胶乳透射免疫比浊法
胶乳免疫比浊法与荧光免疫层析法的原理
胶乳免疫比浊法与荧光免疫层析法的原理胶乳免疫比浊法与荧光免疫层析法是两种常用的免疫学检测方法，它们在医学领域中起着重要的作用。
胶乳免疫比浊法主要利用抗原与特定抗体结合后，使得溶液浑浊度增加的特性，通过比浊度的变化来判断样品中是否含有特定抗体或抗原。
而荧光免疫层析法则是利用特定荧光标记的抗体与抗原结合后，在荧光检测器上显示荧光信号的原理。
这两种方法在实际应用中各有优劣之处，本文将对这两种方法的原理、应用和发展进行探讨。
首先，胶乳免疫比浊法是一种比较传统的免疫学检测方法，其原理比较简单，操作相对容易。
在这种方法中，首先需要将待检测的抗原与特异性抗体混合，形成抗原-抗体复合物。
当复合物形成后，会导致溶液的浑浊度增加，通过光学方法检测溶液的浊度变化，从而判断样品中是否含有特定的抗体或抗原。
这种方法具有灵敏度高、速度快和成本低的特点，被广泛应用于临床、生物学和环境监测等领域。
然而，胶乳免疫比浊法也存在一些局限性，例如其灵敏度有一定的限制，只能检测较高浓度的抗原或抗体。
另外，由于比浊法是通过测定溶液的浑浊度来判断样品中的抗原或抗体，对于复杂样品的检测可能存在干扰。
因此，在一些需要更高灵敏度和特异性的应用场景下，研究人员开始寻找更加先进的免疫检测方法，其中荧光免疫层析法便是一种备受关注的新型技术。
荧光免疫层析法是一种结合了免疫学和荧光技术的先进检测方法，其原理是利用特定荧光标记的抗体与抗原结合后，在荧光检测器上显示荧光信号。
荧光免疫层析法具有灵敏度高、特异性好、多样性强等优势，被广泛用于生物医学、食品安全和环境监测等领域。
相比于胶乳免疫比浊法，荧光免疫层析法具有更高的灵敏度和特异性，能够检测到低浓度的抗原或抗体，并且可以应用于更加复杂的样品中。
荧光免疫层析法的应用范围也在不断扩大，不仅可以用于传统的生物学检测领域，还可以应用于分子诊断、药物研究和生化反应动力学等领域。
在医学诊断领域，荧光免疫层析法已经成为一种常用的检测方法，可以用于检测各种疾病的标志物，如癌症标志物、感染性疾病的诊断等。
胶乳增强透射比浊法检验Mb及临床意义
胶乳增强透射比浊法检验Mb及临床意义摘要】血清肌红蛋白(Mb)存在于心肌与其他肌肉组织中，其分子量为17 500，血清肌红蛋白是急性心肌梗死(AMI)患者升高的最早、标志物之一。
血清肌红蛋白测定方法有很多，由于分光光度法、电泳法及层析法不能测定低于微克水平的Mb，现已不使用。
免疫化学法较灵敏，但抗血清必须是对Mb特异的。
放射免疫试验灵敏度高，对流免疫电泳是一种定性方法，且灵敏度较低，不适宜检测心肌梗死。
乳胶凝集试验是个半定量试验，是用肉眼判断终点，具有一定的主观性，而且一些含有高浓度类风湿因子的血清会产生干扰。
放射免疫试验灵敏度高，特异性强，但使用放射性核素，现已少用。
胶乳增强透射比浊法灵敏度高，特异性好，测定速度快，适用于各型生化自动分析仪，现已在临床上普遍采用。
我们测定了30例AMI患者在3～6小时、12小时、24小时和48小时的Mb水平，观察血清肌红蛋白在急性心肌梗塞)时升高的时间特点及不同部位心肌梗塞之间水平的差异，结论表明：对于那些发病早、临床症状和心电图不典型的AMI患者应尽早检测Mb,以免贻误治疗时机。
同时， Mb也可作为评估AMI预后和判定梗塞面积的一个良好指标。
【关键词】血清肌红蛋白检验临床应用1 临床资料测定了30例AMI患者在3～6小时、12小时、24小时和48小时的Mb水平，结果提示血清Mb在AMI患者发病3～6小时即明显升高，阳性率已达80%；12小时水平最高，阳性率已达100%。
在四种不同部位梗塞患者中，以急性前壁梗塞患者血清Mb水平最高、持续时间最长，病死率最高；其次为非Q波型梗塞患者。
2 原理 Mb致敏胶乳颗粒是大小均一的聚苯丙烯乳胶颗粒悬液，颗粒表面包被有兔抗人Mb抗体。
样本中的Mb与胶乳颗粒表面的抗体结合后，使相邻的胶乳颗粒彼此交联，发生凝集反应产生浊度。
该浊度与样本中的Mb浓度呈正比，在570 nm处测定吸光度，可计算样本中Mb的浓度。
3 方法3.1试剂I甘氨酸缓冲液(pH 9.0)，NaN31．0 g／L。
一种胶乳增强免疫比浊试剂、稳定方法及应用与流程
一种胶乳增强免疫比浊试剂、稳定方法及应用与流程1胶乳增强免疫比浊试剂的介绍胶乳增强免疫比浊试剂是一种常用于免疫学实验中的试剂，它可以被用来检测特定抗原或抗体的存在，尤其是在生物医学和生命科学领域中应用广泛。
该试剂由胶体金、珠光体、荧光素、光散射物等成分组成，能够通过增强散射和吸收等光学效应，从而提高检测的灵敏度和可信度，并且还能够保证试剂稳定性和可重复性。
2胶乳增强免疫比浊试剂的稳定方法为了保证胶乳增强免疫比浊试剂的稳定性，通常采用以下方法：2.1抑制氧化反应某些成分在氧化反应的作用下会失去活性，因此可采用添加还原剂来抑制氧化反应。
通常使用亚硫酸钠、硫代硫酸钠等还原剂，可以有效地抑制氧化反应。
2.2控制温度和光照温度和光照会对试剂的稳定性产生影响，因此需要控制环境温度和光照强度。
通常把试剂置于暗处或遮光袋中，避免直接照射光线。
2.3添加保护剂添加保护剂能够保护试剂免受外界环境的影响，一些常用的保护剂有甘露醇、丙二醇、山梨醇等。
这些保护剂能够减轻试剂在储存和运输过程中受到的压力，从而延长试剂的使用寿命。
3胶乳增强免疫比浊试剂的应用流程胶乳增强免疫比浊试剂的应用流程包括以下几个步骤：3.1试剂前处理使用前，需要将胶乳增强免疫比浊试剂离心，将沉淀物均匀悬浮于试剂中。
3.2样品处理制备样品液，通常需要对样品进行稀释、加热、离心等操作，以获得更加准确的测量结果。
3.3加试剂将胶乳增强免疫比浊试剂加入样品中，混合均匀后进行孵育。
3.4测量结果测量反应产物的比浊度、荧光强度等参数，并进行数据分析和结果判定。
4胶乳增强免疫比浊试剂的应用胶乳增强免疫比浊试剂的应用范围非常广泛，通常用于以下方面：4.1检测抗体和抗原胶乳增强免疫比浊试剂可以用于检测特定抗体或抗原的存在，常常被应用于医学诊断、生物工程等领域。
4.2生化分析胶乳增强免疫比浊试剂能够用于测定肽、多肽、蛋白质、脂质等生化物质的存在和浓度。
4.3分子识别胶乳增强免疫比浊试剂可以用于基因测序和DNA分析等领域，为了识别特定的分子，可以在试剂中加入标记物质并进行检测。
2免疫透射比浊实验
自动生化分析仪器
实验步骤：
1.待测血清标本稀释 测IgG，血清按1:10 用 生理盐水稀释；测IgA、IgM时血清不稀释。 在测定管中待检血清的最后稀释倍数为IgG 1： 1000 ，IgM 1:50至1:100 。 2.抗血清稀释 按厂家说明书标明效价的80%稀 释。
3.
管号 1.PEG-NaF稀释液（ml） 3待测血清（ul）
第二小组
实验目的：掌握免疫透射比浊实验原理和
用途，了解其操作方法。
实验原理：
免疫比浊实验：在一定量的抗体中分别加 入递增量的抗原，经一定时间后形成可溶性 免疫复合物，在PEG作用下可自液相析出，形 成微粒，使检样浊度发生变化，用浊度计测 量反应液体的浊度，复合物形成越多浊度越 高，绘制标准曲线，根据浊度推算样品的抗 原含量。
测IgG 1.0 1.0
抗体空白管 1.0 —— 1.0
2抗血清（ul）（效价1:100） 12.5
管号 1.PEG-NaF稀释液（ml）
测IgM 1.0 12.5 10.0
抗体空白管 1.0 —— 10.0
2.抗血清（ul）（效价1:100） 3.待测血清（ul）
混匀，37℃水浴30min，340mm波长以 抗体空白管调零，按终点法读取各管 光密度
4.标准曲线绘制 将标准Ig参考血清稀释成5个 不同浓度的标准管，按上述操作步骤进行， 测定各管吸光度，以光密度对浓度进行回归 处理，作标准曲线。由测定管A值再计算出待 测血清中的免疫球蛋白的含量。
Байду номын сангаас
实验结果：
测出测定管的A值后，根据回归方程或标准曲 线即可计算出待测血清中IgG的含量。
注意事项：
·羊抗人IgG、IgA、IgM
免疫比浊法生产流程
免疫比浊法生产流程免疫比浊法的生产流程如下：1. 清洗：吸取100μL胶乳微球加入1 mLMES缓冲液中，混匀后17000 rpm离心30min，弃上清，加入1mLMES，用超声波清洗器振散微球团块，每次持续约30s，3~5次。
2. 活化：将NHS粉末和EDCI粉末恢复室温，配制浓度为20mg/mL的NHS活化剂和EDCI活化剂，将适量的NHS和EDCI活化剂加入已清洗的微球中，上下颠倒混匀后再置旋转混匀器上混匀，持续约20~30min。
3. 包被：将已彻底超声振散的微球加入一定浓度的CSFVE2蛋白单抗中，先手动上下颠倒混匀，再置旋转混匀器充分反应。
15000rpm离心10min后弃上清，加入1 mL MES。
4. 封闭：将已彻底超声振散的微球加入100μL封闭液，置旋转混匀器充分反应1h或置2~8℃封闭过夜。
此外，还应注意如下问题：在离心前使标本完全自然形成凝块。
保持样品管的密闭状态。
抽血后2小时内完成离心和冷藏。
血清和血浆需用物理方法尽快与细胞分离。
去除所有可能存在的纤维蛋白和细胞成分，否则会得到假阳性结果。
如果48小时内不能完成检测即应将标本放入-20℃冰箱冻藏。
标本只能复溶一次，检测前须将复溶标本离心处理。
不要用水浴方法复溶标本。
吸取血浆标本时应避免将红细胞层上的白细胞或血小板层吸出。
含有颗粒物质的浑浊血清或血浆标本在检测前须先从原始管内转运出来，并重新离心，原始管中含有分离介质(分离胶)的可以不再离心。
如果标本不在24小时内检测或运送标本时，将标本保存在-20℃或更低温度的环境中。
标本不能溶血。
标准液所用的物质对HIV抗体，乙型肝炎表面抗原和丙型肝炎抗体测试呈阴性反应。
建议各实验室建立自己的正常值范围。
测量的特征值(测量范围、精度、准确度、灵敏度)和多种分析仪的参数将另外提供。
以上信息仅供参考，如有需要建议咨询专业人士。
胶乳透射免疫比浊法-国家食品药品监督管理总局
目前胱抑素 C 含量的测定方法主要是基于抗原抗体反应的
— 1 ——
免疫方法，如胶乳免疫比浊法、胶体金免疫比色法、 单向免疫扩
散法、酶联免疫吸附法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法等，
免疫比浊法可分为透射免疫比浊法和散射免疫比浊法。 其中透射
免疫比浊法可适用于半自动生化分析仪、 全自动生化分析仪， 散
用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据， 并依据产品
的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。
本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件， 不涉及
注册审批等行政事项， 亦不作为法规强制执行， 如有能够满足法
规要求的其他方法， 也可以采用， 但应提供详细的研究资料和验
证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
的变化，加入标准溶液后样品总浓度必须在试剂检测线性区间
内）或纯品，每个浓度重复检测 3 次，按公式（ 2）计算回收率，
结果应符合产品技术要求性能指标的要求。
R=[C ×（V 0+V ）－ C0×V 0） ] / （ V ×CS）×100% 式中：
（ 2）
R —回收率；
V —加入标准溶液的体积；
V 0 —人源样品的体积； C —人源样品加入标准溶液后的检测浓度；
6840。
二、注册申报资料要求
（一）综述资料
综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、方法学特征、
生物安全性评价、研究结果总结以及同类产品上市情况介绍等
内容，应符合《体外诊断试剂注册管理办法》 （国家食品药品监
督管理总局令第 5 号）和《关于公布体外诊断试剂注册申报资
料要求和批准证明文件格式的公告》 （国家食品药品监督管理总
意义。
注：若注册申报产品声称临床意义超出此内容范围， 应提供
免疫学实验 免疫比浊(免疫球蛋白的测定)
3 免疫胶乳比浊法
原理
选择一种大小适中，均匀一致的胶乳颗 粒，吸附抗体后，当遇到相应抗原时，则 发生凝集，单个胶乳颗粒在入射光波长之 内，光线可透过，当两个胶乳凝集时，则 使透过光减少。这种减少的程度与胶乳凝 集成正比，与抗原量成正比。
（a）带抗体的胶乳在波长之内可透过光线； （b）结合后，则形成光线衰减
2. 海德堡（heidelberger）曲线理 论
2 抗体的质量
（1）特异性高 （2）效价高 （3）亲和力高 （4）抗血清来源
3 抗原抗体反应的溶液
• pH 6.5~8.5
• 电解质 离子强度、种类（磷酸盐缓冲液）
4 增浊剂的使用
• PEG、tween-20等非离子型亲水 剂
• 作用：消除蛋白质分子周围的电子 云和水化层，促进抗原、抗体分子 靠近，结合形成大分子复合物。
（二）类型
1. 透射免疫比浊法 2. 散射免疫比浊法 3. 免疫胶乳比浊法
1 透射免疫比浊法
原理：
抗原抗体在一定缓冲液中形成免疫复合物 (IC)，当光线透过反应溶液时，由于溶液内复 合物粒子对光线的反射和吸收，引起透射光减 少，免疫复合物量越多，透射光越少，即光线 吸收越多，可用吸光度表示。吸光度和复合物 的量成正比，当抗体量固定时，与待检抗原量 成正比。用抗原标准品建立标准曲线，可测出 待检抗原含量。
•
样本管吸光度
• 浓度＝————————×校准液浓度（g/L）
•
校管吸光度
• 结果及讨论
– 检测报告 – 检测意义
实验二、免疫浊度测定 ——免疫球蛋白检测
实验步骤见说明书 IgG9.77g/L IgA1.72g/L IgM1.37g/L
沉淀反应
微生物与免疫教研室
胶乳免疫比浊法和免疫学法
胶乳免疫比浊法和免疫学法
首先，让我们来谈谈胶乳免疫比浊法。
胶乳免疫比浊法是一种常用的免疫学检测方法，它利用胶乳颗粒作为载体，将抗原或抗体与胶乳颗粒偶联，形成胶乳免疫复合物。
当抗原与抗体结合时，会形成较大的颗粒团簇，从而导致溶液的浊度增加。
通过测量溶液的浊度变化，可以间接地定量检测抗原或抗体的存在量。
这种方法操作简便，灵敏度高，被广泛用于临床诊断和科研实验中。
其次，让我们来谈谈免疫学法。
免疫学法是一种通过检测免疫反应来识别和测定抗原或抗体的方法。
免疫学法包括很多种技术，比如ELISA（酶联免疫吸附实验）、免疫印迹、免疫荧光等。
这些方法都是基于免疫反应原理，通过抗原与抗体的特异性结合来进行检测。
免疫学法可以用于检测感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤标志物等，具有高度的特异性和灵敏度。
总的来说，胶乳免疫比浊法和免疫学法都是用于检测抗原和抗体的实验方法，它们在原理和应用上有所不同，但都在医学诊断和科研领域发挥着重要作用。
希望这些信息能够帮助你更好地理解这两种方法。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
附件5胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）注册技术审查指导原则本指导原则旨在指导技术审评部门对胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）的技术审评工作，同时也为注册申请人注册申报资料的准备及撰写提供参考。
本指导原则是对胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。
本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。
应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。
一、适用范围胱抑素C测定试剂（胶乳透射免疫比浊法）是指基于透射免疫比浊法原理，利用半自动生化分析仪、全自动生化分析仪对人血清、血浆中的胱抑素C进行体外定量分析的试剂。
目前胱抑素C含量的测定方法主要是基于抗原抗体反应的—1 —免疫方法，如胶乳免疫比浊法、胶体金免疫比色法、单向免疫扩散法、酶联免疫吸附法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法等，免疫比浊法可分为透射免疫比浊法和散射免疫比浊法。
其中透射免疫比浊法可适用于半自动生化分析仪、全自动生化分析仪，散射免疫比浊法需特定蛋白分析仪。
从方法学上讲，本指导原则仅适用于胶乳透射免疫比浊法,不适用于散射免疫比浊法。
依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）和《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管〔2013〕242号），胱抑素C测定试剂（免疫比浊法）管理类别为二类，分类代号为6840。
二、注册申报资料要求（一）综述资料综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、方法学特征、生物安全性评价、研究结果总结以及同类产品上市情况介绍等内容，应符合《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）的相关要求。
相关描述应至少包含如下内容：1.产品预期用途及辅助诊断的临床适应证背景情况（1）胱抑素C的生物学特征、结构与功能、在体内正常和病理状态下的代谢途径和存在形式。
胱抑素C（Cystatin C, CysC）是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂，也被称为γ—微量蛋白及γ—后球蛋白，广泛存在于各种组织的—2 —有核细胞和体液中，是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质，分子量为13.3KD，由122个氨基酸残基组成，可由机体所有有核细胞产生，产生率恒定。
循环血液中的Cys C能自由透过肾小球，在近曲小管几乎全部被上皮细胞摄取并分解，尿中仅微量排出。
Cys C水平不受性别、年龄、饮食等因素的影响，是一种反映肾小球滤过率（GFR）变化的理想内源性标志物。
当肾功能受损时，Cys C在血液中的浓度随肾小球滤过率变化而变化。
肾衰时，肾小球滤过率下降，Cys C在血液中浓度可增加数倍甚至十数倍。
（2）与预期用途相关的临床适应证背景情况，如临床相关疾病的发生、实验室诊断方法等。
肾小球滤过率（GFR）的评估在肾功能的监测方面具有重要意义。
注：若注册申报产品声称临床意义超出此内容范围，应提供相关文献或临床研究依据。
CysC分子量较小，其测定方法主要基于免疫反应原理。
随着CysC在临床上的应用，检测它的方法也越来越多，按照原理大体上可分为二类：一类是非均相法如单向免疫扩散法（RID）、放射免疫测定法（RIA）、荧光免疫测定法（FIA）、酶联免疫测定法（ELISA）；另一类是均相法如颗粒计数免疫测定法，颗粒增强透射免疫比浊法（PETIA），颗粒增强散射免疫比浊法（PENIT）。
非均相法难于自动化，限制了CysC的临床推广应用，胶乳免疫测定是一种均相测定方法，在胶乳颗粒上包被抗体，与抗原结合时颗粒发生凝集，此方法易于自动化，已被广泛应用于临床。
—3 —2.产品描述包括产品所采用的技术原理、主要原材料的来源、质量控制及制备方法、主要生产工艺过程及关键控制点，质控品、校准品的制备方法及溯源情况。
3.有关生物安全性方面的说明如果体外诊断试剂中的主要原材料采用各种动物、病原体、人源的组织和体液等生物材料经处理或添加某些物质制备而成，为保证产品在运输、使用过程中对使用者和环境的安全，研究者应提供上述原材料有关生物安全性的说明。
4.有关产品主要研究结果的总结和评价5.参考文献6.其他包括同类产品在国内外批准上市的情况，相关产品所采用的技术方法及临床应用情况，申请注册产品与国内外同类产品的异同等。
（二）主要原材料的研究资料（如需提供）主要原材料的选择、制备、质量标准及实验验证研究资料；质控品（如产品包含）、校准品（如产品包含）的原料选择、制备、定值过程及试验资料；校准品的溯源性文件，包括具体溯源链、实验方法、数据及统计分析等详细资料。
（三）主要生产工艺及反应体系的研究资料（如需提供）产品的主要生产工艺可以用流程图表示，明确关键工序和特殊工序，并简单说明控制方法。
确定反应温度、时间、缓冲体系等的研究资料、确定样本和试剂（盒）组分加样量的研究资料。
不同适用机型的反应条件如果有差异应分别详述。
—4 —（四）分析性能评估资料申请人应提交产品研制阶段对三批试剂进行的所有性能验证的研究资料，对于每项分析性能的评价都应包括具体研究目的、实验设计、研究方法、实验数据、统计方法、可接受标准、研究结论等详细资料。
性能评估时应将试剂和所选用的校准品、质控品作为一个整体进行评价，评估整个系统的性能是否符合要求。
有关分析性能验证的背景信息也应在申报资料中有所体现，包括实验地点、适用仪器、试剂规格和批号、所选用的校准品和质控品、临床样本来源等。
性能评估应至少包括空白吸光度、分析灵敏度、精密度、准确度、线性、分析特异性（抗干扰能力）等。
1.试剂空白吸光度用生理盐水作为样本重复测定2次，记录试剂参数规定读数点主波长下的吸光度值（A），结果均值应符合产品技术要求性能指标的要求。
2.分析灵敏度测定已知浓度在（1.00±0.10）mg/L的样本，记录试剂规定参数的吸光度差值。
换算为1.00mg/L的胱抑素C的吸光度差值，结果应符合产品技术要求性能指标的要求。
3.准确度建议按如下优先顺序，同时结合申请人实际情况，采用如下方法之一对试剂准确度进行评价。
（1）相对偏差根据生产企业提供的试剂线性区间，将可用于评价常规方法的参考物质作为样本，按照待测试剂说明书的步骤进行检测，每—5 —个样品重复测定3次，测试结果记为（Mi），按公式（1）分别计算相对偏差（Bi），如果3次结果都符合产品技术要求性能指标的要求，即判为合格。
如果大于等于2次的结果不符合，即判为不合格。
如果有2次结果符合，1次结果不符合要求，则应重新连续测试20次，并分别按照公式（1）计算相对偏差，如果大于等于19次测试的结果符合产品技术要求性能指标的要求，即判为合格，准确度符合产品技术要求性能指标的要求。
Bi=（Mi-T）/T×100% （1）式中：Bi—相对偏差；Mi—测量浓度；T—参考物质标示值。
（2）回收试验在人源样品中加入一定体积由具有溯源性的参考物质配制的标准溶液（标准溶液体积与人源性样品体积比应不会产生基质的变化，加入标准溶液后样品总浓度必须在试剂检测线性区间内）或纯品，每个浓度重复检测3次，按公式（2）计算回收率，结果应符合产品技术要求性能指标的要求。
R=[C×（V0+V）－C0×V0）] / （V×C S）×100% （2）式中：R —回收率；V —加入标准溶液的体积；V0 —人源样品的体积；C —人源样品加入标准溶液后的检测浓度；C0 —人源样品的检测浓度；C s —标准溶液的浓度。
—6 —（3）方法学比对参照EP9—A2的方法，用不少于40个在检测浓度范围内不同浓度的人源样品，以生产企业指定的已上市分析系统作为比对方法，每份样品按待测试剂操作方法及比对方法分别检测。
用线性回归方法计算两组结果的相关系数（r）及医学参考水平的相对偏差，结果应符合产品技术要求性能指标的要求。
在实施方法学比对前，确认两者都分别符合各自相关的质量标准或技术要求后方可进行比对试验。
方法学比对时应注意质量控制、样本类型、浓度分布范围并对结果进行合理的统计学分析。
4.精密度测量精密度的评估方法包括重复性和批间差试验，应至少包括两个浓度水平的样本，其中一个样本浓度应在（1.00±0.10）mg/L样本范围内，另一个样本应为异常高值样本。
（1）重复性在重复性条件下，对不同浓度的样品分别重复测定10次，计算10次测定结果的平均值（X）和标准差（SD），根据公式（3）得出变异系数（CV），结果均应符合产品技术要求性能指标的要求。
CV=SD/X×100% （3）式中：CV—变异系数；SD—10次测量结果的标准差；X—10次测量结果的平均值。
（2）批间差分别用三个不同批号试剂，对不同浓度的样品，分别重复测—7 —— 8 —定3次，计算每个浓度样本每批号3次测量结果的平均值（X i ，i=1、2、3），根据公式（4）、公式（5）计算批间相对极差（R ），结果均应符合产品技术要求相应性能指标的要求。
T X =3321X X X ++ （4）R=（X max -X min ）/T X ×100% （5）式中：R —批间相对极差；X max —X i 的最大值，i=1、2、3； X min —X i 的最小值，i=1、2、3；X T —三批测量结果的总平均值。
5.线性取接近测定范围上限的高值（H ）和接近下限的低值（L ）样本各一份，混合成至少6个稀释浓度的样本（x i ），充分混匀，防止蒸发或其他改变。
用试剂（盒）分别测试各稀释浓度3次，然后分别计算每个稀释浓度检测结果的均值（y i ），以x i 为自变量，以y i 为因变量求出线性回归方程，按公式（6）计算线性回归的相关系数（r ）；同时将x i 代入线性回归方程，计算y i 的估计值（y ie ），根据公式（7）和（8）计算线性绝对偏差或相对偏差（R i ），结果均应符合产品技术要求性能指标的要求。
（6） 绝对偏差 = 检测结果均值（y i ）- 估计值（y ie ） （7） （8） ∑∑∑-=2i 2i i i )y -(y )x -(x )]y )(y x -[(x r 100%y y -y R ieie i i ⨯=建立试剂线性所用的样本基质应尽可能与临床实际检测的样本相似，且应充分考虑多倍稀释对样本基质的影响。