人巨细胞病毒核酸检测
骨髓移植患者血及尿中巨细胞病毒感染核酸标志物的检测
一、临床资料及标本采集
作者单位: 100044 北京医科大学人民医院检验科
27 例骨髓移植后 出现发热的患者来源于本院 血液病研究所骨髓移植病房。根据病史、临床表现、 生化检测及肺 X 光片, 拟诊 CMV 感染。同时收取患 者晨尿及依地酸( EDTA) 抗凝外周血 3ml 为 1 份标 本, 连续收 取, 每 周 1 次, 平 均每人 收取 4 份 标本 ( 1~ 8 份不等) , 对初验后提供的 10 例 CMV 阳性标 本, 除 1 例仅留取 2 份标本外, 均在 4 份以上。共得 103 份血尿标本。
内消失。13 例中的另 3 例均仅测到 DNA, 而未测到 IE mRNA, 且在 2 周内消失, 以四格表方法列表统计 处理阳性血和尿标本, 两方法符合率 83. 5% 。无一 例血 IEmRNA 阳性而尿 DNA 阴性者。卡方检验P< 0. 01, 该两法差异有非常显著意义。
三、抗病毒治疗用药前后监测结果 监测 6 例患者用 DHPG 治疗前后的尿 DNA 及 血 IE mRNA 变化情况, 见表 1。
关键词! 骨髓移植 巨细胞病毒感染 聚合酶链反应
Clinical value of IE mRNA detection in bone marrow transplantation patients with CMV infection ZHANG Zheng , LI Li. Dep artment of Clinical Laboratory , 2nd Clinical Hospital, Beijing Medical University , Beij ing 100 044
结果
一、RT PCR 法优化检测 CMV EI mRNA 1 Mg2+ 用量: 配制 5 管 CMV cDNA PCR 体系, Mg2+ 浓度依 0. 5 mmol/ L 递增, 首管为 0. 5 mmol/ L, 末管为 2. 5 mmol/ L。结果 1. 5 mmol/ L 条带最优。 2 退火时间: 选 30 秒, 90 秒, 120 秒扩增, 以 90 秒最优。 3 延伸时间: 选 30 秒, 90 秒, 120 秒扩增, 以 120 秒最优。 4 T aq 酶用量: 选 0. 5U, 1U, 1. 5U, 2U 扩增, 以 1U( 50 l) 最优。 二、标本检测结果 在 27 例患者 103 份标本中, 13 例患者有阳性发 现。其中 10 例患 者尿 DNA 及血 IE mRNA 同时 阳 转。10 例中又有 8 例尿 DNA 持续较血 IE mRNA 为 久, 平均 3. 5 周( 2~ 5 周) 。而血 IE mRNA 平均 仅 1. 7周( 1~ 4 周) , 8 例中仅 1 例持续 4 周, 7 例在 2 周
长春地区准献血人员人巨细胞病毒检测
染是高发病率与致死率 的重要原因［ 。胎儿感 ［ 卜
染 可引起 新 生儿 黄 疸 、 道 畸形 等 。近 年来 的研 究 胆 表 明 ， 类 巨细胞 病毒 与 胃肠 道疾 病 、 人 动脉粥 样硬 化
春 地 区 １５ Ｈ Ｍ ３ 例 Ｃ Ｖ—Ｄ Ａ阳性者 各 年龄 段分 布见 Ｎ
表１ 。经卡方检验各年龄段 Ｈ Ｍ —Ｎ Ｃ Ｖ Ｄ Ａ阳性率存在 明显差异 ， ＝３ ．７ ｕ ４—１ ３ ３ ， ＝（ ）＊（ ２—１ ＝３ 大 于 ） ，
Ｃ ｉ ａｂＤｉ鼬 ，０，０１ Ｖ ｌ１ ， ｏ． ｔｂ ｒ ｈｎＪＩ ａ １ ２ １， ｏ ５ Ｎ Ｏｃｏ ｅ
文章编 号 ：０７ ２７ ２１ ）０—１５ —０ １０ —４８ （０ １１ ７ ８ ２
长春 地 区准 献 血人 员 人 巨细胞 病 毒 检 测
关 峰， 王 宏
（ 长春市 中心血站 ， 吉林 长春 １０３） ３０３
股份有限公 司生产的 Ｈ Ｃ —Ｎ Ｍ ＶＤ Ａ荧光定量检测试
剂盒。
１２３ Ｄ Ａ提取 ． 。 Ｎ
取 基 因组 Ｄ Ａ Ｎ 。
留取受试 者静 脉全 血 ５Ⅱ ， 用 ｄ使
Ｄ Ａ提取试剂盒按照说明书流程操作 ， Ｎ 从全血 中提
１ ２４ Ｈ Ｖ Ｄ Ａ定 量 检 测 ．． ＭＣ ． Ｎ 采 用 实 时 荧 光 定 量 ２４ 准献 血 员血 Ｈ ＭＶ Ｄ Ａ 阳性 者 职 业 分 布 ． Ｃ ．Ｎ
１ ２ 方法 ．
２３ 准 献血 者 血 ＨＣ ．Ｎ 阳性 者 性 别 分 布 ． ＭＶＤ Ａ 长 春地 区 １５例 Ｈ验 Ｈ Ｍ —Ｎ Ｃ ＶＤ Ａ阳性率无性 别差异，
＝
１２ １ 仪器 ．．
１２２ 试 剂 ．．
美国 Ａ Ｉ ｔ Ｏ ｅ Ｂ ｅ ｎ 荧光定量 Ｐ Ｒ仪。 Ｓｐ Ｃ
65-人巨细胞病毒核酸检测标准操作程序
人巨细胞病毒核酸定量核酸检测标准操作规程（荧光PCR法）1.目的规范人巨细胞病毒(HCMV)核酸DNA（荧光PCR法）检测操作流程，准确进行人巨细胞病毒(HCMV)DNA分析。
2.应用范围使用中山大学达安基因股份有限公司人巨细胞病毒(HCMV)核酸检测试剂盒（荧光PCR 法）和PE GeneAmp 5700、ABI Prism 7000、ABI Prism 7700等仪器进行人巨细胞病毒(HCMV)DNA 检测。
3.职责由PCR实验室制定程序文件，专业技术人员负责执行，实验室主管负责监督实施。
4.内容4.1 实验原理和临床应用本品选取人巨细胞病毒珠（即人疱疹病毒5型）-AD169基因组中编码即刻早期转录调节蛋白的IE1基因的一高度保守的非编码区为扩增靶区域，设计特异性引物及荧光探针，扩增片段长度为86bp,利用实时荧光定量PCR技术，定量检测尿液、乳汁、血清或淋巴细胞样本中人巨细胞病毒DNA。
本品用于器官移植、骨髓移植及HIV阳性/AIDS患者尿液、乳汁、血清或淋巴细胞中的人巨细胞病毒(HCMV)感染的检测，用于人巨细胞病毒感染的辅助诊断和疗效监控，不用于血源筛查。
本品检测结果仅供临床参考，不能单独作为确诊或排除病例的依据。
4.2标本采集4.2.1 使用标本类型：尿液、乳汁、血清和淋巴细胞4.2.2 标本采集；由合作单位按照以下要求进行采集。
4.2.2.1 尿或乳汁：取晨尿或成熟乳1ml于1.5ml的无菌离心管中，离心取沉淀即为标本。
标本可立即用于测试，也可保存于-20℃待测，保存期为6个月。
4.2.2.2 血清：用无菌注射器抽取受检者静脉血1ml,注入无菌1.5mlEppendoff管，4℃静置过夜。
吸取上层血清（注意勿带入红细胞）至另一无菌1.5mlEppendoff管中，即为血清标本。
标本可立即用于测试（48小时以内），也可以保存于-20℃待测，保存期为6个月。
4.2.2.3 淋巴细胞：取静脉血（EDTA抗凝）1ml,利用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞即为标本。
巨细胞病毒感染诊疗指南
巨细胞病毒感染诊疗指南【概述】巨细胞病毒感染(cytomegalovirus infection，CMV)是由人巨细胞病毒引起的先天性或后天获得性感染，人群普遍易感。
主要通过母婴及水平传播。
本病基本病理特征为受染的细胞体积增大，胞核和胞浆内出现包涵体。
大多数感染者没有症状或亚临床表现。
但在先天感染、免疫缺陷、器官和骨髓移植患儿中可引起严重感染，甚至危及生命。
【病史要点】1．流行病学资料询问母亲在妊娠期间有无CMV原发感染或再发感染。
有无输血和输血液制品病史。
有无器官和骨髓移植病史。
有无免疫缺陷病史。
2．临床表现1)先天性感染①肝炎表现：有无黄疸，出现时间、程度、进展与否，有无白陶土粪便。
有无鼻衄、皮肤、注射部位出血倾向(警惕肝功能衰竭)。
是否伴食欲减退、腹泻、呕吐等症状。
②肺炎表现：有无咳嗽、呛奶、呼吸困难、气急、青紫、伴或不伴发热(先天感染多伴有严重肺炎)。
抗生素治疗后有无好转。
③神经系统症状：有无小头畸形、智力低下、视力障碍、脑瘫、抽搐及神经性耳聋(主要见于先天感染)。
2)获得性感染①婴儿感染：重点询问黄疸及其程度，有无肝功能异常。
有无咳嗽、气急、青紫(该年龄段可以并发肺炎)。
②儿童期感染：重点询问有无发热、皮疹、伴有黄疸或无黄疸，肝功能有无异常(多数感染CMV后没有症状)。
③免疫缺陷者感染(包括原发性免疫缺陷、艾滋病、器官及骨髓移植)：重点询问有无肺炎、肝炎、脑炎、视网膜炎、胃溃疡、糖尿病等多器官受累相应临床表现。
【体检要点】1．体检皮肤巩膜有无黄疸，程度(轻、中、重)，有无肝脾肿大，肿大程度、质地、边缘，有无腹部膨隆，腹壁静脉怒张，有无移动性浊音，是否伴有皮肤的出血点、浅表淋巴结肿大、浮肿。
2．体检智力发育及体格发育有无落后，有无小头畸形、视力减退、听力损害等。
3．注意有无气急、紫绀、呼吸困难、肺部啰音。
【辅助检查】1．病毒分离或巨细胞包涵体的检测病毒分离或巨细胞包涵体的检测的传统方法是从血、尿、唾液、脐血等受检标本中培养出病毒，若呈阳性即可确诊。
人巨细胞病毒核酸定量检测试剂盒临床应用及初步评价
人巨细胞病毒核酸定量检测试剂盒临床应用及初步评价王述莲;邓中平;呼建民;戴立忠;黄基容;王军;艾颖娟【摘要】目的：探讨人巨细胞病毒（HCMV）核酸定量检测试剂（PCR‐荧光探针法）的临床使用及初步评价。
方法：用浓缩一步法试剂与煮沸法试剂对192例临床收集的样本进行HCMVDNA检测并对比其结果，同时，将两种试剂的检测结果分别与HCMV‐pp65抗原检测结果进行对比。
结果：新型人巨细胞病毒核酸检测试剂与煮沸法试剂的阳性一致性百分比98．06％，阴性一致性百分比95．51％，总一致性百分比96．88％；对6例不符样本进行测序复核，并对复核后的结果进行Kap‐pa检验一致性分析，结果Kappa值＝1．000，表明新型试剂的检测结果与煮沸法试剂及复核检测的结果具有很好的一致性。
在与HCMV‐pp5抗原检测结果的对比中，两种试剂均表现出较好的准确性。
结论：人巨细胞病毒核酸检测试剂与煮沸法试剂检测结果具有很好一致性，操作简单快速，减少污染环节，并具有内标控制假阴性，结果准确，符合临床检测要求，具有较高的应用价值。
%Objective:The goal of this study is to evaluate the clinical application of a new Human Cyto‐megalovirus DNA Diagnostic Kit (refer to as concentrated one‐step method hereafter) .Methods:A total of 192 clinical specimens were detected by concentrated one‐step method and another kind of fluorescence diagnostic kit u‐sing boiling method ,The results were analyzed a nd compared .Simultaneously ,HCMV‐pp65 antigenemia test re‐sults of these 192 specimens were gathered and compared with the results from the one step and Boiling method kits . Results :The two kits showed excellent agreement The Positive consistency was 98 .06% ,the negative consistency was 95 .51% and the total consistency was 96 .88% ;6 cases ofdiscrepant samples were sequenced review ,then the results were performed with the Kappa consistency analysis ,The value ofKappa=1 .000 ,showed good consistency between the two methods .In addition ,compared with HCMV‐pp65 antigenemia test results ,the two reagents both showed good accuracy .Conclusion :The one step method showed good consistency compared with the conventional boiling method ,In this method ,the nucleic acid targets extracted by lysis buffer all went into the PCR reaction .This avoids laboratory contaminations which occur often during routine DNA extraction process .And the PCR detection system uses an internal positive control (internal control) to avoid a false negative result .With a simple procedure , precise results ,this new diagnostic kit is suitable for routine clinical lab usage .【期刊名称】《陕西医学杂志》【年(卷),期】2014(000)011【总页数】3页(P1542-1544)【关键词】巨细胞病毒感染;脱氧核糖酸酶类/分析;荧光免疫测定;聚合酶链式反应;试剂盒,诊断;煮沸法【作者】王述莲;邓中平;呼建民;戴立忠;黄基容;王军;艾颖娟【作者单位】武警北京市总队第三医院检验科北京100141;湖南圣湘生物科技有限公司;武警北京市总队第三医院检验科北京100141;湖南圣湘生物科技有限公司;武警北京市总队第三医院检验科北京100141;湖南圣湘生物科技有限公司;湖南圣湘生物科技有限公司【正文语种】中文【中图分类】R446人类巨细胞病毒（Human cytomegalovirus，HCMV）亦称细胞包涵体病毒，为疱疹病毒科β属的双螺旋DNA病毒，由于感染的细胞肿大，并具有巨大的核内包涵体，所以称为巨细胞病毒。
EB病毒和人巨细胞病毒核酸检测的实验研究
EB病毒和人巨细胞病毒核酸检测的实验研究郭建巍;高毓蕊;田占月;陈昌国;王珍光;李文军;赵强元【期刊名称】《现代检验医学杂志》【年(卷),期】2014(029)001【摘要】目的检测血浆和外周血单个核细胞(PBMC)中EB病毒(epstein-barr virus,EBV)与人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)DNA含量,以期为两种病原体的早期诊断与监测提供敏感、准确、及时的实验室结果,并为两种病原体感染的实验室诊断筛选出适宜的标本类型.方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(real time-PCR)分别对270份血浆和外周血单个核细胞中EB病毒和HCMV病毒进行核酸检测并分析.结果 270份血浆和外周血单个核细胞中EBVDNA检出率分别是30％和96.7％,血浆和外周血单个核细胞两种类型标本检测EBV DNA的联合检出率为100％;血浆和外周血单个核细胞两种类型标本对HCMV DNA检出率分别是40％和86.7％,两种类型标本对HCMV DNA的联合检出率为100％.结论外周血单个核细胞标本对EB病毒和HCMV的检出率明显高于血浆标本,血浆和单个核细胞两种类型标本对EBV DNA和HCMV DNA的联合检出率为100％.临床医生在疑似EBV和HCMV感染患者的诊疗中要选择适宜的标本类型,首选外周血单个核细胞标本进行检测,条件允许的情况下与血浆标本联合检测,以提高检测的敏感性和准确性.【总页数】3页(P105-107)【作者】郭建巍;高毓蕊;田占月;陈昌国;王珍光;李文军;赵强元【作者单位】中国人民解放军海军总医院检验科,北京 100048;甘肃省第二人民医院体检中心,兰州 730000;中国人民解放军海军总医院检验科,北京 100048;中国人民解放军海军总医院检验科,北京 100048;中国人民解放军海军总医院检验科,北京100048;中国人民解放军海军总医院检验科,北京 100048;中国人民解放军海军总医院检验科,北京 100048【正文语种】中文【中图分类】R373.1;Q503【相关文献】1.尿液巨细胞病毒核酸检测结合全血细胞计数在小儿巨细胞病毒感染诊断中的应用[J], 黄峥;姜新华;吴小明2.特发性血小板减少性紫癜患儿EB病毒、巨细胞病毒、人微小病毒B19、幽门螺杆菌感染的临床观察 [J], 房倩;王丽;刘玲;张东风;郭映辉;李坤芬3.EB病毒和人巨细胞病毒感染对儿童急性淋巴细胞白血病PTEN及hTERT基因甲基化的影响 [J], 祁新坤;舒逸;秦茹;邹琳4.EB病毒及人巨细胞病毒近期感染参与系统性红斑狼疮疾病活动临床分析 [J], 杨大伟;臧欢欢;黄玉萍;孙旭;李莹5.人类巨细胞病毒、EB病毒和单纯疱疹病毒1型与慢性牙周炎的相关性研究 [J], 李颖;章锦才;张蕴惠因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
实时荧光定量PCR检测人巨细胞病毒感染的 临床意义分析
实时荧光定量PCR检测人巨细胞病毒感染的临床意义分析实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR，qPCR）是一种高灵敏度、高特异性的核酸检测技术，可以用于检测病毒感染。
人巨细胞病毒（HCMV）是一种广泛存在于人群中的病毒，它可以引起免疫功能低下人群的严重感染。
本文将通过对实时荧光定量PCR检测人巨细胞病毒感染的临床意义进行分析，以期探讨该技术在临床诊断和治疗中的应用前景。
一、HCMV感染与临床疾病HCMV感染是一种全球性分布的病毒性感染，通常对健康人群并不产生严重影响，但对于免疫功能低下的人群，特别是器官移植受者、艾滋病患者和先天免疫缺陷患者等，HCMV感染可能导致严重并发症，如肺炎、肝炎、胃肠道炎症等。
HCMV还是新生儿感染的主要致病因子之一，导致新生儿先天性HCMV感染，可能引发先天性畸形和神经系统损伤。
二、实时荧光定量PCR检测HCMV感染1. 技术原理实时荧光定量PCR是一种核酸扩增技术，它结合了PCR扩增和荧光探针技术，能够实现对靶基因数量的准确计数。
在进行PCR扩增的荧光探针与靶基因结合，产生特定的荧光信号，通过荧光信号的强度可以定量检测靶基因的数量。
实时荧光定量PCR具有高灵敏度、高准确性和高特异性的特点，能够快速准确地检测HCMV感染。
2. 临床应用实时荧光定量PCR检测HCMV感染已被广泛应用于临床诊断和监测。
在器官移植术后感染HCMV的患者中，通过定期对血液或组织样本进行实时荧光定量PCR检测，可以及时发现HCMV感染的情况，以便早期干预治疗。
对于新生儿先天性HCMV感染的诊断，实时荧光定量PCR也具有高度的准确性和可靠性，有助于早期发现感染，进行及时治疗。
1. 提高诊断准确性传统的HCMV感染诊断方法包括病毒培养、免疫组化检测和血清学检测等，这些方法存在着时间长、操作复杂、准确性低等缺点。
而实时荧光定量PCR检测HCMV感染具有高灵敏度、高特异性和高准确性的特点，能够在短时间内对HCMV感染进行快速、准确的诊断，有助于提高诊断准确性。
诺如、人巨细胞、肠道病毒核酸检测考试试题
诺如、人巨细胞、肠道病毒核酸检测考试试题1.达安诺如病毒核酸检测样本种类（） [单选题]A. 咽拭子B.血浆C.全血D.粪便拭子(正确答案)2.达安人巨细胞病毒核酸检测样本种类（） [单选题]A.咽拭子B.血浆(正确答案)C.全血D.粪便拭子E.尿液3.达安肠道病毒核酸检测样本种类（） [单选题]A.咽拭子B.血浆全血D.粪便拭子(正确答案)4.肠道病毒三项包括（）A .EV(正确答案)B.EV71(正确答案)C.CA16(正确答案)D.CT5.达安人巨细胞病毒核酸提取好后加多少于反应管（） [单选题]A.10 ulB.20ul(正确答案)C.5ulD.30ul6.达安诺如病毒核酸提取好后加多少于反应管（） [单选题]A .10 ulB.20ulC.5ul(正确答案)D.30ul7.人巨细胞病毒样本采集管是（） [单选题]A .肝素钠(正确答案)B.枸橼酸钠C.EDTAD.肝素锂8.人巨细胞病毒核酸检测试剂盒规格（） [单选题]A .24人份/盒B.48人份/盒(正确答案)C.25人份/盒D.30人份/盒9.肠道病毒三项核酸检测的扩增体系为（） [单选题]A .10ulB.15ulC.25ulD.20ul(正确答案)10.人巨细胞病毒的扩增体系为（） [单选题]A .30ul(正确答案)B.15ulC.25ulD.20ul11.人巨细胞病毒核酸检测试剂盒保存条件（） [单选题]A .室温B.2-8℃C.-20±5℃(正确答案)12.诺如病毒核酸检测试剂盒保存条件（） [单选题]A .室温B、2-8℃C.-20±5℃(正确答案)13.肠道病毒核酸检测试剂盒保存条件（） [单选题]A .室温B.2-8℃C.-20±5℃(正确答案)14.肠道病毒三项中哪一项是通用型（） [单选题]A .EV(正确答案)CA16C.EV7115.EV71阳性如何判断（） [单选题]A .FAM有扩增曲线且CT值《44，ROX检测通道有扩增曲线且CT值《44,CY5检测通道有或无扩增曲线(正确答案)B.FAM有扩增曲线且CT值《44，CY5检测通道有或无扩增曲线C.ROX检测通道有扩增曲线且CT值《44,CY5检测通道有或无扩增曲线。
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淋球菌核酸扩增荧光检测（NG-DNA）
一、检验项目：淋球菌核酸扩增荧光检测（NG-DNA）
二、临床意义：
1、人是淋球菌的唯一天然宿主，人对淋球菌感染没有免疫能力，所有人
均有相同的易感性，因此再感染或慢性感染是较普遍的
2、临床常见症状为非淋性尿道炎、盆腔炎、前列腺炎、阴道炎、不育不孕
症等，也有少数无症状携带者
3、性接触传播是淋病的主要传染形式。
但也可以通过非性接触途径传播。
美国疾控中心建议：25岁以下高发年龄段的女性及25岁以上女性中的高危人群每年应当接受NG筛查；所有妊娠期女性第一次产检时应当接受NG检查，高危人群孕晚期时应当接受复查。
我国疾控中心2008年开始将NG列为单独的病种进行传染病报告。
2010年5月国家人口和计划生育委员会下发“国家免费孕前优生健康检查项目试点工作技术服务规范中临床实验室9项检查中就包含NG的检测。
有利于早期诊断
病原体初感染时几乎见不到特异症状，容易延误治疗性
三、标本送检要求：4ml黄色帽血清管，空腹采集后立即送检，如不能立即
送检可于4℃保存一周，如需长期保存请放入－20℃冻存，运输过程中请注意保持低温。
四、开单名称：淋球菌核酸定性检测（NG-DNA）。
五、收费： 140元/例
六、送检时间：周一至周五上午12：00前
七、送检地点：检验科PCR室
八、报告时间：抽血后，7个工作日后进入我院计算机检查报告系统，查看
检测结果。
联系电话： 84206146。