微生物学检验(第3版)葡萄球菌微生物设计性实验
葡萄球菌和链球菌的微生物学检查
青岛农业大学兽医微生物实验报告题目：葡萄球菌和链球菌的分离鉴定姓名：阿芳学院：动物科技学院专业：动物科学班级： 201X级X班学号：（201XXXXX）指导教师：任慧英完成日期 2014年3月22日葡萄球菌和链球菌的分离鉴定摘要目的：对实验提供的A、B两种细菌进行分离鉴定。
主要方法：通过对细菌的分离培养，形态的观察以及生化反应的现象等方法进行鉴定。
关键词：葡萄球菌；链球菌；分离鉴定引言1葡萄球菌是一群革兰氏阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状，故名。
多数为非致病菌，少数可导致疾病。
葡萄球菌是最常见的化脓性球菌。
无鞭毛，无荚膜，不产生芽胞，营养要求不高，在普通培养基上生长良好，在含有血液和葡萄糖的培养基中生长更佳，需氧或兼性厌氧，少数专性厌氧。
28～38℃均能生长，致病菌最适温度为37℃，PH为4.5～9.8，最适为7.4。
在琼脂平板上形成圆形凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，不透明的菌落。
葡萄球菌在血琼脂平板上形成的菌落较大，有的菌株菌落周围形成明显的完全透明溶血环（β溶血），也有不发生溶血者。
多数葡萄球菌能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产生气。
致病性菌株能分解甘露醇。
葡萄球菌在自然界中分布很广，健康禽类的皮肤、羽毛、眼睑、粘膜、肠道等都有葡萄球菌存在。
链球菌是化脓性球菌的另一类常见的细菌，常排列成链状，无芽胞，无鞭毛，有菌毛样结构，革兰氏染色阳性。
需氧或兼性厌氧，有些为厌氧菌。
营养要求较高。
普通培养基中需加有血液、血清、葡萄糖等才能生长。
最适温度37℃，最适PH7.4～7.6，血琼脂平板上形成灰白色、有乳光、表面光滑、边缘整齐、直径0.5—0.75mm的细小菌落，不同菌株有不同溶血现象。
根据在血琼脂培养基上的溶血特征可分为三种不同类型：α型溶血性链球菌又称草绿色链球菌，菌落周围出现草绿色溶血环，致病力弱。
β型溶血性链球菌产生强烈的溶血毒素，在血琼脂培养基上，可使菌落周围出现宽2～4毫米、界限分明、无色透明的溶血环，致病力强。
实验5 金黄色葡萄球菌的检验
实验5 金黄色葡萄球菌的检验1 目的和要求（1）掌握金黄色葡萄球菌的检验方法（2）了解金黄色葡萄球菌各检验步骤的依据及原理2 基本原理金黄色葡萄球菌进入人体内，可引起局部的痈疾和蜂窝组织炎，还可以引起肺炎、心肌炎、骨骼炎、肾盂肾炎等系统化脓性感染，甚至可发展成败血症。
此外，食品中生长金黄色葡萄球菌是食品卫生中的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌在是中会产生肠毒素，食用后将引起食物中毒，这在我国细菌性食物中毒事件中，仅次于沙门氏菌和副溶血弧菌。
因此，检验食品中金黄色葡萄球菌是实际意义。
绝大多数金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生金黄色色素，菌落周围有透明的溶血圈，在厌氧条件下能分解甘露醇产酸，产生血浆凝固酶和耐热的DNA酶。
3 实验材料3.1 检样乳与乳制品（如奶粉、消毒乳）、肉制品、饮料3.2 菌种金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌斜面培养物。
3.3 培养基7.5%氯化钠肉汤、肉浸液肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker氏培养基3.4 试剂与染色剂无菌生理盐水、兔血浆、革兰氏染色液等。
3.5 仪器与其他用具无菌吸管（1mL、5、10）、无菌试管、载玻片、接种环、酒精灯、显微镜、均质器、恒温箱等。
4 检样程序5 操作步骤5.15.1.1样品的处理称取25 g 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min。
若样品为液态，吸取25 mL 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。
5.1.2 增菌和分离培养5.1.2.1 将上述样品匀液于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
实验五 葡萄球菌与链球菌
葡萄球菌与链球菌
实验四 目的要求：
葡萄球菌与链球菌
1、熟悉致病性葡萄球菌与链球菌的微生物学诊断方法。
2、掌握致病葡萄球菌与链球菌形态、培养特性。
实验内容：
一、显微镜观察致病葡萄球菌与链球菌形态。
二、实验观察致病葡萄球菌与链球菌培养特性。
三、链球菌的CAMP试验（示教）。
致病性葡萄球菌常引起各种化脓性疾患、 败血症和脓毒败血症。 葡萄球菌属分为3种：金黄色葡萄球 菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌。
致病葡萄球菌形态
致病葡萄球菌形态
致病葡萄球菌形态
葡萄球菌培养特性
葡萄球菌培养特性
葡萄球菌培养特性
葡萄球菌的微生物学检验程序：
病料 （脓汁、渗出液、血液乳汁等） 直接涂片镜检：普通染色、革兰氏染色 培养：增菌培养 普通肉汤 分离培养 血液平板 普通平板
链球菌形态
链球菌形态
链球菌形态
实验四
葡萄球菌与链球菌
实验报告：1、描述致病葡萄球菌与链球菌培养特性。 2、实验观察的致病葡萄球菌与链球菌基本形态。
在普通琼脂平板形成湿润、光滑、隆起的 圆形菌落，直径１～２mm。菌落颜色依菌 株而异，初呈灰黄色，继而为金黄色、白色 或柠檬色。致牛乳腺炎以及耐药菌株常为深 黄色。色素的形成也依培养条件而异，通常 在22℃或在含糖、牛乳、血清的培养基中， 产生色素较多；有氧及CO2条件下易形成色 素。 在血液琼脂平板形成的菌落较大，产溶血 素的菌株为病原菌，在菌落周围呈现明显的 β溶血。
链球菌形态
链球菌培养特性
链球菌培养特性
链球菌培养特性
链球菌培养特性
链球菌培养特性
链球菌的微生物学诊断
病料
（脓汁、渗出物病灶 病料、呼吸道分泌物 等；败血症：心血、 实质器官等）
微生物学实验目的与要求
微生物学实验目的与要求实验五病原性球菌目的(一) 掌握致病性葡萄球菌的特征；抗链球菌溶血素“O”试验；甲型链球菌与肺炎链球菌区别。
(二) 熟悉三种链球菌在血平板上的区分；肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌的形态特征。
(三) 了解病原性球菌的形态、染色性。
内容(一) 病原性球菌的形态及染色性(示教)。
(二) 葡萄球菌培养及生化特性(示教)。
(三) 致病性葡萄球菌的鉴定(操作)。
(四) 链球菌的培养与抗链球菌溶血素“O”试验(示教与操作)。
(五) 肺炎链球菌与甲型链球菌的区别(示教)。
(六) 脓汁或咽拭子分离培养(操作)。
一、病原性球菌的形态及染色性(示教)1．葡萄球菌的形态及染色性(示教)【材料】金黄色葡萄球菌革兰染色示教片。
【方法】油镜观察细菌的形态、排列及染色性。
2．链球菌的形态及染色性(示教)【材料】乙型链球菌血清肉汤培养物制作的革兰染色示教片。
【方法】油镜观察链球菌的形态、大小、排列及染色性。
3．肺炎链球菌的形态结构及染色性(示教)【材料】3肺炎链球菌革兰染色示教片、肺炎链球菌荚膜示教片。
【方法】油镜观察二张示教片中肺炎链球菌的形态结构特点及其染色性。
4．脑膜炎奈瑟菌的形态及染色性(示教)【材料】脑膜炎奈瑟菌革兰染色示教片。
【方法】油镜观察注意形态、大小、排列以及染色性。
5．淋病奈瑟菌的形态及染色性．【材料】淋病性尿道、阴道脓汁涂片（革兰染色）。
【方法】油镜观察细菌形态、排列、在细胞内或外及染色性。
4二、葡萄球菌培养及生化特性(示教)【材料】1．金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌血琼脂平板培养物2．金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌甘露醇管【方法】1．取金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的血琼脂平板培养物，观察二种葡萄球菌单个菌落的形态、大小、表面、边缘、透明度、颜色及溶血性(如颜色不易区别时，可用滤纸片揩抹菌落观察)。
2．取金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的甘露醇发酵管，观察二者对甘露醇的分解情况。
三、致病性葡萄球菌的鉴定5致病性葡萄球菌的鉴定，一般实验室都根据以下特征，其中尤以血浆凝固酶试验意义最大。
微生物学检验(第3版)临床微生物标本的检验
G+杆菌 G-球菌 G-杆菌
真菌 厌氧菌
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Company name
血液标本中常见的病原体
22
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血标本的采集：
采血量 血液量每增加1ml， 阳性率就增加3%～5% 血量2ml增加到20ml时，血培养的阳性率就增加 30%～50% 儿童抽血量为1～3ml，成人抽血量3-5ml。 血液和肉汤的比例一般推荐为1：5～1：10 标本量大于1ml，细菌量也增加，对于感染的儿 童每毫升血液比成人有更多的微生物。
临床意义
人肠道中存在大量细菌，正常情况下 处于生态平衡，不会致病。当机体抵抗力 低下，某引起细菌入侵或滥用抗生素致肠 道菌群失调时，产生腹泻。
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Company name
五、呼吸道标本
类型：鼻咽拭子、痰 和经气管采集的标本。 上呼吸道存在正常菌 群，在采集标本与结 果分析时应予考虑。
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Company name
1．涂片检查： 湿片检查、制动试验 和革兰染色镜检：可确诊霍乱弧菌。抗酸 染色：可查结核分枝杆菌。 革兰染色：可 查葡萄球菌、艰难梭菌、弯曲菌和酵母样 菌等。 2．细菌培养：根据需要检查的细菌选择 粪便培养条件，一般需培养2～3天，如有 阳性菌生长，需进一步进行生化鉴定和药 敏试验后报告。
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Company name
正确地选择检查目的和方法
正确规范的采集和运送标本
应用良好的检测技术和方法，提供准确的结果或报告
临床感染性疾病的诊断和治疗
遵照医嘱 充分准备
严格查对
正确采集
及时送检
7
Company name
1、细菌学检验单
医生填写检验申请单 检验单应标明姓名、 性别、住院号、床号 、标本种类、检验目 的和送检日期等。
医学微生物学实验脓汁标本中金黄色葡萄球菌的鉴定 ppt课件
实验器材
标本：脓拭子、感染分泌物或模拟脓汁标本 菌种：金黄色葡萄球菌培养物、表皮葡萄球菌 培养基：血琼脂平板、甘露醇发酵管 其他：血浆、生理盐水、革兰染液、玻片、滴管
培养箱、 酒精灯、接种环等
医学微生物学实验脓汁标本中金黄 色葡萄球菌的鉴定
检查原则
在脓汁标本中，以化脓性球菌最为常见，本实 验主要检测金黄色葡萄球菌
医学生物学实验
2011年6月
医学微生物学实验脓汁标本中金黄色葡 萄球菌的鉴定
实验八
脓汁标本中金黄色葡萄球菌的鉴定
医学微生物学实验脓汁标本中金黄色葡 萄球菌的鉴最后没有总结一节课的重点的难点，你是 否会认为老师的教学方法需要改进？
你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ 教师的教鞭
用药前采集标本 无菌操作
医学微生物学实验脓汁标本中金黄 色葡萄球菌的鉴定
标本检测程序
脓汁、脓性分泌物（未知菌液/固体培养物）
直接
涂片 革兰染色 镜检
接种 血琼脂平板
菌落观察
血浆凝固酶试验
甘露醇发酵
医学微生色物葡学萄实诊球验菌断脓的汁报鉴标定告本中金黄
检查方法和结果报告
直接显微镜检查：取标本直接涂片，均匀涂成菌 膜，自然干燥，固定后革兰染色，油镜观察。
标本+甘露醇
阳性（+）/阴性（─）
注：第2天观察记录结果 医学微生物学实验脓汁标本中金黄
色葡萄球菌的鉴定
白葡菌+甘露醇
实验报告
本次实验的目的要求、器材、检查原则、标本检 测程序 （简要）、结果报告和结论
医学微生物学实验脓汁标本中金黄 色葡萄球菌的鉴定
金黄色 葡萄球菌
血平板培养结果观察
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微生物综合设计性实验论文——不同抗生素对细菌抑制作用的研究
Abstract： Objective To study the different antibacterial effect between streptomycin and kanamycin on
Escherichia coli and Staphylococcus albus. And determine the minimum inhibitory concentration (MIC) of antibiotics. Methods Using the method of filter paper to determinate these two antibiotics’ antimicrobial effect of Escherichia coli and Staphylococcus. In the same concentration, through Control experiments to compare the different antibacterial effect of two kinds of antibiotics . Using blank control experiment set different concentration of antibiotics to study, taking the size of inhibition zone to indicate the inhibitory effect. Through the parallel control experiment statistics the diameter of inhibition zone to find the minimum inhibitory concentration of two kinds of antibiotics on bacteria (MIC). Results Streptomycin on Escherichia coli and Staphylococcus albus MIC are 5 g/mL and 8 g/mL; Kanamycin on Escherichia coli and Staphylococcus albus MIC are 15 g/mL and 25 g/mL. Conclusions Two kinds of antibiotics have inhibitory effect on two kinds of bacteria, and this effect decrease with the decrease of their concentration. Comparing the different the value of MIC shows that whether for Escherichia coli or Staphylococcus albus , kanamycin’s MIC values are greater than streptomycin’s, Therefore, the inhibitory effectiveness of streptomycin is strength than kanamycin.
金黄色葡萄球菌实验报告doc
金黄色葡萄球菌实验报告篇一：微生物实验报告细菌微生物实验报告题目年级专业实验者学号小组成员指导老师一、实验目的脓汁和粪便标本中病原菌的检测 XX 级临床医学八年制1.了解细菌生长的基本营养条件，熟悉培养基的类型，学习并掌握培养基的原则与方法。
2.掌握无菌操作技术，掌握病原菌的分离与培养方法。
3.了解并比较细菌在固体、半固体和液体培养基的生长特征。
4.学习并掌握空气及人体细菌检测学方法。
5.掌握细菌涂片标本的制备以及革兰染色法，熟悉不同类型细菌的基本形态。
6.掌握糖发酵实验、抗菌素敏感性实验和血浆凝固酶实验的原理与方法。
7.从脓汁和粪便标本中分离培养和检测出病原体。
二、实验器材1.培养基的制备：干粉培养基、天平、蒸馏水、称量皿、药勺、锥形瓶、量筒、电炉、试管、洗耳球、试管筐、移液管、棉塞、牛皮纸、橡皮筋、手套、石棉网2.空气与人体体表细菌学检查：琼脂培养基、酒精、碘酒3.细菌的分离培养：脓汁标本、粪便标本、伊红美蓝平板、营养琼脂平板、接种环、酒精灯、打火机4.细菌的纯培养：接种环、酒精灯、打火机、中性笔、斜面培养基5.细菌的形态学检测：斜面培养物、营养肉汤、生理盐水、镜油瓶、拭镜纸、吸水纸、载玻片、显微镜、接种环、酒精灯、打火机、中性笔、革兰染色试剂、液体培养基6.细菌的生化试验：葡萄糖发酵管、乳糖发酵管、接种针、酒精灯、打火机、中性笔、菌液、营养琼脂平板、接种环、药物纸片（青霉素、庆大霉素、头孢曲松）、玻片、兔血浆、生理盐水7.细菌的血清学试验：玻片、福氏志贺菌诊断血清、生理盐水、接种环、酒精灯三、实验方法与步骤1.培养基的制备称量琼脂粉→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌2.空气与人体体表细菌学检查2.1空气的细菌学检查每组1个营养琼脂平板，选择实验楼女厕所→将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边→平板暴露于空气中15分钟→平板倒扣盖上→作标记→37℃温箱培养24小时→观察结果。
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论文式实验报告
• 一、题目的选择 • 1、准确、具体、简洁、醒目，使人一目 了然，引起重视 • 2、作者与单位(班级)，并注明所在班级 和指导教师姓名。 • 3、摘要和关键词摘要是对论文主要内容 和观点的概括
论文式实验报告
• 二、关键词 • 又称主题词或索引词，一篇论著(论文)一 般选用2～5个关键词
肠球菌的微生物特性
1、形态与染色：肠球菌形态类似链球菌，为单 个、成双或链状排列的卵员形革兰氏阳性球菌。 2、菌落特点：肠球菌在血平板上形成灰白色、 不透明、表面光的小菌落，菌落周围可出现α 溶血环，也可无溶血环。
肠球菌主要生化反应
• 氧化酶、触酶阴性，能分解多 种糖，胆汁七叶苷试验阳性， 6.5%氯化钠试验阳性，水解 PYR。
葡萄球菌形态
• 2、形态观察：取葡萄球菌少许涂片，革 兰氏染色后镜检观察细菌形态，应为革 兰氏阳性球菌呈葡萄状排列。
葡萄球菌形态
溶血性链球菌在血平板上
葡萄球菌主要生化反应
• 触酶＋，葡萄糖OF试验：F， • 血浆凝固酶＋或-。 • 甘露醇试验＋或- 、 • 新生霉素试验S或R。
链球菌菌落特性
微生物设计性实验
革兰阳球菌的鉴定
鉴定程序
血液(脓液、分泌物)
清析
无菌生长 (7天培养)
混浊
血平板 中国兰
35℃24h
G+球菌 触酶
+
葡萄球菌属
链球菌属
可疑菌落 G染色 生化反应 药敏试验 报告
葡萄球菌的微生物特性
• 1、菌落观察：葡萄球菌在普通琼脂平板 上菌落特点：中等大小，圆形不透明、 表面光滑、边缘整齐，并可产生不同的 色素。葡萄球菌在血平板上菌落特点： 中等大小，圆形、表面光滑、边缘整齐、 不透明菌落，并可产生不同的色素，但 金黄色葡萄球菌和溶血葡萄球菌等在菌 落周围有明显溶血环。
• 五、结果： • 结果是实验研究成果的结晶
论文式实验报告
• • • • 六、讨论 1.1 1.2 1.3
对实验结果解释和评价
论文式实验报告
• 七、参考文献 期刊：著者．文章名．刊物名称，卷或 年(期)文章的起讫页码 书籍：编著者．书名．版本．出版地： 出版者，年份
思考题
• 在葡萄球菌鉴定过程中,如何处理血浆凝 集反应中的问题? • 链球菌的鉴定要点是什么?如何将葡萄球 菌属与链球菌进行鉴别?
• 球形或卵圆形革兰阳性球菌，呈 链状排列。链的长短和细菌的种 类及生长环境有关，常可见到成 双排列，无芽胞、无动力，在液 体培养基上形成的链比在固体培 养基上的长。
链球菌在血平板上菌落特征
丙链
甲链
乙链
图片
链球菌革兰染色
链球菌主要生化反应
• 1、触酶试验
• 2、杆菌肽试验---A链 • 3、CAMP试验---B链 • 4、七叶苷---D链 • 5、 Optochin敏感试验---肺链
论文式实验报告
• 三、引言(前言)引言是论文正文的开场白 • 1、引起读者对本论文的兴趣。 • 2、为读者提供理解本论文所需的背景资 料。
论文式实验报告
• • • • • • 四、材料与方法材料与方法 1、实验对象 2、实验材料 3、实验分组 4、实验过程和方法 6、数据处高，需加入血液或血清， 多数菌株为兼性厌氧，最适生长温度为 35 OC，PH7.4~7.6。在液体培养基为 絮状或颗粒沉淀生长，易形成长链；在 血平板上18~24h后形成灰白色、透明 或半透明、表面光滑、圆形、凸起、边 缘整齐的小菌落，菌落周围可出现α、 β、γ三种不同特征的溶血现象。
链球菌菌体形态