酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别-学时

实验一酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别

活细胞数目比例有什么影响？

4. 如何测定酵母菌死亡率？简述其原理。

5. 标本片上的某一物象，第一次看到后如何再次找到它?

一、实验目的与要求

1. 了解普通光学显微镜的构造及原理，正确掌握使用显微镜的方法；

2. 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式；

3. 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；

4. 掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。

二、实验原理

1. 酵母菌

酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍，不必染色即可用显微镜观察其形态。但由于细胞个体大，采用涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片或水-碘液浸片法来观察酵母细胞。

大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式，并对酵母细胞进行死活染色鉴别。

2. 美蓝染液

图1：酵母菌美蓝浸片观察3min（10×40）图2：酵母菌美蓝浸片观察30min（10×40）

三、实验设备及材料

1. 菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) 或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2 天左右的豆芽汁液体培养物(需稀释)。

2. 溶液或试剂：0.1%和0.05%吕氏碱性美蓝溶液(或0.01%美蓝水溶液)，革兰氏染色用碘液等。

3．器材：显微镜，擦镜纸，吸水纸，盖玻片、酒精灯、接种环、镊子、胶头滴管、小烧杯、洗瓶等等。

四、实验步骤与内容

1．美蓝浸片的观察

（1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌放在染液中，并用接种环将其混合均匀，酒精灯上灼烧清洗接种环。

注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。用接种环将菌体与染液混合时，不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。

水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。

五、实验结果

绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征、出芽情况及死活细胞数量变化。

图1：酵母菌0.1%美蓝浸片观察3min（10×10）图2：酵母菌0.1%美蓝浸片观察3min（10×40）

图3：酵母菌0.1%美蓝浸片观察30min（10×40）图4：酵母菌0.05%美蓝浸片观察3min（10×10）

图5：酵母菌0.05%美蓝浸片观察3min（10×10）图6：酵母菌0.05%美蓝浸片观察30min（10×40）注意：显微镜的放大倍数=目镜放大倍数×物镜放大倍数。

物镜倍数（低倍镜10倍，高倍镜40倍，油镜100倍）

六、思考题

1. 吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？

试分析其原因。

美蓝浓度越大，作用时间越长则视野中死菌比例越大。

原因：要点一：渗透压增大→细胞失水；要点二：还原力有限，浓度高或时

间较长都会对细胞结构造成破坏。

2. 在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌？

要点：(1)细胞大小及形态；(2)液泡；(3)出芽生殖；(4)鞭毛；(5)细胞核及细胞器

实验一酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别练习题

一、名词解释

1. 假菌丝：酵母生长旺盛时，出芽形成的芽细胞尚未脱离母细胞又长出了新芽，

容易形成成串的细胞。如果各细胞之间连接处面积小于细胞直径，形成的这种藕节状的细胞串称为假菌丝。

等九部分组成。

8. 简单染色的操作程序是

9．酵母菌通过0.1%美兰染色1~2分钟后，活细胞呈色，死细胞呈色；

10. 在其它条件相同的情况下，物镜放大倍数越大，焦距，其工作距

离，所需光量。

11. 用日光灯作光源时，通常用反光镜，用自然光作光源时，通常用反

光镜。

12. 显微镜的倍数越大，焦深越，调焦应该越。

三、选择题

1. 对光学显微镜观察效果影响最大的是：（）

A 目镜

B 物镜

C 聚光器D总放大倍数

2. 目镜头上的"K"字母表示：（C ）

A.广视野目镜

B.惠更斯目镜

C.补偿目镜；

3. 目镜头上的"P"字母表示：（A ）

A.平场目镜

B.广视野目镜

C.平场补偿目镜

A.正低相差物镜

B.正高相差物镜

C.负高相差物镜。

5. 物镜头上的"UVL"字母表示：（C ）

A.无荧光物镜

B.照相物镜

C.相差物镜。

6. 镜头上标有"对C"字母的镜头是：（A ）

A.相差调整望远镜

B.摄影目镜

C.相差目镜

11．镜头上标有“NK"字母的镜头是（A ）

A.照相目镜

B.荧光目镜

C.相差目镜

12．目镜头上的“PK”字母表示（C ）

A.平场目镜

B.补偿目镜

C.平场补偿目镜

13．物镜头上的"Splan"字母表示（A ）

A.超平场物镜

B.平场物镜

C.消色差物镜

14．物镜头上的"SplanApo"表示（A ）

A.超平场复消色差物镜

B.超平场半消色差物镜

C.超平场物镜

15.物镜头上的"Planapo"表示（C）

A.超平场物镜

B.平场物镜

C.平场复消色差物镜

16．物镜头上的"Plan"字母表示（A ）

A.平场物镜

B.消色差物镜

C.超平场物镜

17．目镜头上的"W"字母表示（C ）

A.广视野高眼点补偿目镜

B.高眼点目镜

C.广视野目镜

18．目镜头上的"SWK"字母表示（A ）

A.超广视野目镜

B.高眼点补偿目镜

C.平场补偿目镜