鲎试验(Limulus test)
鲎试验检测原理
鲎试验检测原理鲎试验是一种用来检测人的智力和记忆能力的经典实验。
它通过测量人们在不同情境下的反应时间来评估其认知能力。
鲎试验基于鲎（Hermit crab）在适应新环境时的行为特点，进而推断出人类在面对新事物时的认知过程。
本文将详细介绍鲎试验的原理及其应用。
鲎是一种甲壳类动物，生活在海洋中。
当鲎的贝壳变得破旧或不再适合生活时，它们需要寻找并适应新的贝壳。
这一过程被称为鲎试验。
在实验中，研究人员会选择一只鲎并将其放置在一个装有多个贝壳的容器中。
其中只有一个贝壳是合适的，而其他贝壳则是不适合的。
实验开始时，鲎会进入容器并开始探索各个贝壳。
当它找到一个适合的贝壳时，它会迅速将自己的身体缩入其中。
研究人员会记录下这一反应时间，并将其作为鲎适应新环境的能力的指标。
鲎试验的原理是人类在面对新事物时的认知过程与鲎适应新贝壳的行为相似。
当人类面临新的认知任务时，他们需要不断探索并选择最合适的策略或解决方案。
这个过程涉及到感知、注意、记忆和推理等一系列认知能力。
而鲎试验通过测量人们在探索新事物时的反应时间，间接反映了他们的认知能力水平。
鲎试验的应用十分广泛。
在教育领域，它可以用来评估学生的学习能力和记忆力。
在临床心理学中，鲎试验可以作为评估认知功能障碍和认知退化症的工具。
此外，鲎试验还可以应用于人机交互和人工智能领域，用来评估用户对新技术和界面的适应能力。
然而，鲎试验也存在一些局限性。
首先，鲎试验只能提供间接的指标，而不能直接测量人的认知能力。
其次，鲎试验的结果可能受到许多因素的影响，如情绪、焦虑和注意力等。
因此，在进行鲎试验时需要控制这些干扰因素，以保证结果的准确性。
鲎试验是一种基于鲎适应新环境行为的实验，用来评估人类的认知能力。
通过测量人们在探索新事物时的反应时间，可以间接反映他们的认知水平。
鲎试验在教育、临床心理学和人机交互等领域具有广泛的应用前景。
然而，鲎试验的结果需要谨慎解读，同时也需要进一步的研究来完善和改进这一方法。
中国药典和美国药典的内毒素检测要求
鲎试剂－LAL，中国药典和美国药典的内毒素检测要求鲎试剂是从栖生于海洋的节肢动物“鲎”的兰色血液中提取变形细胞溶解物，经低温冷冻干燥而成的生物试剂，专用于细菌内毒素检测。
鲎试验法是国际上至今为止检测内毒素最好的方法，它简单﹑快速﹑灵敏﹑准确，因而被欧美药典及我国药典定为法定内毒素检查法，并已被世界各国所采用。
目前国际上销售的鲎试剂有两种，一种称美洲鲎试剂（Limulus Amebocyte Lysate），缩写为LAL，由美国生产；另一种称东方鲎鲎试剂（Tachypleus Amebocyte Lysate），缩写为TAL。
实验证明：美洲鲎试剂-LAL比东方鲎试剂LAL更纯洁，检测效果更好。
TAL检查内毒素有很多方法，目前应用最广泛的是凝胶法，此外还有动态浊度法﹑显色基质法,比色法等。
其用途有以下几方面：1. 药检：用于注射药品﹑放射性药物﹑生物制品﹑注射器及生产工艺流程中的内毒素检测；2. 临床：用于检测病人各种体液中的内毒素含量；3. 其他：用于检测水或食品中的内毒素含量。
2005年版中国药典《细菌内毒素检查法-鲎试剂法》(鲎试剂－LAL法)本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法。
供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。
当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。
细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。
细菌内毒素国家标准品系自大肠杆菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及设置的各种阳性对照。
凝胶法细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015EU/ml的灭菌注射用水。
定量测定用的细菌内毒素检查用水，其内毒素的含量应小于0.005EU/ml。
美国USP鲎试剂检测方法
USP这一章节的部分内容已与欧洲药典和日本药典协调一致，不一致的部分以符号*标出。
本章阐述了关于检查和定量供试品内毒素的方法。
本法利用鲎（Limuluspolyhemus或 Tachypleus tridentatus）血细胞提取物制备的用于内毒素检测的鲎试剂（LAL）检定内毒素。
*1该检查包括两种方法：一为凝胶法，系利用鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理；另一种为光度测定法，该法利用鲎试剂与内毒素反应过程中的光学变化来实现内毒素的测定，这种方法又可分为浊度法（基于形成凝胶的过程中，溶菌液的浊度变化）和显色法（得到的肽－呈色基团复合物断裂后，检测反应混合物的色度）。
检测时，可用其中任一种方法进行试验。
当测定结果可疑或有争议时，除非各论中另有规定，以凝胶法测定结果为准。
直接比较供试品溶液与标准内毒素溶液，判断凝胶法的反应终点。
内毒素含量以USP内毒素单位（USP-EU）表示。
[注-1USP EU相当于1个内毒素单位。
]LAL试剂专用于浊度检查法或显色法，因此，使用这两种方法进行检定时，必须符合它们各自的要求。
两种检查法都要求建立标准曲线，以检定供试品的内毒素含量。
主要的实验步骤有：在预定的时间内将内毒素和对照品分别与LAL试剂保温培养；读取相应波长处的吸光度等。
使用终点浊度法时，应在孵育时间结束时马上读数；对终点显色法，则要在孵育终止时添加酶反应-终止制剂，反应停止后，方可读数。
动态浊度法和动态显色法分析整个反应时间内吸光度的变化，并通过这些读数计算比值。
仪器所有玻璃器皿及由其他耐热材料制成的器皿需用已验证的工艺在热烘箱内进行去热原处理。
*2去热原时，常用的最小时间和温度设置分别为30分钟和250℃。
若使用塑料器械，如微孔板和微量进样器配套的吸头等，它们必须标明无内毒素并确对试验无干扰。
[注-本章内，“管”也包括任何其他反应容器，如微孔板的孔等。
]内毒素储备标准溶液和内毒素标准溶液的制备USP内毒素RS的效价规定为10000 USP内毒素单位（EU）/西林瓶。
鲎试验(Limulus test)
上图所示：鲎，最具特点的就是鲎的血是蓝色的。
鲎（hòu）亦称马蹄蟹。
肢口纲（Merostomata）剑尾目（Xiphosura）海生节肢动物，共4种，见于亚洲和北美东海岸。
虽又称马蹄蟹爬上灶、夫妻鱼、鸳鸯鱼，东方鲎等，但不是蟹，而与蝎、蜘蛛以及已绝灭的三叶虫有亲缘关系。
鲎(horseshoe crab)是一类与三叶虫（现在只有化石）一样古老的动物。
鲎的祖先出现在地质历史时期古生代的泥盆纪，当时恐龙尚未崛起，原始鱼类刚刚问世，随着时间的推移，与它同时代的动物或者进化、或者灭绝，而惟独只有鲎从4 亿多年前问世至今仍保留其原始而古老的相貌，所以鲎有“活化石”之称。
每当春夏季鲎的繁殖季节，雌雄一旦结为夫妻，便形影不离，肥大的雌鲎常驮着瘦小的丈夫蹒跚而行。
此时捉到一只鲎，提起来便是一对，故鲎享“海底鸳鸯”之美称。
鲎的血液中含有铜离子，它的血液是蓝色的。
这种蓝色血液的提取物——“鲎试剂”，可以准确、快速地检测人体内部组织是否因细菌感染而致病；在制药和食品工业中，可用它对毒素污染进行监测。
科学家也使用鲎血研究癌症。
但是，对鲎抽血后，它们就被放生。
鲎试剂是从栖生于海洋的节肢动物“鲎”的兰色血液中提取变形细胞溶解物，经低温冷冻干燥而成的生物试剂，专用于细菌内毒素检测。
鲎试剂因能与细菌内毒素及β-葡聚糖反应形成凝胶而被广泛用于检测食品、水源、药品、医疗器械、动物体液等不同样品中的内毒素。
使用鲎试剂检测的试验称为鲎试验。
鲎是一种海洋节支动物，其血液及淋巴液中有一种有核的变形细胞，胞浆内有大量的致密颗粒，内含凝固酶及凝固蛋白原。
当内毒素与鲎变形细胞冻融后的溶解物（鲎试剂）接触时，可激活凝固酶原，继而使可溶性的凝固蛋白原变成凝固蛋白而使鲎变形细胞冻融物呈凝胶状态。
检测内毒素血症的一种试验。
鲎系海边栖生的一种大型节肢动物,属蜘蛛纲。
其多功能血细胞(变形细胞)的溶解物中含有一种可凝性蛋白质,在极微量内毒素(0.0005vg/ml)存在时可形成凝胶。
鲎试验检查细菌内毒素应注意的问题
鲎试验检查细菌内毒素应注意的问题鲎试验检查细菌内毒素应注意的问题发布时间02年09月05日 09时18分方法：通过对干扰鲎试验准确性干扰因素的分析(包括鲎试剂本身、操作条件、配制原料等)，提出了鲎试验中应注意的问题。
结果：只要克服了检查中的干扰因素，鲎法具有比家兔法更简便、快速、灵敏度高、重现性好等优点。
鲎试验是利用鲎的变形细胞与微量内毒素产生凝集反应的现象，作为判断供试品中细菌内毒素限量是否符合规定的一种方法[1]。
它具有比家兔法更简便、快速、灵敏度高、重现性好等优点。
中国药典1995年版已收载细菌内毒素检查法(简称鲎试验)，但只用于几种输液的检查。
根据现有的实验证明，凡不干扰细菌内毒素检查或虽有干扰，但可以克服的药品注射剂，将能够全部以鲎法代替家兔热原检查法。
但是该法受到许多因素的影响，故在做鲎试验检查时，应注意下列问题。
1鲎试剂本身1.1鲎试剂灵敏度 为了保证检查细菌内毒素结果的准确性，用于试验的鲎试剂应首先核对灵敏度。
因为在我们的实际工作中，发现鲎试剂均符合药典规定标准前提下，由于生产厂家不同，部分鲎试剂的实测灵敏度与标示值有差异而导致检测同一检品时，用相同标示值的鲎试剂，出现不同结果。
因而先核对灵敏度可避免因鲎试剂本身造成的判断失误。
建议法定部门和生产单位应注意鲎试剂的质量检查。
1.2供试品稀释 在取样品时，一定要熟悉中国药典的内容，不能直接取大输液原液0.1ml进行检查，这是排除干扰因素的简单有效的方法。
因药典已明确规定试验中鲎试剂的灵敏度不超过0.5EU/ml，根据供试品的稀释公式： 供试品稀释倍数= L/λυL ：供试品的内毒素限量(1EU/ml)λυ：鲎试剂灵敏度的标示值(EU/ml)故检测大输液均应稀释后才能进行试验，如选用更高灵敏度的鲎试剂，则应增加样品的稀释倍数。
稀释用的细菌内毒素检查用水药典作了规定。
在4h内不得与鲎试剂产生凝集反应。
如果直接用供试品原液试验，就会使供试品的内毒素提高到0.5EU/ml或0.5EU/ml以下，这样，根据目前大输液的生产和贮藏条件，有些就会达不到，鲎法检出的阳性率会提高，兔法复核的机遇也将增多，势必会浪费人力物力。
细菌内毒素试验(鲎试验)要点及控制方法
细菌内毒素试验（鲎试验）要点及控制方法一般细菌毒素可分为两类，一类为外毒素(Exotoxin)；它是一种毒性蛋白质，是细菌在生长过程中分泌到菌体外的毒性物质。
产生外毒素的细菌主要是革兰氏阳性菌。
如白喉杆菌、破伤风杆菌、肉毒杆菌、金黄色葡萄球菌以及少数革兰氏阴性菌。
另一类为内毒素(Endotoxin)，是革兰氏阴性菌的细胞壁的产物。
细菌在生活状态时不释放出来，只有当细菌死亡自溶或粘附在其它细胞时，才表现其毒性，内毒素的主要化学成分是脂多糖中的类脂A 成分。
和热原的关系热原(pyrogen)系指能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。
它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。
热原是否就是内毒素？细菌内毒素是热原的一种，即细菌性热原。
细菌内毒素被认为是热原的本质，此事在学术上仍有争议，热原不仅是细菌内毒素。
但在药检的范畴，细菌内毒素是主要的热原物质，可以说无内毒素就无热原，控制内毒素就是控制热原。
热原反应：含有热原的注射剂注入人体可引起发热反应，使人体产生发冷、寒战、体温升高、出汗、恶心、呕吐等症状，有时体温可升至40℃，严重者甚至昏迷、虚脱，如不及时抢救，可危及生命。
来源和控制方法1、细菌内毒素的特性2、去除细菌内毒素的方法(1)吸附法此法是利用活性炭对热原的吸附作用达到去除作用的方法。
常用的吸附剂中，活性炭对热原的吸附作用最强，一般用量为总容量的0.1%-0.5% ，将溶液加热到70℃左右保温一定时间效果更好。
使用的活性炭应符合药典规定要求。
(2)蒸馏法此法是利用热原具有不挥发性而达到去除目的。
因此，凡适于蒸馏的药品均可用蒸馏法除去热原。
(3)热破坏法此法是利用热高温能破坏热原质达到去除目的。
因此，凡适用于高温处理的如热原检查试验中接触药液的容器，可用180℃干烤3小时，或250℃干烤30min以上。
(4)强酸强碱处理法此法利用强酸强碱能破坏热原而达到去除的目的。
(5)其他，也可以采用过滤等方法去除热原。
无细胞百日咳原液细菌内毒素检查方法
无细胞百日咳原液细菌内毒素检查方法的探讨摘要：目的：学习鲎试剂法检测细菌内毒素的基本原理、方法、影响因素及建立无细胞百日咳原液细菌内毒素鲎试剂检查方法的可行性。
方法：灵敏度复核试验对鲎试剂灵敏度进行复核；干扰试验排除无细胞百日咳原液对鲎试剂的干扰；鲎试剂法测定无细胞百日咳原液；将鲎试剂法测得结果与家兔法测得结果对比。
结果：稀释至0.005ug/ml的样品溶液对灵敏度0.25EU/ml的鲎试剂无干扰作用，与家兔热源试验结果基本一致。
结论：用鲎试剂法检测无细胞百日咳原液细菌内毒素是可行的。
关键词：无细胞百日咳原液鲎试剂法细菌内毒素热源检查Study on the Bacterial Endotoxin Test of AcellularPertussis vaccine BulkCollege of animal medicine,Sichuan Agricultural University【Abstract】Study the theory of the test of the bacterial endotoxins by TAL test and the methods、interference factors. Objective To establish the test of the bacterial endotoxins in Acellular Pertussis vaccine bulk. Methods Interference test and contrast test. Results The experiment shows that the interference elements can be excluded by diluting Acellular Pertussis vaccine bulk to 0.005ug/ml and using 0.25EU/ml TAL. Regent The inspection results are the same as that TAL TEST can be used for the direction of bacterial endotoxins of Acellular Pertussis vaccine bulk. 【Keywords】Acellular Pertussis vaccine bulk ;tachypleus amebocyte lysate(TAL);bacterial endotoxins test;pyrgen test.在现在的药物制剂工程及无细胞疫苗的生产过程中，如何避免热源污染及清除热源是一个难题。
鲎试验名词解释
鲎试验名词解释
鲎试验是20世纪初，由法国生物学家米歇尔拉克罗斯（Michele Racovitza）开始研究的一项实验。
这项实验是为了研究小虫鲎（thermobia domestica）对不同激活物质（像放射性元素等）的反应，从而为人类动植物疾病的治疗提供帮助。
在这一实验中，研究人员将小虫鲎放置在不同的激活物质浓度的溶液中，以观察它们的反应。
实验开始时，由于小虫鲎的体型小而体表抗菌，它们没有对任何激活物质有明显反应，并且仅在低浓度的情况下可以存活。
随着激活剂浓度的升高，小虫鲎的反应也发生了变化，它们开始产生抗性，最终适应了强有力的激活物质，例如放射性元素，而不会死亡。
经过一系列实验和分析，拉克罗斯得出了有意义的结论。
他发现，小虫鲎对激活物质的耐受性是可塑的的，它们可以通过非遗传的方式自我调节和适应环境的变化。
这一发现有助于人们更好地理解动植物性状适应和变化的机制，也帮助生物学家解释了一些现象。
例如，小虫鲎在某种环境下会出现抗性，而在另一种环境中却不会，这可以说明抗性可以通过有效的响应和调节，来适应不同的环境条件。
此外，拉克罗斯的发现也暗示了一种新的治疗手段。
因为他发现小虫鲎在激活剂浓度高于一定极限时会出现耐受性的情况，这意味着抗药性疾病可以通过增加相应激活物质的浓度，来对其产生抑制作用。
总之，鲎试验是20世纪生物学的一项重要研究，它不仅给人们
提供了有价值的理论，而且为治疗动植物疾病开辟了新的道路。
鉴于
拉克罗斯的重要贡献，后来人们把它命名为“拉克罗斯实验”，它也成为20世纪生物学发展史中最重要的研究之一。
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上图所示：鲎，最具特点的就是鲎的血是蓝色的。
鲎（hòu）亦称马蹄蟹。
肢口纲（Merostomata）剑尾目（Xiphosura）海生节肢动物，共4种，见于亚洲和北美东海岸。
虽又称马蹄蟹爬上灶、夫妻鱼、鸳鸯鱼，东方鲎等，但不是蟹，而与蝎、蜘蛛以及已绝灭的三叶虫有亲缘关系。
鲎(horseshoe crab)是一类与三叶虫（现在只有化石）一样古老的动物。
鲎的祖先出现在地质历史时期古生代的泥盆纪，当时恐龙尚未崛起，原始鱼类刚刚问世，随着时间的推移，与它同时代的动物或者进化、或者灭绝，而惟独只有鲎从4 亿多年前问世至今仍保留其原始而古老的相貌，所以鲎有“活化石”之称。
每当春夏季鲎的繁殖季节，雌雄一旦结为夫妻，便形影不离，肥大的雌鲎常驮着瘦小的丈夫蹒跚而行。
此时捉到一只鲎，提起来便是一对，故鲎享“海底鸳鸯”之美称。
鲎的血液中含有铜离子，它的血液是蓝色的。
这种蓝色血液的提取物——“鲎试剂”，可以准确、快速地检测人体内部组织是否因细菌感染而致病；在制药和食品工业中，可用它对毒素污染进行监测。
科学家也使用鲎血研究癌症。
但是，对鲎抽血后，它们就被放生。
鲎试剂是从栖生于海洋的节肢动物“鲎”的兰色血液中提取变形细胞溶解物，经低温冷冻干燥而成的生物试剂，专用于细菌内毒素检测。
鲎试剂因能与细菌内毒素及β-葡聚糖反应形成凝胶而被广泛用于检测食品、水源、药品、医疗器械、动物体液等不同样品中的内毒素。
使用鲎试剂检测的试验称为鲎试验。
鲎是一种海洋节支动物，其血液及淋巴液中有一种有核的变形细胞，胞浆内有大量的致密颗粒，内含凝固酶及凝固蛋白原。
当内毒素与鲎变形细胞冻融后的溶解物（鲎试剂）接触时，可激活凝固酶原，继而使可溶性的凝固蛋白原变成凝固蛋白而使鲎变形细胞冻融物呈凝胶状态。
检测内毒素血症的一种试验。
鲎系海边栖生的一种大型节肢动物,属蜘蛛纲。
其多功能血细胞(变形细胞)的溶解物中含有一种可凝性蛋白质,在极微量内毒素
(0.0005vg/ml)存在时可形成凝胶。
本试验即利用此原理测定血液或其他样品中的微量内毒素。
在临床病例,下列疾病阳性率较高:内毒素性休克、急性化脓性胆管炎、重症肝炎、腹膜炎、肝硬化等。
内毒素检出阳性病例中约有2/3导致死亡。
根据鲎试剂反应的原理可分为定性鲎试剂和定量鲎试剂，对应的试验称定性鲎试验和定量鲎试验。
定性鲎试验主要用于药品，医疗器械等产品的内毒素定性检验。
定量鲎试验主要用于检测临床病人、动物体内内毒素等方面，以便为医生用药提供参考。
鲎试验按方法分：
凝胶法
动态浊度法
终点浊度法
动态显色法
终点显色法
凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。
凝胶法鲎试剂常见规格为0.1ml/支或0.5ml/支或者更大装量，使用时应加除热原水（细菌内毒素检查用水）复溶后使用。
凝胶法是通过观察有无凝胶形成作为反应的终点。
此法操作比较简单，经济，不需要专用测定设备，可以进行定性或半定量测定。
动态浊度法、终点浊度法、动态显色法、终点显色法，这四种方法都是定量检测内毒素的。
根据检测原理，终点浊度法和动态浊度法都属于浊度法。
浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。
终点浊度法未见商品化产品。
动态浊度法（又称动态比浊法）是检测反应混合物的浊度上升某一预先设定的吸光度所需要的反应时间，或是检测浊度增加速度的方法。
终点显色法和动态显色法都是属于显色基质法。
显色基质法系利用鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物显色释放出的呈色团的多少而测定内毒素含量的方法，根据产物颜色判断内毒素浓度，又称为比色法。
厦门鲎试剂厂于2005年推出以鲎四肽为显色底物的鲎试剂盒，抗干扰能力强, 灵敏度高达0.005EU/ml, 质量达到国际领先水平。
目前已有500多家单位使用该试剂盒，并有部分单位发表相应文献。
国内有少量国外产品，但价格远高于国产试剂，到货周期长。
如果您仅需要检测样品的内毒素限量，可以选择凝胶法鲎试剂，通过确定内毒素限值及最大有效稀释倍数，做样品的干扰试验从而确定使用的鲎试剂的灵敏度。
如果您需要定量测定样品中内毒素含量则应选择显色基质鲎试剂盒或动态浊度法鲎试剂。
动态浊度法与动态显色法需要带温育系统的动态光度测定仪器及配套软件，例如，微板鲎试仪ELx808及软件TALgent 或Gen5。
动态浊度法与动态显色法简单方便、一步即成，线性范围宽。
终点显色法需要配套酶标仪或可见分光光度计进行检测。
配套带有温育系统的酶标仪，如微板鲎试仪ELx808，可减少试剂用量。
三观就是世界观、价值观、人生观，这「三观」不合的人是不太可能做朋友的，勉强不来的。
物以类聚，人以群分。
三观，才是人和人之间最大的障碍！
三观不合的人，所说的话难有交集，更谈不上碰出火花，寒暄片刻尚可，相处时间稍长，便如鸡同鸭讲，彼此都觉得索然无味，甚至有可能互相伤害。
以利相交，利尽则散；以势相交，势败则倾；以权相交，权失则弃；以情相交，情断则伤；唯以心相交，方能成其久远。
朋友不在多，而在是否能同道，是否能知心。
同道则能共行，知心则能互信。
当然，志同道合指的并不是完全一样，而是求同存异，互相包容。
人生就像一列行驶的列车，中途陆陆续续有人上车，也有人下车。