抗原特性和致病性不同可分为经典毒株、变异毒株和超强毒株(vvIBDV)[1]，3种类型的毒株目前均在国内流行，以vvIBDV 流行为主，但从2019年国内蛋（肉）鸡群中陆续发现IBDV 新型变异株（nv-IBDV ），目前已在全国范围内分布或存在，且nv-IBDV 流行比例呈逐渐上升态势，特别是2021年以后，nv-IBDV 流行比例占90%左右[2]。
2）IBDV 无囊膜，对外界环境具有较强的耐受性，可在鸡舍及周边环境中长期存活。
IBD 的传染源主要是发病鸡、带毒鸡以及被IBDV 污染的鸡舍等，健康鸡可通过直接接触传播或通过被IBDV 污染的粪便、垫料、饲料、饮水、用具以及人员和车辆等间接传播[3]。
3）IBD 主要侵害雏鸡（3~12周龄）和青年鸡。
与蛋鸡相比，肉鸡的发病率较高，以2~4周龄肉鸡最易感染。
IBD 常呈地方性流行，且无显著季节性，全年均可发生。
2临床症状IBD 的潜伏期为2~3d 。
鸡场初发IBD 疫情时，通常雏鸡群大批突然发病，病鸡自啄肛门，腹泻，排灰白色水样稀粪，污染泄殖腔周围的羽毛。
随着病程的发展，病鸡精神沉郁，缩颈闭目，羽毛蓬乱，双翅下垂，体温升高，喜扎堆，采食量下降，饮水量增加。
发病后期，病鸡颈部或全身震颤，步态不稳，重症病例趴卧不起，机体明显脱水且极度虚弱，最终衰竭而亡。
3种不同类型佐剂的猪瘟E2基因工程亚单位疫苗免疫效果的比较研究
3种不同类型佐剂的猪瘟E2基因工程亚单位疫苗免疫效果的比较研究李天增;王遵宝;王华龙;贺笋;李俊辉;徐龙飞;廖勇【期刊名称】《畜牧与兽医》【年(卷),期】2022(54)3【摘要】为了筛选用于制备猪瘟E2基因工程亚单位疫苗的佐剂,用水佐剂、双相佐剂以及油包水佐剂分别制备了3种猪瘟E2基因工程亚单位疫苗,在猪上进行了免疫效果的评价。
本试验选取4~5周龄猪瘟病毒病原、抗体阴性猪40头,随机分为8组,每组5头,其中3组用于3种不同佐剂制备的亚单位疫苗的单次免疫效果评价,3组用于疫苗的二次加强免疫效果评价,1组为商品化猪瘟活疫苗对照,1组为空白对照。
免疫后进行临床观察、抗体水平监测和免疫效力评价,观察各组仔猪的不良反应情况。
结果显示:3种不同类型佐剂制备的猪瘟E2基因工程亚单位疫苗接种猪后均无任何不良反应,均能诱导机体产生良好的中和抗体,油包水佐剂制备的疫苗与另外2种佐剂制备的疫苗相比,免疫空窗期短,免疫持续期长,中和抗体水平高,在临床使用上更具优势。
本研究为商品化亚单位疫苗佐剂的选择提供了重要的数据支持。
【总页数】4页(P79-82)【作者】李天增;王遵宝;王华龙;贺笋;李俊辉;徐龙飞;廖勇【作者单位】天康生物制药有限公司【正文语种】中文【中图分类】S851.3【相关文献】1.不同佐剂对猪附红细胞体亚单位疫苗免疫效果的影响2.不同佐剂对猪附红细胞体亚单位疫苗免疫效果的影响3.在猪蓝耳病病毒和猪圆环病毒感染猪场利用猪瘟E2基因工程亚单位疫苗控制猪瘟的案例分析4.3种不同类型佐剂的猪圆环病毒2型亚单位灭活疫苗免疫效果的比较研究5.猪瘟E2基因工程亚单位疫苗使用效果分析因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
传染性法氏囊病病毒C4毒株VP2基因的原核表达及生物信息学分析
传染性法氏囊病病毒C4毒株VP2基因的原核表达及生物信息学分析王洁琼;赵玉杰;周云飞;黄宗梅;陈盼盼;周薇帆;刘琳;李新生【摘要】This study was aimed to investigate the relationship between the virulence characteristics of infectious bursal disease virus(IBDV) C4 strain and its VP2 amino acid sequence.The RNA of IBDV C4 strain was extracted,and its VP2 gene was amplified by RT-PCR.VP2 nucleotide sequences and deduced amino acids of different virulent IBDV strains were compared.At the same time,prokaryotic expression vector pET-32a(+) was used to express the VP2 gene.The expression of recombinant VP2 protein was detected by SDS-PAGE and Western blotting.The results showed that the VP2 gene of IBDV C4 strain belonged to the very virulent infectious bursal disease virus (vvIBDV) in evolutionary relationship,the VP2 nucleotides homology between IBDV C4 strain and other vvIBDV strains were 98.1％ to 98.7％,and there were no mutations in S-W-S-A-SGS (326-332 amino acids) and 222(A),256(I),294(I) and 299(S).The VP2 amino acid sequence of IBDV C4 strain was consistent with the characteristics of other vvIBDV strains.However,there were three differences amino acids sites at 201(D/G),281(G/R) and 313(V/A) between the amino acids of the C4 strain and the very virulent strain UK661.And the change of 281(R) was in the small hydrophilic region of 279 to 290,which was related to the antigenicity of the virus;The recombinant VP2 protein molecular weight expressed in Escherichia coli BL21 was about 67 ku.This study provided abasis for further research on antigenic changes resulting from amino acid variation of 201(G),281 (R) and 313(A).These results indicated that the VP2 gene of the IBDV C4 strain was consistent with the major characteristics of the vvIBDV strain VP2 gene.The difference of three amino acid sites in the vvIBDV strain C4 might be related to the evolution of virulence of IBDV strain in China.%试验旨在研究一株传染性法氏囊病病毒(IBDV)河南分离株的毒力特征及其与VP2氨基酸序列特征的关系.通过提取IBDV C4株RNA,利用RT-PCR扩增其VP2基因,与其他不同毒力IBDV毒株进行核苷酸及推导的氨基酸序列比对分析,同时使用pET 32a(+)原核表达载体表达VP2基因,用SDS PAGE和Western blotting 检测重组VP2蛋白的表达.结果显示,扩增的IBDV C4株的VP2基因序列在进化关系上属于超强毒力IBDV(vvIBDV)分类,与选取的vvIBDV毒株代表毒株核苷酸序列同源性在98.1％～98.7％之间,其七肽区为S-W-S-A-S-G-S(第326 332位氨基酸)符合超强毒株特征,且222(A)、256(I)、294(I)和299(S)位氨基酸与超强毒力毒株的4个特征性氨基酸一致;但IBDV C4毒株的VP2蛋白氨基酸序列与超强毒力毒株代表毒株UK661相比,201(D/G)、281(G/R)、313(V/A)位氨基酸不同,其中281位氨基酸的改变处于279-290的小亲水区内,与病毒抗原性有关;构建的pET-32a(+)-VP2原核表达载体在大肠杆菌BL21感受态细胞上表达出分子质量约67 ku的重组VP2蛋白,为进一步比较201(G)、281(R)、313(A)位氨基酸差异导致的抗原特性改变提供了研究基础.本试验结果表明,IBDV C4株VP2基因与vvIBDV毒株VP2基因的主要特性一致,但也有3处氨基酸与代表毒株UK661存在差异,这些改变可能与中国IBDV毒株毒力的进化有关.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2017(044)012【总页数】7页(P3585-3591)【关键词】传染性法氏囊病病毒(IBDV);VP2;分子特征;原核表达【作者】王洁琼;赵玉杰;周云飞;黄宗梅;陈盼盼;周薇帆;刘琳;李新生【作者单位】河南农业大学牧医工程学院,郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,郑州450002;河南农业大学牧医工程学院,郑州450002【正文语种】中文【中图分类】S852.65-9.4传染性法氏囊病(infectious bursal disease，IBD)是由传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus，IBDV)引起的，危害鸡和火鸡的一种急性、高度接触性传染病[1]。
鸡传染性法氏囊病又名腔上囊炎
鸡传染性法氏囊病又名腔上囊炎、传染性囊病，是由病毒引起的雏鸡的一种急性高度接触性传染病，临床上以法氏囊肿大、肾脏损害为特征。
该病于1957年在美国特拉华州甘布罗地区的肉鸡群中首次发现，因此又称甘博罗病。
目前本病作为危害养禽业的三大主要疫病之一，呈世界性分布，该病引起雏鸡的免疫抑制，使病鸡对大肠杆菌、腺病毒、沙门氏菌、鸡球虫等病原更易感，对马立克疫苗、新城疫疫苗等接种的反应能力下降，因此该病对养鸡业造成了巨大的危害。
(一)病原病毒属于双核糖核酸病毒，能在鸡胚及鸡胚成纤维细胞、肾细胞、非洲绿猴肾细胞及幼素领猴肾细胞等各种细胞上生长良好，并产生病理变化。
病毒抵抗力强，能耐受乙醚、氯仿、高温及胰酶的处理，对紫外线有抵抗力，56℃5小时、60℃30分钟均不能使其失活，耐酸(pH2)但不耐碱(pH12)。
1％石炭酸、甲醇、福尔马林或70％酒精处理1小时可杀死病毒，3％石炭酸、甲酚或0.1％汞溶液处理30分钟也可灭活病毒，0.5％氯化铵作用10分钟能杀死病毒。
病毒分为两个血清型，即Ⅰ型和Ⅱ型。
血清Ⅰ型对鸡致病，Ⅱ型对火鸡致病。
Ⅰ型又存在不同的亚型，两型之间交叉免疫保护性极差，但亚型之间有一定的交叉保护性。
(二)流行病学3～6周龄的鸡对本病易感，3周龄以下的雏鸡受感染后不表现临床症状，但引起严重的免疫抑制，火鸡和鸭也能自然感染。
该病是高度接触性传染的，病毒能持续存在于鸡舍的环境中。
饲养过病鸡的鸡舍在清除病鸡之后的54～122天，对其它鸡仍有感染性。
病鸡舍的小粉甲虫、蚊子、鼠等均有感染性。
经呼吸道、消化道及种蛋可感染本病，经常是通过被污染的饲料、饮水、垫料、粪便、尘土、鸡舍用具、人员衣服、昆虫等途径而传播。
各种品种的鸡均可感染，来航鸡尤为易感，在易感鸡群中，感染率高达几乎100％，发病率为7％～10％，有时达30％以上，死亡率不定，但在来航鸡可能高达50％。
本病无明显的季节性，一年四季均可发生。
(三)临床症状在易感鸡群中，本病往往突然发生，潜伏期短，感染后2～3天出现临床症状，早期症状之一是鸡啄自己的泄殖腔现象。
传染性法氏囊病病毒FX株VP2基因的克隆、表达及其免疫原性研究的开题报告
传染性法氏囊病病毒FX株VP2基因的克隆、表达及其免疫原性研究的开题报告一、研究背景法氏囊病是一种严重的传染性疾病，在家禽养殖业中造成了重大的危害。
目前法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus，IBDV）的疫苗通过在禽体内感染后产生免疫效果，但是由于疫苗制备的复杂性以及其多种限制因素的存在，使得疫苗的生产和应用受到很大的制约。
因此，利用重组DNA技术对IBDV进行研究和改良，以及构建更加有效的疫苗，成为了当前研究的热点。
其中，VP2基因是IBDV中最为重要的免疫原，其功能区域与抗体识别有紧密的关系，是IBDV疫苗研究的重点。
本研究拟对IBDV FX株 VP2基因进行克隆、表达和免疫原性研究，为研究IBDV 的毒力和免疫应答机制提供理论和实验基础。
二、研究内容和目标1.构建含有IBDV FX株VP2基因的表达载体通过PCR扩增IBDV FX株中VP2基因，将其克隆至表达载体中，如pET28a，实现转化至宿主菌中，并筛选出正常表达的分泌型蛋白。
2.表达过程中VP2基因的克隆和表达产物的检测将成功克隆的IBDV FX株VP2基因表达载体转化于大肠杆菌宿主菌中，通过SDS-PAGE、Western blot等方法检测所得表达产物的分子量与特异性。
并验证其活性、稳定性等其他特性。
3.研究VP2基因抗原性分析将所得表达产品注射于动物，在检测所得血清抗体反应的基础上，进一步利用酶联免疫吸附实验等结合性技术进行VP2抗原性的分析。
三、研究意义1. 深入揭示VP2基因在IBDV中的功能特性、反应机制等，进一步探究法氏囊病与宿主免疫抗性的关系，为研究病毒感染的机制提供新的理论基础。
2. 为减轻法氏囊病对家禽养殖的严重危害，构建高效、安全、可靠的新型IBDV 疫苗，提供实验依据。
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2种佐剂在传染性法氏囊病基因工程亚单位疫苗中的应用比较蔡联燊;荣俊【摘要】为提高疫苗佐剂在鸡传染性法氏囊病(IBD)基因工程亚单位疫苗制备中的有效性和安全性,采用2种佐剂IBDV VP2抗原效价的4种疫苗:AGP效价分别为1:32和1:16的白油佐剂IBD疫苗和AGP效价分别为1:32和1:16的603新型纳米佐剂IBD疫苗,以及2组不同佐剂的对照制剂,将疫苗以2种不同剂量分别注射接种SFP鸡,进行了免疫效果与安全性对比试验.免疫效果试验结果表明:白油佐剂组2种不同抗原剂量刺激产生的抗IBDV VP2抗体水平均高于对应的等剂量的纳米佐剂制剂.并且白油佐剂组抗体水平从14d到21d呈上升趋势,纳米佐剂组14d后抗体水平上升不明显或呈下降趋势.安全性对比试验结果表明:纳米佐剂IBD亚单位疫苗的安全性明显优于白油佐剂.该结果可为IBD亚单位疫苗生产工艺的改进提供参考.【期刊名称】《长江大学学报（自然版）理工卷》【年(卷),期】2011(008)003【总页数】3页(P236-238)【关键词】603新型纳米佐剂;白油佐剂;法氏囊病亚单位疫苗;免疫;SPF鸡;效价【作者】蔡联燊;荣俊【作者单位】长江大学生命科学学院,湖北,荆州,434025;长江大学生命科学学院,湖北,荆州,434025【正文语种】中文【中图分类】S852.5+3鸡传染性法氏囊病( infectious bursal disease, IBD )是一种急性、高度接触传染性的病毒病。
它是由传染性法氏囊病病毒( infectious bursal disease virus, IBDV)引起的鸡的免疫抑制性传染病[1]。
IBD给家禽业造成巨大经济损失，尚无特效药可以治疗，目前主要应用疫苗进行预防。
所用疫苗主要为灭活疫苗和冻干活疫苗以及新型的基因工程亚单位疫苗[2]，其中传染性法氏囊病基因工程亚单位疫苗具有较好的免疫原性，副作用相对较低，是一种应用前景广阔的禽病疫苗[3]。
疫苗佐剂是动物疫苗中的重要组成部分，是一种非特异性免疫增强剂，可增强机体的免疫应答能力或改变免疫应答的类型。
佐剂一方面能增强疫苗免疫效果，另一方面也会引起被免疫动物产生一些局部或全身副反应。
选择合适的佐剂，对于提高疫苗免疫效果和减少不良反应有重要的意义[4]。
为了进一步提高传染性法氏囊病基因工程亚单位疫苗的免疫效果和安全性，本研究以SPF鸡为试验动物，对2种不同的动物疫苗佐剂：白油佐剂和603新型纳米佐剂应用于传染性法氏囊病亚单位疫苗中的免疫效果和安全性进行了比较，现将结果报告如下。
1.1 材料白油佐剂：由94%(V/V)矿物油、6%(V/V)的Span-80，2%(m/V)硬脂酸铝配置而成；603新型纳米佐剂：由赛百瑞(北京)生物技术有限公司提供。
VP2蛋白：以长江大学大学生命科学学院分子生物学实验室保存的IBD亚单位疫苗工程菌种(专利菌种)进行诱导表达而得[5]，经过纯化后作为制备疫苗用抗原。
IBDV琼脂免疫扩散试验AGP检测用抗原及阳性血清：购自中国兽医药品监察所。
所用SPF鸡由购自北京梅里亚维通实验动物技术有限公司的SPF种鸡蛋，在实验室以实验用孵化器进行孵化而得，孵出后放入消毒的隔离器中进行饲养和试验。
1.2 不同佐剂IBD亚单位疫苗的制备本研究共制备4种传染性法氏囊病亚单位疫苗：分别是VP2抗原效价为1∶32和1∶16的白油佐剂疫苗，分别编号为1号疫苗和2号疫苗，抗原效价为1∶32和1∶16的603纳米佐剂疫苗，分别编号为3号疫苗和4号疫苗。
并设2组不同佐剂配置的空白对照疫苗，白油佐剂对照疫苗编号为5号疫苗，纳米佐剂对照疫苗编号为6号疫苗。
各种疫苗成分详见表1。
制备白油佐剂传染性法氏囊病亚单位疫苗时，将制备好的VP2抗原和吐温-80，充分混匀，30℃，静置60min。
再与制备好的白油佐剂按表1比例混合，在乳化机内进行乳化。
分装后2～8℃保存[6]。
制备纳米佐剂传染性法氏囊病亚单位疫苗时，按表1将各组分混匀，在乳化机内进行乳化。
1.3 佐剂的免疫效果试验将36只45日龄SPF鸡分成6组(A、B、C、D、E、F)，每组6只。
A～F各组鸡分别注射1～6号疫苗，即其中A组、B组为白油佐剂组，C组、D组为纳米佐剂组，E组、F组为对照组。
所有鸡均颈部皮下注射，剂量为0.2ml/只。
在免疫接种14d、21d后分别对试验鸡进行采血，血样8000 r/min离心5 min分离血清，参照文献[7]通过琼脂免疫扩散试验检测血清IBDV抗体。
1.4 佐剂的安全性试验将36只45日龄SPF鸡随机分成6组(a、b、c、d、e、f)，每组6只。
a～f各组鸡分别注射1～6号疫苗，即其中a组、b组为白油佐剂组，c组、d组为纳米佐剂组，e组、f组为对照组。
所有鸡均颈部皮下注射，剂量为1ml/只。
试验鸡安全性检测通过以下2个方面进行判断：①观察鸡在免疫接种后的食欲、精神状态及其恢复情况；②在免疫接种后21d，对鸡进行剖杀，观察注射部位病理变化情况。
2.1 不同佐剂IBD亚单位疫苗的免疫效果各组试验鸡免疫接种14d、21d后血清IBDV抗体检测结果见表2。
由表2可知，白油佐剂组2种不同抗原剂量刺激产生的抗IBDV VP2抗体水平均高于对应的等剂量的纳米佐剂组。
白油佐剂的2个疫苗免疫组中，抗原量增加使抗体的水平提高明显，如在免疫14d时，注射抗原效价为1∶32的疫苗的SPF鸡，其IBDV抗体均效价为28.8，而注射抗原效价1∶16的疫苗的SPF鸡，其IBDV抗体均效价为19.6。
但该规律在纳米佐剂疫苗中表现并不明显，如在免疫14d时，注射抗原效价1∶32的纳米佐剂疫苗的SPF鸡，其IBDV抗体平均效价为9.6，而注射抗原效价1∶16的纳米佐剂疫苗的SPF鸡，其IBDV抗体均效价为10.4。
试验SPF鸡注射白油佐剂疫苗后14d到21d期间，IBDV抗体水平呈明显上升趋势，而注射纳米佐剂疫苗后14d到21d期间，抗体水平维持不变或下降。
说明603号纳米佐剂为水性佐剂，注射进入动物体后迅速吸收，很快使抗体达到峰值，然后又迅速消退。
此结果表明，白油佐剂传染性法氏囊病亚单位疫苗的免疫效果明显优于纳米佐剂传染性法氏囊病亚单位疫苗，并且在免疫后抗体水平稳定性方面，也是前者明显优于后者。
2.2 不同佐剂IBD亚单位疫苗的安全性不同组SPF鸡注射不同佐剂疫苗后的全身反应没有明显区别。
24 h内基本采食减少，行动迟缓，应激性较差；24～48 h，采食增加，行动应激逐渐恢复；48 h后采食及精神基本恢复正常。
在免疫21d，对SPF鸡进行折颈处死后剖检，以肿块大小或其他病变≤1cm×1cm为安检合格，检测结果见表3。
从剖检结果来看，2种不同佐剂的副反应情况并不相同，白油佐剂组的a组和b组的疫苗吸收情况不理想，形成肉芽病变肿块；而纳米佐剂组的c组和d组的疫苗吸收较好，未形成肉芽病变肿块。
并且603新型纳米佐剂组的病变范围要明显小于白油佐剂组。
在白油佐剂组中，a组的安检合格率要略低于b组；在纳米佐剂组中，c组和d组的安检合格率没有明显区别。
此结果表明，纳米佐剂传染性法氏囊病基因工程亚单位疫苗与白油佐剂法氏囊病基因工程亚单位疫苗比较，前者产生较小的副反应，安全性明显优于后者。
本研究结果表明：在增强免疫效果方面，白油佐剂要明显优于纳米佐剂；在安全性方面，纳米佐剂要明显优于白油佐剂。
白油佐剂为油乳佐剂，它的作用机制是抗原包被在油相形成的微结构中，使之形成贮存库而缓慢释放，刺激机体免疫细胞持续性产生抗体[8]，所以使动物获得较高的抗体水平。
但是，白油佐剂制备的疫苗在动物体内不易扩散吸收，所以产生较大的局部副反应。
603新型纳米佐剂是采用纳米技术加工而成的纳米颗粒，其直径通常介于50～200nm之间[9]，试验结果表明其安全性好、免疫效果差，原因可能由于其为水性佐剂，在动物体内易于扩散，所以在局部产生的副反应较小；但是也由于其易于扩散的特性，所以无法持续刺激动物免疫系统而得到较高的抗体水平。
在选择佐剂的时候，应根据不同佐剂的特性和不同疫苗制备的需要，选择合适的佐剂。
【相关文献】[1]Wyeth P J, Cullen G A. Maternally derived antibody-effect on susceptibility of chicks to infectious bursal disease[J]. Avian Pathol, 1976, 5: 253-260.[2]赵怀龙,贾世玉,陈如明. 鸡传染性法氏囊病基因工程疫苗研究进展[J]. 中国生物制品学杂志, 2005,18(11):538-540.[3]程太平,荣俊,孙中杰. 传染性法氏囊病重组亚单位疫苗的田间试验[J]. 吉林畜牧兽医,2007,28(8):8-10.[4]穆杨,周丽梅,侯宏虎,等. 三种佐剂对鸡体液免疫影响的比较[J]. 动物医学进展, 2007,28(10):37-39.[5]Rong J, Jiang T, Cheng T P, et al. Large-scale manufacture and use of recombinant VP2 vaccine against infectious bursal disease in chickens[J]. Vaccine,2007, 25:7900-7908.[6]程太平,荣俊,王怀林. 传染性法氏囊病重组亚单位疫苗保存期试验[J]. 安徽农业科学,2006,34(21):5554-5555.[7]白文彬,于康震. 动物传染病诊断学[M]. 北京:中国农业出版社,2002:138-142.[8]赵萍,储岳峰,高鹏程,等. 免疫佐剂的研究现状及发展动态[J]. 中国兽禽种业,2008,(13):66-68.[9]赵卓,潘延钵,邓玉芹,等. 用新型纳米佐剂配置猪伪狂犬病灭活疫苗的免疫效果研究[J]. 动物保健品, 2010,(1):144-146.。