Aurora-A表达与胰腺癌吉西他滨耐药关系的实验研究
Aurora-A介导的ER阳性乳腺癌Tamoxifen耐药性的机制研究的开题报告
Aurora-A介导的ER阳性乳腺癌Tamoxifen耐药性
的机制研究的开题报告
背景与意义：
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，Tamoxifen是ER阳性乳腺癌的常用药物。
然而，近年来Tamoxifen耐药性的发生率升高，导致患者的治疗效果受到影响。
因此，研究Tamoxifen耐药性机制对临床治疗具有重要的指导意义。
Aim：
本研究旨在探讨Aurora-A介导的ER阳性乳腺癌Tamoxifen耐药性的机制。
方法：
1. 研究对象：选取ER阳性乳腺癌细胞系。
2. 细胞实验：通过Western blot、免疫荧光等实验方法检测Aurora-A在Tamoxifen耐药细胞中的表达并与敏感细胞比较；建立Aurora-A基因沉默模型，比较改造前后细胞对Tamoxifen敏感性的变化。
3. 小鼠实验：建立ER阳性乳腺癌裸鼠模型，检测Tamoxifen联合Aurora-A抑制剂治疗对裸鼠肿瘤生长抑制的效果。
预期结果：
1. 发现Tamoxifen耐药乳腺癌细胞中Aurora-A表达水平高于敏感细胞。
2. Aurora-A沉默可增加Tamoxifen敏感性。
3. Tamoxifen联合Aurora-A抑制剂能有效抑制裸鼠肿瘤生长。
结论：
本研究将探讨Aurora-A介导的ER阳性乳腺癌Tamoxifen耐药性的机制，为临床治疗指导和治疗方案的改进提供重要的理论依据。
吉西他滨诱导胰腺癌细胞株SW1990的耐药作用与硫氧还蛋白还原酶活性的改变
吉西他滨诱导胰腺癌细胞株SW1990的耐药作用与硫氧还蛋白还原酶活性的改变牛备战;陈革;李丽君;吴元德;赵玉沛【期刊名称】《中国医学科学院学报》【年(卷),期】2005(027)005【摘要】目的建立对吉西他宾耐药的胰腺癌细胞株,探讨硫氧还蛋白还原酶(TrxR)在耐药过程中的作用.方法采用间歇浓度递增法诱导胰腺癌细胞株SW1990对吉西他宾耐药,检测其生物学性状变化,并对比观察TrxR活性变化.结果药物培养9个月后,得到稳定传代的SW1990/GZ耐药细胞株;其形态学、生长特征等均发生了明显变化,细胞变圆、体积缩小、内质网扩张、颗粒样物质增多及细胞倍增时间延长;对吉西他滨、5-氟尿嘧啶、阿霉素和丝裂霉素的耐药性均显著增加;耐药细胞的TrxR 活性也明显增高.结论SW1990/GZ有多药耐药现象,TrxR在耐药过程中起一定作用.【总页数】5页(P606-610)【作者】牛备战;陈革;李丽君;吴元德;赵玉沛【作者单位】中国医学科学院,中国协和医科大学,北京协和医院基本外科,北京,100730;中国医学科学院,中国协和医科大学,北京协和医院基本外科,北京,100730;中国医学科学院,中国协和医科大学,北京协和医院基本外科,北京,100730;中国医学科学院,中国协和医科大学,北京协和医院基本外科,北京,100730;中国医学科学院,中国协和医科大学,北京协和医院基本外科,北京,100730【正文语种】中文【中图分类】R329.26;R735.9【相关文献】1.阿司匹林引起胰腺癌细胞株SW1990对吉西他滨耐药及其机制研究 [J], 林永良;陈良岂;杜荣国;林英卓2.热疗增强盐酸吉西他滨对人胰腺癌细胞株SW1990增殖抑制作用的实验研究 [J], 李小平;郑磊贞;王雅杰3.ERK通路在胰腺癌细胞株SW1990吉西他滨化疗耐药中的作用 [J], 谢德荣;郭双双;杨琼;江志敏;陈邓林;毕卓菲;马雯4.吉西他滨耐药的胰腺癌SW1990细胞株的建立及相关特性检测 [J], 贾一夫;丁飞;余跃;高萌;杨显珠;王均5.miR-100通过抑制PLK1提高胰腺癌细胞株SW1990吉西他滨敏感性的影响及作用机制 [J], 李东正;魏尉;安勇;顾荣民;文旭;李刚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
苦参碱调节Aurora-A表达逆转胰腺癌吉西他滨耐药的研究
1、项目名称：苦参碱调节Aurora-A表达逆转胰腺癌吉西他滨耐药的研究2、研究前景分析胰腺癌的发病率逐年升高，在欧美居常见恶性肿瘤的第4位，在我国位于恶性肿瘤死亡的第9位。
据报道胰腺癌在初次确诊后，1年内死亡率达80%，3年内为95%。
转移患者的中位生存时间3-6 mon，局部晚期6-10 mon。
存活率的提高主要源于手术切除率和外科治疗水平的提高。
手术仍是目前惟一有希望治愈胰腺癌的措施，但由于缺乏早期诊断手段，只有10%～20%的病人就诊时适宜手术切除，总的切除率为14%。
手术切除者，总的5年存活率为18%，淋巴结阴性的病人为32%，切缘和淋巴结均为阴性的病人可达到40%。
70%～80%的病人由于肿瘤无法切除，必须通过非手术治疗来改善生活质量并延长生存期[1]。
即使是肿瘤切除的病人，既往的随机对照研究也证明远期效果不理想，患者大多死于肝转移和局部复发。
所以在手术同时配合辅助化疗，以期达到提高生活质量和延长生存时间的目的。
但胰腺癌的化疗效果仍不是很理想，作为胰腺癌的首选药物的而吉西他滨，其化疗有效率仅为25%[2]。
多药耐药（multidrug resistance，MDR）是肿瘤化疗失败的主要原因之一。
MDR 是指抗某种细胞毒物药的耐药特征，可对许多结构上无关或作用机制上不同的其他细胞毒药物产生交叉抗药性，可由肿瘤细胞的MDR基因过表达或扩增所引起，但是其机制却不明确。
吉西他滨在胰腺癌的化疗中有着极其重要的地位。
吉西他滨是一种属于新型抗嘧啶核苷酸代谢化疗药物，属细胞周期特异性抗代谢类药物，主要作用于DNA合成期（即S期）的肿瘤细胞，是胰腺癌的标准一线化疗方案[3]。
有报道指出，腹腔内吉西他滨灌注能有效抑制肿瘤生长，改善患者生活质量，并减轻全身毒性反应[4]。
尽管吉西他滨单药方案已经成为胰腺癌辅助治疗的标准方案，但其疗效还不能令临床医生满意，尤其是对无手术指征的局部晚期和转移性胰腺癌，中位生存期的延长较传统的5-FU/LV也仅数月。
胰腺癌组织存活素和极光B表达的相关性
胰腺癌组织存活素和极光B表达的相关性谢祚启;赵秋;柯晓煜;范学科;刘志清【期刊名称】《肿瘤防治研究》【年(卷),期】2010(37)2【摘要】目的探讨凋亡抑制蛋白存活素(survivin)和极光B(AURORA-B)在胰腺癌组织中的表达与生物学行为之间的关系及两者的相关性。
方法用免疫组织化学SP 法检测45例胰腺癌和8例慢性胰腺炎及7例正常胰腺组织切片的survivin和AURORA-B的表达。
结果45例胰腺癌中survivin和AURORA-B蛋白的阳性表达率分别为75.55%和53.33%;两者在7例正常胰腺组织中均未发现阳性表达;两者在8例慢性胰腺炎组织中的阳性表达率分别为25%和0。
survivin的表达与组织学分级有关(P<0.05),而与临床分期和淋巴结转移关系不大(P>0.05),AURORA-B 的表达与临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05),而与组织学分级关系不大(P>0.05);survivin与AURORA-B的表达密切相关(P<0.05)。
两者的表达与患者的性别、年龄、肿瘤的大小及部位均无关。
结论survivin和AURORA-B密切相关,可能在胰腺癌的发生、发展过程中起关键作用,可能为胰腺癌的治疗和预防提供了新的靶点。
【总页数】4页(P185-188)【关键词】胰腺癌;免疫组织化学;存活素;极光B【作者】谢祚启;赵秋;柯晓煜;范学科;刘志清【作者单位】武汉市柏泉劳教所卫生所;华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科【正文语种】中文【中图分类】R735.9【相关文献】1.存活素在胰腺癌组织中的表达 [J], 梁智勇;刘彤华;罗玉凤;关健;魏拴增;曹金伶;高洁;崔全才2.组织芯片检测人宫颈癌癌基因和存活素在胰腺癌中的表达及临床意义 [J], 张翼;徐泽宽;张国新;郝波;苗毅3.存活素和尿激酶型纤溶酶原激活剂在人胰腺癌组织中的表达意义及相关性分析[J], 雷霆;贾富鑫;刘江伟4.胆管癌组织中存活素及MMP-9的表达相关性及临床意义 [J], 杜骁;薛冰川;安鑫;许桂祥5.大肠癌组织中存活素、环氧化酶-2、T细胞因子4的表达及三者相关性 [J], 肖忠盛;龙泓;丁成明;肖友忠因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一项新的研究表明生物学行为可增加胰腺癌对吉西他滨化疗的敏感性
一项新的研究表明生物学行为可增加胰腺癌对吉西他滨化疗的敏感性FBW7通过上调ENT1增加胰腺癌对吉西他滨化疗的敏感性胰腺癌恶性度高，五年生存率仅为8%。
一方面由于早期诊断困难，手术切除率低。
另一方面即使部分患者获得手术切除，术后也易复发和转移。
药物化疗是胰腺癌综合治疗最重要的组成部分，以吉西他滨为基础的单药或联合方案仍然是胰腺癌化疗的首选，令人遗憾的是临床仅30%患者对吉西他滨单药化疗有反应，即使联合白蛋白紫杉醇方案，有反应的患者也不足50%。
发表期刊在胰腺癌细胞中由于FBW7表达的下调导致其泛素化底物c-Myc 呈高表达，进而引起肿瘤细胞的恶性增殖、糖代谢异常及侵袭转移。
在探索胰腺癌对吉西他滨耐药机制的过程中。
上海市胰腺肿瘤研究所团队通过预实验发现在胰腺癌细胞中过表达FBW7，可以增加细胞对吉西他滨的化疗敏感性。
进一步研究发现FBW7增加胰腺癌细胞对吉西他滨的化疗敏感性依赖于hENT1蛋白水平的提高及细胞膜定位的增加。
研究成果发表于2017年的《Oncology Reports》。
第一作者胡强胜硕士上海市胰腺肿瘤研究所复旦大学胰腺肿瘤研究所复旦大学附属肿瘤医院胰腺外科相关背景目前认为hENT1是将吉西他滨转运入胰腺癌细胞主要的核苷载体，其表达水平直接决定细胞内吉西他滨浓度，进而影响化疗疗效。
因此深入了解hENT1表达的调控机制并选择合适的方法加以干预有助于提高胰腺癌细胞对吉西他滨化疗的敏感性。
研究进展考虑到FBW7是泛素－蛋白酶体降解途径的重要调节因子，首先通过使用MG132 抑制泛素－蛋白酶体降解途径，观察到hENT1的蛋白水平并无明显变化。
于是进一步使用氯喹抑制溶酶体降解途径，观察到hENT1的蛋白水平明显提高，同时细胞对吉西他滨的化疗敏感性也增加，提示FBW7可能通过溶酶体降解途径参与了hENT1表达的调控。
上述实验结果提示胰腺癌细胞低表达FBW7促进hENT1的降解，使得细胞对吉西他滨转运减少。
Aurora －A 参与非小细胞肺癌化疗药耐药与患者预后的关系
Aurora －A 参与非小细胞肺癌化疗药耐药与患者预后的关系叶磊光;闫安;刘宝刚【期刊名称】《实用肿瘤学杂志》【年(卷),期】2016(030)002【摘要】Objective To identify the expression of Aurora-A and its correlation with cisplatin resist-ance and prognosis in non-small cell lung cancer( NSCLC) .Methods A total of 62 NSCLC patients treated by surgery and adjuvant cisplatin-based chemotherapy were included in our study.The expression of Aurora-A was determined by immunohistochemical ( IHC) analysis.Correlation between Aurora -A expression and clinic pathological variables was estimated.The prognostic significances were assessed by Kaplan-Meier method,and the differences in survival probabilities were evaluated by the Log-rank test.Results IHC showed that 26 out of the 62 NSCLC patients were with high Aurora-A.There was no significant association between Aurora-A ex-pression and clinic pathological variables.The overall survival of patients with high Aurora-A expression( median survival time:50.1 months)was significantly poorer than those with low Aurora-A expression(median survival time:55.8 months) .Conclusion The present study suggests that high Aurora-A expression is correlated with cisplatin-based chemotherapeutic resistance and predicts poor patient survival in NSCLC.However, further in vitro study is needed.%目的：本研究旨在探索 Aurora－A在非小细胞肺癌（ Non－smallcell lung cancer，NSCLC）的表达情况，以及其与化疗药耐药性和预后的关系。
苦参碱对胰腺癌吉西他滨耐药及Aurora-A表达的影响
苦参碱对胰腺癌吉西他滨耐药及Aurora-A表达的影响朱锦辉;陈燕;叶清煌;占小莉;王跃东【摘要】Objective To evaluate the effect of matrine on inducing apoptosis of pancreatic cancer cells,and regulating the expression of Aurora-A and reversing gemcitabine-resistance of pancreatic cancer. Methods Apoptosis of PANC-1 and PANC-1/R2 cells were analyzed by Flow Cytometry after treatment of matrine and gemcitabine. Aurora-A gene expression of PANC-1 / and PANC-1/R2 were analyzed by qPCR after treatment of matrine and gemcitabine. Results The outcome of Flow cytometry shows that apoptosis rates of pancreatic cells had no significant difference in groups but significant difference between the PANC-1 and PANC-1/R2 groups. The same phenomenon was found of Aurora-A mRNA expressionin the two groups. Conclusions The combination of matrine andh gemcitabine can induce apoptosis of pancreatic cancer cells,but can not reverse the effects of gemcitabine-resistance of pancreatic cancer,can not increase sensitivity to chemotherapy,also has no impact on expression of Aurora-A. The results indicates that matrine can play a certain role of anti-pancreatic cancer by inducing apoptosis.%目的：探讨苦参碱对胰腺癌吉西他滨耐药及Aurora-A表达的影响。
吉西他滨缓释微球间质化疗治疗胰腺癌的实验研究
吉西他滨缓释微球间质化疗治疗胰腺癌的实验研究李井泉;赵平;王世亮;王铮;李爱东;张永明;韩志楷;马洁【期刊名称】《癌症进展》【年(卷),期】2008(6)6【摘要】目的研究(聚乳酸-乙醇酸共聚物)PLGA-吉西他滨(GEM)缓释微球间质化疗应用于胰腺癌的治疗效果.方法将80只胰腺癌荷瘤鼠随机分为8组,每组10只.A1、A2、A3组瘤内注射PLGA-GEM缓释微球,给药剂量分别为5mg/kg、2.5mg/kg和1.25mg/kg;B组瘤内注射GEM(5mg/kg)对照;C组腹腔内注射GEM 5mg/kg;D 组瘤内注射PLGA-5-Fu缓释微球5mg/kg;E组为PLGA载体5mg/kg对照;F组不接受任何治疗.于给药前、给药后4、8、12、16、20、24天观察裸鼠生存状况、称体重、测量肿瘤大小,绘制肿瘤生长曲线;24天时处死动物,称瘤重,计算抑瘤率;行免疫组化染色,了解VEGF表达情况.结果 PLGA-GEM缓释微球瘤内给药高、中剂量组(A1、A2组)抑瘤率分别达到了66%和40%,与其他组相比结果具有统计学差异(P＜0.05);随着PLGA-GEM 缓释微球剂量的增加,VEGF表达降低,A1、A2组与F组相比,结果具有统计学差异(P＜0.05).各组体重在治疗后各观察点与治疗前比较,没有统计学差异.结论 PLGA-GEM缓释微球能有效抑制胰腺癌移植瘤的VEGF表达,能显著抑制肿瘤的生长,且无明显的毒副作用,该制剂具有一定的潜在临床应用价值.【总页数】6页(P601-606)【作者】李井泉;赵平;王世亮;王铮;李爱东;张永明;韩志楷;马洁【作者单位】中国医学科学,院北京协和医学,院肿瘤医院肿瘤研究所,北京,100021;中国医学科学,院北京协和医学,院肿瘤医院肿瘤研究所,北京,100021;合肥工业大学控释药物研究室,合肥,230009;中国医学科学,院北京协和医学,院肿瘤医院肿瘤研究所,北京,100021;中国医学科学,院北京协和医学,院肿瘤医院肿瘤研究所,北京,100021;中国医学科学,院北京协和医学,院肿瘤医院肿瘤研究所,北京,100021;中国医学科学,院北京协和医学,院肿瘤医院肿瘤研究所,北京,100021;中国医学科学,院北京协和医学,院肿瘤医院肿瘤研究所,北京,100021【正文语种】中文【中图分类】R73-76+1;R735.9【相关文献】1.吉西他滨单药与吉西他滨联合化疗治疗晚期胰腺癌的临床观察 [J], 尚秋利;温洪涛2.吉西他滨联合奥沙利铂与吉西他滨单独化疗治疗晚期胰腺癌的近期疗效比较 [J], 谭晶;卢永刚;梁颖;王昭辉3.吉西他滨单药与吉西他滨联合化疗治疗晚期胰腺癌疗效及安全性评价 [J], 王付湘4.纳米刀联合吉西他滨与吉西他滨同步放化疗治疗局部晚期胰腺癌对比评价 [J], 黄德良;胡莹;万友华;姚中平;袁红艳5.吉西他滨单药与吉西他滨联合化疗治疗晚期胰腺癌的临床观察 [J], 闫萍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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Aurora-A表达与胰腺癌吉西他滨耐药关系的实验研究何永礼;施福田;严秋亮;朱锦辉【摘要】目的探讨Aurora-A的表达与胰腺癌吉西他滨耐药之间的关系.方法 40只裸鼠采用随机数字表法分为两组,分别采用人胰腺癌细胞株PAN C-1和吉西他滨耐药株PANC-1/R2皮下移植再原位移植的方法构建动物模型(PANC-1组、PANC-1/R2组).采用实时定量基因扩增(qPCR)法测定PANC-1和PANC-1/R2中Aurora-AmRNA的表达.建模后第5周处死裸鼠,测定并比较两组裸鼠体重、肿瘤转移情况、肿瘤质量;采用免疫组化方法测定并比较两组瘤体Aurora-A蛋白的表达.结果 PANC-1组、PANC-1/R2组第5周裸鼠体重、肿瘤重量及肿瘤转移率分别为(23.2±1.41)g、(0.453±0.110)g、36.8％及(22.91±1.13)g、(0.564±0.203)g、50.0％,两组比较差异均有统计学意义(均P＜0.05),两组Aurora-A mRNA表达分别为1.002±0.040及1.845±0.069,差异有统计学意义(P ＜0.05);两组Aurora-A蛋白阳性表达率分别为83.3％及57.9％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Aurora-A高表达与胰腺癌细胞株的吉西他滨耐药有关,新方法构建的PANC-1/R2耐药株Aurora-A高表达,可用于胰腺癌吉西他滨耐药研究的载体.【期刊名称】《浙江医学》【年(卷),期】2016(038)011【总页数】4页(P810-813)【关键词】Aurora-A;胰腺癌;多药耐药;吉西他滨【作者】何永礼;施福田;严秋亮;朱锦辉【作者单位】金华文荣医院普外科;金华文荣医院普外科;金华市人民医院普外科;310009 杭州,浙江大学医学院附属第二医院外科【正文语种】中文【 Abstract】 Objective To assess the relationship of Aurora-A expression with gemcitabine-resistance in pancreatic cancer cells. Methods Pancreatic cancer model was established by inoculation in nude mice with human pancreatic cancer PANC-1 cells and drug resistant pancreatic cancer PANC-1/R2 cells,respectively(n=20 in each group).The expression of Aurora-A mRNA in PANC-1 and PANC-1/R2 cells were tested by qPCR technique.Animals were sacrificed after 35d and the tumor tissue samples were collected.The expression of Aurora-A protein in tumor tissues of two groups was detected by immunohistochemistry. Results In PANC-1 and PANC-1/R2 groups,the metastatic rate in 5 ws was 36.8%(7/19)and 50.0% (9/18)(χ2=4.21,P＜0.05),the mean weight of tumor was 0.453±0.110g and 0.564±0.203g(t=9.35,P＜0.05),the weight of mice was 23.2±1.41 g and 22.91±1.13g(t=20.36, P＜0.05).The expression of Aurora-A mRNA in PANC-1 cells and in PANC-1/R2 cells was 1.002± 0.040 and 1.845±0.069,respectively(t=35.02,P＜0.05).Positive expression of Aurora-A protein was detected in 15 out 18 mice of PANC-1/R2 group,while it was in 11 out 19 mice of PANC-1 group(χ2=5.023,P＜0.05). Conclusion High expression of Aurora-A gene is associated with gemcitabine-resistance in pancreatic cancer cells.胰腺癌是常见的病死率很高的恶性肿瘤，化疗效果不理想。
作为治疗胰腺癌的首选药物吉西他滨，其化疗有效率也仅为25%[1]，多药耐药是导致化疗效果欠佳的重要原因。
Aurora-A蛋白作为DNA修复功能的蛋白，具有参与修复DNA的作用。
目前发现，在食管癌、前列腺癌、乳腺癌、胃癌、肺癌等的化疗中，抑制Aurora-A的表达能增强肿瘤的化疗敏感度[2-4]。
本文采用人胰腺癌细胞株PANC-1和吉西他滨耐药株PANC-1/R2细胞株皮下移植再原位移植的方法构建动物模型，以此研究Aurora-A差异表达与吉西他滨的耐药关系，现将结果报道如下。
1.1 材料（1）实验动物：40只雄性BALB/c裸小鼠由浙江中医药大学动物实验中心提供，鼠龄42～56（47± 12）d；质量18～20（19.2±0.7）g；饲养于恒温（25～27℃）、恒湿（45%～50%），且符合无特定病原体条件的裸鼠室内；饮用水及标准食疗均经灭菌后供动物自由食用。
（2）细胞株：PANC-1由浙江大学医学院附属第二医院外科研究所提供。
PANC-1/R2为体外培养体内诱导循环筛选的新方法获得的PANC-1的吉西他滨耐药株。
（3）主要仪器和试剂：实时定量基因扩增（qPCR）仪购自Biorad公司，IS1000凝胶成像系统购自美国法莫西亚公司，Beckman Coul ter Avanti J-20低温离心机购自德国Heraeus公司，鼠抗人Aurora-A单克隆抗体购自美国Santa Crus Biotechnology公司，Taq DNA聚合酶购自日本Takara公司，RNA酶抑制剂购自美国Promega公司，ABC免疫组化检测试剂盒购自华美生物工程公司。
1.2 方法1.2.1 分组方法将40只裸小鼠采用随机数字表法分成两组，每组20只，分别用PANC-1和PANC-1/R2两种细胞株皮下移植再原位移植的方法建模（即PANC-1组及PANC-1/R2组）。
两组裸鼠每天检查、每周称重，于建模后第5周称重后处死。
实验过程中，PANC-1组术后1周因腹腔感染死亡1只，故PANC-1组19只进入后续实验，PANC-1/R2组术后10d及2周时因腹腔感染各死亡1只，故18只进入后续实验。
收集两组裸鼠肿瘤病灶及淋巴结和内脏等标本组织。
胰腺肿瘤组织在拭干表面水分后立即在电子称上称重并记录。
标记取下后的标本，用预冷的0.9%氯化钠溶液冲洗，并取肿瘤组织1块（用于免疫组化染色）立即置入液氮罐中，后转入-80℃冰箱保存。
其余肿瘤组织石蜡包埋切片进行HE染色。
所有肿瘤组织均作病理切片证实。
记录两组裸鼠重量、肿瘤组织重量，以及胰腺外淋巴、远处转移发生率，并进行组间比较。
1.2.2 Aurora-A mRNA测定 PANC-1和PANC-1/R2两种细胞株作体外培养，细胞裂解提取RNA，以提取的RNA进行扩增。
其引物序列及目的片段的长度Aurora-A-R为CGGTTCAGAATCAGAAGCAGAAGC（5′-3′）；Aurora-A-F为CCAGAGGGCGACCAATTTCAAAG（5′-3′）。
qPCR程序：将提取的RNA反转录制备cDNA，设定程序为两步法real-time PCR，预变性95℃，1min；之后每一步变性95℃，5s；退火延伸60℃，20s；共进行40个循环。
PCR产物经2%琼脂糖凝胶电泳，选择明亮条带的产物进行正反向测序，电压设定120V，电流60mA，然后在自动凝胶成像系统上成像观察扩增结果。
记录两组qPCR测定的mRNA的结果，并进行组间比较。
1.2.3 Aurora-A蛋白表达测定采用二步法免疫组化测定Aurora-A蛋白表达。
免疫组化染色程序按试剂盒说明书进行，PBS代替一抗作阴性对照。
Aurora-A蛋白阳性表达定位于细胞质，呈棕黄色颗粒。
在光学显微镜下观察全片，对切片染色阳性情况进行评估，结果判定参照文献[3]进行。
显微镜下取不同放大倍数，选取5个高倍视野，拍照、保存结果。
根据阳性细胞数量、百分率及表达强度分为4级：0级为无明显阳性反应细胞，Ⅰ级为阳性细胞＜25%、弱染色，Ⅱ级为阳性细胞25%～75%；Ⅲ级为阳性细胞＞75%、强染色。
0～Ⅰ级判为阴性表达；Ⅱ～Ⅲ级判为阳性表达。
分别记录两组免疫组化Aurora-A蛋白表达的阳性率，并进行比较。
1.3 统计学处理应用SPSS 14.0统计软件，计量资料以表示，组间比较采用t检验。
计数资料以百分率表示，组间比较采用χ2检验。
2.1 两组裸鼠第5周体重、肿瘤质量及胰腺外淋巴、远处转移发生率比较见表1。
2.2 两种细胞株Aurora-A mRNA表达水平的比较PANC-1、PANC-1/R2细胞株Aurora-A mRNA的表达水平分别为1.002±0.040及1.845±0.069，两者比较，差异有统计学意义（t=35.02，P＜0.05）。
其电泳图见图1。
2.3 两组裸鼠标本中Aurora-A蛋白表达情况 PANC-1、PANC-1/R2标本中Aurora-A蛋白表达阳性率分别为57.9%（11/19）、83.3%（15/18），两组比较差异有统计学意义（χ2=5.023，P＜0.05）。
光学显微镜下可见Aurora-A蛋白阳性表达呈棕黄色颗粒，主要分布在肿瘤细胞和血管内皮细胞的细胞质中（图2）。
Aurora-A是新近发现的调节中心体、微管功能的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在中心体成熟、纺锤体形成、染色体分离，即有丝分裂的正常进行中发挥至关重要的作用。
目前，Aurora-A已被认为是一个与多种恶性肿瘤发生相关的癌基因。