第八章 霉菌毒素检验
食品中霉菌毒素的测定(修订)
食品中霉菌毒素的测定:目前的分析方法及其局限性摘要：霉菌毒素是由一系列真菌产生的自然污染物。
它们出现在食物和饲料当中对人类和动物的健康造成了威胁。
这种威胁是通过直接污染农产品或喂养的动物受污染的干草、玉米而“遗留”在动物的代谢产物-牛奶和鸡蛋中的真菌毒素引起的。
由于他们不同化学结构和不同的物理属性,霉菌毒素显示出广泛的生物效果。
个体霉菌毒素可以导致基因毒性、诱变、致癌、致畸和产生雌激素。
为了保护消费者的健康和减少经济损失，监督和控制食品和饲料中的霉菌毒素已经成为生产商、监管部门和世界范围内的研究人员一个主要的目标。
然而,化学结构的多样性使霉菌毒素无法用单一的技术进行分析。
因此,大量的分析方法已被开发和验证。
食物基质的多相性及快速的需求同准确测定多种霉菌毒素，对常规分析带来了巨大的挑战。
本文将讨论的最关键的问题是：（1）代表性样本的收集（2）基于色谱或免疫化学技术的新兴分析方法和经典分析方法的操作（3）官方方法的验证（4）当前方法的局限性及未来的发展前景关键词：霉菌毒素和真菌代谢产物、食品、快速验证的方法、规则、抽样、多样霉菌毒素的测定介绍：常规的霉菌毒素自古以来,人类使用真菌(霉菌,酵母)生产食品,包括奶酪、面包,意大利香肠、啤酒和葡萄酒。
神秘的疾病与食品消费作为结合体从而导致第一个为食品的立法和检查食品质量体系的成立。
最古老的食品立法是巴比伦人(公元前1700年)和希泰族(公元前1500年)颁布的。
两个具有历史意义的立法已经为我们现代食品法律处理了两个重要的目标：保护健康和预防欺诈。
然而,1961年之后真菌代谢产物不再被认为是潜在的健康危害。
关键事件是1963年英国在进口了被黄曲霉毒素污染的花生之后导致了100000只火鸡的死亡。
随后,有很多可疑事件都与使用霉菌毒素的生化战争试剂有关。
1974年和1981年之间,目击者报告从老挝,阿富汗和柬埔寨难民的暗示指出空袭期间使用了通过空气分散的单端孢霉烯族毒素类细菌。
霉菌和毒素的检测方法 ppt课件
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2.1.4.1 结果
计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相 应稀释倍数计算。
若所有平板上菌落数均大于 150 CFU，则对稀释度最高的 平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落 数乘以最高稀释倍数计算。
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自从20 世纪 60 年代发现强致癌的黄曲霉毒素以 来,霉菌与霉菌毒素对食品的污染日益引起重视。我国 在2011 年颁布了国家标准 GB2761-2011食品中真菌毒 素限量,各级食品监督检测机构全面开展霉菌的检测工 作。
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62.1霉菌检测方法01 方法GB4789.15-2010 食 品微生物学检验霉 菌和酵母计数。
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2.1.5 镜检
B.1 检样的制备：取定量检样,加蒸馏水稀释至折光指数为 1.3447～ 1.3460（即浓度为7.9%～8.8%），备用。 B.2 显微镜标准视野的校正：将显微镜按放大率 90～125 倍调节标 准视野，使其直径为 1.382 mm。 B.3 涂片：洗净郝氏计测玻片，将制好的标准液，用玻璃棒均匀的 摊布于计测室，以备观察。 B.4 观测：将制好之载玻片放于显微镜标准视野下进行霉菌观测， 一般每一检样观察 50 个视野，同一检样应由两人进行观察。 B.5 结果与计算：在标准视野下，发现有霉菌菌丝其长度超过标准 视野（1.382mm)的1/6或三根菌丝总长度超过标准视野的1/6（即测 微器的一格）时即为阳性（+），否则为阴性（-），按100个视野计， 其中发现有霉菌菌丝体存在的视野数，即为霉菌的视野百分数。
食品中霉菌毒素的检测和控制研究
食品中霉菌毒素的检测和控制研究中英文摘要随着食品加工和储存条件的不断改善，人们对食品安全的关注度也越来越高。
霉菌毒素是一种常见的食品危害物质，在多种食品中都能检测到其存在。
本文将介绍霉菌毒素的检测和控制研究现状，以及在实际应用中的问题和解决方法。
关键词：霉菌毒素、检测、控制、应用、问题With the continuous improvement of food processing and storage conditions, people's attention to food safety is also increasing. Mycotoxins are a common food hazard substance that can be detected in various foods. This article will introduce the current research status of mycotoxin detection and control, as well as the problems and solutions in practical applications.Keywords: mycotoxins, detection, control, application, problems 小标题：一、霉菌毒素的种类和影响二、霉菌毒素的检测方法三、霉菌毒素的控制方法四、应用中的问题与解决方法正文：一、霉菌毒素的种类和影响霉菌毒素是由霉菌产生的一种具有毒性的化合物，其在多种食品中都可以检测到，包括谷物、坚果、蔬菜、水果等。
常见的霉菌毒素包括黄曲霉毒素、赤霉烯酮、欧宝枯菌素等，这些毒素会带来严重的健康危害，如肝癌、肾病、免疫系统衰弱、神经系统损伤等。
二、霉菌毒素的检测方法霉菌毒素的检测是保障食品安全的重要手段之一。
目前，常用的检测方法包括色谱法、高效液相色谱法、酶联免疫分析法等，其中酶联免疫分析法是一种快速、准确、灵敏度高的方法，已广泛应用于食品安全检测。
霉菌毒素检测方法
霉菌毒素检测方法1.呕吐毒素(DON)的检测ELISA法测试前请仔细阅读本说明在2—8℃冷藏—不要冻结1.简介 DON毒素脱氧瓜萎镰菌醇（DON，）是单端孢菌素烯烃中的一种，它通常是由生长在谷类物品（如小麦、玉米、大麦和秣草）霉菌镰红菌素生成的。
脱氧瓜萎镰菌醇的毒性效应包括：呕吐、不想进食、胃肠炎、腹泻、免疫抑制和血液病。
研究表明猪对脱氧瓜萎镰菌醇很敏感。
当脱氧瓜萎镰菌醇含量≥1ppm时，它们就拒绝进食。
其毒性也会对其他物种产生毒性效应，各种物种对脱氧瓜萎镰菌醇的敏感性各不相同。
研究表明脱氧瓜萎镰菌醇会使已加工食物发生问题，包括使可吃的谷类制品产生臭味、对生面团质量产生负面影响。
因此，精确测定可能含有脱氧瓜萎镰菌醇的食物和食品就现得十分重要。
FDA（美国食品和药品管理局）已经制定了脱氧瓜萎镰菌醇含量的强制标准。
美国食品药物管理局已经颁布的DON毒素建议限量如下：2.方法原理本测试盒的测试原理是一种竞争性的直接酶联免疫吸附剂测试方法（ELISA），可准确检测出样品中ppm级的DON毒素。
样品和标准控制液中游离的DON毒素与轭合物中的DON毒素竞争抗体结合位置。
清洗后，加入底物，底物与轭合物反应出现兰色，兰色越深表明DON毒素越少。
将其置于微型孔阅读器中可读出透光度，以控制标准液的透光度作标准曲线，将样品的透光度与标准曲线比较计算出样品中DON毒素的准确浓度。
3.贮存要求本试剂盒存放在2～8℃时，可以一直使用到标签上注明的到期日期。
4.试剂与仪器4.1已提供的材料48个包被了抗体的孔；48个红色标记的混合孔；5瓶2ml浓度为0、0.25、0.5、1、3 ppmDON毒素控制标准液(黄色标签)；1瓶DON毒素-HRP轭合物溶液(兰色标签)；1瓶24ml底物溶液(绿色标签)；1瓶32ml红色终止液（红色标签）4.2需要但未提供的材料提取材料；蒸馏水或去离子水；100ml量筒；150ml的具塞三角瓶；滤纸；样品收集具塞试管；漏斗；粉碎机；称量为5～25克的秤；带450nm滤光片的酶标仪；200μl移液器；200μl吸咀；纸巾或等效的吸水材料；计时器；防水记号笔；洗瓶；移液器用的试剂槽；蒸馏水或去离子水；计时器等5.注意事项本测试盒不使用时应在2～8℃下存放。
第八章霉菌毒素检验
AFB1与其它毒物的LD50
名称
AFB1 666
LD50
0.335 300
倍数
1 1360
DDT
CDT As2O3 KCNLeabharlann 20059 30 3
630
201 63 10
慢性毒性
A 肝组织学变化：肝细胞变性，坏死，再生结 节，肝管上皮增生及肝纤维化、肝硬化 B 肝功能变化：血清转氨酶，ATP ，碱性磷酸 酶,球蛋白升高
1.1 霉菌及霉菌毒素
霉菌（fungi）：是菌丝体比较发达而又没有较 大子实体的一部分真菌的通称。 霉菌毒素（Mycotoxin）：指少数霉菌在污染 食品上繁殖所产生的有毒代谢产物，它对人、 牲畜引起损害。
霉菌产毒的特点
1）霉菌中仅少数菌种能够产毒，少数 产毒 霉菌只有一部分菌株可以产毒。 2）霉菌产毒具有可变性 3) 产毒的菌种所产生的霉菌毒素无严 格专一性 4） 产毒霉菌产生毒素需一定条件。
1.3 霉菌毒素的产生条件
食品菌相：共存于食品中的细菌种类和相对数量的构成。 如：粮谷中以曲霉和青霉常见，小麦和玉米以镰刀菌污 染为主。因此，通过对食品霉菌菌相的分析，大致可判 断可能产生的毒素种类。
黄曲霉毒素： 玉米、花生等 青霉菌毒素： 大米、水果等 镰刀菌及毒素：小米、玉米等
霉菌污染食品质量的评定及食品卫生意义
主 要 来 源 ： 主 要 是 黄 曲 霉 （ Aspergillus flavus 部 分 产 毒） 、寄生曲霉(Aspergillus parasitlas 所有菌株产毒)等 代谢产物。AFT主要污染粮油及其制品，如花生、花生 油、玉米、大米、棉子等。此外，在核桃、乳及乳制品、 干辣椒中也有发现AFT的污染。 常检出AFTB1，奶和奶制品中易检出AFTM1。 在我国，产生黄曲霉毒素的菌种主要是黄曲霉，一般湿 热地区产毒株多、产毒量大。
霉菌毒素的测定方法完美版PPT
用目测法或酶标仪B1标准样比较判断样品中B1的含量。
用目测法或酶标荐仪B赭1标准曲样比霉较判毒断样素品中AB的1的含周量。摄入量不得超过100 ng／奴体重。目前，部分国家已
⑥万一手皮膜被污染，可用次氯酸纳溶液搓洗，再用肥皂水洗净。
4 ng是各实验室制所公定认的了。 食品及饲料中赭曲霉毒素A的限量标准，我国尚未制定。赭曲霉毒
知识点：霉菌毒素的测定方法
情景7：食物中有毒有害成分的检测 任务4：食品中黄曲霉毒素的测定
课程：食品分析技术
食品中有害物质的测定
有害物质－霉 素
第三节 食品中霉菌毒素及其检测
二、霉菌毒素的检测
1．黄曲霉毒素的检测
我国涉及黄曲霉毒素的限量及检测的国家标准有 GB 2761—1981(食品中黄曲霉毒素B1允许量标准)、 GB 9676--1988(牛乳及其制品中黄曲霉毒索M，限量卫生标准)、 GB／T 17480--1998(酶联免疫吸附法测定饲料中黄曲霉毒素B、)、 GB／T 5009．22--1996[薄层色谱法(第一法)／ELISA(第二法)测定食品中黄曲霉毒
④实验中所用的或被污染的玻璃器皿须经5％次氯酸钠溶液浸泡5分钟再清洗之。 ⑤实验完毕应用5％次氯酸钠清洗消毒实验台等。 ⑥万一手皮膜被污染，可用次氯酸纳溶液搓洗，再用肥皂水洗净。
2．赭曲霉毒素A的检测
用目测法或酶标仪B1标准样比较判断样品中B1的含量。
霉菌毒素检测方法综述
•霉菌毒素检测方法综述由于产生毒素的霉菌无处不在，以及我们对大多数有利于霉菌生长和霉菌毒素产生的条件控制不力，造成食品和饲料的霉菌毒素污染问题越来越成为现代农业生产中不可忽视的重大难题。
在各种农产品上生长着的各种各样的霉菌，这些霉菌都能产生霉菌毒素，霉菌毒素是有毒的化合物，有些甚至是致癌的。
霉菌毒素有很多种(CAST,2003)，包括黄曲霉毒素，主要是黄曲霉毒素B1和M1(Aflatoxins，FB1、FM1)；赭(棕)曲霉毒素A(OchratoxinA，OA)；杂色(柄)曲霉毒素(Terigmatocystin)；展青霉素(Patulin,PTL)；玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN(F－2));串珠镰刀菌素(Moniliformin,MF)，三硝基丙酸以及属于单端孢霉烯族化合物(Trichothecenes)的T－2毒素(T－2toxin,T－2)；脱氧雪腐镰刀菌烯醇(呕吐毒素)(Deoxynivalenol,DON)；二乙酰镳草镰刀菌烯醇(Diacetoxyscirpenol，DAS)等。
联合国粮农组织在近期的报道中指出，全世界至少99个国家，占世界人口的87％，针对粮食和饲料的霉菌毒素污染问题都有相关的规定。
在未来的几年里，与不断变化的全球气候有关的气象突发事件的增多将进一步向我们提出挑战。
霉菌毒素污染给食品企业、粮油加工企业、畜禽养殖场以及饲料的加工企业造成了巨大的经济损失。
目前霉菌毒素检测常用的方法如下几种：一、薄层层析法：TLC法是针对不同的样品，用适宜的提取溶剂将霉菌毒素从样品中提取出来，经柱层析净化，再在薄层板上层析展开、分离，利用霉菌毒素的荧光性，根据荧光斑点的强弱与标准比较测定其最低含量。
TLC 法样品前处理繁琐，且提取和净化效果不够理想，提取液中杂质较多，在展开时影响斑点的荧光强度。
二、色谱法：色谱法，包括薄层色谱、气相色谱、液相色谱等，一直是最重要的霉菌毒素的化学分析方法。
饲料中霉菌毒素检测技术PPT课件
霉菌
பைடு நூலகம்
代 谢
产
物
霉菌毒
素
蕈菌
.
3
一、饲料中霉菌毒素的危害
2、霉菌毒素产生的原因
霉菌无处不在，它们可在农作物生长、收获、 运输和储存期间生长并产生毒素
农作物作为饲料原料在生产、销售、储存、运 输过程中如果受到霉菌污染也会发生霉变、遭 受霉菌毒素污染
.
4
一、饲料中霉菌毒素的危害
3、霉菌毒素的种类
现已报道的霉菌毒素大约有300种
在饲料中常见的、对人和动物健康造成潜在 危害的毒素主要有：黄曲霉毒素、玉米赤霉 烯酮、赭曲霉毒素、T-2毒素、伏马毒素和脱 氧雪腐镰刀菌稀醇（呕吐毒素）等6种毒素
.
5
一、饲料中霉菌毒素的危害
4、霉菌毒素的主要危害
一是可以引起饲料的变质，产生异味，降低 其饲用价值，甚至完全让其失去商品价值
二是饲料被霉菌污染后，导致畜禽的急、慢 性中毒，免疫机能和生产性能下降，造成养 殖业效益的下降
4、检测方案
初筛
胶体金
ELISA
批量样本
可疑样品
阳性样确证
√液
高
荧
质
效
光
联
液
分
.
用
相
析
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二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法
5、检测流程
取样 GB/T14699.1 2005 饲料 采样
制样 GB/T20195 动物饲料试样的制备
萃取
净化（主要用于色谱法）
分析测试
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三、ELISA法的操作要点及注意事项
.
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二、饲料中霉菌毒素的主要检测方法
3、主要检测方法的特点比较
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霉菌毒素检验孙素霞教学目标熟悉霉菌毒素的命名与分类、产生条件等。
复习黄曲霉菌、赭曲霉菌、展青霉素、单端胞霉烯族化合物、玉米赤霉烯酮等几种霉菌毒素的理化特性、毒性特征、常见的污染食品。
掌握黄曲霉菌、赭曲霉菌、展青霉素、单端胞霉烯族化合物、玉米赤霉烯酮等几种霉菌毒素的主要检测方法黄曲霉毒素的检验1赭曲霉素A 的检验2展青霉素的检验3单端胞霉烯族化合物的检验4主要内容玉米赤霉烯酮的检验5第一节概述霉菌及霉菌毒素霉菌毒素的命名与分类霉菌毒素的产生条件毒性与危害一、霉菌及霉菌毒素霉菌(fungi):是菌丝体比较发达而又没有较大子实体的一部分真菌的通称，在自然界分布很广；与食品卫生关系密切的是曲霉菌属、青霉菌属和镰刀菌属 霉菌生长引起食品霉变，产生对人体危害性大的霉菌毒素(mycotoxin);一种菌种或菌株可以产生几种毒素，而同一种毒素又可由不同霉菌产生，产毒菌株与霉菌毒素之间无严格的专一性二、霉菌毒素的命名与分类二呋喃环类、内酯环类和醌类毒素化学结构抑制蛋白质合成类、作用于离子通道类、作用于细胞骨架类、作用于细胞突触类作用机理曲霉毒素类、青霉毒素类、镰刀毒素类毒素来源肝脏毒素、肾脏毒素、神经毒素毒素的作用部位杂色曲霉毒素、串珠镰刀菌素产生毒素的霉菌种类分类方式三、霉菌毒素的产生条件¾产毒的可变性¾霉菌毒素是霉菌产生的次级代谢产物。
在霉菌生长后期，随着养分的耗竭，霉菌的生长受到抑制，体内有氧代谢如三羧酸循环的中间产物（初级代谢产物）如乙酰辅酶A，丙酮酸等大量堆积，易导致霉菌代谢性中毒，迫使霉菌启动体内另外的合成途径，以这些初级代谢产物为原料合成次级代谢产物如霉菌毒素。
¾霉菌毒素的产生受食品中的水分、pH值、环境温度、湿度及氧气等因素影响。
四、毒性与危害¾污染食品，引起食品腐败变质、降低食品的食用价值，甚至完全不能食用，造成经济损失；全世界每年约有2%的粮谷由于霉变不能食用。
¾摄入霉菌毒素污染的食品可引起中毒：急性中毒、慢性中毒、三致作用。
饲料霉菌毒素污染及处理 霉菌毒素的污染与防控第二节黄曲霉毒素的检验AFT 是由黄曲霉和寄生曲霉产生的结构相似的一类化合物，均为二呋喃香豆素的衍生物；AFT 在紫外线照射下能产生荧光：AFTB 1和AFTB 2 —蓝紫色AFTG 1和AFTG 2—黄绿色AFTB 1加氢—AFTB 2 （AFTB 1是典型代表，其毒性大、污染率高）AFTG 1加氢—AFTG 2AFTB 1羟基化—AFTM 1 （AFTM 1易污染乳类）㈠黄曲霉毒素(aflatoxin, AFT)特性黄曲霉毒素的结构式AFTB最为常见，其毒性和致癌性最强，食品卫生检测中1的常用指标；AFTB具有极强的毒性和致癌性。
1AFTB不溶水能溶于有机溶剂（三氯甲烷、甲醇等）1AFTB耐热：在268℃时发生裂解，破坏其毒性；1在碱性溶液中不稳定，当pH 9~10之间时，可迅速分解成几乎无毒的盐。
对氧化剂敏感，氧化剂浓度越高，毒素分解越快。
㈡AFT的来源AFT是由黄曲霉、寄生曲霉等产生的代谢产物，主要污染粮油食品、动植物食品等以花生和玉米受污染最严重。
大豆、胡桃、食用油、调味品、药材等也易受到污染。
㈢AFT毒性1974年，印度事件¾急性中毒：剧毒物质，毒性是氰化钾的10倍，肝脏毒，可抑制DNA、RNA和蛋白质的合成；雏鸭经口LD50 0.294μg/kg。
¾慢性中毒：生长障碍，肝脏出现亚急性或慢性损伤；¾致癌性：可诱发多种动物肝癌,及多个部位癌症。
对人类的致癌性不能肯定，但黄曲霉毒素污染程度与居民原发性肝癌的发生率成正相关。
㈣AFT卫生标准1981年，我国颁布食品中AFTB1最高允许量标准： 玉米、花生仁、花生油≤20μg/kg玉米及花生仁制品≤20μg/kg大米和其他食油≤10μg/kg其他粮食、豆类、发酵食品≤5μg/kg婴儿食品中不得检出AFTM在牛乳、乳制品中(按含牛乳量折算)≤0.5μg/kg1㈤AFT的分析方法薄层色谱法（thin-layer chromatography,TLC）:操作繁琐、准确性差。
酶联免疫吸附测定法（ELISA法）：样品处理简单、操作方便、但影响因素多，易出现假阳性或假阴性，可用于大批量样品的筛选。
高效液相色谱测定法（High Performance Liquid Chromatography,HPLC）：高效、快速、分析周期短、可同时测定多种毒素。
微柱筛选法薄层色谱法¾原理：样品中AFTB经甲醇-水溶液提取后，浓1缩、定容、点样于硅胶G薄层板上，经展开分离后，在波长365nm紫外光下观察蓝紫色荧光，根据其在薄层板上显示荧光的强度与标准比较来确定含量样品处理正己烷和甲醇-水溶液(55+45)震荡提取AFTB1留在甲醇-水层三氯甲烷反提取甲醇-水层中的AFTB1AFTB1进入三氯甲烷层通过无水硫酸钠的慢速定量滤纸、通风挥干用苯-乙腈混合液溶解残渣，作点样液测定—定性点样液和标准溶液均点在硅胶G 薄层板上展开槽内，丙酮-三氯甲烷(8+92)展开取出晾干，在波长365nm 紫外光下观察Rf 在0.6附近有蓝紫色荧光，可能有AFTB 1污染确证：在点样处加三氟乙酸，Rf 下降至0.1左右原点至斑点中心距离Rf 值= 原点至展开剂前沿距离AFTB 水解生成AFTB ，极性增加测定—定量定性实验阳性的样品，应作定量测定。
TLC法的最低检出限量0.0004μg/ml。
在薄层板上滴加0.04μg/ml黄曲霉毒素B1标准使用液10μl。
紫外灯下观察，样品的荧光强度与标准中那一点的荧光强度相同，样品中的量即为该点的量。
10μl （0.0004μg）20μl （0.0008μg）40μl （0.0016μg）80μl （0.0032μg）酶联免疫吸附测定法（ELISA法）¾原理：将已知抗原吸附在酶标微孔板表面，加入一定量抗体与待测样本（含有毒素抗原）提取液的混合液，竞争孵育后，在固相载体表面形成抗原抗体复合物。
洗除多余抗体成分，然后加入酶标记的第二抗体，与吸附在固体表面的抗原抗体复合物相结合，再加入酶的底物，在酶的催化作用下，底物发生反应，生成有色物质，根据标准和样品的吸光度值，计算样本中的抗原含量。
¾最低检出浓度0.01μg/kg。
竞争法测抗原样品处理粉碎均匀样本用乙腈-水（50+50）（碳酸盐缓冲液调pH至8.0）进行提取，滤纸过滤，滤液用含0.1% 牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)的洗液稀释后，供ELISA法检测用。
测定+BSA)包被酶标板包被：用包被抗原(AFTB14℃过夜洗去多余抗原，加毒素标准液和样本提取液单抗加AFTB137℃孵育洗去多余抗体，加HRP标记二抗37℃孵育洗去二抗，加底物TMB，37 ℃孵育硫酸中止反应，显色，酶标仪读数，判定结果高效液相色谱测定法¾原理：样本中的黄曲霉毒素经C柱分离，18用带荧光检测器的高效液相色谱仪检测，以保留时间定性，峰面积或峰高定量。
样品处理样品提取：称取适量样本，加少量水浸润，混匀后加三氯甲烷，振摇提取，再加入无水硫酸钠，经快速定性滤纸滤于具塞量筒中。
样品净化和衍生化反应：三氯甲烷-正己烷、三氯甲烷-甲醇淋洗除去杂质丙酮-水洗脱AFT于烧杯中水浴烘干，少量三氯甲烷溶解转移至具塞试管部分溶液加入正乙烷、三氟乙酸，混匀，静置30min，AFTB衍生为1AFTB2，用氮气吹干，加入少量流动相溶解待测。
测定¾处理的衍生样品、未衍生样品和标准溶液注入高效液相色谱仪，以保留时间定性，峰面积或峰高定量。
¾色谱条件z荧光检测器，激发波长Ex=360nm，发射波长Em=425nm；z色谱柱为C(250mm×4mm)；18z流动相为甲醇-0.01M磷酸二氢钾(1+1)；z流速为1.3ml/min。
方法说明¾样本提取时，除用本法介绍的三氯甲烷外，也可以使用水溶性有机溶剂，如乙腈-水或甲醇-水。
¾净化时，可采用商品化固相萃取小柱。
¾本法流动相含磷酸盐，使用完后应用去离子水彻底冲洗，再用甲醇冲洗，以保护色谱柱。
流动相可用不含盐的组分，如乙腈-甲醇-水。
¾样品用三氟乙酸衍生的目的是确定样本是否含有AFTB。
1当样品在AFTB标准对应的保留时间出峰时，做衍生化试1对应保留时间也出峰时，便可验，若衍生化样品在AFTB2。
判断样品中检出AFTB1GB/T 5009.23-2006 食品中黄曲霉毒素B 1、B2、G1、G2的测定微柱筛选法¾原理：样本经提取后，通过装有氧化铝、硅镁型吸附剂的微柱管内，AFT被吸附后，在波长365nm紫外光灯下显示蓝紫色荧光环，其荧光强度与AFT在一定的浓度范围内成正比。
¾根据样品提取液在硅镁型吸附剂层出现的荧光强度，可初步判定样品AFT的含量。
样品处理样品提取：磨细均匀的样品用甲醇水振荡提取、过滤，再加三氯甲烷反提取，经无水硫酸钠脱水，即为样品提取液。
测定样品提取液、AFT 标准液和三氯甲烷分别加入微柱管展开剂丙酮-三氯甲烷(1+9)展开365nm 波长紫外灯下观察结果阳性结果蓝紫色荧光环阴性结果微黄色荧光环方法说明¾由于在微柱上不能分离AFTB1、B2、G1、G2，所测得的结果为AFT总含量。
方法检出限为0.5μg/g。
¾层析用的酸性与中性氧化铝、硅镁型吸附剂及层析用无水硫酸钠应在110℃~120 ℃活化2h，装瓶盖严于干燥器内，可保存1周左右。
¾在加样或展开时，柱管均要保持垂直，待展开剂流完后，即可观察结果，最好在2h内进行观察。
¾接收洗脱废液的容器，要尽可能密闭。
相关标准GB/T 5009.23-2006 食品中黄曲霉毒素B 1、B 2、G 1、G 2的测定薄层色谱法微柱筛选高校液相色谱法GB 5009.24-2010 食品中黄曲霉毒素M 1和B 1的测定薄层色谱法NY/T 2071-2011 饲料中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的测定液相色谱-串联质谱法GB 5413.37-2010 乳和乳制品中黄曲霉毒素M 1的测定免疫亲和层析净化液相色谱—串联质谱法GB/T 23212-2008 牛奶和奶粉中黄曲霉毒素B 1、B 2、G 1、G 2、M 1、M 2的测定液相色谱-荧光检测法第三节赭曲霉毒素A的检验㈠赭曲霉毒素(ochratoxin, OCT)特性赭曲霉毒素是由曲霉属、青霉属等产生的一类化学结构类似香豆素的化合物；赭曲霉毒素包括A、B、C和D四种化合物；赭曲霉毒素A（OTA）是稳定的无色针状结晶化合物，在乙醇溶液中置冰箱中可保存一年以上；微溶于水，易溶于有机溶剂和碳酸氢钠水溶液；㈡OTA来源在寒冷的条件下，OTA主要由纯绿青霉产生；在温暖的气候下，主要由赭曲霉产生。