枸杞多糖分离纯化及其结构光谱分析与显微学观察

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枸杞多糖的提取及其组成的气相色谱分析

枸杞多糖的提取及其组成的气相色谱分析

枸杞多糖的提取及其组成的气相色谱
分析
枸杞多糖是枸杞中的一种多糖类物质,具有多种生物活性,如抗氧化、促进免疫、抗疲劳等作用。

它的提取主要采用溶剂萃取法,通常使用乙醇或乙醚作为溶剂。

步骤如下:
1.将枸杞子放入搅拌机内,加入适量的溶剂,打成浆状。

2.将浆状物置于蒸馏器内,加热蒸馏,使溶剂与枸杞多糖分离。

3.过滤掉残留的枸杞粉,再将溶剂进行浓缩。

4.在浓缩后的溶剂中加入适量的水,使枸杞多糖沉淀。

5.用纸巾过滤掉水,并将枸杞多糖置于干燥箱内干燥,即可得到枸杞多糖。

枸杞多糖的组成可以通过气相色谱分析来确定。

气相色谱分析是一种常用的化学分析技术,可以用来研究物质中不同成分的组成。

在进行气相色谱分析时,需要使用一种叫做色谱柱的装置,将样品加入其中,并加热蒸发。

样品中的不同成分会在色谱柱中分离,并通过检测器检测得到光谱图,从而确定样品中各成成分。

枸杞多糖的分离,纯化,分析及免疫作用的研究

枸杞多糖的分离,纯化,分析及免疫作用的研究

枸杞多糖的分离,纯化,分析及免疫作用的研究
王玲;李欣
【期刊名称】《昆明医学院学报》
【年(卷),期】1995(016)002
【摘要】枸杞子经热水提取,用蛋白酶法和Sevag法除蛋白,透析纯化得到枸杞多糖(LBP),经UV扫描,LBP未见核酸(260nm)和蛋白质(280nm)特征吸收峰,PAGE电泳和Bradford法测蛋白质含量,仅测到微量蛋白质及低于5mg/g糖。

红外分析显示有典型多糖吸收峰。

对其活性作了分析,结果表明本室所提取的LBP具有明显增强ConA和LPS诱导的小鼠脾脏淋巴细胞增殖作用,并对S-180荷瘤小鼠具明显
【总页数】4页(P29-32)
【作者】王玲;李欣
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
【相关文献】
1.枸杞多糖的分离纯化及结构研究 [J], 张倩;张民;王超;杨帅;梁辰;吕晓玲
2.枸杞多糖分离纯化及降血糖效果的研究 [J], 李长江;张英锋;高大威
3.枸杞多糖分离纯化及性质研究 [J], 张晶;韩喜江;李艳波
4.桑枝多糖分离纯化及其免疫作用的初步研究 [J], 邬灏;卢笑丛;王有为
5.大孔树脂分离纯化枸杞多糖的研究 [J], 魏达凤;朱瑜瑜;王杨;刘蕾
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枸杞中多糖成分的分离和提取技术

枸杞中多糖成分的分离和提取技术

枸杞的功效十分强大,《神农本草经》中记载,枸杞能补气益血,清肝明目。

在1981—2010年,一系列与枸杞和枸杞多糖相关的中成药和制剂也是层出不穷,据统计已经达到876种。

对于天然产物的分析检测而言,得率和纯度至关重要,因此在多糖成分的分离和提取技术研究中必须在优化条件的同时,确保多糖的生物活性不会因提取工艺受到影响。

现阶段,碱溶液、酸溶液、水溶液都常被用于多糖的提取。

其中,热水凭借着易于获取、溶解度强等显著优势成为了提取多糖时首选的溶剂。

然而,多糖中含有醛基等官能团,所以碱性溶液也常被用于多糖的提取。

随着科学技术的不断进步,超声波技术、超临界萃取等技术也被广泛用于枸杞中多糖成分的分离[1]。

1 枸杞多糖的结构和理化性质随着科技的进步,人们发现枸杞中的生物活性成分较为复杂,既包括氨基酸、生物碱、脂肪酸、色素类物质,也含有离子盐等无机元素。

其中,枸杞多糖因为抗癌、抗氧化、免疫调节等作用受到广泛关注。

然而,枸杞多糖多与蛋白质相结合,这给枸杞中多糖成分的提取和分离带来了一定的难度。

研究表明,枸杞多糖成分较为复杂,多由葡萄糖、甘露糖、木糖、鼠李糖、阿拉伯糖等己碳糖组成侧链(简单结构见图1),并与由氨基酸组成的多肽链紧密结合。

图1 简单多糖结构示意图2 多糖的提取分离方法2.1 多糖的提取方法枸杞中的多糖以不同形式存在,对于每种形式的多糖都需要采用针对性的预处理方法。

现阶段,在天然产物分离与提纯中常用的分析检测方法包括脱色处理、粉碎成末、清洗脱脂等。

其中,粉碎是为了促进枸杞中物质的溶解,最大限度的获取枸杞中的有效物质。

脱色处理主要是为了除去枸杞中的显色物质,避免对后续处理工艺的干扰。

脱脂是避免多余的脂质对后续结果的影响。

2.1.1 溶剂浸提法因为多糖在水溶液中的溶解度较高,故而可以用水、酸、碱等极性溶剂或者甲醇、乙醇等质子型溶剂溶解。

其中,热水因成本低、来源广等优势常用作溶媒介质。

虽然多糖在酸、碱性溶液中也存在一定的溶解度,但是酸碱会影响多糖成分的活性,例如,溶解糖苷键,破坏多糖的三维立体结构等,故而此类方法常被用于对生物活性要求不高的成分的提取。

枸杞多糖的结构与生物活性研究

枸杞多糖的结构与生物活性研究

枸杞多糖的结构与生物活性研究随着人们生活水平的提高,人们的健康意识也逐渐增强。

枸杞作为一种具有多种保健功效的传统中药材,因其含有丰富的多糖而备受关注。

枸杞中的多糖以枸杞多糖为主要成分,其结构和生物活性成为当前热门的研究方向之一。

本文将从结构和生物活性两个方面介绍枸杞多糖的研究现状。

一、枸杞多糖的结构1.1 枸杞多糖的萃取方法枸杞多糖主要以酸、碱或酶解法进行萃取,其中,以酸法萃取得到的多糖含量最高。

萃取得到的多糖成分主要有枸杞多糖1、枸杞多糖2和枸杞多糖3三种类型,其中,枸杞多糖1为主要组分。

1.2 枸杞多糖的化学组成枸杞多糖的主要化学组成为多糖类物质,其中以多糖为主要成分。

多糖类物质是由单糖分子通过葡聚糖、木聚糖、半乳糖等多个分支链连接而成的高分子多糖,萃取得到的枸杞多糖中 mainly 以葡萄糖和甘露糖为主要单糖组成,同时还含有一定量的半乳糖、鼠李糖和阿拉伯糖等。

1.3 枸杞多糖的结构枸杞多糖的分子结构呈线性或分枝状,且其分子结构复杂,含有不同的糖链长度和不同的共价连接方式。

据文献报道,枸杞多糖含有α-葡萄糖-1,5-α-木糖、α-鼠李糖-1、4-α-半乳糖、或α-阿拉伯糖-1、3连接等不同的单糖顺序。

二、枸杞多糖的生物活性枸杞多糖具有多种生物活性,其中最为突出的有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化和降血压等功效。

下面将从这几个方面简单介绍。

2.1 免疫调节研究发现,枸杞多糖能够增强机体免疫功能,提高T淋巴细胞的免疫活性。

同时,它还能够调节巨噬细胞的吞噬功能,促进巨噬细胞释放多种免疫因子,从而起到免疫调节作用。

2.2 抗肿瘤枸杞多糖在肝癌、乳腺癌、结肠癌、卵巢癌等多种癌症中均具有一定的抗肿瘤作用。

研究表明,枸杞多糖能够抑制癌细胞的生长和分裂,促进癌细胞的凋亡。

此外,它还能够调节人体免疫系统,增强机体对癌症的抵抗能力。

2.3 抗氧化枸杞多糖还具有较强的抗氧化能力,能够清除自由基及其产生的氧化物质,保护人体细胞免受氧化伤害。

黑果枸杞多糖的分离纯化及抗氧化活性研究

黑果枸杞多糖的分离纯化及抗氧化活性研究

黑果枸杞多糖的分离纯化及抗氧化活性研究黑果枸杞是一种传统的药用和保健植物,被广泛应用于中药制剂、健康食品和保健品等领域。

它富含多种成分,其中黑果枸杞多糖是其重要的活性成分之一。

本文将重点探讨黑果枸杞多糖的分离纯化方法以及其抗氧化活性。

首先,本研究选取优质的黑果枸杞作为研究对象。

经过采摘、清洗、晾干等处理步骤后,将黑果枸杞粉碎并进行提取。

采用常规的水煮法提取方法,将黑果枸杞与适量的水混合煮沸,然后过滤得到提取液。

接下来,采用酒精沉淀法将提取液中的多糖沉淀得到多糖样品。

随后,使用超滤和凝胶渗透色谱等技术对多糖样品进行分离纯化。

首先,采用超滤技术将大分子的杂质去除,得到较为纯净的多糖样品。

然后,将多糖样品经过经典的凝胶渗透色谱技术进行进一步分离。

通过调节填料和溶剂体系,可以分离出多种不同大小和结构的多糖组分。

分离纯化得到黑果枸杞多糖后,使用一系列的物化性质和化学分析方法对其进行表征。

例如,使用紫外光谱和红外光谱技术分析黑果枸杞多糖的吸收峰和波谱特征,以确定其结构和功能基团。

同时,还可以采用高效液相色谱技术对多糖的组成单糖和链长进行分析。

这些分析方法可以为黑果枸杞多糖的结构特性提供重要的信息。

最后,对黑果枸杞多糖的抗氧化活性进行评估。

采用自由基清除试验和金属离子螯合试验等方法,测定黑果枸杞多糖对超氧阴离子自由基、羟基自由基以及金属离子的清除能力。

实验结果表明,黑果枸杞多糖具有显著的抗氧化活性,具有一定的自由基清除和金属离子螯合能力。

这种抗氧化活性可能与多糖中的多糖结构和官能团有关。

综上所述,本研究通过合理的分离纯化方法,成功得到黑果枸杞多糖样品,并对其进行了结构表征和抗氧化活性评估。

研究结果表明,黑果枸杞多糖具有良好的抗氧化活性,有望成为一种重要的天然抗氧化剂和保健品原料。

然而,还需要进一步深入研究黑果枸杞多糖的生物活性、药理特性和机制等方面,以更好地利用其在医药和保健品领域的潜力综上所述,本研究成功得到了黑果枸杞多糖样品,并对其进行了结构表征和抗氧化活性评估。

枸杞多糖的提取纯化及组成分析

枸杞多糖的提取纯化及组成分析

枸杞多糖的提取纯化及组成分析
王战勇;闫松;商丽颖;晁彩林
【期刊名称】《氨基酸和生物资源》
【年(卷),期】2008(30)1
【摘要】采用水提法从枸杞中提取分离枸杞多糖(LBP)用DEAE纤维素柱色谱和凝胶柱色谱进行分离纯化,采用GPC-LLS法、红外光谱和气相色谱等方法对其组成进行研究。

结果表明LBP含有3个级分,LBP的分子质量约为1.497×105,由阿拉伯糖(Ara),鼠李糖(Rha),木糖(Xyl),甘露糖(Man),半乳糖(Gal)和葡萄糖(Glc)6种中性单糖组成。

【总页数】3页(P22-24)
【关键词】枸杞多糖;提取;纯化
【作者】王战勇;闫松;商丽颖;晁彩林
【作者单位】辽宁石油化工大学环境与生物工程学院;辽宁石油化工大学化学与材料科学学院;唐山师范学院滦州分校
【正文语种】中文
【中图分类】Q53
【相关文献】
1.提取纯化工艺对枸杞多糖抗氧化功能的影响 [J], 刘凌;孙慧;周明;周学义
2.新疆枸杞多糖的提取及其单糖组成分析 [J], 谢晓霞;沈广军
3.枸杞多糖提取纯化和生物活性研究进展 [J], 刘娜
4.枸杞多糖提取纯化工艺研究进展 [J], 任奕
5.枸杞多糖的提取纯化及体内外抗氧化活性研究 [J], 邱树磊;胡国柱;陈玉库;刘月岗;吕凤霞;武彩红;陈晓兰;胡元亮
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枸杞多糖的分离纯化及结构研究

枸杞多糖的分离纯化及结构研究张倩;张民;王超;杨帅;梁辰;吕晓玲【摘要】构杞子经提取,醇沉,得到枸杞水溶性多糖粗品(LBP).最佳乙醇沉淀添加量为50 mL浓缩液中添加80 mL体积分数95%乙醇;最佳乙醇醇沉时间为12h;Sevag法除蛋白次数为6次,脱除率为83.45%.枸杞粗多糖经DEAE-52纤维素(OH-)色谱柱、Sephedex G-50柱层析纯化后,得到LBP1和LBP2.采用紫外光谱扫描和Sephedex G-100柱层析鉴定LBP1和LBP2均为分子质量相对均一的组分.高效液相色谱检测LBP1和LBP2的相对分子质量分别为367和358.苯酚-硫酸法测得:LBP1和LBP2的中性糖含量分别为82.20%和74.50%;咔唑-硫酸法测得LBP1和LBP2的半乳糖醛酸含量为7.50%和14.30%.气相色谱测得LBP1的单糖组成摩尔比为半乳糖∶甘露糖∶葡萄糖=1.79∶1.00∶3.08;LBP2的单糖组成的摩尔比为半乳糖∶甘露糖∶葡萄糖=1.32∶ 1.00∶7.38.红外光谱测定结果显示,LBP1和LBP2均由吡喃糖构成.β消去反应检测得LBP1和LBP2与氨基酸是通过O-糖苷键相连.刚果红实验证明LBP1和LBP2均不存在三股螺旋结构.粒度实验表明,溶液酸碱度会影响构杞多糖的粒度分布.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2014(040)012【总页数】7页(P41-47)【关键词】枸杞多糖;分离纯化;结构分析【作者】张倩;张民;王超;杨帅;梁辰;吕晓玲【作者单位】天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津,300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津,300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津,300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津,300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津,300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院,天津,300457【正文语种】中文枸杞是我国的传统中药材,具有补肾养肝、清热凉血及益精明目等功能[1]。

枸杞多糖的提取分离和其组成研究


[责任编辑 李 禾 ]
枸杞多糖的提取分离和其组成研究
田丽梅 , 王 3
(中国药科大学 生命科学与技术学院 , 江苏 南京 210009)
[摘要 ] 目的 :从枸杞中提取分离枸杞多糖 (LBP) ,并对其组成进行研究 。方法 :采用水提法提取 LBP,用 DE2 AE纤维素柱色谱和凝胶柱色谱进行分离纯化 ,采用 GPC2LLS法 、气相色谱法 、氨基酸自动分析等方法对其组成进 行研究 。结果 : LBP纯品含有 4个级分 , LBP的分子质量约为 11524 ×105 ,由阿拉伯糖 (A ra) ,鼠李糖 ( Rha) ,木糖
Conclusion : A tractylone can convert to atractylenolides during p rocess of A. m acrocephala, and the contents of each component are re2
lated to the level of p rocess. [ Key words] A tracty lodes m acrocepha la; p rocess mechanism; conversion; sesquiterpenes
由上可知 ,本实验中经过分级纯化后的 LBP含 有 LB P2Ⅰ, LB P2Ⅱ, LBP2Ⅲ和 LB P2Ⅳ4 个级分 ,作 者对纯化后的 LBP进行了各种检测 。 2. 2 LB P纯度的鉴定
采用 Sephadex G200 凝胶柱色谱鉴定 LB P 纯 度 。取 LBP样品 10 mg,溶于最小体积的蒸馏水中 , 上 Sephadex G200凝胶柱 (110 cm ×70 cm ) ,用蒸馏 水洗脱 ,流速 6 m l·h- 1 ,用自动收集器按每管 3 mL 分部收集 。用硫酸 2苯酚法 ( 490 nm )和紫外吸收法 (280 nm )进行检测 ,以洗脱管数为横坐标 ,吸光值 为纵坐标作图 。

枸杞中枸杞多糖的提取及分离纯化工艺的研究

枸杞中枸杞多糖的提取及分离纯化工艺的研究石油化工与工艺 05160111 倪宜海指导教师:史高峰教授摘要本文主要对枸杞黄酮类化合物的微波辐射辅助提取取枸杞粉末和提取最佳工艺进行研究。

取得的主要研究成果如下:加入一定料液比(1:8、1:10、1:12)的水溶液,放入微波搅拌器中放置一定时间(40-100min),温度70-100摄氏度之间,功率(300-600w)。

取出过滤,取其溶液放置旋转蒸发仪中进行蒸馏。

枸杞渣滓放回搅拌器中进行二次提取,提出多糖混合液醇沉冷冻干燥后,为褐色絮状粉末固体。

确定最佳工艺:提取温度90 ℃;料水比1∶10(W∶V),提取时间2h,功率600。

得出多糖再进行Sevage法脱蛋白,冷冻干燥后,为乳白色絮状粉末固体粗多糖。

在最佳条件下枸杞粗多糖提取率可达12.23%。

枸杞粗蛋白含量6.98%关键词:微波搅拌,冷冻干燥,Sevage法脱蛋白,分离纯化AbstractIn this paper, the main flavonoids of Lycium barbarum's the microwave-assisted extraction of radiation from wolfberry extract powder and the best technology for research. The main research results obtained are as follows: by adding some liquid ratio (1:8,1:10,1:12) aqueous solution into the microwave stirrer placed a period of time (40-100min), the temperature between 70-100 degrees Celsius , power (300-600w). Remove the filter, select the solution placed in Rotary Evaporator distillation. Barbarum waste back into the blender in the second extract, the polysaccharide mixture of freeze-drying alcohol, in order to brown flocculent solid powder. To determine the optimum process: extraction temperature 90 ℃; feed water ratio 1:10 (W: V), extraction time 2h, Power 600. Polysaccharide derived from another protein Sevage law, after freeze-drying for white flocculent powder Polysaccharide solid. Under the best conditions in barbarum Polysaccharide extraction rate of 12.23%. Barbarum 6.98% crude protein content.KEY WORDS: microwave mixing, freeze-drying, Sevage method of removing protein, purification 1.前言枸杞中的化学成分比较复杂,主要包括蛋白质、氨基酸、微量元素、糖类、脂肪、脂肪酸、菇类、甾醇类、维生素、色素类、生物碱类。

枸杞子中多糖含量的测定(1)

枸杞子中多糖含量的测定柳婷,胡浩斌(陇东学院化学化工学院,甘肃庆阳 745000)摘要:本文是用分光光度法测定枸杞子中的含糖量[1]。

先用80%乙醇提取以除去单糖、低聚糖、生物碱等干扰成分,然后用蒸馏水提取其中所含的多糖类成分。

多糖在硫酸作用下,水解成单糖,并迅速脱水生成糠醛衍生物,与苯酚缩合成有色化合物。

用紫外分光光度法[2]测定其枸杞子多糖含量,本法简便,显色稳定,灵敏度高重现性好。

关键词:枸杞子;多糖;紫外分光光度计Detection of Polysaccharide in Lycium barbarumLiu Ting, Hu Hao-Bin(College of Chemistry & Chemical Engineering, Longdong University, Qingyang 74500, China) Abstract:This paper is utilized spectrophotometry to detect Polysaccharide in Lycium barbarum..First,use 80% ethanol to remove simple sugars, oligosaccharides, alkaloids etc interference ingredients, and then extracted the ingredients. Of polysaccharose with distilled water. In Sulfuric acid condition, polysaccharide hydrolysis into monosaccharides, and rapidly dehydrated to furfural derivatives, then condense with phenol into colored compounds. Using spectrophotometry to detect polysaccharide in Lycium barbarum,the method is simple, color stability, high sensitivity and good reproducibility.Key words:Lycium barbarum; polysaccharose; spectrophotometry枸杞子(Lycium barbarum是我国传统的中药材和重要经济作物,性状呈类纺锤形,略扁,长6~21 mm,直径3~10 mm。

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枸杞多糖分离纯化及其结构光谱分析与显微学观察郭琦,孙润广*,郭国贇,焦自明陕西师范大学物理学与信息技术学院生物物理与生物医学工程实验室,陕西西安 710062摘 要:目的提取枸杞多糖并分析其结构性质和显微学形态,为枸杞的进一步开发利用提供参考。

方法采用水提醇沉法得到枸杞多糖,Sephadex G-150凝胶色谱柱纯化得LBP3-I,应用傅里叶变换光谱、气相色谱对LBP3-I进行组成结构分析,通过环境扫描电镜和原子力显微镜观察该组分的显微学形态。

结果LBP3-I是一种含有结合蛋白的多糖复合物。

其单糖组成为鼠李糖基、阿拉伯糖基、木糖基、甘露糖基、葡萄糖基、半乳糖基,且摩尔比率为2.07∶2.38∶3.11∶1.00∶1.12∶2.86。

红外光谱结果显示LBP3-I具有明显的糖类物质特征吸收峰且含有吡喃环;环境扫描电镜下LBP3-I呈现高分支结构,主要呈链状,且糖链间多相互缠绕聚集成环状。

结论LBP3-I是一种含有结合蛋白的多糖复合物,具有分支结构,主要成链状。

关键词:枸杞多糖;单糖组成;分支结构;环境扫描电镜;原子力显微镜中图分类号:R284.18 文献标志码:A 文章编号:0253 - 2670(2012)04 - 0645 - 04Isolation and purification, its structure spectral analysis, and microscopy observation of Lycium barbarum polysaccharideGUO Qi, SUN Run-guang, GUO Guo-yun, JIAO Zi-mingLaboratory of Biophysics and Biomedical Technology, College of Physics and Information Technology, Shaanxi Normal University, Xi’an 710062, ChinaAbstract: Objective To provide the reference for further development and utilization of Lycium barbarums, the structure composition and morphology of L. barbarum polysaccharides (LBP) were studied. Methods LBP was extracted from L. barbarum with water, isolated and purified by quaternary ammonium salts precipitation and gel chromatography process. The structural composition of LBP3-I was characterized by FT-IR and gas chromatography (GC). The morphology was observed by environmental scanning electron microscopy (ESEM) and atomic force microscope (AFM). Results LBP3-I was a polysaccharide complex which contained protein. LBP3-I contained six kinds of monosaccharides (rhamnose, arabinose, xylose, mannose, glucose, and galactose), and their ratios were 2.07︰2.38︰3.11︰1.00︰1.12︰2.86. The FT-IR results revealed the typical characteristics of polysaccharides and pyranoid rings. ESEM and AFM results showed LBP3-I had a high branch structure and sugar chains tangled together into rings. Conclusion LBP3-I is a polysaccharide complex containing protein which has branch structure with sugar chains.Key words:Lycium barbarum polysaccharid (LBP); monosaccharide composition; branch structure; environmental scanning electron microscopy (ESEM); atomic force microscope (AFM)枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)是从宁夏枸杞Lycium barbarum L.中提取的一种水溶性多糖,具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老等多种药理作用,是枸杞子中调节免疫、延缓衰老的主要活性成分[1-2]。

枸杞多糖现已成为医药保健品中的重要功能成分之一。

以往对枸杞多糖的研究多聚焦于其多种生物医学活性和提取工艺优化[3-4],然而对于枸杞多糖的化学组成及分子空间结构研究的报道尚不多见,以致许多枸杞多糖的物化性质和生理功能无法在结构上得以解释[5]。

多糖是一种重要的生物大分子,具有重要的生物学功能。

但对于多糖这种生物大分子来说,对其分子结构和表面形态也鲜有报道。

目前很多仪器的分辨度无法达到纳米级别。

原子力显微镜的出现为解决这个问题提供了技术支持[6]。

本实验在传统热收稿日期:2011-11-03基金项目:国家自然科学基金资助项目(10874108);陕西省自然科学基础研究计划资助项目(SJ08A16)作者简介:郭琦(1987—),女,宁夏回族自治区,硕士研究生,主要从事分子生物物理方面的研究。

E-mail: qqguoqi@ *通讯作者 孙润广 E-mail: sunrunguang@水提取枸杞多糖的基础上,通过气相色谱(GC),傅里叶红外光谱(FTIR)等测定了枸杞多糖的化学组成,并利用环境扫描电镜(ESEM)和原子力显微镜(AFM)研究其微观结构,从而为进一步研究枸杞多糖的多种生物活性以及分子结构提供理论和实验依据。

1材料与设备1.1材料与试剂宁夏枸杞子干果,购于西安万寿药材市场经陕西师范大学生命科学学院杨建雄教授鉴定为Lycium barbarum L.。

95%乙醇、三氯甲烷、正丁醇、苯酚、浓硫酸、葡萄糖、硼酸、NaOH、乙酸、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、NaCl、三氟乙酸、乙酸酐、吡啶、盐酸羟胺、肌醇六乙酰酯、甲醇、KBr,均为国产分析纯,实验室用水为双蒸水。

1.2设备HPX9162MBE数显电热培养箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂);CF16RX高速离心机(日本日立公司);TU1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);Alphal4真空冷冻干燥机(德国Christ公司);气相色谱仪(美国菲尼根公司);EQUINX55傅里叶变换红外光谱仪(德国Brucher公司);SPM—9500J3原子力显微镜(日本岛津);Quanta 200环境扫描电镜(FEI公司)。

2方法2.1枸杞多糖的提取将枸杞子烘干,粉碎,60 ℃下用95%乙醇脱脂2 h,重复3次,收集滤渣并干燥。

称取150 g干燥滤渣加入3 000 mL蒸馏水,90 ℃热水提取2 h,重复2次,合并离心,收集上清液,浓缩至1/4体积,然后加入4倍体积的95%乙醇,静置过夜。

离心,收集沉淀并重复醇沉1次。

2.2Sevage法脱蛋白将两次所得沉淀用蒸馏水溶解,加入糖液1/5体积Sevage试剂(三氯甲烷-正丁醇4∶1),震荡20 min后离心,收集上清液,重复操作至中间无变性蛋白层出现。

将上清液对流水透析3 d,真空冷冻干燥得脱蛋白枸杞多糖(LBP),并对LBP进行紫外光谱分析。

2.3枸杞多糖的分离2.3.1酸性亚组分的分离取LBP 4.0 g溶于75 mL蒸馏水中,加入50 mL CTAB过夜沉淀12 h,4 000 r/min、4 ℃离心20 min,收集沉淀。

沉淀用10% NaCl溶解后,加入3倍体积95%乙醇,产生沉淀,4 000 r/min、4 ℃离心20 min收集沉淀,蒸馏水溶解并透析3 d,冻干得LBP1。

2.3.2中性亚组分的分离CTAB处理后的上清液用1% H3BO3调节pH值为6.0,用2 mol/L NaOH 调节pH值为11.0产生沉淀,4 000 r/min、4 ℃离心20 min收集沉淀。

用10% NaCl溶解沉淀,用2%乙酸调节pH值为7.0,加入3倍体积95%乙醇沉淀,沉淀用蒸馏水溶解并透析3 d,冻干得LBP2。

2.3.3碱性亚组分的分离分离LBP2后的上清液,用乙酸调至pH值为4.4,加入3倍体积的95%乙醇,静置24 h,4 000 r/min、4 ℃离心20 min收集沉淀,沉淀用蒸馏水溶解透析3 d,冻干得LBP3。

2.4枸杞多糖的纯化选取量相对较多的LBP3亚组分40 mg溶于5 mL 蒸馏水中,上Sephadex G-150色谱柱,用蒸馏水洗脱,自动收集每管3 mL。

苯酚-硫酸法检测多糖,合并出峰管,浓缩,冻干,得纯化多糖LBP3-I,并计算收率为42.5%。

2.5多糖的GC分析采用三氟乙酸对LBP3-I样品进行酸水解得到单糖,甲醇中和,产物先后用无水吡啶、盐酸羟胺、肌醇六乙酰酯(内标)和无水乙酸酐进行衍生化处理后直接用于GC分析。

GC分析条件:日本岛津OV-1701石英毛细管柱(30 m×0.32 mm);载气为氮气;氢火焰离子化检测器检测;检测器和气化室温度均为260 ℃;柱温采用程序升温,从150~190 ℃过程中的升温速率为7 ℃/min,190~260 ℃过程中的升温速率为15 ℃/min,进样量为1 μL。

2.6多糖的红外光谱分析将干燥的LBP3-I 5 mg加入到750 mg KBr中在研钵中研磨均匀[7],压片,置于红外光谱仪中分析。

2.7环境扫描电镜观察取少量干燥LBP3-I样品平铺置于金属片的导电胶上,用吸耳球吹去表面浮样,置真空喷镀仪内喷金后在环境扫描电镜下观察。

2.8原子力显微镜观察将LBP3-I用蒸馏水溶解至10 μg/mL,用微量移液枪移取5 μL样液滴在新剥离的云母片上,30 min 后在SPM—9500J3原子力显微镜Tapping模式下观察。

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