2种方法检测非小细胞肺癌EGFR基因突变的比较
非小细胞肺癌常见的驱动基因突变类型
非小细胞肺癌常见的驱动基因突变类型非小细胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer，NSCLC）是目前肺癌的主要类型，约占所有肺癌的85%。
驱动基因突变是NSCLC发生和发展的重要原因之一。
本文将介绍非小细胞肺癌中常见的几种驱动基因突变类型。
1. EGFR突变表皮生长因子受体（Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR）是一种经常发生突变的驱动基因。
EGFR突变包括点突变和插入/缺失突变，常见的突变位点有Exon 19和Exon 21。
EGFR突变可以导致受体激活异常，进而促进细胞增殖和进化，是NSCLC中最为常见的驱动基因突变。
EGFR突变与亚型NSCLC的发生有关，对EGFR酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）有较好的治疗反应。
2. ALK融合基因ALK基因重排是NSCLC中另一种常见的驱动基因突变。
ALK基因重排导致ALK蛋白与其他蛋白（如EML4）融合，形成具有激酶活性的融合蛋白。
这种融合蛋白能够激活多个信号通路，促进肿瘤细胞的增殖和生存。
ALK融合基因在NSCLC中的检出率约为5%，主要见于非吸烟者和年轻患者。
对于ALK阳性的NSCLC患者，ALK 抑制剂是一种有效的治疗选择。
3. ROS1融合基因ROS1基因融合是NSCLC中另一种重要的驱动基因突变。
ROS1融合基因的患者通常是非吸烟者和年轻人。
ROS1融合基因可以激活多个信号通路，促进肿瘤细胞的增殖和生存。
ROS1融合基因在NSCLC中的检出率约为1-2%。
针对ROS1阳性的NSCLC患者，ROS1抑制剂是一种有效的治疗选择。
4. BRAF突变BRAF基因突变是NSCLC中较为罕见但具有重要意义的驱动基因突变。
BRAF突变通常见于不吸烟的患者，尤其是女性。
BRAF突变可以导致信号通路的异常激活，进而促进肿瘤细胞的增殖和生存。
BRAF突变在NSCLC中的检出率约为1-4%。
对于BRAF阳性的NSCLC患者，BRAF抑制剂是一种有效的治疗选择。
非小细胞肺癌中EGFR免疫组化与基因扩增和点突变检测的对比研究
非小细胞肺癌中EGFR免疫组化与基因扩增和点突变检测的对比研究孙世珺;彭瑶;黄巍;杜鹃;罗教秀;张俊凯【摘要】目的:检测非小细胞肺癌中EGFR 基因扩增、点突变及蛋白的表达情况,为探讨EGFR 在非小细胞肺癌的发生、发展中的作用以及化疗方式的选择上提供信息.方法:应用FISH 和Q-PCR 方法检测EGFR 基因扩增和突变,应用免疫组织化学方法检测EGFR 蛋白的表达情况,依据Robert 免疫组化分级评分方法,把NSCLC 的EGFR 免疫组化与基因扩增和点突变检测进行比较及分析.结果:EGFR 蛋白在非小细胞肺癌组织表达率为43.9%(36/82),FISH 法检测EGFR 基因扩增率为18.3%(15/82),Q-PCR 法检测EGFR 基因突变率为22.0%(18/82).EGFR的表达与其基因扩增率正相关(P<0.05) ;其表达与其基因突变率不相关(P>0.05).结论:EGFR 免疫组化表达率高于FISH 法检测基因扩增率及Q-PCR 法检测突变率,但其无法替代分子生物学检测方法,三种方法结果互相结合,能更好的指导临床治疗方案的选择.【期刊名称】《中外医学研究》【年(卷),期】2012(010)024【总页数】2页(P3-4)【关键词】非小细胞肺癌;表皮生长因子受体;免疫组化;荧光原位杂交法;实时荧光定量法【作者】孙世珺;彭瑶;黄巍;杜鹃;罗教秀;张俊凯【作者单位】中山大学附属中山医院,广东,中山,528403;中山大学中山医学院;中山大学附属中山医院,广东,中山,528403;中山大学附属中山医院,广东,中山,528403;中山大学附属中山医院,广东,中山,528403;中山大学附属中山医院,广东,中山,528403【正文语种】中文【中图分类】R392肺癌是严重威胁人类生命健康的常见恶性肿瘤之一。
在中国过去的十年中，肺癌的发病率和死亡率明显升高；在美国乃至全世界肺癌也是因癌症死亡的首位原因[1]。
2种方法检测非小细胞肺癌EGFR基因突变的比较
性， 为寻 找 适 宜 临床 应 用 的 Ｅ ＧＦ Ｒ基 因突 变检 测 方 法提 供 实 验依 据 。 方 法 收 集 ６ Ｏ例 非 小细 胞 肺 癌 患 者 肿 瘤 组 织 ， 应 用测 序 法
・
１ ６２ ・
国 际检 验 医学 杂志 ２ ０ １ ３ 年 １月第 ３ ４ 卷 第 ２期
Ｉ ｎ ｔ Ｊ Ｌ ａ ｂＭｅ ｄ ， Ｊ ａ ｎ ｕ ａ ｒ ｙ ２ ０ １ ３ ， Ｖ ｏ １ ． ３ ４ ， Ｎ ｏ ． ２
・
临床 检验 研 究论著 ・
２种 方 法检 测 非小 细胞 肺 癌 ＥＧＦ Ｒ 基 因突 变 的 比较
罗 凯 ， 王 倩 ， 刘季 芳 ， 潘 东晓 ， 薛兴 阳 ， 傅 文凡 ， 贺智敏 （ １ ． 广 州 医学 院肿瘤研 究所／ 广州 医学 院附属 肿瘤 医院 ， 广 东广 州 ５ １ ０ ０ ９ ５ ；
２ ． 广 州市 中 医医院病理 科 ， 广 东广 州 ５ １ ０ １ ３ ０ ）
Ｄｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ＥＧＦＲ ｍｕ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｉ ｎ ｎ ｏ ｎ－ ｓ ｍａ ｌ ｌ ｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｕｎ ｇ ｃ ａ ｎｃ ｅ ｒ ｔ ｉ ｓ ｓ ｕｅ ｓ ｂ ｙ ｔ ｗｏ ｍｅ ｔ ｈｏ ｄ ｓ
Ｌｕ ｏ Ｋａ ｉ ， Ｗａ ｎ ｇ Ｑｉ ａ ｎ。 ， Ｌｉ ｕ Ｊ ｉ ｎ ｇ ， Ｐａ ｎ Ｄｏ ｎ ｇ ｘ ｉ ａ ｏ ， Ｘｕ ｅ Ｘｉ ｎ ｇ ｙ ａ ｎ ｇ ， Ｆｕ Ｗｅ ｎ ｆ ａ ｎ ， Ｈｅ Ｚｈ ｉ ｍｉ ｎ
非小细胞肺癌患者EGFR基因检测
国内外胸水标本EGFR检测的研究
作者
Kimura H Soh J Hung MS
国家/地区
日本 日本 台湾
病例数
24 61 29
EGFR突变率 （%）
33% 26% 41%
Kimura H
Jian G
日本
中国
43
32
25.6%
28.1%
Cancer Sci. 2006;97(7):642-8. Int J Cancer. 2006;119(10):2353-8. Chang Gung Med J. 2006;29(4):373-9. Br J Cancer. 2006;95(10):1390-5. J Cancer Res Clin Oncol. 2010;136(9):1341-7.
每例蜡块切取10-12片5μm 厚连续切片，切片在37℃烘箱
内烤片3h后常温保存。
胸膜活检组织EGFR突变状况
病人数 EGFR突变 突变率% P
男性
女性 有吸烟史 无吸烟史
18
17 10 25
6
11 1 16
33.3
64.7 10 64
0.094
0.007
胸液沉淀与相应胸膜转移灶EGFR突变的比较
检出率83.33%，不同标本检出率
n 手术 淋巴结活检 气管镜 肺穿 胸腔镜 胸水 合计 30 6 13 11 1 5 66 有结果 30 6 5 8 1 5 55 检出率 100% 100% 38.5% 72.7% 100% 100 % 83.33%
EGFR突变率
55份有结果的标本中，29份EGFR突变
除标本和细胞学标本均可用于EGFR突变的 检测。 理想的标本，需保证200～400个肿瘤细胞 （文献报道大于100个即可）
非小细胞肺癌EGFR基因突变与扩增的比较及其与血清CEA水平的关系
非小细胞肺癌EGFR基因突变与扩增的比较及其与血清CEA水平的关系黄宇筠;袁润强;陈应智;袁小玲;缪卓峰;庄楚璇【摘要】目的比较分析非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子受体(EGFR)基因突变与扩增的关系,并探讨其与血清癌胚抗原(CEA)水平有无相关性. 方法对270例确诊非小细胞肺癌的肺组织标本(包括手术切除及经纤支镜活检取得)用实时荧光定量PCR法技术检测EGFR基因突变状态,用荧光原位杂交技术检测EGFR基因的扩增情况.治疗前抽取患者静脉血,用化学发光法检测血清CEA水平. 结果 270例NSCLC中EGFR基因突变率为31.11％,EGFR基因扩增率为20％,基因突变并扩增的占10.74％.基因突变组、基因扩增组、基因突变并扩增组和基因无突变无扩增组血清CEA平均水平分别为[3.03(1.68-6.22)] ng/mL、[3.19(1.8-17.17)]ng/mL、[3.39(1.85-20.87)] ng/mL和[2.54(1.5-4.62)] ng/mL.基因突变组与基因扩增组、基因突变组与基因无突变无扩增组血清CEA比较无显著性差异(P＞0.05).基因扩增组与基因无突变无扩增组、基因突变并扩增组与基因无突变无扩增组血清CEA比较有显著性差异(P＜0.05).EGFR基因突变、基因扩增及基因突变并扩增与血清CEA水平有明显相关性. 结论在NSCLC中EGFR基因突变率大于扩增率,其机制有待进一步阐明.EGFR基因与血清CEA水平有明显相关性.血清CEA水平有可能成为指导非小细胞肺癌EGFR靶向治疗的指标.【期刊名称】《分子诊断与治疗杂志》【年(卷),期】2015(007)001【总页数】5页(P22-26)【关键词】表皮生长因子受体;突变;扩增;癌胚抗原;非小细胞肺癌【作者】黄宇筠;袁润强;陈应智;袁小玲;缪卓峰;庄楚璇【作者单位】中山大学附属中山医院,中山市人民医院呼吸内科,广东,中山528400;中山大学附属中山医院,中山市人民医院呼吸内科,广东,中山528400;中山大学附属中山医院,中山市人民医院呼吸内科,广东,中山528400;中山大学附属中山医院,中山市人民医院呼吸内科,广东,中山528400;中山大学附属中山医院,中山市人民医院呼吸内科,广东,中山528400;中山大学附属中山医院,中山市人民医院呼吸内科,广东,中山528400【正文语种】中文［KEY WORDS］Epidermal growth factor receptor（EGFR）；Mutation；Amplification；Carcinoembryonic antigen（CEA）；Non-small cell lung cancer（NSCLC）肺癌是当今世界最常见的恶性肿瘤，占癌症死亡率的第一位［1］。
非小细胞肺癌EGFR基因突变检测
EGFR基因突变和EGFR靶向治疗
中国肺腺癌驱动基因突变图谱
NSCLC中药物疗效相关的EGFR突变
八项随机研究奠定了TKI在EGFR基因突 变阳性患者中一线治疗的地位
研究 IPASS First-SIGNAL WJTOG 3405 NEJGSG002 OPTIMAL EURTAC LUX-LUNG 3 LUX-LUNG 6
病理评估和质控对于基因检测至关重要-
为什么EGFR检测要在 病理科开展？
标本接收
组织处理、蜡块和 H&E染色切片制作
病理质量控制
质量达标
EGFR 基因突变 检测
质量不达标
无EGFR 基因 突变检测
蜡块
未染色切片 H&E 染色切片
标记肿瘤细胞比例高的区域 刮取标记以内的区域
肿瘤细胞含量评估对于EGFR结果判读影响
吉非替尼组的PFS与卡铂/紫杉醇组无显著差异 (HR, 0.88; 95% CI, 0.61–1.28; p 0.50)
Goto K. et al. J Thorac Oncol 2012; 7(1):115-121
亚太和俄罗斯晚期NSCLC组织/细胞学和 配对的血浆样本(IGNITE)
一致性
敏感性
多部权威指南强调治疗前的EGFR突变检测
ASCO2015指南： 考虑用EGFR TKI进行一线治疗的非小细胞肺癌 患者应该进行肿瘤EGFR突变检测来确定适合一 线使用EGFR TKI还是一线使用化疗药物治疗。
ESMO2015指南： •进行个体化治疗决定前应有足够的组织材料进 行组织学诊断和分子检测 •在疾病进展时应考虑重新检测 •应当系统分析EGFR突变状态——在晚期非小细 胞肺癌患者组织中进行标准检测A].
EGFR突变检测方法简介
遗传异质性 （Heterogeneity） 对检测方法敏感度有较高要求
-5-
标本因素对肿瘤组织中基因突变检测的影响
--组织标本种类--
冰冻组织
--外科手术标本 --穿刺活检测标本
固定包埋组织
--外科手术标本 --穿刺活检测标本
正常细胞混杂 （Contamination with normal cells）
EGFR突变检测方法简介
朱冠山 (Mike) 阿斯利康中国创新研究中心 20010年4月9日
-1-
内 容
非小细胞肺癌中EGFR活性增强突变 标本因素对肿瘤组织中基因突变检测的影响 EGFR突变检测方法概述 ARMS试剂盒检测EGFR突变 工作流程与质量控制
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非小细胞肺癌中EGFR酪氨酸激酶区突变
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EGFR突变检测主要方法及敏感度
方法
直接测序法 PCR-RFLP/AS-PCR dHPLC/HRMA 实时荧光定量PCR --TaqMan --PNA-LNA clamp --ARMS >10％ 1％ 1％
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敏感度
10-20％ N/A 3-12％
测序法与ARMS法比较
测序法 敏感度 FFPE标本成功率 商用试剂盒 流程与速度 数据分析要求 试剂成本 仪器成本 10-20% 低 无 复杂/慢 高 低 高 ARMS 1% 高 有 简单/快 低 略高 低
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Q&A
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ADx ARMS
中国厦门艾德 双环引物与探针 29种 FAM信号, Ct值 <10ng/Rnx Stratagene Mx系列, ABI系列, Lightcycler480
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非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变的结果
·论著·非小细胞肺癌表皮生长因子受体基因突变的结果分析王璇，时姗姗，马恒辉，周晓军，王建东［摘要］目的回顾性分析301例非小细胞肺癌（NSCLC）组织表皮生长因子受体（EGFR）基因突变检测结果，比较三种实验方法检查EGFR突变的差异。
探讨肺癌临床靶向个体化治疗进行EGFR分子病理检查的最佳方法。
方法应用聚合酶链反应（PCR）结合直接测序法检测171例肺癌DNA样本；TaqMan探针荧光定量PCR法检测88例肺癌DNA样本；扩增阻碍突变系统（ARMS）法检测42例肺癌DNA样本。
结果PCR直接测序法、TaqMan探针荧光定量PCR法、ARMS法的阳性总检出率分别是31.58%、27．27%、42.86%。
结论PCR直接测序法和TaqMan探针荧光定量PCR法阳性总检出率差异无统计学意义（P＞0.05），ARMS法阳性总检出率高于PCR直接测序法和TaqMan探针荧光定量PCR法（P均＜0.01）。
对于不同来源的肺癌组织标本，不同方法检测EGFR突变具有各自的优点和不足。
［关键词］肺癌；表皮生长因子受体；突变［中图分类号］R574［文献标志码］A［文章编号］1672-271X（2012）05-0387-03Respective analysis of EGFR mutations in non-small cell lung cancerWANG Xuan，SHI Shan-shan，MA Heng-hui，ZHOU Xiao-jun，WANG Jian-dong．Department of Pathology，Nanjing General Hospital of Nanjing Military Command，PLA，Nanjing，Jiangsu210002，China［Abstract］Objective The results of epidermal growth factor receptor（EGFR）mutations in301tis-sues with non-small cell lung cancer（NSCLC）detected by three different methods were respectively analyzed．The differences among three methods were compared．The objective of this study was to explore the proper mo-lecular method for personalized target therapy in lung cancer．Methods Polymerase chain reaction combine with direction sequencing was used to detect EGFR mutations in171patients．Real-time PCR with TaqMan fluo-recent probe was used to detect EGFR mutations in88patients and amplification refractory mutation system PCR （ARMS-PCR）was used to detect EGFR mutations in42patients．Results The total positive rates for sequen-cing，TaqMan real-time PCR，and ARMS-PCR methods were31．58%，27．27%，and42．86%respectively．Conclusion No significant difference in total positive rate between direct sequencing and TaqMan real-time PCR（P＞0．05）．The total positive rate was higher in ARMS-PCR than that in direct sequencing and TaqMan real-time PCR（P＜0．01）．To different tissues，different methods have their superiority when used for detection of EGFR mutations in lung cancer．［Key words］lung cancer；EGFR；mutation肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，国内肺癌的死亡率占城市恶性肿瘤之首［1］，其中非小细胞肺癌（NSCLC）占75% 80%。
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酪氨酸 激 酶 抑 制 剂 （ ） 类小分子靶向药物已进入 Ｅ Ｇ Ｆ Ｒ Ｔ Ｋ Ｉ Ｎ Ｓ Ｃ Ｌ Ｃ患 者 的 临 床 治 疗 并 取 得 良 好 的 疗 效。 许 多 研 究 表
２ ４］ ， 明［ Ｅ Ｇ Ｆ Ｒ基因 酪 氨 酸 激 酶 功 能 区 的 体 细 胞 基 因 突 变 与
万方数据 作者简介 ： 罗凯 ， 男， 主管检验师 ， 主要从事肿瘤靶向治疗与耐药研究 。 △ 通讯作者 ， ： Ｅ ｍ ａ ｉ ｌ ｈ ｅ ｚ ｈ ｉ ｍ ｉ ｎ ２ ０ ０ ５＠ｙ ａ ｈ ｏ ｏ ． ｃ ｏ ｍ。
国际检验医学杂志２ ， ， ， ０ １ ３年１月第３ ４卷第２期 Ｉ ｎ ｔ ＪＬ ａ ｂＭ ｅ ｄ Ｊ ａ ｎ ｕ ａ ｒ ０ １ ３ Ｖ ｏ ｌ ． ３ ４ Ｎ ｏ ． ２ ｙ２
目的 比较测序法和 Ｔ 基因１ ａ ｍ ａ ｎ 实时荧光 Ｐ Ｃ Ｒ 法检测 表 皮 生 长 因 子 受 体 （ Ｅ Ｇ Ｆ Ｒ） ９、 ２ １外显子基因突变的一致 摘 要 ： ｑ 为寻找适宜临床应用的 Ｅ 应用测序法 性， Ｇ Ｆ Ｒ 基因突变检测方法提供实验依据 。 方法 收集 ６ ０例非小细胞肺癌患者肿瘤组织， 和Ｔ 比较两种方法的有效性 。 结果 两法检测 Ｅ ａ ｍ ａ ｎ 实时荧光 Ｐ Ｃ Ｒ 法分别检测 Ｅ Ｇ Ｆ Ｒ 基因 １ ９、 ２ １ 外显子基因突变 ， Ｇ Ｆ Ｒ 基因 ｑ ／ ） 和９ ／ ） ， 差异无统计学意义 （ ） 。 结论 ２ 种方法均可用 于 １ ９、 ２ １ 外显子突变结果符合率分别为 ９ ６． ７％ （ ５ ８ ６ ０ ８． ３％ （ ５ ９ ６ ０ Ｐ＞０． ０ ５ 测序法更适合指导临床分子靶向治疗 。 Ｅ Ｇ Ｆ Ｒ 基因 １ ９、 ２ １ 外显子突变检测 ， 关键词 ： 受体 ，表皮生长因子 ； 基因测序 ； 聚合酶链反应 ： ／ Ｄ Ｏ Ｉ １ ０． ３ ９ ６ ９ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ３ ４ １ ３ ０． ２ ０ １ ３． ０ ２． ０ １ ６ ｊ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： （ ） １ ６ ７ ３ ４ １ ３ ０ ２ ０ １ ３ ０ ２ ０ １ ６ ２ ０ ３
１］ 是肺癌晚期 ， 具有较 差 的 预 后 ［ 。近 年 来， 表皮生长因子受体
１． ２ 仪 器 与 试 剂 测 序 法 、 Ｔ ａ ｍ ａ ｎ实时荧光 Ｐ Ｃ Ｒ 法检测 ｑ Ｅ Ｇ Ｆ Ｒ 基因 １ ９、 ２ １ 外显子 基 因 突 变 试 剂 盒 分 别 购 自 北 京 鑫 诺 美迪 科 技 有 限 公 司 、 北京金菩嘉医疗科技有限公司， 两法对应 的检测仪器 分 别 为 美 国 Ａ Ｂ Ｉ３ １ ３ ０ ｘ ｌ基 因 测 序 仪 和 Ａ Ｂ Ｉ７ ５ ０ ０ ｆ ａ ｓ ｔ实时荧光定量 Ｐ Ｃ Ｒ 仪。 １． ３ 方法 取 １． １． ３． １ 样品前处理 石蜡切片样 品 ： ５ｍ ＬＥ ｅ ｎ ｄ ｏ ｒ ｆ管 ｐ ｐ 加入 １ｍ １支， Ｌ 二甲 苯 。 依 据 组 织 大 小 与 肿 瘤 细 胞 含 量 取 石 蜡切片 ６～１ 每片滴加 １～２ 滴二甲苯 ， 取洁净手术 刀 片 刮 ５片， 取玻片上组织放入 Ｅ 振荡混匀后静置１ ， ｅ ｎ ｄ ｏ ｒ ｆ管 中 ， ０ｍ ｉ ｎ ｐ ｐ ， 弃上清液 。 重复以上步骤 用 １ ｍ １ ２０ ０ ０×ｇ 离心 ５ｍ ｉ ｎ Ｌ 二甲 苯洗涤样品 １ 次 ， 加入 １ｍ ， Ｌ 无水乙醇 ， １ ２０ ０ ０×ｇ 离 心 ５ ｍ ｉ ｎ 弃上清液 。 再使用无 水 乙 醇 重 复 洗 涤 样 品 １ 次 。 室 温 开 盖 静 置， 待无水乙醇彻底 挥 干 。７ 用洁净手 ５％ 乙 醇 固 定 组 织 样 品 ： 术刀于 送 检 肿 瘤 组 织 中 做 ４～６ 点 取 样 放 入 Ｅ ｅ ｎ ｄ ｏ ｒ ｆ管 中 ， ｐ ｐ 弃 上 清 液。室 温 开 盖 静 置， 待乙醇彻 ７ ５％ 乙醇洗涤样品 １ 次 ， 底挥干 。 １． ３． ２ 基因 组 Ｄ ＮＡ 提 取 使 用 天 根 口 腔 拭 子 基 因 组 Ｄ ＮＡ 提取试剂盒 ， 按试剂盒说明书操作步骤提取基因 组 Ｄ ， 提 取 ＮＡ 后测 Ｏ ／ Ｄ ２ ６ ０、 Ｏ Ｄ ２ ６ ０ Ｏ Ｄ ２ ８ ０ 评估 Ｄ ＮＡ 含量与纯度 。 阳性对照。依 １． ３． ３ Ｄ ＮＡ 测序突变检测 实验全程设置 阴 、 据试剂盒说明书 ， 利用 Ｐ Ｃ Ｒ 仪扩增 Ｅ Ｇ Ｆ Ｒ 基因 １ ９、 ２ １ 外显子 。 扩增引物如下 ： １ ９ Ｆ５ ′ Ｃ Ｃ Ｔ ＴＡＧ Ｇ Ｔ ＧＣ Ｇ ＧＣ Ｔ ＣＣ Ａ Ｃ ＡＧ Ｃ
其中约 Ｎ Ｓ Ｃ Ｌ Ｃ患者 Ｅ Ｇ Ｆ Ｒ Ｔ Ｋ Ｉ靶 向 治 疗 敏 感 性 密 切 相 关 ， ９ ０％ 的突变发生于 １ ９、 ２ １ 外显子上 ， Ｅ Ｇ Ｆ Ｒ Ｔ Ｋ Ｉ在突变患 者 中 的有效率可达 ７ 而在非突变患者中有效率仅１ ０％ 以 上 ， ０％ 左 右 。 因此检 测 Ｅ Ｇ Ｆ Ｒ 基因１ ９、 ２ １外显子突变对于指导临床 对 患者的靶向治疗具有重要意义 。 Ｅ Ｇ Ｆ Ｒ Ｔ Ｋ Ｉ Ｎ Ｓ Ｃ Ｌ Ｃ 目前临床应用的检测 Ｅ Ｇ Ｆ Ｒ基因突变的方法主要为测序 法和实时荧光 Ｐ 其中实时荧光 Ｐ Ｃ Ｒ 法， Ｃ Ｒ 法又分为 Ｔ ａ ｍ ａ ｎ ｑ 实时荧光 Ｐ 特异引物双扩增荧光 Ｐ 上述 Ｃ Ｒ 法、 Ｃ Ｒ 法 等 亚 类， 方法各有 优 缺 点 。 本 研 究 选 择 临 床 常 用 的 测 序 法 和 Ｔ ａ ｍ ａ ｎ ｑ 实时荧光 Ｐ 法 检 测 例 患 者 肿 瘤 组 织 基 Ｃ Ｒ ６ ０ Ｎ Ｓ Ｃ Ｌ Ｃ Ｅ Ｇ Ｆ Ｒ 因１ 并 分 析 结 果 间 的 差 异， 旨在为临床 ９、 ２ １ 外显子突变 情 况 ， 选择合适的 Ｅ Ｇ Ｆ Ｒ 基因突变检测方法提供实验依据 。 １ 资料与方法 １． １ 一 般 资 料 收 集 ２ ０ １ １年广州医学院附属肿瘤医院 其中石蜡切片样品４ Ｎ Ｓ Ｃ Ｌ Ｃ患者肿瘤组织样品 ６ ０ 例， ２ 例， 男性３ 女性２ 年龄３ ７ ５％ 乙醇固定组织样 品 １ ８ 例； ７ 例， ３， ４～ 中位年龄 ５ ７ ８岁， ８岁。
Ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎｏ ｆＥ Ｇ Ｆ Ｒｍ ｕ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｉ ｎｎ ｏ ｎ ｓ ｍ ａ ｌ ｌ ｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｕ ｎ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ ｔ ｉ ｓ ｓ ｕ ｅ ｓｂ ｔ ｗ ｏｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ｇｃ ｙ １ １ １ ， Ｌ ｕ ｏＫ ａ ｉ Ｗ ａ ｎ ｉ ａ ｎ２ ， Ｌ ｉ ｕＪ ｉ ａ ｎ Ｐ ａ ｎＤ ｏ ｎ ｘ ｉ ａ ｏ１ ， Ｘ ｕ ｅＸ ｉ ｎ ａ ｎ Ｆ ｕＷ ｅ ｎ ａ ｎ１ ， Ｈ ｅＺ ｈ ｉ ｍ ｉ ｎ１△ ｇＱ ｆ ｇ ， ｇ ｇ ｙ ｇ ， ｆ （ １． Ｇ ｕ ａ ｎ ｚ ｈ ｏ ｕＭ ｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌＵ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ａ ｎ ｃ ｅ ｒＩ ｎ ｓ ｔ ｉ ｔ ｕ ｔ ｅａ ｎ ｄＨ ｏ ｓ ｉ ｔ ａ ｌ， Ｇ ｕ ａ ｎ ｚ ｈ ｏ ｕ， Ｇ ｕ ａ ｎ ｄ ｏ ｎ １ ０ ０ ９ ５， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ； ｇ ｙＣ ｐ ｇ ｇ ｇ５ ２． Ｄ ｅ ａ ｒ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ａ ｔ ｈ ｏ ｌ ｏ Ｇ ｕ ａ ｎ ｚ ｈ ｏ ｕＨ ｏ ｓ ｉ ｔ ａ ｌ ｏ ｒ ａ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌＣ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅＭ ｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ， Ｇ ｕ ａ ｎ ｚ ｈ ｏ ｕ， Ｇ ｕ ａ ｎ ｄ ｏ ｎ １ ０ １ ３ ０， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ） ｐ ｆＰ ｇ ｙ， ｇ ｐ ｆＴ ｇ ｇ ｇ５ ： Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ Ｏ ｂ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｏｃ ｏ ｍ ａ ｒ ｅＤ ＮＡｓ ｅ ｕ ｅ ｎ ｃ ｉ ｎ ｎ ｄＴ ａ ｍ ａ ｎｒ ｅ ａ ｌ ｔ ｉ ｍ ｅＰ Ｃ Ｒｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｎ Ｇ Ｆ Ｒｅ ｘ ｏ ｎ１ ９ａ ｎ ｄ２ １ｍ ｕ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｉ ｎｏ ｒ Ｔ ｐ ｑ ｇａ ｑ ｇＥ ｊ ｄ ｅ ｒ ｔ ｏｆ ｉ ｎ ｄａｓ ｕ ｉ ｔ ａ ｂ ｌ ｅｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄｏ ｆｇ ｅ ｎ ｅｍ ｕ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ． Ｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ｏｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔＥ Ｇ Ｆ Ｒｅ ｘ ｏ ｎ１ ９ａ ｎ ｄ２ １ｍ ｕ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｉ ｎ６ ０ｎ ｏ ｎ Ｔ ｓ ｍ ａ ｌ ｌ ｃ ｅ ｌ ｌ ｌ ｕ ｎ ａ ｎ ｃ ｅ ｒｐ ａ ｔ ｉ ｅ ｎ ｔ ｓｂ ＮＡｓ ｅ ｕ ｅ ｎ ｃ ｉ ｎ ｎ ｄＴ ａ ｍ ａ ｎｒ ｅ ａ ｌ ｔ ｉ ｍ ｅＰ Ｃ Ｒａ ｎ ｄｔ ｏａ ｎ ａ ｌ ｚ ｅｔ ｗ ｏｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ′ｅ ｆ ｆ ｉ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ． Ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｇｃ ｙＤ ｑ ｇａ ｑ ｙ ｙ （ ） Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅｗ ａ ｓｎ ｏｓ ｉ ｎ ｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅｂ ｅ ｔ ｗ ｅ ｅ ｎ ｔ ｗ ｏｍ ｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｓ ｉ ｎｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｎ Ｇ Ｆ Ｒｅ ｘ ｏ ｎ１ ９ａ ｎ ｄ２ １ｍ ｕ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ Ｐ＞０． ０ ５ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｃ ｏ ｇ ｇＥ ／ ） ／ ） ， ｉ ｎ ｃ ｉ ｄ ｅ ｎ ｃ ｅｒ ａ ｔ ｅ ｓｏ ｆ ｅ ｘ ｏ ｎ１ ９ａ ｎ ｄ２ １ｍ ｕ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎｗ ｅ ｒ ｅ９ ６． ７％ （ ５ ８ ６ ０ ａ ｎ ｄ９ ８． ３％ （ ５ ９ ６ ０ ｒ ｅ ｓ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｌ ． Ｃ ｏ ｎ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ ＮＡｓ ｅ Ｄ ｐ ｙ ｕ ｅ ｎ ｃ ｉ ｎ ｎ ｄＴ ａ ｍ ａ ｎＲ ｅ ａ ｌ ｔ ｉ ｍ ｅＰ Ｃ Ｒａ ｌ ｌ ｃ ｏ ｕ ｌ ｄｂ ｅｕ ｓ ｅ ｄｆ ｏ ｒｍ ｕ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎｏ ｆＥ Ｇ Ｆ Ｒｅ ｘ ｏ ｎ１ ９ａ ｎ ｄ２ １． Ｄ ＮＡｓ ｅ ｕ ｅ ｎ ｃ ｉ ｎ ｓｍ ｏ ｒ ｅ ｑ ｇａ ｑ ｑ ｇｉ ｓ ｕ ｉ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｆ ｏ ｒｇ ｕ ｉ ｄ ｉ ｎ ｈ ｅｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌｍ ｏ ｌ ｅ ｃ ｕ ｌ ａ ｒ ｔ ａ ｒ ｅ ｔ ｅ ｄｔ ｈ ｅ ｒ ａ ． ｇｔ ｇ ｐ ｙ ： ， ； ｅ ｎ ｅｓ ｅ ｕ ｅ ｎ ｃ ｉ ｎ ｏ ｌ ｍ ｅ ｒ ａ ｓ ｅｃ ｈ ａ ｉ ｎｒ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｋ ｅ ｏ ｒ ｄ ｓｒ ｅ ｃ ｅ ｔ ｏ ｒｅ ｉ ｄ ｅ ｒ ｍ ａ ｌ ｒ ｏ ｗ ｔ ｈｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｇ ｐ ｑ ｇ； ｙ ｐ ｐ ｇ ｙｗ 非小细胞肺癌 肺癌是威胁人类健康的主要恶性肿瘤之一 ， （ 约占肺癌的 ８ 很多 Ｎ Ｎ Ｓ Ｃ Ｌ Ｃ） ０％ 以上 ， Ｓ Ｃ Ｌ Ｃ 患者在确诊时已