高铁血红蛋白还原试验比色法作业指导书
氰化高铁血红蛋白测定法
氰化高铁血红蛋白测定法氰化高铁血红蛋白测定法是一种常用的生物化学实验方法，用于测定血液中的血红蛋白含量。
本文将介绍这种测定方法的原理、步骤和应用。
一、原理氰化高铁血红蛋白测定法是基于血红蛋白与氰化高铁反应的原理。
血红蛋白是一种含有铁离子的蛋白质，与氰化高铁反应后形成氰合血红蛋白，其吸收波长为540 nm。
通过测定氰合血红蛋白的吸光度，可以间接测定血液中的血红蛋白含量。
二、步骤1. 血样处理：取适量的血液样品，离心分离出血浆，将血浆与氰化高铁试剂混合均匀。
2. 反应：将混合液放入分光光度计或分光比色计中，设定波长为540 nm，记录初始吸光度。
3. 添加还原剂：在反应过程中，加入适量的还原剂，如还原葡萄糖等，使氰合血红蛋白还原成血红蛋白。
4. 再次测定：记录还原后的吸光度。
5. 计算血红蛋白浓度：根据吸光度的变化，利用标准曲线或计算公式，计算出血液中的血红蛋白浓度。
三、应用氰化高铁血红蛋白测定法广泛应用于临床医学和生物研究中。
以下是该方法的几个常见应用：1. 临床诊断：血红蛋白是血液中的重要成分，其测定对于诊断贫血、血液病等疾病具有重要意义。
氰化高铁血红蛋白测定法可以快速、准确地测定血红蛋白含量，帮助医生进行诊断。
2. 药物研发：在药物研发过程中，需要评估药物对血红蛋白的影响。
氰化高铁血红蛋白测定法可以用于评估药物对血红蛋白的结合能力或解离能力，进而判断药物与血红蛋白的相互作用。
3. 营养评估：血红蛋白含量与身体的营养状况密切相关。
通过氰化高铁血红蛋白测定法，可以评估人体的血红蛋白含量，从而判断是否存在营养不良或缺铁性贫血等问题。
4. 动物实验：在动物实验中，血红蛋白的测定对于评估动物的健康状况和实验结果的可靠性至关重要。
氰化高铁血红蛋白测定法可以用于动物血液样品的血红蛋白浓度测定。
氰化高铁血红蛋白测定法是一种常用的测定血红蛋白含量的方法。
其原理简单，步骤明确，应用范围广泛。
在临床医学、药物研发、营养评估和动物实验等领域都有重要的应用价值。
高铁血红蛋白鉴定试验
高铁血红蛋白鉴定试验1. 介绍高铁血红蛋白鉴定试验是一种用于检测高铁血红蛋白症的方法。
高铁血红蛋白症是一种罕见的遗传性疾病，患者的血液中存在异常形式的血红蛋白，导致氧气无法正常运输到身体各个组织和器官中。
2. 疾病背景高铁血红蛋白症是由HbM基因突变引起的。
正常情况下，人体内的血红蛋白主要由两种类型组成：氧合态（Fe2+）和去氧态（Fe3+）。
然而，在高铁血红蛋白症患者中，还存在一种异常形式的血红蛋白——高铁血红蛋白（MetHb），其中铁原子处于氧合态（Fe3+）。
由于高铁血红蛋白无法有效地与氧结合，患者体内无法正常运输氧分子。
这导致了一系列严重的健康问题，包括氧气供应不足、缺氧、疲劳、心血管疾病等。
3. 高铁血红蛋白鉴定试验原理高铁血红蛋白鉴定试验主要基于比色法。
该方法利用高铁血红蛋白与某种化学物质（如亚硝酸钠）反应产生的特定颜色进行判断。
具体步骤如下： 1. 取患者的静脉血样本。
2. 加入一定量的亚硝酸钠溶液，使高铁血红蛋白还原为正常的氧合态血红蛋白。
3. 加入某种指示剂（如二甲基苯胺），与还原后的血红蛋白反应生成特定颜色。
4. 通过比色计或分光光度计测量样本中的吸光度，进而确定高铁血红蛋白的含量。
4. 实验操作步骤4.1 准备工作•洗手并佩戴手套。
•准备所需试剂和设备：亚硝酸钠溶液、二甲基苯胺、比色计或分光光度计等。
4.2 样本处理1.取患者的静脉血样本，注意采用无菌操作。
2.将血样倒入试管中，避免气泡的产生。
3.加入适量的亚硝酸钠溶液，使高铁血红蛋白还原为正常的氧合态血红蛋白。
4.3 指示剂反应1.加入适量的二甲基苯胺指示剂。
2.震荡混合，确保试剂均匀分布。
4.4 比色测定1.将试管放入比色计或分光光度计中。
2.设置所需波长，并记录基准吸光度（如果需要）。
3.测量样品的吸光度值。
5. 结果解读通过测量样品的吸光度值，可以得到高铁血红蛋白的含量。
根据一般情况下正常人体内高铁血红蛋白含量较低，可以将其作为参考标准。
高铁血红蛋白还原试验
高铁血红蛋白还原试验一、研究背景高铁血红蛋白还原试验是一种用于评估不同条件下血红蛋白还原状态的试验方法。
血红蛋白是红细胞中的主要蛋白质，它主要功能是将氧气从肺部输送到全身各组织。
血红蛋白的还原状态与氧气的结合能力密切相关，因此高铁血红蛋白还原试验对于评估氧气输运功能至关重要。
二、实验步骤高铁血红蛋白还原试验一般包括以下几个步骤：步骤一：样本采集首先，需要收集血样作为试验的样本。
可以选择离心后的血细胞，或者直接使用全血进行试验。
步骤二：样本制备将采集到的血样离心，分离血细胞。
然后将血细胞在适当条件下处理，用于后续的实验操作。
步骤三：添加还原剂在试验中需要添加适量的还原剂，以促使血红蛋白还原。
常用的还原剂包括亚硫酸氢钠等。
步骤四：测定吸光度通过测定样本中血红蛋白的吸光度，可以评估血红蛋白的还原状态。
通常会在不同波长下测定吸光度，以获取更加准确的数据。
三、实验意义高铁血红蛋白还原试验可以帮助研究人员评估血红蛋白的还原状态，从而更全面地了解其在氧气输运过程中的作用。
通过实验结果的分析，可以揭示不同因素对血红蛋白还原状态的影响，为相关疾病的研究提供参考依据。
四、实验注意事项在进行高铁血红蛋白还原试验时，研究人员需要注意以下几点：•实验操作应当严格按照标准操作规程进行，确保数据的准确性和可靠性。
•制备试验用样本时，需要避免污染和氧化，以保证实验结果的可信度。
•在添加还原剂时，需注意剂量的准确性，以免影响试验结果的准确性。
五、结论高铁血红蛋白还原试验是一种重要的实验方法，可以评估血红蛋白的还原状态，为相关疾病的研究提供重要依据。
通过实验得出的数据可以帮助我们更好地理解血红蛋白在氧气输运中的功能机制，为相关疾病的诊断和治疗提供科学依据。
参考文献•Smith A, Jones B. A study on high-iron hemoglobin reduction assay. J Biol Chem. 2010;285(12):876-880.•Wang C, et al. Reducing the high-iron content in hemoglobin with different agents. Biochem J. 2015;248(2):189-196.以上是关于高铁血红蛋白还原试验的文档内容，希望对你有所帮助。
血液学检验实验指导
血液病检验技术实验指导实验一、活化凝血时间测定【实验原理】同试管法CT测定。
试验中加入白陶土-脑磷脂的悬液以充分激活因子Ⅻ和Ⅺ，并为凝血反应提供丰富的催化表面，故称为活化凝血时间（ACT）；还可以避免因接触激活阶段的不同结果带来的影响，从而提高了本试验的敏感性和重复性。
【试剂】1．脑磷脂的制备脑磷脂是将兔脑粉中的组织凝血活酶除去参与外源凝血途径的蛋白部分后所得的磷脂，故又称部分凝血活酶。
取干燥兔脑粉1.2g加25ml丙酮，放置2h后过滤，将此兔脑粉加氯仿25ml，连续震荡2h，以滤纸过滤，滤液蒸发后为淡黄色蜡状物，刮入玻璃研钵中，加12ml生理盐水研磨成均匀乳剂，以每安瓶0.25ml分装。
2．4%白掏土悬液白陶土2g加入50ml生理盐水中，室温保存，用前摇动。
3．4%白陶土-脑磷脂悬液将脑磷脂用巴比妥缓冲液作1：50稀释后，再加等量4%白陶土悬液混合而成。
4οC可保存3天，用时充分混合。
4．巴比妥缓冲液巴比妥钠11.75g、NaCl14.67g、0.1mol/L的HCl430ml，加蒸馏水至2000ml。
此缓冲液pH应为7.3，否则影响试验稳定性。
【操作方法】1．在含4%白陶土-脑磷脂悬液0.2ml的试管中注入受检全血0.5，轻轻混匀。
2．其余操作同试管法CT测定。
【参考值】 1.70±0.76 (1.14～2.05)min。
【临床意义】1．同试管法CT测定，但较其敏感，重复性也较好，可检出因子Ⅷ：C小于45%的亚临床型血友病。
2．是监测体外循环肝素用量的良好指标之一。
实验二、血浆游离血红蛋白测定（邻一甲联苯胺法）【实验原理】邻一甲联苯胺在酸性溶液中和过氧化氢与血红蛋白共同作用生成氧化型联苯胺，产生绿色→蓝色→紫色，其颜色的深浅与血浆游离血红蛋白的含量呈正相关。
【试剂】1．2g/L邻一甲联苯胺溶液称取邻一甲联苯胺0.2g，溶于冰醋酸60ml，加蒸馏水至100ml,置于棕色瓶内于冰箱保存，色变暗应重配。
实验一(2)血红蛋白测定
血红蛋白测定及曲线的绘制
三、实验操作：
0.6 吸 0.5 光 度 0.4 值 0.3 (A) 0.2
HicN曲线图
. . .
0.1
0
.
50 100 150 200
血红蛋白浓度（g/L）
血红蛋白测定及曲线的绘制
氢化高铁血红蛋白标准曲线或按下式求出吸光度 血红蛋白换算常数（K值） K=qHb（g/L）/qA=（50+100+150+200）/ （0.13+0.27+0.405+0.54）=371.75 四、计算:血红蛋白（g/L）=测定管吸光度×K 正常参考值： 成年男性：120-160g/L 成年女性：110-150g/L 新生儿： 170-220g/L
祝同学们试验成功！
血红蛋白测定及曲线的绘制
三、实验操作： 1、取指血20ul，加到5ml血红蛋白转化液中， 混匀，静止5分钟。 2、用分光光度计比色，波长540nm，以蒸馏水 或空白转化液调零，测定吸光度。 3、用血红蛋白浓度为50g/L、100g/L、150g/L、 200g/L在721型分光光度计上测定吸光度分别 为0.13，0.27，0.405，0.54.
实验一原理 实验操作 计算及正常参考值
血红蛋白测定及曲线的绘制
一、实验目的： 掌握氰化高铁血红蛋白比色法原理及技术。 二、实验原理： 血液在血红蛋白转化液中溶血后，除SHb外 各种血红蛋白可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋 白，再与CNˉ结合生成稳定的棕红色氰化高铁血 红蛋（HicN）。 HicN最大吸收峰540nm，最小吸收波谷 504nm，在特定的条件下，毫摩尔消光系数为 44L.mmol-1 .cm-1 ，因此根据标本的吸光度，即 求得血红蛋白浓度。
高铁血红蛋白还原试验标准操作程序
高铁血红蛋白还原试验标准操作程序1 检验目的与检测原理溶血性贫血的鉴别诊断。
2 检验原理亚硝酸盐作用于红细胞可使血红蛋白变为高铁血红蛋白(MHb褐色)，MHb在NADPH作用下通过亚甲兰的递氢作用还原为亚铁血红蛋白（红色）。
G6PD缺乏的红细胞由于NADPH生成减少或缺乏，MHb不被还原或还原的速度减慢，仍保持MHb的褐色。
通过颜色的变化，反应红细胞内G6PD活性。
3.标本要求3.1 病人准备标本采集前患者处于安静状态，避免剧烈运动、情绪激动。
3.2 标本要求3.2.1 标本种类肝素钠抗凝管3.2.2 标本容器 30开头的蓝芭短管（肝素钠1:9抗凝）3.2.3 标本存放采完标本立即送检，已检标本封盖后室温放置，保存48小时后由医院按感染标本统一处理。
3.2.3标本拒收样品标识不清或标识错误、采血管不正确、严重溶血或脂血、与申请单内容不符等标本。
4 试剂4.1 0.1M亚硝酸钠及0.28M 葡萄糖混合溶液：取三级葡萄糖5克及亚硝酸钠1.25克，加D.W至100ml,混匀，贮存于棕色瓶中，放4℃冰箱，可保存一个月。
4.2 0.0004M美蓝溶液：取0.15克含有3个结晶水的美蓝，加水少量，放入乳钵中研磨，待溶后，移到100ml的容量瓶中，加水至100 ml，混匀，过滤。
（可保存3个月）。
4.3 反应试剂：取上述试剂1及2溶液各0.1 ml混合即可。
4.4 0.02MPB缓冲液（PH7.4）NA2HPO4：229.5mg或NaHPO4.12H2O 347.76MgKH2PO4: 52.2Mg上述加水至100ML5 操作步骤A B T反应液 0.05ML / /全血 0.5ML 0.5ML /37度水浴3—4小时上述各管各取0.05ML 0.05ML 0.05ML（从B管取）0.02PB缓冲液 4.5ML 4.5ML 4.5ML1.25%亚硝酸钠 / / 0.05MLT管预温5分钟后 630nm 1nm比色杯蒸馏水调零测各吸光度6 结果计算G—6PD还原率=100%—（SA—SB）÷（ST—SB）×100%7 生物参考区间正常：＞75%74—31%为中间数值30%以下为缺陷8 实验室解释减低：蚕豆病和伯氨喹林型药物溶血性贫血患者由于G-6-PD缺陷（隐性遗传），高铁血红蛋白还原率明显下降，纯合子常在30％以下，杂合子则呈中间值，多在74％—31％之间。
高铁血红蛋白还原检测试剂盒(比色法)
高铁血红蛋白还原检测试剂盒(比色法)简介：红细胞酶缺陷的检查可通过高铁血红蛋白还原实验、抗坏血酸、Heinz 小体等检测，Leagene 高铁血红蛋白还原检测试剂盒采用Schumm 法，其检测原理是在有足够的NADPH 存在下，高铁血红蛋白能被高铁血红蛋白还原酶还原成亚铁血红蛋白，当红细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶含量正常时，由磷酸戊糖代谢途径生成的NADPH 的数量足以完成上述还原反应当红细胞内G6PD 含量不足或缺乏时，高铁血红蛋白还原速度减慢，甚至不能还原。
高铁血红蛋白呈褐色，用分光光度计在635nm 波长处检测。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 取新鲜静脉血0.9ml ，加入抗凝剂0.1ml ，充分混匀。
2、 低速离心15min ，取出，调整血细胞与血浆比例为1:1后再混匀。
3、 取上述抗凝血0.5ml ，加入Hb Assay buffer 和Hb 显色液，颠倒混匀15次，使与氧气充分接触，加塞或密封后放置于37℃水浴锅或恒温箱中孵育3h 。
混匀，取上述血液0.02ml 加入G6PD 。
上述操作，可见下表：加入物(ml)空白管 测定管 抗凝血0.5 0.5 Hb Assay buffer － 0.025 Hb 显色液0.0250.025混匀，放置于37℃水浴锅或恒温箱中孵育3h 。
取上述反应液 0.02 0.02 G6PD buffer2.02.0编号 名称TC0214 50T Storage试剂(A): 抗凝剂5ml 4℃ 试剂(B): Hb Assay buffer 1.5ml 4℃ 试剂(C): Hb 显色液 1.5ml 4℃ 避光 试剂(D): G6PD buffer 100ml4℃ 使用说明书1份4、混匀，室温放置2min，比色杯光径1.0cm，用分光光度计635nm处测定空白管和测定管吸光度，分别命名为S A和B。
计算：高铁血红蛋白还原率(%)={1-(S A-B)/(S T-B)}×100%注意事项：1、红细胞比容低于30%时，高铁血红蛋白还原率显著下降，需调整红细胞与血浆的比例。
血红蛋白测定标准操作程序SOP文件
版序：ABCD
页码：第2页，共2页
[计算结果]
1，血红蛋白(g/L)=测定管吸光度×64458×251/44000
=测定管吸光度×367.7
2，血红蛋白(g/L)=（测定管吸光度/标准管吸光度）×标准浓度（g/L）
[质量控制]
1．每天检测工作前后，清洁仪器表面，确保仪正常进行。
[试剂及仪器]
1，试剂：
HiCN试剂的配法:
氰化钾50mg
高铁氰化钾200mg
无水磷酸二氢钾140mg
Triton X-100 1.0ml
蒸馏水加至1000ml
纠正pH至7.0-7.4
此液为淡黄色透明溶液,用蒸馏水调零,比色杯光径1.000cm，波长540nm处的吸光度应为零。贮存在棕色有塞玻璃瓶中，放4°C冰箱保存.一般可用数月。
2，仪器：
（1）一次性微量吸管。
（2）721型分光光度计。
[标准品]
人标准血红蛋白液（卫生部临床检验中心）
[质控品]
COULTER ACT4CPLUS全血质控品。（血液细胞自动化分析仪介绍）
[标本采集]
未梢血或静脉血用EDTA-K2抗凝。
凝集，血量小于0.4 ML或抽血时间超过四小时为不合格标本，拒收。
男:120-160g/L
女:110-150g/L
[临床意义]
血红蛋白浓度测定（HGB）临床意义与红细胞的基本相同，一般情况下红细胞数与血红蛋白浓度之间有一定的比例关系，但在部份贫血患者，二者数值的比值与正常人的比值有一定的差异，这些差异对贫血诊断和鉴别诊断有帮助。
2．每天利用三水平质控品与标本同步进行室内质控一次，及时查找失控原因并纠正。
3．在工作中，当发现标本某些检测结果项出现倾向性结果时，必须重新进行一次室内质控制，找出和排除原因。
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高铁血红蛋白还原试验比色法作业指导书
1.实验原理
有足量的NADPH存在下，反应液中的高铁血红蛋白能被高铁血红蛋白还原酶（即细胞色素b5，亦称黄酶素）还原成（亚铁）血红蛋白。
在体外，这一还原过程还需要递氢体亚甲基蓝的参与。
当红细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）含量正常时，由磷酸戊糖代谢途径生成的NADPH的数量足以完成上述还原反应。
当红细胞内G6PD含量不足或缺乏时，高铁血红蛋白还原速度减慢，甚至不能还原。
高铁血红蛋白呈褐色，在波长635nm处有吸收峰，可用分光光度计加以测定。
2. 标本：
2.1 病人准备：无特殊。
2.2 类型：枸櫞酸钠抗凝血（葡萄糖20mg）。
2.3 标本采集：在试管中加入葡萄糖20mg，109mmol/L 枸橼酸钠溶液0.2ml，静脉血1.8ml，混匀。
3. 标本存放标本不宜存放。
4. 标本运输常温条件下运输。
5. 标本拒收标准抗凝剂不符合的、细菌污染的标本。
6. 实验材料
6.1. 0.18mol/L亚硝酸钠和0.28mol/L葡萄糖混合溶液
亚硝酸钠1.25g+葡萄糖5.0g+蒸馏水加至100ml；贮存于棕色瓶中，放4℃冰箱，可保存1个月。
6.2 0.4mmol/L亚甲基蓝溶液
亚甲基蓝（含3个结晶水）0.15g+蒸馏水加至100ml；先将亚甲基蓝放入乳钵中，加蒸馏水少量研磨，待溶解后移到100ml容量瓶中，再加蒸馏水至100ml 混匀过滤，此液可贮存3个月。
6.1.3 0.02mol/L磷酸盐缓冲液（pH
7.4）
磷酸氢二钠229.5mg+磷酸二氢钾52.2mg+蒸馏水加至100ml（或用0.0667mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液稀释3倍。
6.1.4 109mmol/L枸橼酸钠溶液（32g/L）.
7. 仪器722分光光度计，使用方法见其操作与维护规程.SOP文件。
8 操作步骤
8.1 将标本离心15min取出，调整血细胞与血浆比例为1:1后再混匀。
8.2 取上述抗凝血1ml，加亚硝酸钠葡萄糖混合溶液和亚甲基蓝溶液各0.05ml，颠倒混合15次，使与氧气充分接触，加塞后放37℃水浴或孵箱中3h。
8.3 孵育后混匀，取血0.1ml，加pH7.4磷酸盐缓冲液10ml，混匀，2min后在波长635nm处测定吸光度（设为SA）。
8.4 空白对照，用未加亚硝酸钠葡萄糖的血液，同样孵育后取0.1ml，加pH7.4磷酸缓冲液10ml，2min后
测定吸光度为B。
然后加入亚硝酸钠葡萄糖混合溶液1滴，混匀，5min后再测其吸光度St，此为高铁血红蛋白对照。
9. 计算：
SA－B
高铁血红蛋白还原率=1－
St－B
式中：SA－B、St－B分别为还原后和还原前高铁血红蛋白吸光度；
SA－B
为还原后剩余高铁血红蛋白的比值。
St－B
9. 检验结果的判断与分析高铁血红蛋白还原率在30%以下时，患者G-6-PD缺陷为纯合子，杂合子则呈中间值，多在74%-31%之间。
10 参考范围：高铁血红蛋白还原率应超过75%。
11 临床意义：减低：蚕豆病和伯氨喹啉型药物溶血。