血红蛋白测定参考方法

的 内径 为 1.000cm± 0。 002cm。
5.2 试 剂 (文 -齐 氏液 ,van KampeⅡ and z刂 Istra reagent)
5.2.1 文-齐 氏液 的组成
KCN
O。 o5og
K3Fe(CN)6
0.20og
KH2P04(无 水 )
0.140g
非离子表面活性剂
0.5mL~1.0mL
5 -般 技术 要 求
5.1 设备 5.1.1 玻璃 器具
试验 所 用 的玻 璃器 具 应 为 A级 。
Ws/T341ˉ ˉ2011
规格要求 :正 向置换式微 量 加 样 器 或 吸量 管 100uL± 0.5uL、 0.5mL± 0.005mL,容 量 瓶 25mL± o,03mL、 100mL± 0.08mL、 250mL± 0.12mL、 1000mL± 0.3mL。
蛋 白(Hi),其 后 又 与氰 离 子 (CNˉ )反 应 生成 氰 化 高 铁 血 红蛋 白(HCN),HCN在 波 长 540nm处 有 最 大吸收峰 ,HCN吸 光度严 格遵循 朗伯-比 尔定律 ,即 HCN在 波 长 540nm的 吸光度值与 HCN浓 度 成
正 比 ,血 红 蛋 白浓 度 可 由分 光 光度 计 所 测定 的吸光 度值 计 算 得 出 。
见 的小凝 块 或溶 血 。
5.3.2 采集标本 时使用 EDTA为 抗凝剂 ,要 求加人血液后抗凝剂 的终浓度为 3.7umol/mL~5.4umol/ mL,可 以使 用 以下几 种抗 凝 剂 :
—— EDTA· K2(相 对分 子质量 368.4),浓 度 为 1.4m酽 mL~2。 Om酽 mL; —— EDTA· K2· 2H20(相 对 分子质量 404.5),浓 度 为 1.5mg/mL~2.2mg/mL; —— EDTA· K3· 2H20(相 对分 子 质量 442.5),浓 度 为 1.6m酽 mL~2.4mg/mL; —— EDTA· N助 ·2H20(相 对分子 质量 372.23),浓 度 为 1.4mg/mL~2.0m酽 mL。
3 总则
为 了保 证 参 考 方 法 检 测 结 果 的准 确性 ,建 立 参 考 方 法 的实 验 室应 与其他 参考 实验 室进 行 结 果 比对 。
4 原理
血红 蛋 白分 子 中的亚 铁 离 子 (Fe2+)在 溶 液 中被 高 铁 氰 化 钾 氧 化 成 高 铁 离 子 (Fe3+)形 成 高 铁 血 红
Ws/T341-ˉ 2011
血 红 蛋 白测 定 参 考 方 法
1 范围
本标 准 规 定 了血红 蛋 白测 定参 考 方 法 的技术 要 求 。 本标 准适 用 于建立 并 运行 血 红蛋 白测 定 参 考 方 法 的实 验室 。
2 术语和定义
下列术语 和定义适用 于本文件 。 2.1
血红 蛋 白 hemog1oun,HGB/Hb
临床 实验室试剂用水 ,I级 1000。 O mL
临床实验室 I级试剂 用水应满足 以下 指标 :细 菌数(10αV/mL;25℃ 条件 下 电阻抗 )10mΩ ·cm;
硅 含 量 (Sio2)(0.05mg/L。
所用化学试 剂应 为不含结 晶水 的分析纯 。
非 离 子 表 面 活性 剂 可使 用 Nonidet R40或 Hton Ⅺ 1oo。
5.1.2 薄膜 过 滤 器 :由 低 蛋 白结 合 和低 释 放 材 料 制 成 ,过 滤 器 半 径 为 25mm,薄 膜 孔 径 为 0,⒛ um~
o,25um。
5.1.3 分 光 光 度 计 :所 用 的分 光 光 度 计 应 经 计 量 部 门检 定 合 格 ,仪 器 的狭 缝 宽 度 ≤ 2nm,配 对 比色杯
试 剂 中的氰 化 钾 为剧 毒 物 质 ,应 规 定 相应 的生 物 安 全 防护 和处 理要 求 。
5.2.2 试 剂 为 清 亮 的淡 黄 色 溶 液 ,不 吸 收 波 长 大 于 480nm的 光 。pH为 7.0~7.4,渗 透 压 为 6mOsm/(kg· H20)~7mOsm/(kg· H2O)。 试 剂应 可使 血 红蛋 白在 5min内 完 全 转 化成 氰 化 高铁
5.3.3 血 液 加 人 抗 凝 管后 ,管 内剩余 空 间 至少 占试 管体 积 的 ⒛ %,以 利 于血标 本 的混 匀 。 5.3.4 标 本 采 集 后 应 在 当天 完成 测 定 。
6 测定步骤
6.1 标 本 稀 释
6.1.1 取 文-齐 氏液加 至容 量 为 25mL的 A级 容 量 瓶 中 ,将 试 剂 液 面调 至 刻度 线 。 6.1.2 用 正 向置 换 移 液器 吸取 100uL混 匀 全 血 ,使 用 蘸 有 盐 水 的纱 布 小 心 快 速 地 擦 掉 毛 细 管 外 壁 残
血红蛋 白。
5.2.3 试 剂 应 保 存 于较 大且 密封 的棕 色 硼硅 酸 盐 玻 璃 瓶 内 ,室 温 避 光 保 存 ,不 能 冷 冻 。如 有 浑 浊 物 生
成 ,应 重新 配 制 。至少 每 月 重新 配 制 一 次 。
5.3 血 标 本 的采 集
5.3.1 用 真 空采 血 系统 采 集 新鲜 静 脉 血 。采 血 时要 避 免 皮 肤 消毒 物 质 的污 染 。标 本 中不 得 有 肉 眼 可
存 在 于 血 液 中所有 的血 红 蛋 白衍 生 物 ,包 括 脱 氧血 红 蛋 白 、氧 合 血红 蛋 白、硫化 血红 蛋 白 、碳 氧 血红 蛋 白和高铁 血 红 蛋 白。 2.2
仅化 商铁 血 红 蛋 白 haemigⅡ obincyanide,HiCN 血红 蛋 白(除 硫 化 血 红 蛋 白外 )中 的亚铁 离 子 被 氧 化 成 高 铁 离 子 ,再 与 氰 离 子结 合 形 成 的血 红 蛋 白 衍 生物 ,即 氰 化 高铁 血 红 蛋 白 。 2.3 参考 方 法 reference method 一种 可 清 楚 和准确 描 述 的用 于特 定 检测 的技 术 ,该 技 术 要 有依 据 ,可 提供 足够准确 和精 密 的实 验 数 据 以评 价 其 他 实 验方 法 检 测 结 果 的有效 性 。若 有 决 定 性 方 法 ,参 考 方 法 的准 确 性 必 须 与 决 定 性 方 法 进 行 比较 ,并 且 应 标 示 不 准 确 度 和不 精 密 度 。