高铁血红蛋白还原试验
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的检查项目有哪些？
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的检查项目有哪些？检查项目：血常规、骨髓象、胆红素、高铁血红蛋白还原试验、红细胞G-6-PD活性测定【实验室检查】：G-6-PD缺乏症的一般实验室检查与其他溶血性贫血相比较无特异性，其诊断有赖于红细胞G-6-PD酶活性的测定。
G-6-PD缺乏症的筛选实验和酶活性定量测定方法有如下几种。
1.高铁血红蛋白还原试验(methemoglobinreductiontest)速度比正常人显著减慢。
该法是目前国内常用于筛查G-6-PD活性试验之一。
微量组织化学洗脱法适合于杂合子的检测，其可信度为75%。
此法的缺点是如果存在HbH、不稳定血红蛋白、高脂血症、巨球蛋白血症等均造成假阳性结果。
2.抗坏血酸(维生素C)氰化物试验(ascorbate-cyanidetest)如果G-6-PD缺乏，H202破坏血红蛋白，形成一个棕色斑点。
3.硝基四氮唑蓝试验该试验可用来检测NADPH生成量。
4.荧光点试验(fluorescentspottest)该试验是最简单、最可信和最敏感的过筛试验。
5.G-6-PD活性测定通过单位时间生成NADPH的量来反映红细胞G-6-PD活性。
其常用方法有世界卫生组织(WHO)推荐的ZinkJam法和国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐的Glock与Mclean法。
在检测红细胞G-6-PD活性时，应注意试验时患者的临床状况。
在溶血发作期，老化的、酶缺乏红细胞在外周血中被选择性地清除掉，年轻红细胞因酶水平较高得以保护，用这些细胞来进行试验分析不能真实地反映红细胞的G-6-PD活性。
为了解决这一问题，可以于急性溶血2～4个月后复查外，或用离心沉淀技术剔除年轻红细胞后再检测红细胞G-6-PD活性，但试验系统中用沉淀红细胞是不标准的。
如果在溶血发作期间接受了红细胞输注亦会影响G-6-PD活性测定结果。
慢性非球形红细胞溶血性贫血，无特异性血液学改变。
血红蛋白一般为80～100g/L，网织红细胞计数增高至4%～35%，由于网织红细胞数比例增高，因而平均红细胞体积增高。
高铁血红蛋白还原试验比色法
高铁血红蛋白还原试验比色法1.实验原理有足量的NADPH存在下，反应液中的高铁血红蛋白能被高铁血红蛋白还原酶（即细胞色素b”亦称黄酶素）还原成（亚铁）血红蛋白。
在体外，这一还原过程还需要递氢体亚甲基蓝的参与。
当红细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（GJD）含量正常时，由磷酸戊糖代谢途径生成的NADPH的数量足以完成上述还原反应。
当红细胞内GPD含量不足或缺乏时，高铁血红蛋白还原速度减慢，甚至不6能还原。
高铁血红蛋白呈褐色，在波长635nm处有吸收峰，可用分光光度计加以测定。
2.标本：2.1病人准备：无特殊。
2.2类型：枸檄酸钠抗凝血（葡萄糖20mg）。
2.3标本采集：在试管中加入葡萄糖20mg,109mmol∕L枸椽酸钠溶液0.2ml,静脉血1.8ml,混匀。
3.标本存放标本不宜存放。
4.标本运输常温条件下运输。
5.标本拒收标准抗凝剂不符合的、细菌污染的标本。
6.实验材料6.1.0.18mol∕L亚硝酸钠和0.28mol∕L葡萄糖混合溶液亚硝酸钠1.25g+葡萄糖5.Og+蒸储水加至100ml；贮存于棕色瓶中，放4℃冰箱，可保存1个月o6.20.4mmol∕L亚甲基蓝溶液亚甲基蓝（含3个结晶水）0.15g+蒸储水加至100ml；先将亚甲基蓝放入乳钵中，加蒸储水少量研磨，待溶解后移到100ml容量瓶中，再加蒸储水至IoOnII 混匀过滤，此液可贮存3个月。
6.1.30.02mol∕L磷酸盐缓冲液（pH7.4）磷酸氢二钠229.5mg+磷酸二氢钾52.2mg+蒸储水加至100nlI（或用0.0667mol∕LpH7.4磷酸盐缓冲液稀释3倍。
6. 1.4109Imnol/L枸檬酸钠溶液（32g∕L）.7.仪器722分光光度计，使用方法见其操作与维护规程.SOP文件。
8操作步骤8.1将标本离心15min取出，调整血细胞与血浆比例为1:1后再混匀。
8.2取上述抗凝血1ml,加亚硝酸钠葡萄糖混合溶液和亚甲基蓝溶液各0.05ml,颠倒混合15次，使与氧气充分接触，加塞后放37。
血液内科葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症患者诊治规范
血液内科葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症患者诊治规范葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PD）缺乏症指因G-6-PD缺乏所致的溶血性贫血。
临床上可分为无诱因的溶血性贫血、蚕豆病、药物诱发和感染诱发的溶血性贫血以及新生儿黄疸5种类型。
（一）诊断要点1.高铁血红蛋白还原试验由于G-6-PD缺乏，红细胞不能生成足够的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NAD-PH），试管中加入亚甲蓝时，高铁血红蛋白还原少于正常值（75%以上）。
本法简便，适用于过筛试验或群体普查，缺点是有假阳性。
2.荧光斑点试验NADPH在长波紫外线照射下能显示荧光。
G-6-PD缺乏的红细胞内NADPH少，所以荧光出现延迟。
G-6-PD正常者10min 内出现荧光。
可依此推测G-6-PD活性，试验操作方便，采血少，特异性也高。
3.硝基四氮唑蓝纸片法红色滤纸片被G-6-PD正常红细胞还原成紫蓝色，严重G-6-PD缺乏者滤纸仍为红色。
4.红细胞海因小体计数在所采血中先加入乙酰苯肼，37℃温育后做甲基紫活体染色。
G-6-PD缺乏的红细胞内可见海因小体，计数＞5%有诊断意义。
5.G-6-PD活性测定最为可靠，是主要诊断依据。
但在溶血高峰期及恢复期，酶活性可以正常或接近正常。
Zinkham法的正常值为（12.1±2.09）U/gHb（37℃）。
（二）临床类型及治疗1.无诱因的溶血性贫血属于先天性非球形细胞性溶血性贫血的一种，G-6-PD可低至0，温育后红细胞渗透性脆性正常，温育后自体溶血试验阳性，无血红蛋白病，抗人球蛋白试验阴性。
输血及使用糖皮质激素可改善病情，切脾效果不理想，需慎重。
2.蚕豆病由于食蚕豆后引起的溶血性贫血，是广东、广西、湖南、江西等地农村常见的血液病。
系蚕豆中何种物质引起尚无定论。
患者并非每年食蚕豆均发病，发病程度与食蚕豆量并不成比例。
患者绝大多数为儿童，3岁以上发病者占70%左右。
男性显著多于女性。
起病急骤，均在食新鲜蚕豆数小时突然发病。
高铁血红蛋白还原试验的临床意义
高铁血红蛋白还原试验的临床意义
高铁血红蛋白还原试验是一种用于评估机体铁代谢状况的实验室检查，其临床意义主要包括以下几个方面：
1. 诊断铁缺乏性贫血和铁过多症：高铁血红蛋白还原试验可以通过检测患者的红细胞中铁的还原状态来评估机体的铁储备情况，从而确定是否存在铁缺乏或铁过多情况。
2. 监测铁治疗疗效：高铁血红蛋白还原试验可以用于监测铁治疗的疗效，包括口服铁剂和静脉注射铁剂。
通过定期检测患者的还原铁水平，可以立即调整治疗方案，以达到最佳疗效。
3. 指导临床用药：高铁血红蛋白还原试验可以作为临床用药的指导和监测工具。
例如，对于一些具有消化系统疾病的患者，可以根据高铁血红蛋白还原试验的结果来确定口服铁剂的剂量和治疗方案。
总之，高铁血红蛋白还原试验在临床上具有重要的意义，可以帮助医生准确地诊断和治疗各种铁代谢紊乱疾病，提高患者的治疗效果和生活质量。
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别名： 高铁血红蛋白还原试验。
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简介：
通过测定高铁血红蛋白的还原速度， 可以间接反映葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的活 性。可用于葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺失症 的辅助诊断。
谢谢！
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临床意义：
降低：见于葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺 陷者，蚕豆病和伯氨喹型药物溶血性贫血 等患者。 一般认为：还原率为31%-74%是 杂合子，脐血为41%-76%;还原率≦30%是 纯合子，脐血为≦40%。
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正常值： 正常人 还原率≧75%;脐血≧77%。
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相关检查： 网织红细胞计数、红细胞直径（MCD）、 红细医学检验·各论：高铁血红蛋白还原试验 >>>
相关症状： 贫血。
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相关疾病：
铁利用性贫血、溶血过度所致贫血、含亚 硝酸盐类植物性食物中毒、自身免疫性溶 血性贫血、溶血性贫血、杀虫脒中毒、葡 萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症、强酸、强碱 中毒。
高铁血红蛋白鉴定试验
高铁血红蛋白鉴定试验1. 介绍高铁血红蛋白鉴定试验是一种用于检测高铁血红蛋白症的方法。
高铁血红蛋白症是一种罕见的遗传性疾病，患者的血液中存在异常形式的血红蛋白，导致氧气无法正常运输到身体各个组织和器官中。
2. 疾病背景高铁血红蛋白症是由HbM基因突变引起的。
正常情况下，人体内的血红蛋白主要由两种类型组成：氧合态（Fe2+）和去氧态（Fe3+）。
然而，在高铁血红蛋白症患者中，还存在一种异常形式的血红蛋白——高铁血红蛋白（MetHb），其中铁原子处于氧合态（Fe3+）。
由于高铁血红蛋白无法有效地与氧结合，患者体内无法正常运输氧分子。
这导致了一系列严重的健康问题，包括氧气供应不足、缺氧、疲劳、心血管疾病等。
3. 高铁血红蛋白鉴定试验原理高铁血红蛋白鉴定试验主要基于比色法。
该方法利用高铁血红蛋白与某种化学物质（如亚硝酸钠）反应产生的特定颜色进行判断。
具体步骤如下： 1. 取患者的静脉血样本。
2. 加入一定量的亚硝酸钠溶液，使高铁血红蛋白还原为正常的氧合态血红蛋白。
3. 加入某种指示剂（如二甲基苯胺），与还原后的血红蛋白反应生成特定颜色。
4. 通过比色计或分光光度计测量样本中的吸光度，进而确定高铁血红蛋白的含量。
4. 实验操作步骤4.1 准备工作•洗手并佩戴手套。
•准备所需试剂和设备：亚硝酸钠溶液、二甲基苯胺、比色计或分光光度计等。
4.2 样本处理1.取患者的静脉血样本，注意采用无菌操作。
2.将血样倒入试管中，避免气泡的产生。
3.加入适量的亚硝酸钠溶液，使高铁血红蛋白还原为正常的氧合态血红蛋白。
4.3 指示剂反应1.加入适量的二甲基苯胺指示剂。
2.震荡混合，确保试剂均匀分布。
4.4 比色测定1.将试管放入比色计或分光光度计中。
2.设置所需波长，并记录基准吸光度（如果需要）。
3.测量样品的吸光度值。
5. 结果解读通过测量样品的吸光度值，可以得到高铁血红蛋白的含量。
根据一般情况下正常人体内高铁血红蛋白含量较低，可以将其作为参考标准。
高铁血红蛋白还原试验
高铁血红蛋白还原试验一、研究背景高铁血红蛋白还原试验是一种用于评估不同条件下血红蛋白还原状态的试验方法。
血红蛋白是红细胞中的主要蛋白质，它主要功能是将氧气从肺部输送到全身各组织。
血红蛋白的还原状态与氧气的结合能力密切相关，因此高铁血红蛋白还原试验对于评估氧气输运功能至关重要。
二、实验步骤高铁血红蛋白还原试验一般包括以下几个步骤：步骤一：样本采集首先，需要收集血样作为试验的样本。
可以选择离心后的血细胞，或者直接使用全血进行试验。
步骤二：样本制备将采集到的血样离心，分离血细胞。
然后将血细胞在适当条件下处理，用于后续的实验操作。
步骤三：添加还原剂在试验中需要添加适量的还原剂，以促使血红蛋白还原。
常用的还原剂包括亚硫酸氢钠等。
步骤四：测定吸光度通过测定样本中血红蛋白的吸光度，可以评估血红蛋白的还原状态。
通常会在不同波长下测定吸光度，以获取更加准确的数据。
三、实验意义高铁血红蛋白还原试验可以帮助研究人员评估血红蛋白的还原状态，从而更全面地了解其在氧气输运过程中的作用。
通过实验结果的分析，可以揭示不同因素对血红蛋白还原状态的影响，为相关疾病的研究提供参考依据。
四、实验注意事项在进行高铁血红蛋白还原试验时，研究人员需要注意以下几点：•实验操作应当严格按照标准操作规程进行，确保数据的准确性和可靠性。
•制备试验用样本时，需要避免污染和氧化，以保证实验结果的可信度。
•在添加还原剂时，需注意剂量的准确性，以免影响试验结果的准确性。
五、结论高铁血红蛋白还原试验是一种重要的实验方法，可以评估血红蛋白的还原状态，为相关疾病的研究提供重要依据。
通过实验得出的数据可以帮助我们更好地理解血红蛋白在氧气输运中的功能机制，为相关疾病的诊断和治疗提供科学依据。
参考文献•Smith A, Jones B. A study on high-iron hemoglobin reduction assay. J Biol Chem. 2010;285(12):876-880.•Wang C, et al. Reducing the high-iron content in hemoglobin with different agents. Biochem J. 2015;248(2):189-196.以上是关于高铁血红蛋白还原试验的文档内容，希望对你有所帮助。
溶血性贫血的实验室检测
四、珠蛋白生成异常的检测
（二）胎儿血红蛋白酸洗脱试验
1.原理 HbF抗酸能力较HbA强。把经固定后的血涂片置酸性缓冲液中保湿一定时间，只有含HbF 的红细胞不被洗脱，再用伊红染色而呈鲜红色。 2.临床意义 （1）脐带血、新生儿、婴儿阳性，成人小于1% （2）地中海贫血病人轻型者（杂合子）仅少数红细胞呈阳性，重型者阳性红细胞明显增多
二、红细胞膜缺陷的检测
（三）自身溶血试验及纠正试验
1.原理 红细胞内酶缺陷，葡萄糖酵解障碍，不能提供足量ATP，以维持红细胞内的钠泵作 用。病人红细胞无菌条件下在自身血浆中温育48小时，使ATP储备减少，钠泵作用减弱，导 致溶血增强。在孵育过程中，分别加入葡萄糖和ATP作为纠正物，并以氯化钠溶液为对照， 观察溶血是否能被纠正。 2.参考值 ➢ 正常人红细胞经孵育48小时后，仅轻微溶血、溶血度<3.5% ➢ 加葡萄糖和加ATP孵育，溶血明显纠正，溶血度均<1%
溶血性贫血的实验室检测
一、溶血性贫血的筛查检测
（一）血浆游离血红蛋白测定
1.参考值 <50mg/L（1～5mg/dl） 2.临床意义 （1）血管内溶血时血浆游离血红蛋白明显增高； （2）血管外溶血时血浆游离血红蛋白不增高； （3）自身免疫性溶血性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血可轻度增高。
一、溶血性贫血的筛查检测
二、红细胞膜缺陷的检测
（二）红细胞孵育渗透脆性试验
1.原理 红细胞孵育过程中，葡萄糖的消耗增加，贮备的ATP减少，导致红细胞膜对阳离子 的主动传递受阻，钠离子在红细胞内集聚，细胞膨胀，渗透脆性增加。 2.参考值 未孵育：50%溶血为4.00～4.45g/L NaCl 37℃孵育24h：50%溶血为4.65～5.9g/L NaCl 3.临床意义 （1）脆性增加：遗传性球形细胞增多症、遗传性椭圆形细胞增多症、遗传性非球形细胞溶 血性贫血等； （2）脆性减低：珠蛋白生成障碍性贫血、缺铁性贫血、镰形细胞贫血等。
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「参考值」高铁血红蛋白还原75%以上。
「临床意义」红细胞内6-磷酸葡萄糖脱氢酸酶（G-6PD）在磷酸戊糖旁路糖代谢中能使6-磷酸葡萄糖变为6-磷酸葡萄糖酸，同时使三磷酸吡啶核苷（TPN）变成还原型三磷酸吡啶核苷（TPNH），TPNH可使氧化型谷胱甘肽（GSSG）变成还原型谷胱甘肽（GSH）并使高铁血红蛋白（HbFe+++）还原成低铁血红蛋白（HbFe++）。
本试验用亚硝酸钠使HbFe++氧化为HbFe+++（暗棕色）以美蓝的递氢作用加强磷酸戊糖旁路的糖代谢。
如果红细胞内G-6PD含量正常，则有足量TPNH产生，它作为高铁血红蛋白还原酶的辅酶，在美蓝（递氢体）参与下使HbFe+++很快还原成HbFe++.GSSG还原成GSH：如果红细胞缺乏G-6PD则TPNH生成减少，HbFe+++还原成HbFe++也减少，本试验即以高铁血红蛋白还原率来反映TPNH生成状况而间接测知G-6PD是否缺乏。
G-6-PD缺乏患者高铁血红蛋白还原减低31%～74%为中间数值（杂合子），30%以下为显著缺陷（纯合子）。