血小板抗体检测及交叉配血
血小板血型系统和检测技术
疫+免疫原因（15%）
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• 两者区别
• 同种异体免疫
•
输入旳血小板不久破坏，输注后1小时
和二十四小时均不见计数增高
• 非免疫原因 输注后1小时血小板计数增高，但二十
四小时计数不增高或受影响
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抗体，红细胞抗原+
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Sound Of Colors
• 我们何其幸运 • 无法确知 • 自己生活在什么样旳世界
• we’re extremely fortunate • not to know precisely • the kind of world we live in.
• —辛波丝卡
GP Iib
HPA-4 Pen Yuk
GP IIIa
HPA-25024B/9r/2H8c Zav
GP Ia
HPA-2a Kob
99.3
n.t.
n.t.
HPA-2b
Koa Siba
14.6
25.4
9.1
HPA-3a Baka Leka
87.7
78.9 79.1
HPA-3b Bakb
64.1
n.t. 70.5
• 一种体重80Kg旳患者，输注了4×1011旳血 小板后，其二十四小时血小板上升了 25×109/L血容量按照75ml/kg计算。计算 PPR。
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考虑血小板质量问5、题，P可T输R注旳AB处O 同理型流旳非程库存血小板，以
系统旳抗体或血小板质量方面旳影响原因
发烧、感染、DIC 等造成血小板消耗增长旳原因存在，主动治 并增长输注剂量
血小板抗体检测及配型
血小板抗体测定操作规程【检测原理】反应板中已包被抗血小板单克隆抗体，血小板悬液经离心洗涤后可在反应孔底部形成血小板单层。
加入血清或血浆，在孔中经过孵育后，若该血清或血浆中含有血小板抗体，则该抗体与反应孔中的血小板单层结合，未结合的成分通过洗涤被去除。
加入抗人及人致敏红细胞（指示红细胞），经离心后指示红细胞通过抗人的桥连与血小板单层上的血小板抗体结合，因此阳性反应为指示红细胞平铺在反应孔底部表面。
而阴性反应为指示红细胞在离心力的作用下聚集于反应孔底部中央。
【试剂组成】1、反映板2、低离子强度溶液3、抗人IgG4、25×浓缩洗涤液5、阴阳性对照6、指示红细胞7、冻干血小板8、生理盐水【样本要求】新鲜血清或血浆样本，4℃可保存7天，若需长期保存应-20℃冻存。
样本检测前经离心5分钟后，取上清液进行检测。
【实验前准备】1将试剂盒平衡至室温(18-25°C)2、25×浓缩洗涤液用纯化水按1:24体积比稀释成洗涤工作液。
【适用仪器】平板式离心机。
离心力和离心转数的换算公式为Rcf(g)=1.119×10-5×r×(rpm)2（r为离心半径，单位cm）。
【检测步骤】(一)抗体检测1、制备血小板悬液：可将商品化的冻干血小板稀释后直接使用；也可自己制备三人份等比例混合型血小板悬液（将有效期内机采血小板用生理盐水进行5-10倍稀释后混合；或采血当天8小时内或枸橼酸钠抗凝全血经离心10分钟，取上层2/3富血小板血浆混合）。
血小板悬液应贮于塑料容器中，保存并在8小时内进行检测。
2、根据检测量出反应板条，标记患者、阳性对照及阴性对照孔，未使用的板条应储存于自封袋中，加入干燥剂密封后，2-8℃储存。
3向反应孔中加入1滴（50ul）上述血小板悬液，轻摇反应板约10秒钟。
4、用平板离心机将反应板以50g离心5分钟，使血小板固定在反映孔底部。
5、倒出反应孔中的液体，并用滴管滴加洗涤工作液清洗3次，洗涤过程中轻摇微孔板，然后轻轻甩掉洗涤液。
血小板抗原抗体检测及其输血科应用课件
流式细胞术
一种利用流式细胞仪进行检测的方法
将待测样品与特异性抗体结合，通过 流式细胞仪对细胞表面抗原进行检测 ，可同时对多个抗原进行定量和定性 分析。
微量淋巴细胞毒试验
一种用于检测人类白细胞抗原抗体的 试验方法
通过将待测血清与淋巴细胞混合培养 ，观察淋巴细胞的死亡情况，从而判 断血清中是否存在针对特定抗原的抗 体。
血小板抗原抗体
是指人体免疫系统对血小板表面抗原产生的特异性抗体，通过与血小板抗原结 合，引发一系列免疫反应。
血小板抗原
指血小板表面存在的特异性抗原，这些抗原在正常生理状态下通常不会引起免 疫反应，但在某些情况下，如免疫系统异常、药物作用等，可能会引发免疫反 应，产生血小板抗原抗体。
血小板抗原抗体的分类
02
CATALOGUE
血小板抗原抗体检测的方法
酶联免疫法
一种常用的免疫学检测方法
通过酶与抗体或抗原的结合，将抗原或抗体的性质、定位及数量“放大”，从而 对样品中的抗体或抗原进行定性或定量的检测。
固相放射免疫法
01
一种将放射性同位素与免疫反应 相结合的检测方法
02
利用放射性同位素作为示踪剂对 抗体或抗原进行标记，通过测量 放射性强度来检测样品中的抗体 或抗原。
04
CATALOGUE
血小板抗原抗体检测在输血科的应用
交叉配血
血小板交叉配血是输血科的重要工作之一，通过检测受血者和供者之间的血小板抗 原抗体，确保输注的血小板与受血者配型相合，减少输血反应的风险。
交叉配血试验包括主侧配血和次侧配血，主侧配血是将受血者的血清与供者的血小 板反应，次侧配血是将供者的血清与受血者的血小板反应。
感谢观看
临床应用范围的扩大
血小板抗体检测
常州市中心血站 输血研究室 许飞
输血的疗效与风险同在
• 输血是把双刃剑，它是现代医疗的重要手 段，在临床上能拯救生命、治疗疾病，同 时又可能给患者带来风险，引起一系列传 染病和免疫性疾病。为保障输血安全，各 国均建立多项法律、法规，并研发新的检 测系统和方法等，旨在提高输血安全，有 效实现其临床意义。
案例
• 予此建议主要考虑：1、患者产生自身抗体，此时 输血有加重溶血的可能；2、停止用药或者换药， 可以减少药物抗体继续产生的概率；3、患者长期 处于贫血状态，短时间的急性溶血性贫血，患者 可以耐受；4、观察血红蛋白，有助于进一步治疗 ，如果机体能够清除药物抗体，刺激骨髓造血可 有效改善贫血状态；5、如果患者血红蛋白经过观 察不能升高，在综合患者生命安全与输血风险考 虑的情况下，还是可以输注洗涤红细胞悬液，前 提是静脉必须保持畅通。
• 我们一般在做血液制品处理时，一般是先 是滤白细胞处理，然后再做血液辐照处理 ，最后做血液的洗涤处理。
病毒灭活血浆
• 血浆是一种临床需求量大，携带病毒风险 高的血液制品。近年来的研究证明，亚甲 蓝光化学法灭活血浆病毒是一种最安全、 有效的适合于单袋血浆病毒灭活的方法； 如结合使用病毒灭活输血过滤器还能去除 光敏剂亚甲蓝和血浆中残留的白细胞，进 一步提高病毒灭活血浆的安全性。
产生疑问的主要原因有： 1、临床标本正反定型不符 2、临床交叉配血不合 3、血小板输注无效 4、急性大出血的输血
临床标本正反定型不符的 原因分析
ABO和Rh血型标准操作规程
• 1、将受血者血标本离心分离血清（血浆）， 将压积红细胞用生理盐水洗涤一次以上，配成 3%-5%的红细胞悬液。
• 2、取7只试管，在标记为抗-A、抗-B、抗-D 3 个试管中加入相应试剂各1滴，在标记Ac、Bc、 Oc、自身细胞4个试管中加入受检者血清各2滴， 前面3个试管加入受检者红细胞悬液1滴，后面 4个试管中加入相应的试剂红细胞（ Ac、Bc、 Oc ）和受检者自身红细胞各1滴。
血小板 抗原抗体检测
血小板抗原
血小板抗原
血小板抗原
24个抗原主要分布在糖蛋白GPⅡb，GPⅢa，GPⅠb，GPⅠa 以及CD109上 ；
GPⅢa（CD61）携带9种HPA抗原，分别为HPA-1，HPA-4， HPA-6bw，HPA-7bw，HPA-8bw，HPA-10bw，HPA-11bw， HPA-14bw，HPA-16bw GPⅡb（CD41）是跨膜蛋白，细胞外116 kD的重链，通过 二硫键与22 kD的轻链共价结合。GPⅡb上携带 HPA-3和 HPA-9bw；
血清学定型 即用已知特异性抗体检测血小板血型抗原 缺点：特异性抗体来源困难 ---人血清中血小板抗体通常为多特异性 ---单克隆抗体匮乏，目前国际上仅有HPA-1a单抗， 无其它HPA单抗。 基因定型 限制性片段长度多态性分析（RFLP） 序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应(PCR-SSO) 序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)
血小板抗体检测 血清学 ELISA法(酶联免疫试验) 血小板抗原单抗特异性固相化法(MAIPA) 固相血小板免疫血清学试验(SPISA)
简易致敏红细胞血小板血清学试验(SEPSA)
流式细胞仪 改良抗原俘获(ELISA) 免疫荧光试验
简易致敏红细胞血小板血清学试验 SEPSA
由HLA抗体引起PTR约占80%，其次为HPA或ABO抗体。 现由于临床广泛输注去白细胞的成分血治疗血液病，发病 率已经大为下降
血小板相关疾病-血小板输注无效(PTR）
非免疫学原因(67.3%) 发热 脾功能亢进 感染 药物作用 DIC 血小板的质量问题 免疫学原因(17.5%) HLA抗体 HPA抗体 ABO血型不合 血小板自身抗体 药物 预防 1.白细胞过滤 2.辐照 3. HLA和HPA配型输注
血小板抗体检查及配血操作规程
【口的】Capture-?®是设计用来检测血小板IgG抗体的固相系统。
可为血小板输注无效患者进行血小板配血。
【适用范圉】血小板输注无效患者血小板输注前配血【检测原理】Capture-P是一个固相抗体检测系统，是曲Rachel等人4、Juji等人5和Sh让毗&等人6发表的检测过程改良而来。
患者或供体血小板首先结合于聚苯乙烯微孔表面。
然后用它们来捕获患者或供体血浆中的血小板抗体。
血清在结合有血小板的微孔中进行简短孵育，使抗体与血小板结合（如果抗体存在）。
把微孔中游离的IgG 冲洗掉，并加入结合抗IgG指示红细胞。
进行离心，这样会使指示红细胞与结合于固定的血小板上的抗体接触。
阳性检测中，在指示红细胞和结合血小板抗体间形成了抗免疫球蛋口G桥联，从而阻止了指示红细胞向微孔底部的移动。
作为这种桥联的结果，指示红细胞会形成一个汇合单层从而覆盖固定的血小板。
相反，如果是阴性检测，当不存在血小板抗原-抗体反应时，指示红细胞的移动就不会被阻止，就会被离心到微孔底部，进而形成紧密圧缩、清晰的细胞扣。
可以使用事先经过冲洗和保存的血小板，这个步骤是可以选择的。
使用血小板冲洗和储存洛液洗涤血小板，使之不含污染性血浆蛋口和非血小板细胞成分，这样的血小板可以用来制备Capture-P检测微孔的单分子层。
【主要组成成份】Capture-P检测微孔板：1X8微带板，坚硕U型底部，表面覆盖特异性血小板粘合剂。
每个微带板可以进行8个单独的检测。
这些微带板保存于一个可重复性密封的铝箔袋中，铝箔袋中含有干燥剂和湿度计。
微带板可以单使用，也可以多个使用。
未使用的微带板.干燥剂和湿度计要立即谨慎重新密封于铝箔袋中，以免暴露于湿气中使粘合剂失效。
Capture检测微孔的辅助试剂：（另行购买）Capture LISS：低离子强度溶液，含有甘氨酸、漠甲酚紫染料和防腐剂叠氮化钠（0. 1%）* OCapture-P指示红细胞：结合有兔抗人IgG抗体的红细胞悬液。
血小板抗体检测及临床应用
荧光法
√
√
极高 一般 ＞2h 荧光显微镜 或流式细胞仪
敏感性高 特异性不足
固相凝集法
√ √
高 较好 ＜1h 平板离心机，洗板机
血小板交叉配型应用最 为广泛的方法
03 固相法血小板检测
MASPAT试剂盒组成
MASPAT试剂盒 (K1360)
• 96孔板 (12 条 *8 孔) • 微孔上包被有血小板单克隆抗体 • MASPAT LISS液：10 ml • MASPAT 抗人 IgG: 6 ml • 阳性质控(混合血小板特异性抗体): 1 ml • 阴性质控(不含血小板特异性抗体): 1 ml
非溶血性输血反应风险评估
白细胞特异性和组织相容性（HLA）抗体是引起临床非溶血性发热输血不良反应的最主 要原因，尤其是有输血史、输血小板史、妊娠史、器官移植史、自身免疫性疾病史等患 者临床输血工作中，输血不良反应约70%. 文献报道输注红细胞为2-6%，输注血小板为20-30%，多次输血患者高达27-63%.
目的
检测受血者血清中是否存在待输血小板的抗体，或患者反复输注血小板、全血及血小板 的血液制品后产生血小板抗体，这些抗体能够导致血小板输注无效及输血反应。
临床意义
只有经过血小板筛查和配型，输注与患者相合或基本相合的血小板，才能达到安全有效 输注血小板功效，另外血小板抗体筛查可协助诊断某些血小板减少症。
白细胞特异性和组织相容性（HLA）抗体的检测对于预防和减少非溶血性发热输血反应 非常有意义。
05 血小板抗体检测应用（输血科） 血小板抗体阳性性别比较及发生NHTR比例
吴宇辰，徐笑红，叶宏宇，血小板抗体对非溶血性输血反应的影响，中国输血杂志，2015-28.8
06 血小板抗体检测应用（输血科） 输血反应与血小板抗体关系
血小板抗体检测及交叉配型在血小板临床输注中的应用分析
血小板抗体检测及交叉配型在血小板临床输注中的应用分析杜玮璐
【期刊名称】《中国社区医师》
【年(卷),期】2014(000)028
【摘要】目的：观察血小板抗体检测及交叉配型对血小板输注临床疗效的影响。
方法：2013年6月-2014年3月收治需输注血小板患者120例，其中50例无输血史患者为对照组，70例有多次输血史患者为观察组，两组均采用固相凝集法检
测血小板抗体，并对抗体阳性患者进行交叉配型，比较血小板输注后的疗效。
结果：观察组和对照组血小板抗体阳性率分别为41.43%和14.00%，观察组显著高于对
照组(P＜0.05)；多次输血史患者随输注次数的增加，血小板抗体阳性率越高；血
小板配型输注1 h、24 h时CCI及有效率均显著高于随机输血患者(P＜0.05)。
结论：多次输血可导致患者产生同种抗体，血小板输注前抗体检测和交叉配型可提高患者临床血小板输注的疗效。
【总页数】2页(P117-118)
【作者】杜玮璐
【作者单位】467000河南省平顶山市中心血站
【正文语种】中文
【相关文献】
1.血小板输注患者行血小板抗体检测及交叉配型的临床意义 [J], 张咏芳
2.血小板抗体检测及交叉配型在血小板输注无效患者中的应用 [J], 陈晓军;孙景春;段生宝;聂荣国
3.血小板抗体检测与血小板配型输注的临床应用分析 [J], 袁志军
4.血小板输注患者行血小板抗体检测及交叉配型的临床意义 [J], 张咏芳;
5.血小板抗体检测及交叉配型在血小板输注患者中的应用 [J], 杜容;施蔚
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邹平县人民医院血小板抗体检测及交叉配血
一、目前血小板输注状况
随着输血技术的发展、成分输血的推广,血小板输注是预防和治疗因血小板减少或血小板功能缺陷引起的出血、并可降低放疗和化疗后血小板减少导致出血的病死率的一种有效措施,近年来在临床上的应用日益普遍,但多次输血或输多次及多人份的血小板可以导致血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness, PTR),这也引起了全世界的关注。
血小板上的非特异性抗原中HLA-I类抗原及ABH抗原在血小板输注中具有临床意义。
供者与受者之间HLA抗原不合可能产生HLA抗体，而HLA抗体是导致PTR最常见的免疫性原因。
血小板特异性抗体（HPA抗体）常和HLA抗体共存，单独由血小板特异性抗体引起的PTR比较少见。
由于本院输注血小板的病人多为血液病病人，这些病人输注血小板的量大且比较频繁，但长期输注后由于免疫因素或其他因素（如发热、严重感染、脾肿大和脾功能亢进、DIC、消耗性凝血障碍等）导致PTR的发生频率也比较高，这为开展血小板抗体检测提供了条件。
由于ABO、HLA、HPA等抗原不合是引起PTR的主要免疫因素，因此对于存在HLA和HPA抗体的患者，比较满意的治疗方案是选择ABO同型、血小板HLA和HPA交叉配型相合的单一供者的血小板输注，即相容性血小板输注，取代目前临床上普遍采用的随机血小板输注。
二、输血科开展的新项目
1.血小板抗体筛查：使用HLA抗体筛查试剂盒，采用ELISA方
法筛查HLA I类IgG抗体。
2.血小板交叉配型：采用双抗体夹心ELISA方法检测针对血小
板GP IIb/IIIa和HLA I类抗原的IgG抗体，方法快速、灵敏，并可区分血小板特异抗体和HLA I类抗体。
三、临床意义
1. HLA抗体检测
（1）对于血小板输注无效的病人，通过检测血小板HLA I类抗体，可以协助医生寻找病人血小板输注无效的原因。
（2）指导医生为HLA I类抗体阳性的病人选择合适的血小板输注方案，使宝贵的血液资源得到合理有效的利用。
（3）对于反复输注血小板的病人，定期测定血清中的HLA抗体可以预测血小板输注效果，并能及时发现导致病人血小板输注无效的免疫性因素。
2. 血小板交叉配型
（1）区分病人血小板抗体的类型。
（2）对于免疫性血小板输注无效的病人，通过进行血小板配型，可以为病人选择相对应抗原阴性的血小板进行输注，从而提高血小板输注效果，并能减轻病人的经济负担。
四、检测说明
采用不抗凝的采血管采集血液标本。
标本要求无溶血，无乳糜，无杂物。