第四节 异常毒性检查法

一、概述
异常毒性检查法的概念:
异常毒性检查法系将一定量的供试品溶液注入小鼠体内 或口服给药，在规定时间内观察小鼠死亡情况，以判断供 试品是否符合规定的一种方法。
为了保证用药安全，一种新药或新的制剂临床使用前， 以及一些毒性较大或生产、贮存中易引入毒性物质或分解 导致毒性增大的药品制剂要进行毒性试验。随着新科技的 发展，药品生产工艺进行了较大改变，特别是改变提炼方 法及精制工艺时，需要在生产过程中追踪检查各工艺段的 半成品及成品是否引入了毒性反应的杂质。如其中可能存 在慢性毒性杂质时，还需要作亚急性及慢性毒性试验观察。 对生产过程中毒性杂质作追踪考察，弄清提炼精制过程中 毒性杂质的踪迹，及时采取措施预防或去除，不但有利于 保证药品使用的安全性，也有利于生产上进一步提高产品 质量。
混匀。 2. 注射液的稀释
用75%乙醇棉球消毒安瓿颈部或瓶塞。 精密量取一定量药液。 按规定浓度，加精密量取的一定量溶剂， 混匀。
静脉注射前的准备 （给小白鼠光照）
用注射器吸取供试品溶液
取小白鼠
固定小白鼠
尾静脉注射
注射完毕,立即 将小白鼠松开,使 其在铁丝网盖内自 由活动以观察即时 反应，并作记录。
第四节 异常毒性检查法
授课人:汪穗福(高级讲师) 苏惠虹(助理讲师)
广州市医药中专学校
教学目标:学习异常毒性检查的方法
教学重点: 异常毒性检查的方法、检查
结果的判断标准
教学难点: 异常毒性检查方法、检查结
果的判断标准
教学方法：讲解法
第四节 异常毒性检查法
一、概述 二、异常毒性检查法的步骤 三、注意事项
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小白鼠尾静脉注射影片
② 皮下注射法
可采用由小白鼠腹部皮下，于 腹部左侧皮下刺入，并使针头在 皮下平行通过腹部中线后，立即 注入0.5 ml供试品溶液。
拔出针头时，如发现有供试品 溶液外溢，此小鼠应废弃，另取 一只小白鼠依法注射。
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小白鼠皮下注射影片
③ 肌肉注射法
可采用由小白鼠后腿肌偏于股 静(动)脉血管外侧，将针头刺入至 肌肉内缓缓注入0.5 ml供试品溶液。 拔出针头时，
雌者不得有孕。动物体重是按正常饲 养条件下的体重。在正常动物饲养条件 下，小白鼠体重17～20 g者，鼠龄约25 d。 （图）
形态表现衰老体弱，背部弓起，行动 蹒跚，毛皮松稀等现象者不宜供使用； 由于饲养条件较差或差异较大的不同鼠 龄的小鼠，虽体重符合要求，也不宜供 使用。
复试时，用18～19 g小白鼠(称量精确 至0.5 g)。试验动物在称重前，自然饱腹。 做过试验的动物不得重复使用。
药品的异常毒性试验是用稳定剂量按指定的 操作方法和给药途径给予规定体重的某种动物， 观察其急性毒性反应。反应的判断以试验动物 死亡与否为终点，这实际上是一个限度试验。 在此剂量下，一般供试品不应使动物中毒致死； 如果出现实验动物急性中毒而死亡，则反映该 供试品中含有的急性毒性物质超过了正常水平。
因此，本试验又称为异常毒性检查法。在出 现试验动物死亡时，除动物试验方法存在的差 异或偶然差错外，主要决定于供试品在生产过 程中是否带入可引发异常毒性反应的杂质。
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小白鼠腹腔注射法影片
⑤ 口服(灌胃)给药法
将注射器装上胃管，缓缓伸入 小白鼠口腔至食道部，将注射器 内栓缓缓推入供试品溶液0.5 ml， 如供试品溶液体积较大，给药量 在1 ml以上者，宜空腹给药。
口服(灌胃)给药法影片
4. 结果判断
除另有规定外，全部小鼠在 给药48 h内不得有死亡；如有死 亡时，应另取体重18～19 g的小 鼠10只复试，全部小鼠在48 h内 不得有死亡。
① 静脉注射法
小白鼠的固定方法,可将其放在铁丝网 盖内,通风较好且便于观察其活动。注射 速度与反应密切相关,应以准确5 S匀速注 入0.5 ml。
注射完毕,立即将小白鼠松开,使其在 铁丝网盖内自由活动以观察即时反应， 并作记录
实验用具
供试品溶液
1. 原料药 精密称取适量，置适宜容器中。 按规定浓度，加精密量取的一定量溶剂，
异常毒性检查的局限性：因为毒性试验是用 试验动物作为模型的，所以存在一定的局限性。 如氯霉素所致精神症状，在一般常规动物试验 上是不可能显现的。
变态反应常与某些内在因素有关，常规异 常毒性试验中是检不出的，只有用免疫学试验 方法才能在动物身上表现出来。
异常毒性检查规定的方法：
《中国药典》(2005年版)规定异常毒性检查法为 小白鼠法，通过检查结果了解药品在毒性方面 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ否有异常现象、被试药品的毒性强度及观察 毒性症状的表现等。
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2. 试验动物的准备
首次试验所用的小白 鼠可用同一性别。按体 重17～20 g平均分配，复 试则用18～19 g的小白鼠。
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3. 试验操作
除另有规定外，取上述小鼠5只， 按该药品项下规定的给药途径，每只 小鼠分别给予供试品溶液0.5 ml。异常 毒性试验操作方法有
尾静脉注射法、皮下注射法、肌肉 注射法、腹腔注射法及口服给药法。
《中国药典》(2005年版)收载该法，（二部） 正文品种共有20个品种、（三部）正文品种共 有86个品种规定应进行异常毒性检查（含特异 性常毒检查）。
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二、异常毒性检查法的步骤:
1. 对试验动物小白鼠的要求 2. 试验动物的准备 3. 试验操作 4. 结果的判断
1. 对试验动物小白鼠的要求：
须健康，无伤，毛色光滑，眼睛红亮， 活泼；体重17～20 g。其来源、饲养条件、 品种、性别均应相同。
三、注意事项
1. 为了使试验结果真实可靠，试验动物要严 格按规定的要求准备。
2. 结果判断，《中国药典》(2005)规定“除 另有规定外， 全部小鼠在给药后48 h内不得有
死亡。”给药后，在规定时间内不引起小鼠死
亡的任何反应不属于异常毒性检查范围，不作 为判断结果的依据。
如发现有血及供试品溶液外溢 者，此小白鼠应废弃，另取一只 小白鼠照上法注射。
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④ 腹腔注射法
可采用由小白鼠腹部 左侧皮下刺入，并使针头 在皮下平行通过腹部中线 后，进入小白鼠右侧腹腔 部位，立即注入0.5 ml供 试品溶液。拔出针头时，如发现有供试品溶 液外溢，此小鼠应废弃，另取一只小白鼠照 上法注射。