畜肉中氟喹诺酮类药物残留操作指南
畜产品中氟喹诺酮类药物残留高效液相色谱法检测技术
2016年第9期（下半月）农民致富之友 Nong Min Zhi Fu Zhi You276财经◎畜牧兽医畜产品中氟喹诺酮类药物残留高效液相色谱法检测技术穆伟峰（新乡市畜产品质量监测检验中心，河南新乡 450003）[摘 要] 目的改善畜产品中氟喹诺酮类药物残留检测。
方法样品经过磷酸盐缓冲液提取，过HLB固相萃取柱，用适当乙腈比例的流动相进行分离。
结果鸡肉、鸡蛋、猪肉样品回收在85%—95%之间。
结论操作简单，回收稳定。
[关键词] 畜产品 氟喹诺酮 药物残留 高效液相色谱法[中图分类号] S826 [文献标识码] A [文章编号] 1003-1650(2016)09-0276-011 材料与方法1.1 仪器与试剂Waters2695高效液相色谱仪，15厘米C 18粒径5um 液相色谱柱，WatersHLB 固相萃取柱（30mg ），安捷伦1200荧光检测器，高速离心机，高速振荡匀浆器。
恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星、达氟沙星标准品，色谱纯乙腈、甲醇，超纯水，其他试剂均为分析纯。
1.2 工作试剂配制5.0mol/L 氢氧化钠溶液：取氢氧化钠饱和溶液28mL 加水稀释至100mL 。
0.03mol/L 氢氧化钠溶液：取5.0mol/L 氢氧化钠溶液0.6mL 加水稀释至100mL 。
0.05mol/L 磷酸三乙胺溶液：取浓磷酸3.4mL 用水稀释至1000mL ，用三乙胺调pH 至2.4。
30%乙腈缓冲液：取30mL 乙腈和70mL0.05mol/L 磷酸三乙胺溶液混合。
磷酸盐提取液：取磷酸二氢钾6.5g 加水稀释至500mL ，用5.0mol/L 氢氧化钠溶液调pH 至7.0。
洗脱液：乙腈与0.05mol/L 磷酸三乙胺溶液2比8配制。
流动相：乙腈与0.05mol/L 磷酸三乙胺溶液14比86配制。
1.3 标准溶液配制准确称取恩诺沙星、环丙沙星、沙拉沙星约25.00mg ，达氟沙星5.00mg ，用0.03M 氢氧化钠溶液定容于25mL 容量瓶中，制成标准储备液，根据称量量和标准品浓度计算标准溶储备液浓度，分别约为1mg/mL 和0.2mg/mL 。
猪肉组织中氟喹诺酮类药物残留检测
学术研究doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2014.05.007氟喹诺酮类药物属第3代喹诺酮类抗菌药，适应于敏感病原菌所致的呼吸道、胃肠道等感染，具有吸收好、组织浓度高、半衰期长、抗菌谱广等优点，已成为兽医临床的常用药。
但随着临床用量的不断增长，因不合理用药或滥用药而导致的畜产品质量安全问题时有发生，并越来越引起社会的广泛关注。
本文在运用“农业部1025号公告-14-2008”标准[1]的基础上，结合本实验室的工作实际，随机选取8名本实验室的化验员，同时并独立完成猪肉组织中氟喹诺酮类药物残留检测工作，得出检测回收率，分析和判断测定结果的准确性。
1仪器与试药1.1仪器天平，感应0.01g；分析天平，感应0.00001g；Aglient1200高效液相色谱仪-配荧光检测器；振荡器；组织匀浆机；离心机；Varian BondElut C18柱（100mg/mL）固相萃取柱；0.45μm微孔滤膜。
猪肉组织中氟喹诺酮类药物残留检测张漫1,李娜2,高木珍1,张宁1,刘晓辉1,王辉1（1.天津市兽药饲料监察所天津300402；2.天津市农产品质量监督检验测试中心天津300381）摘要：随机选取本实验室内的8名化验员，分别测定猪肉组织中氟喹诺酮类药物残留量，通过对结果数据的分析，得出本实验室测定结果的准确程度。
通过磷酸盐缓冲溶液提取猪肉组织中的氟喹诺酮类药物残留，经C18柱净化后，用高效液相色谱法测定含量。
环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星和沙拉沙星的平均回收率（%）分别为：95.6、86.9、89.3和95.6，批内变异系数均≤14%，批间变异系数均≤6%。
结果数据满足标准要求，证明本实验室能准确开展此项检测活动。
关键词：氟喹诺酮类药物；达氟沙星；恩诺沙星；环丙沙星；沙拉沙星；残留检测Determination of Fluoroquinolones Residues in Pork TissueZhang Man1,Li Na2,Gao Muzhen1,Zhang Ning1,Liu Xiaohui1,Wang Hui1（1.Tianjin Institute of Veterinary Drugs and Feed Control,Tianjin,300402.2.Tianjin supervision and Testing Center of Agricultural Product Quality,Tianjin,300384）Abstract:We selecting8technicians in our laboratory randomly,letting they determine fluoroquinolonesresidues in pork tissues separately.Based on the analysis of the experimental data,we concluded the accuracy ofmy determination results.The Fluoroquinolones residues are extracted with phosphate buffer solution,cleaned byC18SPE cartridge,then content was determined by HPLC.The average recoveries of four components were95.6%,86.9%,89.3%,95.6%.The variation coefficient of inter-assay were below14%,intra-assay were below6%.The results meet requirements,so we can carry out the test.Key word:fluoroquinolones;danofloxacin;enrofloxacin;ciprofloxacin;sarafloxacin;residues determination. All Rights Reserved.学术研究1.2药品与试剂达氟沙星，批号10301，含量93.5%,Dr.Ehren-storfer Gmbh公司；恩诺沙星，批号H0081206，含量99.9%,中国兽医药品监察所；环丙沙星，批号130451-201203，含量84.2%,中国食品药品检定研究所；沙拉沙星，批号20629，含量95.0%,Dr. Ehrenstorfer Gmbh公司。
喹诺酮类药物残留量的测定 标准
喹诺酮类药物残留量的测定标准一、引言喹诺酮类药物是一类常用的抗菌药物，被广泛应用于畜禽养殖业和养殖水产业中，以预防和治疗动物植物的感染疾病。
然而，由于长期和滥用使用，喹诺酮类药物在畜禽产品中的残留量问题日益严重，给食品安全带来了一定的挑战。
为了保障消费者的健康和食品安全，加强对喹诺酮类药物残留量的测定标准显得尤为重要。
二、国内外对喹诺酮类药物残留量的测定标准1. 国际标准在国际上，对于喹诺酮类药物残留量的测定标准，主要是由国际食品安全标准委员会（Codex Alimentarius Commission）和世界卫生组织（WHO）制定并发布的《动物兽药残留限量国际标准》。
在该标准中，对不同种类的喹诺酮类药物在畜禽产品中的残留量都有详细的规定和限定，以确保产品的安全合格。
2. 国内标准在我国，对于喹诺酮类药物残留量的测定标准主要由国家食品安全标准委员会负责制定和管理。
国家食品安全标准委员会及其下属的各专业委员会，根据国家食品安全相关法律法规的要求，不断进行标准的修订和完善，以适应国内外食品安全形势的发展和变化。
三、喹诺酮类药物残留量的测定方法1. 高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是目前国际上常用的一种喹诺酮类药物残留量测定方法。
该方法准确、灵敏度高，并且可对多种喹诺酮类药物进行同时测定，适用于不同类型的畜禽产品。
2. 超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）超高效液相色谱-串联质谱法是一种新型的分析技术，具有分辨率高、灵敏度高和分析速度快的特点。
该方法适用于对喹诺酮类药物残留量进行快速准确的测定，是当前国内外研究和应用的热点之一。
四、个人观点和理解在我看来，喹诺酮类药物残留量的测定标准是食品安全监管中的重要环节，它不仅关乎着畜禽产品的质量和安全，更关系着广大消费者的身体健康和生命安全。
当前，我国在食品安全监管方面已取得了一定的成绩，但也面临着一些挑战和问题，如标准的实施和监管不到位等。
浅析氟喹诺酮类兽药残留检测方法
３ 氟喹诺酮 类药物残 留的检测方法
目前 ，常用 于氟 喹诺酮 类药 物残 留 的检 测方 法 可分 为４ 液相色 谱法对 猪 肉组织 中恩诺沙 星和环 丙沙 星残 留量 进行 检 大类 ：微 生物法 、仪器分 析法 、化学发 光与 电化学发光 分析 测 ，结 果 环丙 沙星 、恩 诺沙 星 的质量 浓度 在 ２ｇＬ～１ ０ ｇＬ ／ ０ ／ ｇｋ 。 法及免疫分析法。其中仪器分析法常见的有高效液相色谱法 范 围内呈线性关 系 ，它们 的最低定量限均为２／ｇ （ＰＣ Ｈ Ｌ ）、液一 质联用分析法 （ ＣＭ ）、高效毛细管电泳法 ３ ２ ２ 高效液相 色谱 一 Ｌ／Ｓ ．． 质谱联 用法 （ ｃ Ｍ ） 随着研究 的深 Ｌ— Ｓ （ Ｐ Ｅ）等 ；免疫 分析检测法包括 间接竞 争Ｅｉ 测定法 、免 入 和对食 品安全越 来越 高 的重 视 ，定 性准 确 ，灵 敏度更 高 的 ＨＣ ｌａ ｓ 疫传感器分析法 、免疫亲和色谱 （ＡＣ）分析法等【 。 Ｉ ｌ 液质联 用技 术渐渐 被人 们采纳 ，这种 技术不 仅可 以更精 确 的
兽 药 应 用
中国畜牧兽 医文摘
２ １年 ０１
２卷 ７
第３ 期
浅析氟喹诺酮 类兽药残 留检测方法
将 ，、 Ｊ武 ・
（ 南大 学荣昌校 区，重庆 西
４ ２６ ） ０ ４ ０
［ 要］ 解决兽 药残留监 控 问题是提 高动物源性食 品质 量，保障食品安全 的关键 性环节之一 ，因此在食 品检 验 中建立 一 摘 些 方便 快捷 的检测方 法显得 尤为重要 。本 丈以兽 药氟喹诺酮类为例 ，系统 阐述 了目前在临床检测 中 已经建立的有关 氟喹诺酮类 药物 残留的检 测技 术 ，以期能为其他药物残 留检测提供参考方 向。
兽药残留SPE方法
The determination of antibiotic and pesticide residues in foods： samplepreparation for LC-MS analysisAbstract: In this article, we will discuss SPE strategies prior to tandem LC/MS analysis for sub-ppb determination of chloramphenicol, nitrofuran antibiotic metabolites, and other related substances in animal tissues and in honey. Sample preparation for LC-MS analysis to determinate of antibiotic and pesticide residues in foods is reviewed and prospected .Key words: antibiotic and pesticide residues , food , sample preparation , LC-MS食品中抗生素和农药残留分析：用于LC－MS分析的SPE样品前处理方法Waters公司赵维国摘要：本文将讨论LC-MS分析之前，动物组织和蜂蜜中残留物质的样品前处理策略，其中包括ppb级氯霉素、喹诺酮类、硝基呋喃代谢产物和其它相关物质的固相提取（SPE）方法。
对食品中抗生素和农药残留的LC－MS分析的SPE样品前处理方法进行综述和展望。
关键词：抗生素和农药残留，食品，样品前处理，LC-MS食品中抗生素和其它兽药残留目前正在全球范围内受到广泛的重视。
对于农药和兽药残留的分析而言，所需达到的要求通常取决于毒理学评估的结果，而所期望达到的定量限(LOQ)与合法注册的农业化学品的最大允许残留限量相关。
DB13T1006-2009鸡肉中四种氟喹诺酮类药物残留
（１）
Ｃ＝望二生塑立丝Ｘ１０００ ＡＳ ｘ ｍ
式 中：
ｃ— 样品中氧氛沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星残留量，Ｗｇ／ｇ； Ａ — 样品溶 液中氧氟沙星 、诺氟沙星 、环 丙沙 星、恩诺沙星的峰面积 Ａｏ一一一空白实验被测物的色谱 峰面积或 峰高
Ａｓ — 标准工作溶翔液中氧氟沙 星、诺氟沙星、环丙 沙星 、恩诺沙星的峰面积 Ｃｓ
６ 色谱条件
６．１ 色谱柱：ＺＯＲＢＡＸ ＳＢ－ＡＱ ４．６Ｘ２５０ ｍｍ， ５ ５ｍ或相当者。 ６．２ 流动相：０．０１ ｍｏｌ／Ｌ四Ｔ基澳化钱 （ｐＨ＝３．０）＋乙睛＝（９７．５＋２．５， ＶＮ）ｏ ６．３ 流速：１．０ ｍＬ／ｍｉｎｏ ６．４ 检测波长：激发波长２８０ ｎｍ，发射波长４５０ ｒａｎ， ６．５ 柱温：４０ｃＣ ６．６ 进样量：２０ ｐＬｏ
Ｄ Ｂ １ ３／ Ｔ １ ００ ６ － ２０ ０ ９
８．３ 空白试验与空白添加回收试验 每个试验批次的样品中至少必须 同 时 做 空白样品和空白添加样品 （实际加人值为已知）。空白鸡肉
添加样品的实际加人值水平可选在等于最大残留限量１０ ｇｇ／ｋｇ，或方法检测限２ ｐ ｇ／ｋｇ或略高的实际加 人值水平上操作 ；空 白样品和空 白添加样品的测定按步骤７操作。本试验用于计算试验的回收率Ｒｃ，试 验的回收率用于对阳性的残留结果进行残留量的校正。回收率Ｒ滋 公式 （１）计算。
７ 样 品 处理
７．１ 样品制备 取待检胸 肉 （或 腿 肉）样品，弃去筋 、皮 、骨和脂肪 ，切成小块后 ，用搅 肉机搅碎 。
７．２ 提 取
准确称 取 绞 碎 鸡肉样品５ｇ（精确至０．０１ ｇ）于５０ ｍＬ塑料离心管，加人１０ ｇ无水硫酸钠，加２５ ｍＬ 乙睛，用高速组织均质器于１５ ０００ ｒｐｍ高速均质０．８ ｍｉｎ＇ｖ １．５ ｍｉｎ后 ，３ ５００ ｒｐｍ离心１０ ｍｉｎ，移取上清 液转移到另一个５０ ｍＬ塑料离心管中，残渣用１５ ｍＬ乙睛重复提取一次 ，合并上清液。
氟喹诺酮类药物残留检测国标解读
氟喹诺酮类药物残留检测国标解读氟喹诺酮类药物残留检测国标解读氟喹诺酮类药物是一类广泛应用于人类及动物医药领域的抗菌药物，包括诸如氟苯尼考、氟哌酸、氟氧氟嗪等。
在兽药的使用中，为了保证食品中不残留过多的药物，国家制定了一系列的标准和方法来检测氟喹诺酮类药物的残留。
国标是指国家发布的关于特定物品或行为的规范和标准，是行业内进行质量控制和监督的重要依据。
对于氟喹诺酮类药物残留检测而言，国标主要涉及以下几个方面的内容：1. 检测方法：国标要求制定适用于氟喹诺酮类药物残留检测的方法，包括样品的采集、处理、提取、分离和定量等方面的技术要求。
这些方法通常采用高效液相色谱仪（HPLC）或质谱仪（MS）等仪器设备进行分析，以确保准确度和可靠性。
2. 检测限值：国标规定了氟喹诺酮类药物在食品中的残留限值，即食品中允许存在的最大药物残留浓度。
这些限值根据食品的种类、人们对该食品的摄入量以及药物的毒性等因素来确定，旨在保证食品的安全性和合规性。
3. 样品类型：国标规定了适用于氟喹诺酮类药物残留检测的样品类型，包括肉类、乳制品、水产品、蔬菜等。
针对不同的样品类型，可能需要不同的样品处理和预处理方法，以确保药物残留的有效提取和准确测定。
4. 检测设备和操作要求：国标还规定了氟喹诺酮类药物残留检测所需的设备和操作要求，包括仪器的性能指标、试剂的选择和使用、流程的标准化等。
这些要求有助于确保检测结果的准确性和可比性。
氟喹诺酮类药物残留的检测国标的制定和执行，对保障食品安全、合规经营和消费者权益具有重要意义。
遵循国标的要求进行药物残留检测，可以有效监控食品中的氟喹诺酮类药物残留情况，减少潜在的食品安全风险，保障公众健康。
同时，对于相关行业从业人员而言，了解并遵守国标的要求也是履行职责、提升专业素养的必要条件。
猪肉中氟喹诺酮类药物检测
依据 GB /T 22388-2008
1. 前处理（以猪肉为例）
预处理：
准确称取2g 猪肉样品，加入10mL 磷酸盐提取液（pH=7），水平振荡5min，10000g 离心 5min，吸取上层液，重复提取一次，合并上层液，上层液中加入10mL 正己烷，涡旋1min， 10000g 离心5min，吸取下层液体，待净化。
净化：
固相萃取小柱：
InertSep Pharma 3ml/60mg 货号5010-27101（品牌：岛津技迩）
活化、平衡：3ml 甲醇、3mL 磷酸盐提取液
上样：取预处理的5ml 下层液体过柱
淋洗：3ml 水
抽干
洗脱：2mL 流动相 0.05M 磷酸三乙胺：乙腈=18：82
过滤上机
2. 色谱分析
色谱柱：C18 , 250×4.6mm（i.d.）, 5μm
流动相：A:0.05M 磷酸三乙胺+B:乙腈=18+82，等度洗脱
柱温：35℃
检测波长：Ex:280nm; Em450nm
3. 基质加标回收率结果
三次平行实验结果的回收率（基质加标浓度均为0.05mg/kg）：
4. 结论
在此实验条件下，将固相萃取小柱InertSep Pharma 3ml/60mg 应用于猪肉中氟喹诺酮类残留前处理，基质去除效果好，回收率完全满足要求。
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第六届河南省高职院校技能大赛暨
2013年河南省高职组农产品质量安全检测技能大赛
畜禽肉中氟喹诺酮类兽药残留检测现场考核操作指南
选手编号__________ 本项目操作规程在参照《动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测高效液相色谱法》（农业部1025号公告-14-2008）基础上，考虑到竞赛的时间要求以及公平公正的原则，考核内容略有改动。
操作规程中每位选手做两个平行样。
样品预处理完成后，由组委会统一提供数据，计算样品中氟喹诺酮类药物含量、回收率、RSD值。
组委会为每个选手提供的玻璃器皿均洁净干燥，无需洗涤。
1采样
准确称取2份鸡肉样品（已由组委会事先粉碎成肉糜） 2 （±0.05）g于具塞
离心管中，记录数据；由裁判在样品中统一加入混合抗生素标准溶液100 k。
2提取
2.1准确移取20.0mL磷酸缓冲溶液在每份已称量好的鸡肉样品中，搅匀；
2.2中速振荡5min;
2.3 离心（4000r，7min）;
2.4将上清液倒入50mL烧杯中，以备过柱用。
3净化
3.1安装固相萃取柱，分别用2.0mL甲醇、再用2.0mL磷酸缓冲溶液活化；
3.2将活化好的固相萃取柱安装在固相萃取仪上，取离心所得上清液 5.0mL 过柱；
3.3用水2.0mL清洗，挤干；
3.4用流动相2.0mL洗脱，挤干；并用5mL试管收集洗脱液；
3.5用一次性注射器吸取洗脱液，并将收集的洗脱液过0.22 m有机膜，直
接装在样品瓶中，做好标记，供色谱测定。
4分析
依据给定条件进行残留量、回收率和RSD的数据分析。
备注：本赛项有几个检测关键点，需举手示意裁判。
畜禽肉中氟喹诺酮类兽药残留的检测结果分析
选手编号__________
环丙沙星残留量计算公式：
= ACSVV3
X
=ASV2M
式中：
X—试样中环丙沙星的残留量（ng/g）；
A—试样溶液中环丙沙星的峰面积；
As—对照溶液中环丙沙星的峰面积；
Cs—对照溶液中环丙沙星的浓度（n g/mL）
V i—提取用磷酸盐缓冲溶液的总体积（mL
V2 —过C8固相萃取柱所用备用液体积（mL）
V3 —洗脱用流动相的体积（mL）
M—供试试样的质量（g）
已知：平行样1峰面积值：A —120；平行样2峰面积值：A— 122；对照溶液峰面积值：As-220；对照溶液中环丙沙星的浓度：Cs —10ng/mL,裁判加入0.5血/mL环丙沙星100］。
其余数据根据实验数据取得。
要求：计算试样中环丙沙星的残留量、回收率、RSD计算结果保留到小数点后3位。
注：鸡肉样品环丙沙星未检出。