几种核酸提取方法概述
植物和动物的核酸dna和rna提取方法
提取植物和动物的核酸DNA和RNA是生物学研究中的重要步骤，它们可以帮助科学家们更深入地了解生物的遗传信息和基因表达。
本文将介绍植物和动物核酸DNA和RNA的提取方法，让读者对这一过程有一个清晰的认识。
一、植物核酸DNA提取方法1. 细胞破碎：需要将植物组织破碎，以释放细胞内的DNA。
这可以通过磨粉或切碎的方法来实现。
2. 细胞裂解：接下来，使用裂解缓冲液来裂解细胞膜和细胞壁，释放DNA分子。
裂解缓冲液的配方可以根据不同植物的特性进行调整。
3. 蛋白质沉淀：通过向裂解液中加入溴化苯酚等物质，可以沉淀掉大部分蛋白质，使得DNA分子得以分离。
4. 乙醇沉淀：将裂解液中的DNA用乙醇沉淀，这样可以将DNA分子从溶液中提取出来。
5. 溶解和纯化：将沉淀的DNA分子溶解在适当的缓冲液中，并进行进一步的纯化和浓缩处理，得到纯净的DNA溶液。
二、植物核酸RNA提取方法1. 细胞破碎：与DNA提取类似，首先需要将植物组织破碎，以释放细胞内的RNA。
2. 细胞裂解：使用特制的裂解缓冲液来裂解细胞膜和细胞壁，释放RNA分子。
不同植物组织的RNA特性可能有所不同，需要根据具体情况进行优化。
3. 蛋白酶处理：加入蛋白酶来降解蛋白质，使RNA得以更好地纯化。
4. 酚-氯仿提取：利用酚-氯仿混合液可以有效地将RNA从裂解液中提取出来，与DNA提取类似。
5. 洗涤和纯化：对得到的RNA进行洗涤和纯化处理，得到纯净的RNA溶液。
三、动物核酸DNA提取方法1. 组织裂解：将动物组织进行细胞破碎，释放细胞内的DNA。
2. 细胞裂解：使用特制的裂解缓冲液来裂解细胞膜，释放DNA分子。
对于硬质组织，可能需要较强的裂解条件。
3. 蛋白酶处理：加入蛋白酶来降解蛋白质，使DNA得以更好地纯化。
4. 酚-氯仿提取：利用酚-氯仿混合液可以有效地将DNA从裂解液中提取出来，与植物DNA提取类似。
5. 溶解和纯化：对得到的DNA进行溶解和纯化处理，得到纯净的DNA溶液。
核酸提取经典方法
核酸提取经典方法核酸提取是分子生物学实验中的一项重要步骤，用于从生物样本中提取DNA或RNA。
以下是一些经典的核酸提取方法：1. 酚-氯仿法：这是最常用的核酸提取方法之一。
它通过酚的溶解和蛋白质的沉淀来分离DNA或RNA。
该方法适用于从细菌、真菌、植物和动物等不同来源的样本中提取核酸。
2. 硅胶柱法：这是一种基于硅胶柱的核酸提取方法。
样本先经过细胞裂解，然后通过硅胶柱进行吸附和洗脱，最终得到纯净的DNA 或RNA。
硅胶柱法具有高效、快速和高纯度的特点。
3. 盐析法：盐析法利用核酸和盐的相互作用来分离DNA或RNA。
通过调节盐浓度，可以使核酸从溶液中沉淀下来。
该方法适用于大规模提取核酸的情况，例如从细菌培养物中提取大量的DNA。
4. 磁珠法：磁珠法是一种基于磁性珠子的核酸提取方法。
样本中的核酸先与磁珠结合，然后通过磁力将磁珠和核酸一起分离出来。
该方法具有高效、快速和易自动化的特点，适用于高通量的核酸提取。
5. 高盐法：高盐法利用高盐浓度来沉淀DNA或RNA。
通过加入高盐缓冲液，可以使核酸结合起来形成沉淀物。
该方法适用于从血液等样本中提取核酸。
6. 隔离法：隔离法是一种通过细胞壁溶解和蛋白质去除来提取核酸的方法。
该方法适用于从真菌和植物等样本中提取核酸。
7. 酚氯仿异硫氰酸胍法：该方法是酚-氯仿法的改进版，通过加入异硫氰酸胍来进一步去除蛋白质。
该方法适用于从细胞培养物或组织样本中提取核酸。
8. 碱裂解法：碱裂解法利用高碱性溶液来裂解细胞，并中和后沉淀核酸。
该方法适用于从血液、组织或细菌培养物中提取核酸。
9. 酶裂解法：酶裂解法利用酶来降解蛋白质和核酸之间的连接，从而分离核酸。
该方法适用于从酶可溶化的样本中提取核酸。
10. 玻璃纤维柱法：玻璃纤维柱法利用玻璃纤维柱进行核酸吸附和洗脱。
样本先经过细胞裂解，然后通过玻璃纤维柱进行纯化。
该方法适用于从血液或组织样本中提取核酸。
以上是一些常用的核酸提取方法，每种方法都有其适用的样本类型和优缺点。
四大经典核酸纯化方法
四大经典核酸纯化方法核酸抽提与纯化是分子生物学试验的基础，核酸纯化方法是影响提取核酸质量高低的最重要因素，也是下游分子生物学试验成败的关键。
目前常见的核酸纯化方法有PC 抽提/醇沉淀方法、高盐沉淀蛋白质/醇沉淀方法、离心柱法和生物磁珠法，这几种方法各有其优势和劣势。
一、PC抽提法PC 抽提是去除蛋白质有效的手段，但超过了该饱和度，裂解体系中的蛋白质不会被一次去除，必须靠多次抽提，方可彻底去除。
且每次抽提都会损失部分核酸。
另外，体系太粘稠的坏处是，蛋白质难以彻底去除，以及基因组DNA 会断裂得更厉害，所以要注意裂解液与样品的比例。
PC 抽提的另外一个用途是，利用酸性酚可以部分去除DNA 的特点，在RNA 抽提时获得DNA 残留极少的RNA。
不过有一点要提醒的是，某些植物样品，在去除某些杂质之前，是不能使用PC 抽提的，否则核酸必定降解。
PC抽提最大的优势是成本低廉，对实验条件要求较低，对于经费紧张的实验室较为实用。
二、高盐沉淀法高盐沉淀蛋白质/醇沉淀方法，同样也是一个非常不错的方法。
与PC 抽提方法相比，除了纯度的稳定性可能要低一点外，该方法几乎克服了PC 抽提的所有缺点。
更快、更轻松的去除蛋白质所可以用于大规模抽提，但其不足之处是纯度(蛋白质残留) 不够稳定，蛋白质的沉淀效率在4℃会更好一些。
三、离心柱法离心柱纯化法，是目前试剂盒提取广泛应用的方法。
其最大特点是受人为操作因素影响小，纯度的稳定性很高(虽然纯度不一定比PC 纯化方法更高)。
加入的液体通过离心后会进入另外一个离心管中，与含有核酸的柱子完全是分开的，所以洗涤更彻底。
其致命弱点是样品过量，提取效率较低，且需要反复离心，操作复杂，成本也较高。
四、生物磁珠法生物磁珠法是将纯化介质包被在纳米级生物磁珠表面，通过介质对核酸的吸附，在外加磁场下使核酸附着于磁珠定向移动，从而达到固液分离纯化的作用。
威斯腾生物400-675-6758。
常用核酸提取技术介绍
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谢谢！
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主要步骤：
第一步：细胞的裂解： 破碎细胞，并向溶液中 加入磁珠。
第二步：结合核酸：pH较 低，在高盐环境下，硅胶磁 珠带正电荷，选择性的与优 化试剂中的核酸结合。
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第三步：洗涤：用洗涤液 将非核酸成分冲洗分离 （为清洗干净该步骤可以 重复多次）。
第四步：核酸的洗脱：pH 升高，在低盐环境下，核 酸被洗脱下来。
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• 特点：特异性好，抗干扰能力强， 易于实现半自动和全自动操作。
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3、硅胶柱吸附法：（以肿瘤标本为 例）
• 原理：采用硅胶膜吸附核酸，而对其他生 化组分如蛋白质、多糖、脂类既不相亲也 不吸附，因而可得到纯化的核酸。
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主要步骤：
样品
化学裂解
洗涤
洗脱
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注意事项： • 二甲苯有毒且对后续试验有影响，一定要
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核酸提取应注意的问题： ①尽量简化操作步骤，缩短提取过程。 ②减少化学因素对核酸的降解。 ③减少物理因素对核酸的降解：机械剪切力和高温 ④防止核酸的生物降解。
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破碎 提取 纯化
I.材料准备 II.破碎细胞或包膜－内容物释放
III.核酸分离、纯化 IV.沉淀或吸附核酸，并去除杂质 V.核酸溶解在适量缓冲液或水中
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细胞裂解方式分类：
➢ 物理方式：煮沸法、玻璃珠法、超声波法、
研磨法、冻融法、匀浆法 ➢ 化学方式：表面活性剂（SDS法）、碱裂解法 ➢ 生物方式：酶法（溶菌酶、蛋白酶K等）
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常见样本提取方法总结：
➢ 浓盐法：
常用核酸提取技术介绍
12000rpm 5min 取上清加样
浓缩液主要成分：聚乙二醇（ PEG） 、NaCl
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聚乙二醇（ PEG）
• HOCH2(CH2OCH2)nCH2OH,n＞4 • PEG为有机聚合物，无毒，亲水性强，相
对分子量为6K-20K；PEG的沉淀效果主要 与其本身的浓度和分子量有关，同时还受 离子强度、溶液pH值和温度等因素的影响， 采用该方法可将病毒量浓缩10倍以上。
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裂解液裂解原理：
➢Tris-HCl （pH8.0）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏； ➢EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性； ➢NaCl 提供一个高盐环境，使DNA充分溶解，存在于液相中 ； ➢SDS是一种阴离子去垢剂，在高温（55～100℃）条件下能 裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸；
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核酸提取的原则
提取纯化核酸总的原则： ①应保证核酸一级结构的完整性； ②排除其它分子的污染。
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核酸提取应达到的要求： ①核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高 浓度的金属离子； ②其它生物大分子的污染应降低到最低程度； ③排除其它核酸分子的污染。
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核酸提取应注意的问题： ①尽量简化操作步骤，缩短提取过程。 ②减少化学因素对核酸的降解。 ③减少物理因素对核酸的降解：机械剪切力和高温 ④防止核酸的生物降解。
常用核酸提取技术介绍
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前言
核酸（nucleic acid）是遗传信息的携带者， 是基因表达的物质基础。
无论是进行核酸结构还是功能研究，首先需 要对核酸进行分离和纯化。
核酸样品质量将直接关系到实验的成败。
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核酸的存在形式
核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都是以与蛋 白质结合的状态存在；
核酸提取方法
核酸提取方法核酸提取是分子生物学实验中的重要步骤，它是从生物样本中提取出核酸（DNA或RNA）的过程。
核酸提取的质量和纯度对后续实验结果具有重要影响，因此选择合适的核酸提取方法至关重要。
本文将介绍几种常用的核酸提取方法，帮助您选择适合您实验需求的方法。
1.酚氯仿提取法。
酚氯仿提取法是最常用的核酸提取方法之一。
它适用于从细胞或组织样本中提取核酸。
该方法的原理是利用酚和氯仿的不同密度，将细胞或组织中的蛋白质和脂质沉淀到有机相中，从而分离出核酸。
酚氯仿提取法简单、快速，适用于大批量样本的提取。
2.硅胶柱法。
硅胶柱法是一种基于硅胶膜的离心柱层析技术，适用于从血液、组织、细胞培养物等样本中提取核酸。
该方法通过硅胶膜的亲和作用，使DNA或RNA能够在柱子中特异性地吸附，然后经过洗脱步骤将核酸从硅胶柱中纯化出来。
硅胶柱法提取的核酸纯度高，适用于需要高纯度核酸的实验。
3.磁珠法。
磁珠法是利用磁珠与核酸的亲和作用，将核酸特异性地吸附到磁珠表面，然后利用外加磁场将磁珠与其他杂质分离。
该方法操作简便，无需离心步骤，适用于高通量核酸提取。
磁珠法提取的核酸质量好，适用于高灵敏度的实验。
4.酶解法。
酶解法是利用蛋白酶和蛋白酶K等酶类将蛋白质降解，从而释放出核酸。
该方法操作简单，适用于从血液、组织等样本中提取核酸。
酶解法提取的核酸适用于一些特殊实验，如PCR、RT-PCR等。
5.离心法。
离心法是利用超速离心将细胞或组织破碎，然后通过差速离心将核酸从其他细胞成分中分离出来。
该方法操作简单，适用于从大量样本中提取核酸。
离心法提取的核酸适用于一些基础实验。
总结。
选择合适的核酸提取方法需要根据实验样本的来源、实验需求以及实验室条件等因素综合考虑。
在实际操作中，可以根据不同实验目的选择不同的核酸提取方法，以确保提取的核酸质量和纯度满足实验要求。
希望本文介绍的核酸提取方法能够为您的实验工作提供帮助。
几种核酸提取方法概述
几种核酸提取方法概述几种核酸提取方法概括(1). 浓盐法利用 RNP 和 DNP 在电解溶液中溶解度不一样，将两者分别，常用的方法是用1M 氯纳提取化钠抽提,获得的 DNP 黏液与含有少许辛醇的氯仿一同摇荡 ,使乳化 ,再离心除掉蛋白质 ,此时蛋白质凝胶逗留在水相及氯仿相中间，而 DNA 位于上层水相中 ,用 2 倍体积 95％乙醇可将 DNA 钠盐积淀出来 .也可用 0.15 MNaCL 液频频清洗细胞破裂液除掉RNP,再以 1MNaCL 提取脱氧核糖蛋白, 再按氯仿 --- 异醇法除掉蛋白 .两种方法比较 ,后种方法使核酸降解可能少一些.以稀盐酸溶液提取DNA时,加入适当去污剂,如 SDS 可有助于蛋白质与DNA的分别。
在提取过程中为抑制组织中的DNase 对 DNA的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.往常用.15MNaCL,0.015M 柠檬钠 ,并称 SSC 溶液 ,提取 DNA.（2）.阴离子去污剂法:用 SDS 或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性, 能够直接从生物资猜中提取DNA . 因为细胞中DNA 与蛋白质之间常借静电引力或配位键联合,因为阴离子去污剂能够损坏这类价键,因此常用阴离子去污剂提取DNA.（3）.苯酚抽提法 :苯酚作为蛋白变性剂,同时克制了DNase 的降解作用 .用苯酚办理匀浆液时,因为蛋白与DNA联络键已断,蛋白分子表面又含有好多极性基团与苯酚相像相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA 溶于水相。
离心分层后取出水层，多次重复操作，再归并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇积淀DNA。
此时DNA是十分黏稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，拿出。
此法的特色是使提取的DNA 保持天然状态.1 / 1。
核酸提取及扩增技术简介(含等温扩增技术)-综述
核酸提取及扩增技术原理简介1核酸理化性质RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结晶，DNA则为白色类似石棉样的纤维状物。
除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外，核酸和核苷酸都呈酸味。
DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水，RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。
DNA可达10g/L，呈黏性胶体溶液，在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。
2细胞破碎大多数核酸分离与纯化的方法一般都包括了细胞裂解、核酸与其他生物大分子物质分离、核酸纯化等几个主要步骤。
每一步骤又可由多种不同的方法单独或联合实现。
根据原理不同，细胞破碎主要包含机械破碎法，化学试剂法，酶溶解法。
1）机械方法：包括低渗裂解、超声裂解、微波裂解、冻融裂解和颗粒破碎等物理裂解方法。
这些方法用机械力使细胞破碎，但机械力也可引起核酸链的断裂，因而不适用于高分子量长链核酸的分离。
有报道超声裂解法提取的核酸片段长度从< 500bp~>20kb之间，而颗粒匀浆法提取的核酸一般<10kb。
2）化学试剂法：经一定的pH 环境和变性条件下，细胞破裂，蛋白质变性沉淀，核酸被释放到水相。
上述变性条件可通过加热、加入表面活性剂（SDS、Triton X-100、Tween 20、NP-40、CTAB、sar-cosyl、Chelex-100等）或强离子剂（异硫氰酸胍、盐酸胍、肌酸胍）而获得。
而pH环境则由加入的强碱（NaOH）或缓冲液（TE、STE 等）提供。
在一定的pH环境下，表面活性剂或强离子剂可使细胞裂解、蛋白质和多糖沉淀，缓冲液中的一些金属离子螯合剂（EDTA 等）螯合对核酸酶活性所必须的金属离子Mg2+ 、Ca2+ ，从而抑制核酸酶的活性，保护核酸不被降解。
3）酶解法：主要是通过加入溶菌酶或蛋白酶（蛋白酶K、植物蛋白酶或链酶蛋白酶）以使细胞破裂，核酸释放。
蛋白酶还能降解与核酸结合的蛋白质，促进核酸的分离。
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几种核酸提取方法概述
(1).浓盐法
利用RNP和DNP在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1M 氯纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而DNA位于上层水相中,用2倍体积95％乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.
两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.
以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。
在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常
用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA.
（2）.阴离子去污剂法:
用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA. （3）.苯酚抽提法:
苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。
离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀DNA 。
此时DNA 是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。
此法的特点是使提取的DNA保持天然状态.。