[高中生物必修1叶绿体色素的提取和分离实验知识点]叶绿体色素分离
生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》实验报告
生物实验报告《叶绿体中色素的提取和分离》实验报告实验目的：1. 学习叶绿体中色素的提取和分离的方法；2. 观察叶绿体中不同色素的吸收光谱。
实验原理：叶绿体是植物细胞中的特殊细胞器，其中含有多种色素，包括叶绿素 a、叶绿素 b、类胡萝卜素等。
这些色素能够吸收不同波长的光线，并转化为化学能以参与光合作用。
本实验利用溶剂提取和色谱柱分离的方法，将叶绿体中的色素提取出来，并通过紫外-可见光分光光度计测定不同色素的吸收光谱。
实验步骤：1. 取一片鲜叶（最好选择深绿色的叶片）切碎，加入适量的乙醇或醋酸乙酯中浸泡，使叶绿体释放出色素。
注意保持容器密封以避免光照。
2. 将浸泡片刻半小时，使叶绿体彻底释放色素。
3. 将叶绿体悬液过滤，收集含有色素的过滤液。
4. 取一支色谱柱，填充色谱吸附剂（如硅胶），再用无色溶剂（如正己烷）预洗一次。
5. 将收集到的含色素液体加入色谱柱中，用无色溶剂洗脱，收集不同色素的洗脱液。
6. 用紫外-可见光分光光度计测定不同色素的吸收光谱。
实验结果：根据实验数据得到不同色素的吸收光谱曲线，可观察到叶绿素 a 在400-500 nm波长范围内有最大吸收峰，叶绿素 b 在450-550 nm波长范围内有最大吸收峰，类胡萝卜素在500-600 nm波长范围内有最大吸收峰。
根据吸收光谱的不同，可以推测各色素在光合作用中的吸收波长和参与的反应。
实验结论：通过该实验，我们成功地提取和分离了叶绿体中的色素，并观察到不同色素的吸收光谱。
这些实验结果可以帮助我们深入了解植物光合作用的机制，以及不同色素在光合作用中的作用。
同时，该实验也展示了提取和分离生物样品中化学物质的基本实验技巧和原理。
《叶绿体色素的提取和分离》 实验报告
《叶绿体色素的提取和分离》实验报告
叶绿体是植物细胞中的一种细胞质器，主要功能是光合作用。
叶绿体包括一系列色素，其中最重要的是叶绿素。
在本实验中，我们将提取和分离叶绿体色素，以便进一步分析其
结构和功能。
实验步骤：
1. 从新鲜的叶子中剪下片段，用无菌蒸馏水洗涤。
2. 用离心机将叶片离心，离心速度为1000 rpm，时间为5分钟。
3. 将上清液取出并过滤，过滤剂为细孔过滤纸。
5. 将上清液取出，并用1ml无菌蒸馏水洗涤叶绿体色素。
7. 取出上清液，将其光度值调至0.4-0.6。
（400nm处）
8. 将上述上清液转入紫外吸收仪中，观察叶绿素的吸收曲线。
实验结果：
实验得出的叶绿体色素提取液中，吸收最强的波长为680nm和430nm。
这对应着叶绿
体和类胡萝卜素的吸收峰。
实验得到的叶绿体色素移液后，需要经过离心的过程，这样可去除混杂物质，获得更
为纯净的叶绿素。
通过以上实验，我们成功地提取和分离了叶绿体色素。
叶绿素是植物所特有的，它起
到了光合作用的关键作用。
实验中的提取和分离方法，可以为进一步的分析叶绿素的结构
和功能提供帮助。
高中生物必修一实验八 叶绿体中色素的提取和分离
实验八叶绿体中色素的提取和分离教学目的1．初步掌握提取和分离叶绿体中色素的方法。
2．探索叶绿体中有几种色素。
实验原理1．叶绿体中的色素能溶解在丙酮（有机溶剂，酒精、汽油、苯、石油醚等）中，所以用丙酮可提取叶绿体中色素。
2．色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得快，溶解度低的色素分子随层析液在滤纸条上的扩散得慢，因而可用层析液将不同的色素分离。
实验程序（1）称取5g绿色叶片并剪碎提取色素（2）加入少量SiO2、CaCO3和5ml丙酮收集到试管内并塞紧管口（1）将干燥的滤纸剪成6cm长，1cm宽的纸条，剪去一端两角（使层析液同时到达滤液细线）制滤纸条（2）在距剪角一端1cm处用铅笔画线（1）用毛细管吸少量的滤液沿铅笔线处小心均匀地划一条滤液细线滤液划线（2）干燥后重复划2-3次（1）向烧杯中倒入3ml层析液（以层析液不没及滤液细线为准）纸上层析（2）将滤纸条尖端朝下略微斜靠烧杯内壁，轻轻插入层析液中（3）用培养皿盖盖上烧杯观察结果：滤纸条上出现四条宽度、颜色不同的彩带（如下图）最宽：叶绿素a；最窄：叶绿素b；相邻色素带最近：叶绿素a和叶绿素b；相邻色素带最远：胡萝卜素和叶黄素。
实验关键1．选材时应注意选择鲜嫩、色浓绿、无浆汁的叶片。
如菠菜叶、棉花叶、洋槐叶等。
2．画滤液细线时，应以细、直、颜色浓绿为标准，重复画线时必须等上次画线干燥衙再进行，重复2-3次。
3．层析时不要让滤液细线触及层析液。
注意事项1．因丙酮和层析液都是易挥发且有一定毒性的有机溶剂，所以研磨要快，收集的滤液要用棉塞塞住，层析时要加盖，尽量减少有机溶剂的挥发。
2．在研磨时要加少许二氧化硅，目的是为了研磨充分，有利于色素的提取；加少许碳酸钙的目的是为了防止研磨过程中，叶绿体中的色素受到破坏。
3．分离色素时，一定不要让滤纸条上的滤液细线接触到层析液，这是因为色素易溶解在层析液中，导致色素带不清晰，影响实验效果。
实验(色素提取和分离)
——滤纸会吸附色素，影响提取量 2、及时用棉塞塞住试管口
——避免色素氧化分解
2 实验步骤
2、层析分离（纸层析法）
（1）制备滤纸条： ★要求：干燥、剪角
（2）画滤液细线
滤液细线
★要求：层析
★层析液不能没及滤液细线
3 实验结果
同学们的作品
实验中使用的层析液等有毒，且易燃； 实验时请保持通风，安全操作； 实验结束后充分清洁双手。
光合色素的提取和分离
1 实验原理
叶绿体色素易溶于乙醇等有机溶剂。 不同的叶绿体色素随层析液在滤纸上 扩散速度不同。
2 实验步骤
1、色素的提取
（1）研磨提取 材料:绿叶
SiO2——使研磨充分 药品 CaCO3 ——防止色素破坏
95%乙醇—溶解、提取色素
2 实验步骤
（2）过滤收集 注意事项： 1、用单层尼龙 / 纱布 / 脱脂棉过滤
植物生理学实验 叶绿体色素的提取、分离
3 铜代反应
取上述色素乙醇提取液少许于试管中，1 滴1滴加入浓盐酸，观察颜色变化。然后加醋 酸铜晶体少许，酒精灯上慢慢加热溶液，观察 色素颜色的变化。
叶绿素的提取
叶绿素是一种酯，因此不 溶于水。通常用含有少量水的 有机溶剂如80％的丙酮，或者 95%乙醇，或丙酮∶乙醇∶水 ＝4.5∶4.5∶1的混合液来提 取叶片中的叶绿素，用于测定 叶绿素含量。 之所以要用含 有水的有机溶剂提取叶绿素， 这是因为叶绿素与蛋白质结合 牢，需要经过水解作用才能被 提取出来。 提取方法 研磨法 浸提法 研磨法提取 光合色素
制作绿色标本方法：用50%醋酸溶液配制的饱 和醋酸溶液浸渍植物标 本(处理时可加热)
当溶液变褐 色后，投入 醋酸铜粉末， 微微加热， 形成铜代叶 绿素
提取液的分离：因吸附剂对不同物质的吸附力不同，当用适 当的溶剂推动时，混合物中各种成分在两相（固定相和流 动相）间具有不同的分配系数，所以移动速度不同，经过 一定时间后，可将各种色素分开。
二、材料、仪器设备及试剂
（一）材料：常春藤叶 （二）仪器设备： 研钵；漏斗；三角瓶或试管；剪刀；滴管；玻棒；圆形滤纸 （直径11cm）：酒精灯 （三）试剂： 95％乙醇；石英砂；盐酸；醋酸铜 推动剂：按石油醚；丙酮：苯（10:2:1）比例配 制（V／V）。
2. 叶绿体色素的分离 （1）取圆形定性滤纸一张（直径11cm），用毛细滴管 吸取或玻棒蘸取乙醇叶绿体色素提取液点于滤纸中心， 使色素扩散，风干后，再重复操作数次。 （2）用吸管吸取推动剂滴在滤纸中间，当推动剂前沿接 近滤纸边缘时，即可看到分离的各种色素。风干滤纸， 剪取一条分开的色素带，标明各种色素的位置及颜色， 作为结果贴于实验报告上。
0.1g叶+10ml混合液浸提
[详解]叶绿素分离试验
![[详解]叶绿素分离试验](https://img.taocdn.com/s3/m/999da949f342336c1eb91a37f111f18583d00ca1.png)
[详解]叶绿素分离试验一、叶绿体中色素的提取和分离说明1、取材时要选用新鲜的颜色较深的叶片，以便使滤液中含较多的色素2、研磨时加入二氧化硅的目的是为了研磨的充分，更有效的破坏细胞结构;加入少许碳酸钙的目的是为了防止在研磨过程中，叶绿素受到破坏。
因为叶绿素分子结构中含有一个镁原子，当细胞破裂时，细胞液内有机酸的氢可以取代镁原子而成为褐色的去镁叶绿素，碳酸钙可中和有机酸以防止去镁反应的发生3、研磨时要迅速、充分。
一是因为丙酮容易挥发;二是为了使叶绿体完全破裂，从而能提取出较多的色素;三是叶绿素极不稳定，能被活细胞中的叶绿素酶水解而破坏。
4、制备滤纸条时，要将滤纸条的一端剪去两角。
这样可以使色素在滤纸条上扩散均匀，便于观察实验结果。
5、画滤液细线时，一定要细且直。
这样可以防止色素带重叠，使色素分子均匀分布在一条直线上，做到扩散起点一致。
重复划2,3次，是为了增加滤液细线上的色素分子数量，使实验效果更加明显。
6、分离色素时，一定不要让滤纸条上的滤液细线接触到层析液，这是因为色素易溶解于层析液中，导致色素带不清晰，影响实验效果。
7、识记实验结果的色素带分布及宽窄(四种四素扩散速度的先后顺序为:胡萝卜素,叶黄素,叶绿素a,叶绿素b)二、习题一、选择题1、叶绿素不溶于( )A(水 B(石油醚 C(丙酮 D(苯2、下列关于“叶绿体色素提取和分离”的实验描述中，不属于实验要求的是( )A(提取高等植物叶绿体中的色素 B(用纸层析法分离色素C(了解各种色素的吸收光谱 D(验证叶绿体中所含色素的种类3、通过纸层析分离叶绿体色素，结果在滤纸条上出现四条色素带，自上而下依次为 ( )A(胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a、叶绿紊b B(胡萝卜素、叶绿素a、叶绿素b、叶黄素C(叶绿素b、叶绿素a、叶黄素、胡萝卜素 D(叶黄素、叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素 4、在进行叶绿素提取和分离的实验时，不能让层析液没及滤液细线的原因是( )A(滤纸上几种色素会扩散不均影响实验效果 B(滤纸上的滤液细线会变粗而使色素太分散C(色素会溶解在层析液中，使实验结果不明显 D(滤纸上的几种色素会混合起来不分散5、对“叶绿体中色素的提取和分离”实验中，下列描述正确的是( )A(将5 g新鲜完整的菠菜叶，放入研钵中，加入丙酮、石英砂、CaCO以后，迅速研磨 3B(用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线处小心均匀地划出一条滤液细线，并连续迅速地重复划2,3次C(把划好细线的滤纸条插入层析液中，并不断摇晃，以求加快色素在滤纸条上的扩散D(色素分子是有机物，不溶于水，所以研磨过程中加入丙酮是为了溶解色素6、在叶绿体中的色素提取和分离实验中，四种色素在滤纸条上扩散速度最快的和最慢的是( )A、胡萝卜素和叶绿素bB、胡萝卜素和叶绿素aB、叶黄素和叶绿素b D、叶黄素和叶绿素a7、装置甲是用来验证绿色植物在有光条件下释放氧气的装置，装置乙和丙是另外两个装置，通常可作为本实验的对照实验的装置( )A(乙和丙 B(乙C(丙 D(乙和丙都不是8、叶绿素体中的各种色素能够在滤纸上彼此分离的原因是( )A(色素提取液中的不同色素已经分层B(阳光的照射使各种色素能彼此分开C(各种色素随层析液在滤纸上扩散速度不同D(丙酮使色素溶解并分离的扩散速度不同9、下列生物实验:?制作洋葱根尖分生区装片时，用10,盐酸处理根尖;?将重组质粒导人大肠杆菌，先用氯化钙溶液处理大肠杆菌;?用胰蛋白酶处理动物组织，使细胞分散开来，进行细胞培养;?用纤维素酶和果胶酶处理白菜和甘蓝体细胞，进行体细胞杂交;?为了更充分提取叶绿体中的色素，在研磨叶片时，加入二氧化硅。
叶绿体色素提取与分离实验
类胡萝卜素 50
叶绿素b 叶绿素a
0
波长
二、捕获光能的色素和结构
（一）捕获光能的色素
色素
叶绿素a （蓝绿色）
叶绿素 叶绿素b
（黄绿色） 含量约占3/4
类胡萝卜素
叶黄素 （黄色） 胡萝卜素 （橙黄色）
含量约占卜素主 要吸收蓝紫光
叶绿素主要吸收 红光和蓝紫光
课堂检测
1、在叶绿体色素的提取和分离实验中在滤纸条上扩散速度 最快的色素是（ ） A、叶绿素a B、叶绿素b C、胡萝卜素 D、叶黄素
4、在圆形滤纸的中央点上，对叶绿体的色素进行色素分析， 会得到近似，同心的四个色素环，排到在最里圈的色素是 （） A、橙黄色 B、蓝绿色 C、黄色 D、黄绿色
练习
1、在植物实验室的暗室内，为了尽可能地降
低植物光合作用的强度，最好安装（ B）
A、红光灯 B、绿光灯 C、白炽灯 D、蓝光灯
2、为提高大棚蔬菜的产量，哪项措施更有效
5、下图是叶绿体色素的提取与分离实验中所用的材料与用具。请回答： 分别在A、B、C三个研钵中加入2克菠菜，经研磨、提取得到三种颜色的溶液： 深绿色、黄绿色（或褐色）、几乎无色。注：“+”表示加，“—”表示不加。
处理 二氧化硅（少量） 碳酸钙（少量） 95%乙醇（10ml） 蒸馏水（10ml）
ABC +++ —+ + + —+ —+ —
（ D）
A、安装红色透光薄膜 B、安装蓝紫色透光薄膜
C、安装绿色透光薄膜 D、安装无色透光薄膜
练习
3．在圆形滤纸的中央点上粘叶绿体的色素滤液， 进行色素分析，会得到近似同心环状的四个色素圈，
排在外圈的色素呈 [ A]
叶绿体色素的提取与分离实验
3、用纸层析法将色素进行分离，在滤纸条上出现最宽旳一 条色素带旳颜色是（ ） A、橙黄色 B、黄色 C、蓝绿色 D、黄绿色
类胡萝卜素 50
叶绿素b 叶绿素a
0
波长
二、捕获光能旳色素和构造
（一）捕获光能旳色素
色素
叶绿素a （蓝绿色）
叶绿素 叶绿素b
（黄绿色） 含量约占3/4
类胡萝卜素
叶黄素 （黄色） 胡萝卜素 （橙黄色）
含量约占1/4
吸收可见 旳太阳光
类胡萝卜素主 要吸收蓝紫光
叶绿素主要吸收 红光和蓝紫光
课堂检测
1、在叶绿体色素旳提取和分离试验中在滤纸条上扩散速度 最快旳色素是（ ） A、叶绿素a B、叶绿素b C、胡萝卜素 D、叶黄素
分别在A、B、C三个研钵中加入2克菠菜，经研磨、提取得到三种颜色旳溶液： 深绿色、黄绿色（或褐色）、几乎无色。注：“+”表达加，“—”表达不加。
处理
二氧化硅（少许） 碳酸钙（少许）
95%乙醇（10ml） 蒸馏水（10ml）
ABC +++ —+ + + —+ —+ —
（1）A处理得到旳溶液颜色是 黄绿色 ，原因是__叶__绿__素_被__破__坏__________
（6）色素分离旳成果：相邻色素带间距最宽旳是 他们旳颜色是 橙黄色 和 黄色 ，主要吸收 蓝紫
胡萝卜素 和 叶黄素 ， 光。
（ D）
A、安装红色透光薄膜 B、安装蓝紫色透光薄膜
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[高中生物必修1叶绿体色素的提取和分离实验知识点]
叶绿体色素分离
1、原理：(1)叶绿体中的色素能溶解在有机溶剂无水乙醇(或丙酮)中，所以用无水乙醇可提取叶绿体中的色素。
(2)不同的色素在层析液中溶解
度不同，溶解度高的色素分子随层析液在滤纸条上扩散得快，溶解度低的
色素分子随层析液在滤纸条上扩散得慢，因而可用层析液将不同色素分离。
3、结果分析：①从色素带的宽度可知色素含量的多少依次为：叶绿
素a>叶绿素b>叶黄素>胡萝卜素;②从色素带的位置可知色素在层析夜中
溶解度大小依次是：胡萝卜素>叶黄素>叶绿素a>叶绿素b;③在滤纸上距
离最近的两条色素带是叶绿素a与叶绿素b，距离最远的两条色素带是胡
萝卜素与叶黄素。
4、注意事项：(1)裁取定性滤纸时，注意双手尽量不要接触纸面，以
免手上的油脂或其他脏物污染滤纸。
(2)根据烧杯的高度制备滤纸条，让
滤纸条长度高出烧杯1cm，高出的部分做直角弯折。
(3)画滤液细线时，用力要均匀，速度要适中。
(4)研磨要迅速、充分。
a.因为丙酮容易挥发;b.为了使叶绿体完全破裂.从而能提取较多的色素;
c.叶绿素极不稳定，能被活细胞中的叶绿素酶水解而被破坏。
(5)制备滤纸条时，要将滤纸条的一端剪去两角,这样可以使色素在滤
纸条上扩散均匀,便于观察实验结果。
5、实验创新：在本实验中在圆形滤纸中央点上叶绿体色素的提取液
进行层析，会得到近似同心的四个色素环，由内到外依次是黄绿色、蓝绿色、黄色、橙黄色。
一、为什么要选新鲜绿色的幼嫩叶片
因为叶绿色含N﹑Mg，而老叶中这两种矿质元素很多已经分解转移,
所以鲜绿色的幼叶中叶绿素的含量高,适合于实验.
二、制备滤纸条要剪去两角
实验中需将滤纸条的一端剪去两角，为什么这样做，如果不会怎么样
呢原来若不剪去滤纸条的两角，色素带的两边和中间不是在一条直线上。
这是由于滤纸条两边水分子可以向三个方向散失，向上“跑”的速度快。
而滤纸条中间的水分子只能向两个方向散失，分别是向内和向外，因而会“跑”得慢一些。
而现在剪去滤纸条的两个角，可以在一定程度上加快中
间色素的扩散速度，减慢两边色素的扩散速度，从而真正意义上使这些色
素从同一起点随层析液扩散.
三、为什么研磨时加无水乙醇或丙酮
因为色素是有机物,根据相似相容性原理,无水乙醇或丙酮能溶解色素四、为什么加入少许二氧化硅
在提取色素的过程中，要加人少许二氧化硅。
原来是为了研磨得充分。
二氧化硅就是石英沙子，研磨时可以增大强度，加快细胞和叶绿体的破裂，而使叶绿体中的色素释放出来。
五、为什么加入少许碳酸钙
在提取色素的过程中，要加人少许碳酸钙。
原来是为了防止在研磨时
叶绿体中的色素受到破坏。
叶绿体中的色素原本所处的环境具微碱性。
在
实验中,研磨会使细胞结构遭到破坏，细胞液中有机酸流出，酸性的细胞
液就会接触到叶绿体中的色素，致使叶绿素的分子结构遭到破坏，使叶绿
素失镁，呈黄褐色,如同我们看到到腌制的黄瓜会变色一样,而碳酸钙是强
碱弱酸盐，碳酸钙在水中的溶解度很小，但还是有一部分得到溶解，中和
细胞液的酸性，制造了一个弱碱环境，保护了色素。
六、为什么用单层尼龙布过滤
在过滤时，漏斗基部放一块单层尼龙布，老教材中是用滤纸来过滤的。
过滤的目的是去掉不需要的杂质如破碎的细胞、二氧化硅、碳酸钙等，相
对而言，单层尼龙布可以让色素溶液更好地通过效果比滤纸要好。
1、还原糖的检测
(1)材料的选取：还原糖含量高，白色或近于白色，如苹果，梨，白
萝卜。
(2)试剂：斐林试剂(甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05g/mL
的CuSO4溶液)，现配现用。
(3)步骤：取样液2mL于试管中→加入刚配的斐林试剂1mL(斐林试剂
甲液和乙液等量混合均匀后再加入)→水浴加热2min左右→观察颜色变化(白色→浅蓝色→砖红色)
★模拟尿糖的检测
1、取样：正常人的尿液和糖尿病患者的尿液
2、检测方法：斐林试剂(水浴加热)或班氏试剂或尿糖试纸
3、结果：(用斐林试剂检测)试管内发生出现砖红色沉淀的是糖尿病患者的尿液，未出现砖红色沉淀的是正常人的尿液。
4、分析：因为糖尿病患者的尿液中含有还原糖，与斐林试剂发生反应产生砖红色沉淀，而正常人尿液中无还原糖，所以没有发生反应。
2、脂肪的检测
(1)材料的选取：含脂肪量越高的组织越好，如花生的子叶。
(2)步骤：制作切片(切片越薄越好)将最薄的花生切片放在载玻片中央
染色(滴苏丹Ⅲ染液2～3滴切片上→2～3min后吸去染液→滴体积分数50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精)
制作装片(滴1～2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片)
镜检鉴定(显微镜对光→低倍镜观察→高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒)
3、蛋白质的检测
(1)试剂：双缩脲试剂(A液：0.1g/mL的NaOH溶液，B液：0.01g/mL 的CuSO4溶液)。