畜肉中氟喹诺酮类药物残留操作指南
第六届河南省高职院校技能大赛暨
2013年河南省高职组农产品质量安全检测技能大赛
畜禽肉中氟喹诺酮类兽药残留检测现场考核操作指南
选手编号
本项目操作规程在参照《动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测高效液相色
谱法》（农业部1025号公告-14-2008）基础上，考虑到竞赛的时间要求以及公
平公正的原则，考核内容略有改动。
操作规程中每位选手做两个平行样。样品预处理完成后，由组委会统一提供
数据，计算样品中氟喹诺酮类药物含量、回收率、RSD值。
组委会为每个选手提供的玻璃器皿均洁净干燥，无需洗涤。
1 采样
准确称取2份鸡肉样品（已由组委会事先粉碎成肉糜）2（±0.05）g于具塞
离心管中，记录数据；由裁判在样品中统一加入混合抗生素标准溶液100µL。
2 提取
2.1 准确移取20.0mL磷酸缓冲溶液在每份已称量好的鸡肉样品中，搅匀；
2.2中速振荡5min；
2.3离心（4000r，7min）；
2.4 将上清液倒入50mL烧杯中，以备过柱用。
3 净化
3.1 安装固相萃取柱，分别用2.0mL甲醇、再用2.0mL磷酸缓冲溶液活化；
3.2 将活化好的固相萃取柱安装在固相萃取仪上，取离心所得上清液5.0mL
过柱；
3.3 用水2.0mL清洗，挤干；
3.4 用流动相2.0mL洗脱，挤干；并用5mL试管收集洗脱液；
3.5 用一次性注射器吸取洗脱液，并将收集的洗脱液过0.22µm有机膜，直
接装在样品瓶中，做好标记，供色谱测定。
4 分析
依据给定条件进行残留量、回收率和RSD的数据分析。
备注：本赛项有几个检测关键点，需举手示意裁判。
畜禽肉中氟喹诺酮类兽药残留的检测结果分析
选手编号
环丙沙星残留量计算公式：
13
2
X=
ACsVV
AsVM
式中：
X—试样中环丙沙星的残留量（ng/g）；
A—试样溶液中环丙沙星的峰面积；
As—对照溶液中环丙沙星的峰面积；
Cs—对照溶液中环丙沙星的浓度（ng/mL）
V1—提取用磷酸盐缓冲溶液的总体积（mL）
V2—过C18固相萃取柱所用备用液体积（mL）
V3—洗脱用流动相的体积（mL）
M—供试试样的质量（g）
已知：平行样1峰面积值：A1—120；平行样2峰面积值：A2—
122；对照溶液峰面积值：As—220；对照溶液中环丙沙星的浓度：Cs
—10ng/mL，裁判加入0.5µg/mL环丙沙星100µL。其余数据根据实验
数据取得。
要求：计算试样中环丙沙星的残留量、回收率、RSD。计算结果
保留到小数点后3位。
注：鸡肉样品环丙沙星未检出。
磺胺类及氟喹诺酮类药物兔单克隆抗体的制备与多残留检测技术研究
磺胺类及氟喹诺酮类药物兔单克隆抗体的制备与多残留检测技术研究1. 本文概述在当前食品安全和公共卫生领域，对动物源性食品中的化学药物残留进行有效监控是确保消费者健康的关键环节。
磺胺类药物和氟喹诺酮类药物作为广泛使用的抗菌剂，在畜牧业中的应用尤其普遍。
这些药物的不当使用或过量残留可能对人类健康产生严重威胁。
开发一种高效、灵敏的检测技术以监测和控制这些药物的残留水平显得尤为重要。
本文旨在研究并制备针对磺胺类和氟喹诺酮类药物的兔单克隆抗体，并通过这些抗体建立一种多残留检测技术。
通过使用现代生物技术手段，我们成功地制备了一系列高特异性和高亲和力的单克隆抗体。
这些抗体能够准确识别目标药物，并在后续的检测实验中显示出优异的性能。
本研究首先涉及了抗原的设计和合成，随后通过免疫学方法在兔体内产生相应的抗体。
通过筛选和优化，我们获得了一组性能最佳的单克隆抗体。
本文还将介绍基于这些抗体的多种检测平台，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光免疫分析和免疫层析条带（Lateral FlowAssay, LFAS）等，以实现对磺胺类和氟喹诺酮类药物残留的快速、准确检测。
通过本研究，我们期望为食品安全监管机构和相关行业提供一种新的技术手段，以更有效地控制和管理动物源性食品中的药物残留问题，从而保护公众健康并促进行业的可持续发展。
2. 材料与方法化学试剂：弗氏完全和不完全佐剂、辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗、蛋白质AG亲和层析柱等。
偶联载体蛋白：将合成多肽与载体蛋白（如BSA或KLH）偶联，制备免疫抗原。
免疫程序：描述免疫新西兰大白兔的具体步骤，包括免疫原的注射剂量、频率和途径。
杂交瘤细胞的筛选与克隆化：通过HAT选择性培养基筛选，有限稀释法进行克隆化。
单克隆抗体的生产与纯化：采用体外培养或小鼠腹腔注射的方法生产单克隆抗体，并通过亲和层析法纯化。
亲和力常数测定：利用表面等离子共振（SPR）等技术测定抗体与抗原的亲和力。
ELISA方法：建立磺胺类和氟喹诺酮类药物的多残留ELISA检测方法。
超高效液相色谱-串联质谱法同时测定畜禽肉中27种磺胺及喹诺酮类药物的残留
华 孝成 杨 飞 萍 邵 歆 虞 贺 新 金 叶 舟
（ 温 州市农 产 品检 验、 ？ 贝 ４ 试 中心 ，温 州 ３ ２ ５ ０ １ ４ ）
摘 要 ：本 文建 立 了 超 高 效 液 相 色 谱 一 串联 质 谱 仪 同时 分 析 畜 禽 肉 中磺 胺 及 喹 诺 酮 类 共 ２ ７种 抗 菌 素 残 留 的 检 测 方 法
用 乙腈 提 取 样 品 中待 测 组 分 ，经 旋 转 蒸 发 浓缩 至 干 ，用 ｌ ｍ Ｌ１ ０ ％ 乙腈 一 ０ ． １ ％ 甲酸 水 溶 解 ，正 己烷 冷冻 离 心脱 脂 ．应 用Ｕ Ｐ Ｌ Ｃ— ＭＳ ／ Ｍ Ｓ采 用 梯 度 洗 脱 进 行 色 谱 分 离及 多 反 应 监 测 质 谱 分 析 模 式 １ ０ ａｉ ｒ ｎ内 同 时 对 畜 禽 肉 中 ２ ７种 磺 胺 及 喹 诺 酮 用 外 标 法 进 行 定 性 和 定 量 测 定 。 分 别 对 鸡 肉 空 白基 质 进 行 ３个 水 平 （ ２ ． ０￣ ｇ ／ ｋ ｇ ，１ ０ ． ０￣ ｇ ／ ｋ ｇ ，２ ０ ． ０￣ ｇ ／ ｋ ｇ ） 的加 标 回收 试 验 ，其 回 收 率 为 ７ ０ ． Ｏ ％～１ ２ ２ ． ７ ％。３ 个 浓 度 的 添 加 回收 方 法 的相 对 标 准 偏 差 低 于 １ ７ ％ 。２ ７种 待 测组 分 以 最 低 统 计 检 出 限均 为 ０ ． ２ ｇ ／ ｋ ｇ ，定 量 限为 ０ ． ５￣ ｇ ／ ｋ ｇ 。该 方 法 样 品前 处 理 简 单 、快 速 、准 确 性 、重 复 性 好 。可 用 于 畜 禽 肉 中 ｌ ６种 磺 胺 及 ｌ １ 种 喹 诺 酮 类 药 物 残 留 的 日常 分 析测 定 关 键 词 ：超 高效 液 相 串联 质 谱 ；冷 冻 除 脂 ；磺 胺 ；喹 诺 酮 ；残 留
水产品中氟喹诺酮类多残留检测方法的研究
水产品中氟喹诺酮类多残留检测方法的研究摘要：氟哇诺酮类药物因其具有抗菌谱广、抗菌作用强、使用方便等特点，被广泛应用于兽药临床和水产养殖中。
水产品中氟喹诺酮类药物残留不仅会给动物性食品安全带来潜在隐患，也会对人类的健康及生存环境造成危害。
提供准确的水产品氟哇诺酮类药物多残留检测方法成为食品安全监测一项刻不容缓的任务。
本文对该类药物在水产品中的残留分析方法进行综述和合理的展望，旨在为进一步开展水产品中氟哇诺酮类药物残留研究和监测提供借鉴。
关键词：氟喹诺酮类药物残留；水产品；检测方法氟哇诺酮类（Fluoroquinofones，FFQs）是一类人工合成的广谱抗菌药，是第三代喹诺酮类药物，药物通过抑制细菌的DNA回旋酶，影响拓扑异构酶Ⅳ，干扰细菌的DNA复制而阻碍细菌DNA 合成，最终导致细菌死亡而抗菌。
此类药物属吡酮酸衍生物，喹啉环的C-6位上有氟原子，C-7位上连接哌嗪基或吡咯基，加入氟原子后增加了其脂溶性，增强了对组织细胞的穿透力，因而吸收好，组织中药物浓度高，半衰期长，大大增加了抗菌谱和杀菌效果。
FQs药物具有抗菌谱广、抗菌作用强、使用方便、不良反应小，以及价格低廉等特点，20余年来已成为发展最快的化学合成抗菌药物，在临床上广泛用于人类和动物的各种感染性疾病的治疗[1]，其主要有诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、单诺沙星和达氟沙星等。
随着氟喹诺酮类药在兽医临床和水产养殖中的应用，其残留问题已引起了广泛的关注[2]。
本文就水产品中氟喹诺酮类多残留检测方法简要综述。
1、水产品氟哇诺酮类使用现状随着我国水产养殖业的不断发展，抗生素在水产养殖业的应用越来越广泛，抗生素的应用有效地预防和控制了许多水产感染性疾病的发生、促进动物生长和提高饲料的利用率极大地促进了水产养殖业的发展。
氟哇诺酮类因抗菌谱广、抗菌作用强、使用方便等特点近年来在水产养殖中大量使用。
而违规使用兽用抗生素、不执行休药期规定等，最终导致氟哇诺酮类在水产品体内残留超标。
兽药残留试验指导原则
兽药残留试验指导原则（征求意见稿）一、概述（一）定义与目的兽药在动物性食品中残留（简称兽药残留），是指兽药的原形或其代谢物在动物细胞、组织、器官或可食性产品（如奶、蛋）中的蓄积和贮存。
兽药残留对消费者可能产生毒害作用，从而影响人类的健康和消费安全。
为保障动物性食品安全，特制定本指导原则。
（二）适用范围凡申请在食品动物（如牛、羊、猪、禽、水产养殖动物等）使用的兽药均需进行残留试验，兽药残留试验必须在靶动物进行。
（三）兽药残留试验的主要内容1. 用于确定兽药在靶动物体内残留物的性质和量的代谢试验。
2. 用于建立兽药产品的休药期的残留标示物的消除规律试验。
3. 用于兽药残留消除规律研究的残留标示物检测方法的验证试验。
二、试验设计（一）用于确定兽药在靶动物体内残留物的性质和量的代谢试验1．概述首次用作兽药或改变靶动物且没有相关代谢研究资料的兽药需要进行此项试验。
一般使用放射性标记的兽药进行代谢试验。
如果有其他试验手段可以科学开展总残留测定试验，也可以不采用放射性标记的兽药。
所有试验必须遵守兽药非临床试验质量管理规范（GLP），所有涉及到放射性标记的兽药和其他基质材料必须遵守国家相关法规要求。
代谢试验提供的数据和资料包括：（1）总残留的消除试验，即给药后不同时间点采样的动物可食性组织中毒性作用的残留(Residues of toxicological concern)的消除数据；（2）主要代谢物的确定；（3）残留标示物的确定；（4）残留靶组织的确定。
2．总残留的消除试验一般在主要品种的靶动物体内进行，获得的试验数据有时候可以外推到次要品种的动物。
（1）放射性标记兽药一般选择使用14C标记，也可以使用3H、32P、15N或35S标记。
必须提供标记的位点，可以标记一个或多个位点。
标记物的化学纯度必须达到95％。
（2）动物及饲养处置必须是具有代表性的商业品种和靶动物群，要提供动物来源、体重、健康状况、年龄和性别等数据。
《兽药残留检测技术》PPT课件精选全文完整版
第六章 兽药残留检测技术
第二节 样品前处理
样品前处理是指样品的制备和对样品中的待测组分进行 提取、净化、浓缩的过程。
样品前处理的目的是消除基质干扰、保护仪器、提高检 测方法的灵敏度、选择性、准确度、精密度。
一、常见兽药
按用途分类
抗微生物药
抗寄生虫药 激素类药物
抗生素：青霉素、链霉素、氯霉素 抗菌药：磺胺药、呋喃类药、喹诺酮类 抗病毒药：干扰素 抗蠕虫药 抗原虫药 杀虫药
生长促进剂
1、抗微生物药
抗微生物药是指对病原微生物(细菌、真 菌、支原体、病毒等)具抑制或杀灭作用, 主要有用于全身感染的抗生素、磺胺药及 其他化学合成抗菌药。
3. 硝基呋喃类药物
主用于抗菌消炎, 如呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等。
4. 抗寄生虫类药物
主要用于驱虫或杀虫, 如苯并咪唑、左旋咪 唑、克球酚、吡喹酮等。
而常用的苯并咪唑类抗寄生虫药物有丙硫 苯咪唑、丙氧咪唑、噻苯咪唑、甲苯咪唑、 丁苯咪唑等。
5. 激素类药物
主要用于提高动物的繁殖和加快生长发育 速度, 使用于动物的激素有性激素和皮质激 素。而以性激素(包括多种内源性性激素、 人工合成的类似性激素的类固醇化合物、 人工合成的具有性激素某些特性的非类固 醇化合物) 最常用, 如孕酮、睾酮、雌二醇、 甲基睾酮, 丙酸睾酮、苯甲酸雌二醇、己烯 孕酮等。
兽药的危害
引起过敏、致畸、致突变及致癌等不良反 应。
立法
为防止动物性食品中可能出现的药物残留损害人体健 康,1984年在CAC的倡导下由联合国粮农组织(FAO)和世 界卫生组织(WHO)联合发起组织了食品中兽药残留立法 委员会(CCRVDF)。
畜产品药残检测中加标量的计算方法
畜产品药残检测中加标量的计算方法以农业部1025号公告—14—2008《动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测高效液相色谱法》为例说明。
标线线性范围：恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星标准工作液5ng/mL，10ng/mL，50ng/mL，100ng/mL，300ng/mL，500ng/mL；达氟沙星标准工作液1ng/mL，2ng/mL，10ng/mL，20ng/mL，60ng/mL，100ng/mL。
V/mV1=2C均值(μg/kg)残留量计算公式：X=C均值1、选择加标点加标以选择标线上的点（不限）较方便计算，以恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星标准工作液50ng/mL（达氟沙星标准工作液10ng/mL）来加标。
把加标点代入公式计算出加标后的残留量：恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星残留量X=2C均值(μg/kg)=2×50(μg/kg)=100(μg/kg)达氟沙星残留量X=2C均值(μg/kg)=2×10(μg/kg)=20(μg/kg)2、加标量的计算（根据加标残留量加标）恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星100μg/kg=0.1μg/g，称取样品2g，总添加量为2g×0.1μg/g=0.2μg，需要2.0μg/ mL恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星标准液：0.2μg÷2.0μg/mL=0.1mL=100 uL；达氟沙星20μg/kg=0.02μg/g，称取样品2g，总添加量为2g×0.02μg/g=0.04μg，需要0.4μg/ mL达氟沙星标准液：0.04μg÷0.4μg/mL=0.1mL=100 uL。
3、实际加标后残留量的验算恩诺沙星、环丙沙星和沙拉沙星2.0μg/ mL×0.1mL÷2g=0.1μg/g=100(μg/kg)达氟沙星0.4μg/ mL×0.1mL÷2g=0.02μg/g=20(μg/kg)4、回收率计算公式R=（C均值—C空白）÷Cs×100%C均值：阳性添加检测平均浓度(ng/mL)；C空白：加标基样检测平均浓度(ng/mL)；Cs：对照品加标点上机浓度(ng/mL)。
氟喹诺酮类药物残留限量及检测技术研究进展
氟喹诺酮类药物残留限量及检测技术研究进展张运尚，杜加茹，王伟东，樊剑鸣*（郑州大学公共卫生学院，河南郑州 450001）摘 要：氟喹诺酮类药物（FQS）是第3代喹诺酮类抗生素，具有良好的生物利用度和耐受性，不仅对革兰氏阳性菌和阴性菌有杀菌作用，还具有抗真菌和抗病毒活性，因此被广泛应用于治疗畜牧动物养殖过程中的细菌性感染。
但当人类过多食用含有FQS残留的食品后，将会损害身体多个系统并引起细菌耐药性，因此建立灵敏度高、简便的检测方法十分必要。
本文综述了FQS残留的检测标准和常用的检测方法及优缺点，酶联免疫分析法（ELISA）具有灵敏度高、操作简便等优势，预测ELISA法在今后FQS残留检测中发挥重要作用。
关键词：氟喹诺酮类药物；药物残留限量；残留检测技术；酶联免疫分析法中图分类号：S816.7 文献标识码：A DOI编号：10.19556/j.0258-7033.20200516-05氟喹诺酮类药物（Fluoroquinolones，FQS）是第3代喹诺酮药物，其化学结构是在喹啉环的6位上加入了氟原子，7位上连有哌嗪基的一类衍生物，此特点使得原本亲脂性的吡酮类药物增加了适度的亲水性，同时降低了蛋白结合率，提高生物利用度[1-2]。
该类药物通过抑制细菌的DNA和RNA合成从而达到抑菌作用[3]。
相比第1代及第2代喹诺酮药物，FQS的抗菌活性明显增加，抗菌谱显著扩大，对革兰氏阳性菌（金葡球菌、链球菌、肺炎球菌）和革兰氏阴性菌（肠杆菌科、流感杆菌和奈瑟菌属）[4]以及一些衣原体、支原体和螺旋体均有抗菌作用[5]，因此被广泛应用在临床上治疗细菌感染性疾病。
FQS代表药物主要包括恩诺沙星（Enrofloxacin，ENR）、环丙沙星（Ciprofloxacin，CIP）、诺氟沙星（Norfloxacin，NOR）、达氟沙星（Danofloxacin，DAN）、氟罗沙星（Flero xacin，FLE）、沙拉沙星（Saraflaxacin，SFX）、依诺沙星（Enoxacin，EX）等。
鸡肉中喹诺酮类药物的检测
2017年第11期喹诺酮类药物广泛应用于动物疾病的防治中，尤其在各种密集舍饲的大型养殖场中应用广泛。
在使用喹诺酮类药物养殖的过程中需要严格遵守投药量、投药期、休药期的相关规定。
只有经过严格的休药期，才可以使得暂时残留在动物体内的药物被代谢至完全消除或者降低到对人身体健康无害的浓度，保证人们的安全食用。
喹诺酮类药物残留的药物会对人体健康造成潜在的危害，为此世界各国都制定了相对严格的兽药残留标准。
目前，欧盟、中国及其他等国家制定的喹诺酮类药物在动物源性食品中的残留标准是地于100ng/mL 。
1样品的来源肉鸡鸡肉样品采集于不同的鸡肉食品加工厂，共41份。
2试剂与试剂盒喹诺酮类药物残留检测试剂盒，其主要包括：①预包被偶联抗原的酶标版（96孔）；②标准液：0ppb 、0.5ppb 、1.5ppb 、4.5ppb 、13.5ppb （各1mL ）、40.5ppb ；③高标准液：1ppm （1mL ）；④酶标记物（5.5mL ）；⑤抗体工作液（5.5mL ）；⑥底物液A （6mL ）；⑦底物液B （6mL ）；⑧终止液（6mL ）；⑨20×浓缩洗涤液（40mL ）以上各试剂在2～8℃保存NaH 2PO 4·12H 2O 、NaH 2PO 4·2H 2O 去离子水。
3样品的处理步骤实验器具必须洁净，使用一次性吸头，避免污染干扰实验结果。
配液1：0.02M PB 缓冲液称取0.44g NaH 2PO 4·2H 2O 和2.58gNaH 2PO 4·12H 2O 加500mL 去离子水溶解。
配液2：复溶液将2×复溶液用去离子水进行2倍稀释，用于样本的复溶。
（复溶液在4℃环境可保存一个月）。
取处理的鸡肉的上清，加入3mL 0.02M PB 缓冲液混合，混合30s ，取50μL 用于分析，将样本稀释倍数：4,检测下限：2ppb 。
4样品的ELSIA 检测步骤将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，室温放置30min 以上。
喹诺酮类兽药介绍
（三）达氟沙星
• 1、药动学 • 其特点是在肺组织的药物浓度可达血浆的5~7倍。内
服、肌注和皮下注射的吸收迅速，生物利用度高。 • 2、抗菌作用 • 本药的抗菌作用与恩诺沙星相似，尤其对动物的呼吸
道致病有良好的抗菌活性。
（三）达氟沙星
• 3、应用
• 本药适用于牛、猪、禽的敏感细菌和支原体所致各 种呼吸道感染性疾病，如牛的巴氏杆菌病、支原体 病；猪传染性胸膜肺炎、气喘病；禽败血支原体病、 大肠杆菌病、禽霍乱等。
癫痫患犬慎用。 • 3、肾功能不良患畜慎用。 • 4、喹诺酮类兽药内服适口性差，大多数动物减食，混
饲给药猪大多拒食。
八、主要喹诺酮类兽药物的应用
（一）恩诺沙星
• 1、药动学
• 大多数单胃动物内服给药后吸收迅速和较完全，成年反刍兽内服 给药的生物利用度很低，需采用注射给药。肌注吸收完全，除了 中枢神经系统外，几乎所有组织的药物浓度高于血液，这种分布 有利于全身感染和深部组织感染的治疗。本药通过肾和非肾代谢 方式进行清除，15%~50%的药物以原形通过尿排泄。恩诺沙星 在动物体内的代谢，主要是脱乙基成为环丙沙星。
二、喹诺酮类兽药种类
• 钙、镁、铁、铝等多价金属离子能与喹诺酮类药物 螯合，内服合用影响吸收。氟诺酮类药物能抑制咖 啡因、茶碱的代谢，可使后者的血药浓度异常，甚 至出现中毒的症状。
三、喹诺酮类药物抗菌作用
• 氟喹诺酮类为广谱杀菌性抗菌药，对革兰氏阳性菌、革兰氏 阴性菌、支原体、某些厌氧菌有效，如对大肠杆菌、沙门氏 菌、巴氏杆菌、克雷白杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌，嗜血杆 菌、波氏杆菌、丹毒杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、化脓 棒状杆菌和支原体等均敏感。对耐甲氧西林的金黄色葡萄球 菌、耐磺胺+TMP的细菌、耐庆大霉素的绿脓杆菌、耐泰乐 菌素或泰妙菌素的支原体也有效。
食品中兽药残留检测
（四）分析步骤
2.试料的保存 -20℃以下保存。 3.测定步骤 （1）提取 称取试样5 ±0.05g，于50mL聚四氟乙烯离心管中，加乙酸乙酯20mL，涡动2min， 4000r/min离心5min，取上清液于100mL鸡心瓶中，残渣中加乙酸乙酯20mL，重复提取一 次，合并两次提取液。
（四）分析步骤
硝基呋喃类药物和代谢物均可以使实验动物发生癌变和基因突变。国际食品法 典委员会(CAC)、中国和欧美等大多数国家规定禁止使用此类兽药，在动物性农产品 和饲料中不得检出。硝基呋喃类药物残留检验方法有HPLC法、液质联用法、酶联免 疫法等。酶联免疫法可检测多种硝基呋喃类药物，常用于硝基呋喃类药物残留快速 筛选检验。现以SN/T 3380-2012出口动物源食品中硝基呋喃代谢物残留量的测定为 例介绍酶联免疫法。
2. 乙酸乙酯：色谱纯。 3. 乙腈：色谱纯。 4. 甲醇：色谱纯。
（二）试剂和材料
5. 盐酸。 6. 正已烷。 7. 甲酸：色谱纯。 8. 氨水。 9. MCX柱：60mg/3mL或者相当。 10. 0.1%甲酸溶液：取甲酸1mL，用水溶解并稀释至1000mL 。 11.0.1%甲酸乙腈溶液：取0.1%甲酸830mL，用乙腈溶解并稀释至1000mL。
一、原理
试料中残留的磺胺类药物，用乙酸乙酯提取，0.1mol/L盐酸溶液转换溶剂， 正已烷除脂，MCX柱净化，高效液相色谱-紫外检测法测定，外标法定量。
（二）试剂和材料
除非另有规定，本方法所使用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一 级水。
1.磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲氧哒嗪、苯酰磺胺、磺胺间甲氧嘧啶、磺 胺氯哒嗪、磺胺甲恶唑、磺胺异恶唑、磺胺二甲氧哒嗪、磺胺吡唑对照品：含 量≥99%；磺胺恶唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶：含量≥98%。